ELIMINACION DE NITRATO A LARGO PLAZO A TRAVES DE MICROORGANISMOS DE

DESNITRIFICACION DEPENDIENTES DE METANO EN LA SECUENCIACION DE REACTORES

DISCONTINUOS ALIMENTADOS SOLO CON NITRATO Y METANO

RESUMEN

Los bioprocesos de oxidación de metano anaerobio (damo) desnitrificantes pueden eliminar el

nitrato usando metano como donante de electrones, lo que genera una gran preocupación debido
al estricto estándar actual de descarga de nitrógeno en las plantas de tratamiento de aguas
residuales. Para obtener una tasa de eliminación de nitrógeno (NRR) aceptable para la ingeniería y
demostrar la capacidad estable a largo plazo del sistema Damo en condiciones de nitrato y metano,
se operaron dos reactores por lotes de secuenciación (SBR) alimentados solo con nitrato y metano
durante más de 600 días 30 ° C. El NRR de 21.91 ± 0.73 mg NO3-, -NL-1 día-1 obtenido, que es, según
nuestro conocimiento, la tasa más alta observada en la literatura bajo tales condiciones. Se encontró
que la temperatura afecta significativamente el rendimiento del sistema. Además, la comunidad
microbiana se analizó mediante la técnica de PCR en tiempo real. Los resultados mostraron que el
consorcio microbiano contenía damo archaea y bacterias. Estos dos microbios cooperaron para
mantener la estabilidad a largo plazo. Y el número de damo archaea fue mayor que el de las
bacterias damo con una proporción de 1.77. Al usar metano como donante de electrones, damo
archaea redujo el nitrato a nitrito acoplado a la oxidación de metano y las bacterias damo reducen
el nitrito generado a gas nitrógeno. El primer paso de nitrato a nitrito tomado por damo archaea
podría ser el paso limitante de este sistema de cooperación. SBR podría ser una configuración de
reactor adecuada para enriquecer microbios de crecimiento lento como el cultivo de damo. Estos
resultados demostraron la posible aplicación de procesos de damo para la eliminación de nitrógeno
de aguas residuales que contienen bajas relaciones C / N. Palabras clave: desnitrificación
dependiente de metano, oxidación anaeróbica de metano, Damo archaea, eliminación de nitrato,
SBR

INTRODUCCION

Los bioprocesos anaerobios oxidantes de metano (damo) desnitrificantes tienen un gran significado
ecológico y potencial de ingeniería debido a la participación de dos contaminantes que causan
nitrato y nitrito de eutrofización, y un importante gas metano de efecto invernadero. Los
microorganismos damo se enriquecieron por primera vez en un reactor a escala de laboratorio que
existe como un consorcio de bacterias y arqueas (Rag hoebarsing et al. 2006). Las bacterias Damo,
como Candidatus Methylomirabilis oxyfera (Candidatus M. oxyfera) se demostró que lleva a cabo el
bioproceso anaerobio oxidante de metano (n-damo) dependiente de nitrito usando nitrito como
aceptor de electrones. Estas bacterias se enriquecieron a partir de una variedad de inóculos
alimentados con metano y nitrito en diferentes reactores. Las condiciones de enriquecimiento de
las bacterias damo también se optimizaron y se estableció el modelo matemático. "NO dismutación"
es la hipótesis más popular sobre la vía metabólica de n-damo mediada por la bacteria damo.

