2-10-2019 Reporte de

laboratorio 1
Aislamiento en medio general

Diana Eulogio Garcia

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE PACHUCA
 Introducción

En la naturaleza, existen diversos microorganismos que no han sido

identificados, sino integrados en cultivos mixtos. Dado que existen ciertos
microorganismos que son de interés biotecnológico, se han desarrollado
diversas técnicas que pueden separar unos de otros, obteniendo cultivos
puros o anéxicos. Un cultivo axénico es aquel que contiene un sólo tipo de
microorganismo y que procede generalmente de una sola célula; el
crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una masa de células
fácilmente visible que recibe el nombre de colonia

Para obtener cultivos puros a partir de una población microbiana mixta, se

utilizan las denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas
durante el siglo XIX. En un principio, Lister utilizó diluciones seriadas en medio
líquido con esta finalidad, pero la presencia de contaminación, es decir, de
microorganismos no deseados, dificultó el aislamiento.
La escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos, complementados
con agar, y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo así la
separación física de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o
en el interior del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar
distintas especies microbianas (Trujillo-Hernández, 2015)

Muchos han sido los microorganismos de interés que se han logrado aislar,
sin embargo, uno de los más importantes para la industria han sido las
levaduras por la alta producción de etanol que han demostrado (Trujillo-
Hernández, 2015). Debido a que la identificación sólo puede llevarse a cabo
sobre una cepa en cultivo puro, se procede a realizar un aislamiento en
medio general para poder describir sus características microscópicas y
macroscópicas (Ancasi EG, 2005).
 Referencias consultadas

1.- Trujillo, L.C. y Hernández, S.E. (2015). Aislamiento y caracterización de

levaduras presentes en el fruto del Syzygium malaccense en la comuna 1
de la ciudad de Neiva-Huila. Reviste ingeniería y región. 13(1), 37-45.

2.- Ancasi EG. Manual de microbiología de los alimentos, capítulo 4.

Objetivo

Sembrar muestras de diluciones de una muestra de levadura silvestre

mediante la técnica de vaciado en placa para poder caracterizarla
macro y microscópicamente.

Materiales

 medio de cultivo (PDA)

 Peptona
 Cloruro de sodio
 Cajas Petri
 Micropipeta
 Puntas para micropipeta
 Matraces Erlenmeyer (500 y 125 ml)
 Mechero Fisher
 Olla para esterilizar
 Tubos de ensayo de 10 x 160 mm
 Gradilla
 Probeta de 100 ml
 Pipeta bacteriológica de 10 ml
 Incubadora
 Papel estraza
 Manta de cielo
 Algodón
Metodología (Diagrama de flujo)
 Resultados y discusiones

Para realizar las diluciones se utilizó peptona (fig 1) y cloruro de sodio diluídos
en agua destilada. El agua peptonada (fig 2) funciona como un medio de
enriquecimiento no selectivo en el cual la peptona proporciona nutrientes
necesarios para el desarrollo microbiano mientras que el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico (Britania, 2012).

Figura 2 Agua peptonada

Figura 1 Bactopeptona

Como medio general se utilizó el agar papa dextrosa (fig

3). El agar papa dextrosa es un medio de cultivo que
aporta los elementos nutricionales necesarios para el
desarrollo de hongos filamentosos y levaduras.
La combinación de la infusión de papa con la glucosa
proporciona la fuente de energía perfecta para que
exista un crecimiento satisfactorio de los hongos.
Mientras que el agar es quien brinda la consistencia al
medio (Laboratorios Britania, 2015). Figura 3 Agar papa dextrosa
Posteriormente a la toma de muestra y como parte del análisis, se hace una
dilución primaria (fig 4) cuya finalidad es lograr obtener una muestra
representativa del alimento, esto es, tanto en el aspecto cualitativo
(diferentes tipos de bacterias) como en el cuantitativo, y así lograr una
distribución lo más uniforme posible, de los microorganismos contenidos en
la muestra destinada al análisis realizando diluciones seriadas en tubos (fig
5). Con este fin, se utiliza un diluyente que favorezca la recuperación de los
microorganismos presentes, para ponerlos de manifiesto cuando se cultiven
(Camacho et al, 2019).

Figura 5 Diluciones decimales seriadas

Figura 4 Dilución madre

Una vez preparado el material (fig 6), se procedió a esterilizar a 121 °C y 1

atm de presión. Esta temperatura con un tiempo
de exposición mayor a 15 minutos sirve para
destruir organismos formadores de esporas
(Microbiología, 2015).

Figura 6 Material esterilizable

Después se procedió a vaciar el PDA en cajas Petri para poder inocular las
diluciones hechas con anterioridad por medio del vaciado en placa (fig 7),
ya que es la técnica más ocupada para aislamiento ya que posee mayor
fidelidad y reproducibilidad (Microbiología, 2015)

Figura 7 Placas inoculadas por medio de vaciado en placa

Por último, se inocularon a 28°C por 3 días para verificar su crecimiento

(González-Lázaro, 2014).

Referencias consultadas

1.- Laboratorios Britania. (2012). Agua Peptonada. Ficha técnica.

Recuperado de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a280db
392c81.pdf

2.- Laboratorios Britania. (2016). Papa glucosado agar. Disponible en:

britanialab.com

3.- Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez.

2009. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad
de Química, UNAM. México
5.- Microbiología. (2015). Técnicas de vaciado. Recuperado de:
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/tecnicas-de-
vaciado.html

Conclusiones

Se cumplió parcialmente con el objetivo planteado, ya que es necesario

verificar el crecimiento de microorganismos para afirmar que el proceso se
llevó de manera correcta y en un ambiente aséptico.