FIN

MUESTRA UTILIZADA PATOLOGIAS

TECNICA Tanto en BRCA ALTERACIONES
1 como BRCA DETECTADAS
2 las mutaciones más
frecuentes son incersiones,
deleciones, sustituciones, o
Secuenciacion = next mutaciones terminales
generation (nonsense), estas ultimas
sequencing —> originan codones stop
secuenciacion // de Consecuencias:
prematuros. ➢Cambios
varios fragmentos al en el marco de lectura
mismo tpo (se ➢Aparición de codón stop
secuencian los genes prematuro de terminación
BRCA para identificar ➢Generación de proteínas
mutaciones más cortas por cambio de
aminoácido y disfuncionales aumenta probabilidad de
Analiza 21 genes. 15
tumorales y 6 normales de
referencia, para detectar
nuevas mutaciones
producidas en el tumor.
Cuantitativa (tiempo real). A
PCR-RT en tiempo partir de estas mutaciones
real (q) elabora el Recurrence Score,
que calcula el riesgo de
recidiva a distancia a 10 años
usando solo tamoxifeno
(terapia hormonal) y de
recidiva a 10 años usando
tratamiento combinado
(tamoxifeno Y quimioterapia)
Dual SISH Hibridación in situ con plata,
(hibridacioé n con usando sondas marcadas,
plata) Se usa para para analizar si HER2 está
analizar la aumentado en su expresión,
amplificacioé n del lo que implica que el tumor va
HER2 (receptor para
a proliferar más al tener
un factor de
mayor influencia de factores
crecimiento)
de crecimiento.
duplicacion en tandem de exones 14 y 15 (3-400pb) -
PCR
FLT3 ITD
Mutacion —> perdida de la
funcion de BRCA 1 & 2 =
producir tumor
Mutaciones en el extremo 5
´→ Predispone a cáncer de
mama y de ovario
➢Mutaciones en el extremo
3´→ Asociadas al cáncer de
mama ➢Mutaciones en
ambos extremos →
Asociadas a fenotipo mas
grave
(utilidad de la técnica para cada patología en cuanto
(individuos a analizar y en las que se HERENCIA
a diagnóstico, pronóstico, tratamiento y/o
tipo de muestra) utiliza
acesoramiento genético)
Sangre periférica (al ser
la mutación de los
BRCA la HEREDADA en
el cáncer de mama . Consejo geneé tico para ella y su descendencia, y
heredofamiliar, esta está sirve para diagnoé stico (cancer heredofamiliar) y
en la línea germinal de para opciones terapeué ticas y pronoé stico.
células, por lo que luego
aparece en todas las
células del organismo.
Autosómica dominante con
penetrancia incompleta
(según la mutación
heredada, la penetrancia
varía entre el 30-90%.)
Tej tumoral !! Porque Cancer de Mama
Recordar! requiere de dos
ahora, las mutaciones
mutaciones! La heredada y
que analiza NO son las
otra mas para que el tumor
heredadas sino las Es de indicador para el tratamiento (calcula riesgo
se desarrolle, evento de dos
NUEVAS mutaciones de recidiva solo con hormonoterapia y riesgo
que se producen en el comparado con tratamiento combinado) golpes, hipotesis de knudson
tejido tumoral. Propio de
cada individuo, estas no
se heredan
Es indicador pronóstico, ya que el cancer con HER2
Tejido tumoral (también positivo es más agresivo y crece y prolifera más,
es una mutación propia pero también esto implica una posibilidad de
del tumor, no heredada) tratamiento con TERAPIA DIRIGIDA (trastuzumab
en general, anticuerpo monoclonal)
Resultados: corrida de electroforesis con una banda
de aprox 300pb p/ individio homocigota y otra de
mayor peso p/ heterocigotas. Fenotipo: modificacion
de la proteina —> impide maduracion de las celulas
hematopoyeticas. PRONOSTICO.

mutacion puntual, sustitucion en el exon 20 GAT —> tejido tumoral (en

PCR-RFLP Pronóstico y diagnóstico
(TAT) FLT3 TKD sangre periferica)

Exon 12 = variables: A: duplicacion TCTG; B: adicion

Cambio del marco de lectura de la proteina.
PCR + secuenciacion CATG; D: inserción de nucleotidos CCTG -- NPM1
Tratamiento (translocaciones)
(nucleofosmina)

C/EBP-alfa: variantes R1 y
FISH R2. Translocación Identifica expresion del gen Medula Osea LAM: leucemia Pronóstico (mutaciones puntuales --> pronóstico) Mutaciones de novo
cromosoma 16 22 mieloide aguda

t(15;17) PML-RARA isoformas implicancia terapeútica --> responde a ácido

bcr1, bcr2 y bcr3. retinoico. Define diagnóstico y tratamiento
Translocaciones específico. Tratamiento

RT-PCR t(8;22) AML-ETO translocaciones tumor

t(9,22) BCR-ABL --> Diagnóstico y tratamiento leucemia mieloide aguda

philadelfia cronica (inhibidor de tirosin quinasa)

utilizando la tecnica de bandeo G permite visualizar el

Cariotipo cromosoma con su sitio fragil como una region no Ya no se utiliza para el diagnostico.
coloreada (gen FMR1)