A pesar del gran progreso realizado en n-damo, se ha prestado menos atención al bioproceso
anabólico oxidante de metano (N-damo) dependiente de nitrato. En algunos trabajos publicados
sobre el enriquecimiento del microorganismo funcional N-daños, el amonio se usó a menudo para
desarrollar bacterias anammax como el socio basado en la cognición de que las arqueas de N-damo
solo pueden reducir el nitrato a nitrito (Hu et al 2011, Shi et al.2013). A partir de los consorcios
enriquecidos de N-damo archaea, se identificaron damo archaea como Candidatus
Methanoperedens nitroreducens (Candidatus M. nitrore ducens) y se investigó la genómica del
microbio funcional (Haroon et al.2013 Arshad et al.2015). Con la detección del gen de la metil-CoM
reductase (McrA) y la nitrato reductasa en Candidatus M. nitroreducens, se creía que este
microorganismo combina la oxidación anaeróbica de metano con la reducción de nitrato mediante
la "reversión de la metanogénesis" (Haroon et al. 2013, Arshad et al. al. 2015). Además, el gen McrA
como biomarcador funcional para la detección específica de Candidatus M. nitroreducens se fundó
en varias muestras ambientales, como sedimentos de ríos, lagos, arrozales (Ding et al. 2015; Lu et
al. 2015; Vaksmaa et al. 2017b). También se discutió el potencial de ingeniería del sistema acoplado
damo y anammox para la eliminación anaeróbica de nitrógeno de las corrientes de aguas residuales
que contienen amonio, nitrato y nitrito (Cai et al. 2015; Hu et al. 2015; Xie et al.2017) .La tasa de
eliminación de nitrógeno (NRR) en un cocultivo de damo y anammox alcanzó un valor de 190-684
mg NO3-, NL-1 día-1, que cumplió con las demandas de eliminación de nitrógeno de las plantas de
tratamiento de aguas residuales (PTAR) (Shi et al.2013, Cai et al.2015) Considerando El nitrato es
más omnipresente que el nitrito, es la forma principal de óxidos de nitrógeno en muchos entornos
causados por actividades humanas, como la escorrentía agrícola y los efluentes de las plantas de
tratamiento de aguas residuales (Ding et al. 2016) Los estudios sobre damo en condiciones de
nitrato único sin nitrito podrían ser más realistas. Vaks maa y col. (2016) descubrieron que N damo
archaea playeda desempeña un papel más importante que la bacteria n damo en el ambiente de
agua dulce a través de la técnica 16S rRNA qPCR. Sin embargo, la comprensión previa sobre el
proceso de N damo y su microorganismo funcional solo en condiciones de nitrato y metano no es
acorde con su importancia aún. Al inocular con sedimentos de agua dulce de los lagos y alimentarse
solo con nitrato y metano no pudo enriquecer damo archaca incluso después de 13 y 6 meses de
cultivo, respectivamente. Estos dos intentos mostraron nuevamente que enriquecer la damo
archaea es más difícil sin la existencia de bacterias anammox. Enriquecieron el cultivo de N damo
del suelo del campo de arroz alimentado con solo nitrato y metano en SBR. El sistema microbiano
de acoplamiento capaz de desnitrificar dependiente del metano con solo nitrato y metano
proporciona una nueva aplicación tecnológica para la eliminación de nitrógeno de las aguas
residuales que contienen solo nitrato y una fuente de carbono insuficiente, con las ventajas de una
menor producción de lodo y la utilidad de una fuente de carbono gaseosa más barata. En China, el
estándar de descarga de contaminantes de nivel A en las EDAR urbanas (GB 18918-2002) tiene dos
tipos, clase A y B. El estándar de descarga de dass A es mucho más alto que el de la clase B. Para el
nitrógeno amoniacal, el efluente concentración en clase A y B son 5 y 8 mg-N / L respectivamente.
Para el nitrógeno total (TN), la concentración de efluente en la clase A y B es de 15 mg-N / L y 20
mg. N / L respectivamente. La concentración de nitrógeno amoniacal en el efluente de las PTAR
podría satisfacer la demanda de descarga, mientras que la concentración de nitrato no. En ese caso,
en el efluente de las aguas residuales anaeróbicas, el nitrato puede considerarse como el
componente principal de TN. Las investigaciones detalladas sobre la comunidad microbiana, la
velocidad del proceso, la estabilidad a largo plazo y los factores de influencia del sistema de
desnitrificación dependiente de metano en condiciones de nitrato y metano son necesarios para
evaluar aún más su potencial de ingeniería. Tanto la bacteria damo como la bacteria anammox
pueden acoplar dacha archaea en un proceso de damo dependiente de nitrato mediante la
oxidación de nitrito. El producto de la actividad de DAMO archaea es el nitrito, y una mayor tasa de
eliminación del producto de nitrito aceleraría el proceso de DAMO. La competencia del nitrito entre
las bacterias damo y las bacterias anammox ha sido un tema candente en el proceso DAMO.
Además, Ma et al. (2014) observaron que las bajas concentraciones de amoníaco (1-10 mg / L)
estimularon el enriquecimiento de Nitrobacter winogradskyi, una bacteria de oxidación de nitritos.
Para obtener la tasa máxima de eliminación de nitrato, se ha agregado la bacteria anammox al
reactor en la prueba por lotes para acelerar el consumo de nitrito. En este estudio, dos SBR
alimentados con solo nitrato y metano fueron operados durante más de 600 días para enriquecer
los microorganismos damo del inóculo de lodo mixto y su potencial de operación se evaluó mediante
la prueba NRR. Se reveló la evolución de la comunidad microbiana en este sistema y se investigó
más el efecto de la temperatura en el proceso. Los objetivos de este estudio son evaluar el
rendimiento a largo plazo del N damo en SBR con solo nitrato y metano y obtener una NRR alta para
su uso potencial para la eliminación de nitrato en aguas residuales con bajo contenido de nitrato y
fuente de carbono insuficiente. Estos resultados ampliarían el conocimiento sobre el proceso de N
damo y muestran la posibilidad de que los procesos de damo puedan representar una tecnología
innovadora para eliminar el nitrato (especialmente a baja concentración) de los efluentes
anaeróbicos de las aguas residuales. En China, la falta de una fuente de carbono adecuada conduce
al efluente de las PTAR a menudo contiene nitrato que no puede satisfacer la demanda de descarga
de aguas residuales.

