ESPECTROFOTOMETRÍA

Herrera Tovar Yina Marcela, López Carvajal Ana María

Estudiantes VII semestre, Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Área de
Biología molecular, Universidad de la Amazonia,
Florencia – Caquetá – Colombia. 2019

Resumen

La técnica analítica de la espectrofotometría permite especificar la concentración de

solución de un compuesto. Para la realización de este tipo de medidas se dispone un
espectrofotómetro, en el cual se puede indicar la onda de luz y la longitud que pasa
por una solución y medir la luz absorbida por la misma. En esta práctica se conocerá
las características generales y conceptos vinculados al espectrófometro. Se dio una
breve explicación sobre el funcionamiento del espectrófometro, se realizará unos
espectros de absorción con un fin de describir la onda de longitud donde se presenta
en la muestra la absorción máxima y con ello se realiza las rectas correspondientes
del calibrado y así cuantificaran las distintas concentraciones de las biomoléculas.
Palabras claves: absorbancia, espectrofotometría, biomoléculas

Introducción moléculas. Las moléculas tienen la

capacidad de absorber ondas
La espectrofotometría es la que se
electromagnéticas diferentes que
encarga del estudio relacionado con
arrojan cualquier tipo de dato
fenómenos de interacción de la
cuantificable y calificable. Esto se lo
materia y sus moléculas con la luz o
logra por medio del equipo
radiación electromagnética. Así
denominado espectrofotómetro donde
mismo, la UV o la luz visible consigue
se logra obtener las ondas de longitud
ostentar entre 100-400 Kmol-1, al ser
(300-1200 nm) necesarias para este tipo
usada esa energía esto ocasiona un
de estudio ( UNAM 2010).
estado de exaltación entre los
electrones de los cuales se obtiene un Para obtener una mejor absorción y
espectro de la luz la cual puede ser resultado de los espectros de luz por
medida en función de frecuencia o espectrofotometría se pueden añadir
longitud (Brunatti et.al 2018). ciertos colorantes específicos tales
como; el verde Malaquita resulta
Por otra parte, la espectrofotometría
esencial para teñir partículas
en los últimos años se ha convertido en
microscópicas en organismos
una de las más eficientes técnicas para
unicelulares como bacterias, otro
el análisis y determinación de la
colorante usado es el Rojo Congo,
especificidad de las diferentes
específico para estudios sanguíneos.
Por otra parte, el colorante más usado Malaquita, Azul de Metileno y rojo
en las tinciones biológicas es el azul de Congo mediante el espectro, además
metileno. El objetivo e importancia de de conocer sus respectivas
esta práctica es obtener el espectro de concentraciones a partir de una
absorción de los colorantes Verde muestra problema ( Miñones, 2007).

Metodología se extrae 1ml de la solución y es

agregada al último tubo que es el
Rojo Congo
cuarto.
En 4 tubos de ensayo agregar 4ml de
Teniendo los 4 tubos con las soluciones
etanol, al primer tubo agregar 1 ml de
correspondientes, se sacan muestras
la solución de rojo Congo, al primer
de cada una de ellas en unas celdas,
tubo se le extrae 1ml de la solución y
para ser trasladas al espectrofotómetro
es agregada al segundo tubo, del
y allí hacer la lectura de la absorción de
segundo tubo se le extrae 1ml de la
la curva de calibración.
solución y es agregada al tercer tubo,
de igual manera del tercer tubo se Azul de Metileno
extrae 1ml de la solución y es agregada
En 4 tubos de ensayo agregar 4ml de
al último tubo que es el cuarto.
etanol, al primer tubo agregar 1 ml de
Teniendo los 4 tubos con las soluciones la solución de Azul de Metileno, al
correspondientes, se sacan muestras primer tubo se le extrae 1ml de la
de cada una de ellas en unas celdas, solución y es agregada al segundo
para ser trasladas al espectrofotómetro tubo, del segundo tubo se le extrae 1ml
y allí hacer la lectura de la absorción de de la solución y es agregada al tercer
la curva de calibración. tubo, de igual manera del tercer tubo
se extrae 1ml de la solución y es
Verde Malaquita
agregada al último tubo que es el
En 4 tubos de ensayo agregar 4ml de cuarto.
etanol, al primer tubo agregar 1 ml de
Teniendo los 4 tubos con las soluciones
la solución de Verde Malaquita, al
correspondientes, se sacan muestras
primer tubo se le extrae 1ml de la
de cada una de ellas en unas celdas,
solución y es agregada al segundo
para ser trasladas al espectrofotómetro
tubo, del segundo tubo se le extrae 1ml
y allí hacer la lectura de la absorción de
de la solución y es agregada al tercer
la curva de calibración.
tubo, de igual manera del tercer tubo

Resultados
Bibliografía

 Carlos Brunatti Lic Ana María Martín I. Introducción a la Espectroscopía de

Absorción Molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano [Internet].
[cited 2018 Aug 29]. Available
from:http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf

 UNAM. Fundamentos De La Espectrometría De Masas. 2010;15.

 Miñones J. Práctica de espectrofotometría UV-Visible. Espectrofotometría

[Internet]. 2007;1–8. Available from:
www.usal.es/~quimfis/apoyo/Carmen/Practicas/Espectrofotometria.PDF