amplificacion de la region permite amplificacion de la region CGG compatible

southern Blot
(CGG)n del gen FMR1 con la mutacion o premutacion

6-54 copias (sin mutacion), Diagnostico. No detecta mutaciones y pre

55-200 copias (premutacion), mutaciones grandes. En mujeres debe realizarse
hot start PCR
>200 copias (mutacion estudios complementarios ya que es dificil
son expansión de tripletes
completa) diferenciar entre homocigotas y premutadas
(CGG), inserciones grandes
en la region 5 UTR ligada al x dominante con
estudio especifico de las penetrancia incompleta
Sangre periferica Sindrome de x fragil
southern Blot (uso de regiones repetitivas (CGG)n. permite amplificacion de la region CGG compatible (80% en hombres y 30% en
Eag1/EcoR1-STB Deteccion de expansiones de con la mutacion o premutacion mediante la mujeres)
12,3) -- enzima todos los tamaños y estado detección de metilación en la misma utilizando
metilasa sensible de metilacion del cromosoma enzimas de restricción metilasa-sensibles
x
deteccion de mutacion completa y premutacion a
su vez permite detectar presencia de interrupciones
(pcr convencional + primer que detecta el estado de
AGG (brindan estabilidad). Se realiza en mujeres
TP-PCR metilacion) pones un primer en la inserción y otro fuera.
con premutacion ya que dependiendo del n° de
luego electroforesis capilar
repeticiones que presenten pueden transmitir a su
decendencia la mutacion completa
se combina la deteccion del Metodo semicuantitativo
Aprovecha el cambio deteccion de la mutacion y el estado de mutacion.
MS-MLPA full n° de copias y uso de que identifica grado de
conformacional que genera Tecnica utilizada como metodo confirmatorio
Inverse-shifting PCR enzimas de metilacion metilación.
la mutación para identificar
(Clona regiones en una corrida
desconocidas del electroforética con un gel Detección de Inv22, Inv1 dos mutaciones altamente
ADN que se situan en Inversión en el intrón 22, inversión en el aquellos
especial intrón 1 exones frecuentes como causantes de la patología (en
la vecinidad de que presenten la mutación. hemofilia A severa).
Util en familias que desconocen la mutación. Como
secuencias diana Luego, como la mutación aprox. la mitad de los casos de hemofilia A severa
conocidas) Mutaciones puntuales de una detectada es desconocida se deben a una Inv conocida (Inv22), esta técnica
PCR - CSGE + Patología ligada al X
base o pequeñas inserciones pasa a secuenciarse ese o Sangre periférica Hemofilia es útil para diagnosticar la otra mitad de los casos
secuenciacioé n recesiva
y deleciones esos exones particulares donde no se detectan estas alteraciones más
que en la corrida frecuentes; que presentan la patología pero se
presentaron el patrón desconoce la mutación subyacente que la causa.
alterado para identificarla.
Es útil especialmente en
genes muy grandes con
pequeñas mutaciones
desconocidas en sus
exones.
 Patología ligada al X
Sangre periférica Hemofilia
recesiva

establecer las relaciones entre el defecto molecular

y la presencia de inhibidores (anticuerpos que
PCR - LD t(21;8) PJGF Long distance PCR
inhiben los FVIII o FIX de la coagulación) o predecir
su posible desarrollo,

Se estudian diferentes zonas buscando grandes

PCR-Multiplex deleciones en el gen de la distrofina (compuesto por 79 Se utiliza para hallar las deleciones mas frecuentes
exones) producto de la perdida de uno o varios de ellos
Poder detectar una delecion en el gen de la
Estudio de distrofina confirma el diagnostico.La delecion de ese
segregacion de alelos Buscan 3 loci polimorficos (microsatelites) del gen exon y la aparicion de un codon stop prematuro
(indirecto) asociados con las mutaciones genera la sintesis de una proteina Distrofina
Distrofia muscular truncada, esta alteracion de la Distrofina y su Patología ligada al X
Detecta la delecion de alguno de los 79 exones del gen de Sangre periférica
de Duchenne posterior degradación son la causa de la patologia recesiva
la distrofina, amplificando todos los exones que pertenecen
--> Considerando que no hay cura para esta
Estudio de MLPA a este gen con sondas independientes y comparando la
enfermedad, si se confirma Duchenne el mejor
fluoresencia entre los amplicones mediante electroforesis
No amplificacion del asesoramiento es recomendar ciertos tratamientos
capilar
exon/exones delecionados, que sirvan para
Comprueba quemejorar la calidad
los resultados de vidapor
obtenidos del MLPA
anteriormente detectados por paciente
sean antes de que siempre
correctos,ya la degeneracion
existe lase vuelva
posibilidad
PCR-Simplex demasiado severa y mortal. También sirve parala
MLPA. En nuestro caso, de que se produzca un falso positivo(confirma
delecion en el exon 65 --> no consejo genético
delecion del exonpara su madre
de forma (portadora) y el
directa)
amplifica
patron de bandas con la resto de
poder la familia.
detectar la presencia de la deleción del gen o
Southern Blot presencia de deleciones de descartar la presencia de dichas deleciones. Es un
tip (-α) metodo de diganostico y pronostico.
amplicación de secuencias
especificas del cluster de α
PCR globina humano para detectar alfa talasemia
el gen α2 normal y las
deleciones de -α

No alcanza para diagnosticar la patologia, sino que

MLPA
debe ser empleada como estudio complementario
deleción del gen � globina. Sangre periferica autosomica recesiva
+/-: heterocigota para la
deleción
PCR-gap
-/-: no presenta la deleción
+/+: homocigota para la
deleción detecta mutaciones puntuales tales como un
se amplifican secuencias
cambio de C po T del codon 39 del exon 2 que
secuenciacion especificas del gen HBB o de beta talasemia
se amplifican corresponde a la mutacion mas frecuente de beta
todo el gen secuencias el
gen HBB para realizar la talasemia.
deteccion de distintas Tecnica rapida, economica y confiable para realizar
PCRq mutaciones con sondas screening de la mutacion. Las mismas se detectan
TaqMan. Son cambios de por medio de las curvas de melting
base C>T en codon 39, IVS-1
nt 110 G>A, IVS-1 nt 6 C>T