Mediante la adición del cultivo damo y lavado con metano en aguas residuales anaeróbicas, este
problema podría ser resuelto.

Materiales y métodos

Inóculo y medio

sedimento del lago de agua dulce (60 ml), suelo de arroz (450 ml) y lodos metanogénicos (400 ml)
de una planta local de tratamiento de aguas residuales en Chongqing, China fueron muestreados y
mezclados. Para eliminar las impurezas sólidas y los asuntos orgánicos, la mezcla se precipitó y
tamizado (10 mallas), seguida con limpieza (solución De NACl 0.9%) y lavada (gas nitrógeno 99,99%)
por tres veces. La mezcla pretratada se diluyó entonces con medio mineral y solución de
oligoelemento para obtener una suspensión homogénea de 3 L. Esta suspensión fue finalmente
dividida en dos partes e inoculada en dos reactores (llamados A y B) para el enriquecimiento de
microorganismo damo. La composición de las soluciones de medio mineral y oligoelementos se
preparó sobre la base de la fórmula descrita por Ettwig et al. Durante la preparación, el oxígeno
disuelto (DO) permaneció por debajo del límite de detección para mantener la condición anaeróbica
mediante el lavado con gas nitrógeno (99,99%). En la prueba por lotes junto con anammox, bacterias
anammox (100 ml, SS 1,65 g/L, VSS-0,77 g/L) derivadas del biorreactor anammox en un estudio
anterior se inoculó en el reactor B.

Operación de los reactores.

Dos reactores con un volumen de trabajo de 20 L, envueltos con papel de aluminio, se configuraron
para ejecutar el N-damo proceso. Y 1,5 L de la mezcla homogéneo mencionado anteriormente se
introdujo en los reactores y se mezcló agitando. La temperatura en los reactores se controlaba
utilizando agua del sistema de circulación de recipiente de agua. El valor de PH fue monitoreado por
sondas en línea y se mantuvo a 7.0-7.5 por inyección manual de 1M HCl o 1M NaOH. Los reactores
estaban funcionando en el modo por lotes: (1) La solución madre de nitrato fue añadido a los
reactores para mantener la concentración de 50-150mg / L; (2) Metano (90% H4: 5% C02: 5% N2
vol: vol: vol) se introdujo en los reactores cada 2-5 días para proporcionar sustrato y mantener la
condición anóxica; (3) cada mes, aproximadamente 500 ml de sobrenadante en los reactores fue
intercambiado con medio fresco. En la prueba por lotes de damo acoplado anammox, nitrito, se
añadieron nitrato y amonio al reactor B en el día 261. Después de que anammox se acostumbró a
las consecuencias ambientales se interrumpió el suministro de nitrito. Y al final de la prueba por
lotes, se interrumpió el suministro de nitrógeno de amonio y se cambiaron 500 ml de sobrenadante
para restringir la actividad de anammox. Se realizaron dos pruebas por lotes a corto plazo. Cuando
se alcanzó un estado estable en la prueba de lote A se añadió nitrito (<20 mg NO3-, -NL-1 día-1) al
reactor A y B. Las concentraciones de nitrito en el líquido y los porcentajes de metano en el espacio
de la cabeza se medido 5 veces/día. En la prueba por lotes B, con nutrición, nitrato y metano se
muestrearon de 5 a 7 veces/semana para calcular la relación de consumo. Al final de la prueba por
lotes B, el metano fue reemplazado por gas nitrógeno a observar el efecto de metano en la
conversión de nitrato. Las concentraciones de nitrato, nitrito y amonio en el líquido y los porcentajes
de metano y gas nitrógeno en el espacio de la cabeza se midieron 2-3 veces por semana. El licor
mezclado volátil sólidos suspendidos (MLVSS) en reactores también fueron probados de 2 a 3
meses/tiempo. Basado en el análisis de regresión lineal de estas mediciones, se obtuvieron la tasa
de eliminación de nitrato y metano y se supervisaron las actividades de la cultura damo. Reactor A
y B fueron operados en las mismas condiciones, excepto por las condiciones de temperatura. La
temperatura del reactor B se mantuvo a 30°C durante todo el tiempo, mientras que la temperatura
en el reactor A se ajustó de 22 a 30°C después de 144 días para explorar el efecto del cambio de
temperatura. Los detalles de la condición de operación se muestran en la Tabla 1.

Métodos analíticos

Las muestras de líquidos se estremecieron a través de los filtros de membrana de acetato de

celulosa de 0,45 m antes de la medición. El NO2 se analizó utilizando métodos colorimétricos, y el
NO3 se midió espectrofotométricamente de acuerdo con el método de prueba estándar (Federación
y Asociación 2005). El contenido orgánico total de las muestras líquidas fue medido por el analizador
de carbono orgánico total con la potencia de resolución es 0,01, la precisión es de 0,2 mg/L. El MLVSS
de las culturas se determinó de acuerdo con Métodos APHA (2005). El metano en el espacio de la
cabeza fue analizado por cromatografía de gases equipada con un detector de conductividad
térmica. La temperatura del inyector y la temperatura de la columna fueron a 110°C, y la
temperatura del detector se estableció a 150°C. El helio se utilizó como gas portador a 14 ml/min.
La cantidad total de metano de las fases líquida y gaseosa se calculó sobre la base del teorema de
Henry.

Tabla 1 Condiciones operativas de los reactores

Análisis de estructura microbiana

El ADN genómico de cada muestra se extrajo de lodos de 0,5 g (peso seco) utilizando un kit de ADN
del suelo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La concentración y la calidad del ADN se
examinaron utilizando un espectrofotómetro NanoDrop 2000 (Termo Fisher Scientifc, Wilmington,
DE). La abundancia de bacterias M. oxyfera y M. nitroreducens archaea fueron cuantificadas a través
de una técnica de PCR en tiempo real con los pares especiales de imprimación qP1F-qP1R y 345F-
541R. Las normas se prepararon utilizando ADN plásmido diluido en serie con 103-108 copias
genéticas de μL-1. Las curvas estándar se generaron trazando los valores del ciclo umbral frente al
log10 de los números de copia genética. El análisis filogenético de Candidatus M. oxyfera y
Candidatus M. nitroreducens se llevó a cabo a través del análisis de genes de ARNr 16S. Para las
amplificaciones del gen Candidatus M. oxyfera 16S rRNA, se realizó un PCR anidado con una
imprimación delantera especifc 202 y una imprimación inversa bacteriana universal 1492R en la
primera ronda, y un par de imprimación PCR especificado de qP1F-qP2R en la segunda ronda. El
nested-PCR también se utilizó para amplificar el gen 16SrRNA de M. nitroreducens archaea, el par
de imprimación universal 20F-958R (DeLong 1992) se utilizó en la primera ronda y el segundo suelo
fue realizado por el par de imprimación específica 142F-773R. Los productos de PCR anteriores
respectivamente fueron ligados al vector pMD19-T de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Los árboles filogenéticos se construyeron utilizando el método de unión de vecinos en el software
MEGA 4.1.

Números de adhesión a la secuencia de nucleótidos

Las secuencias reportadas en este estudio fueron depositadas en la base de datos de GenBank con
números de adhesión MH094054–MH094090 (damo archaea 16S rRNA genes), MH094079–
MH094109 (bacteria damo 16S (gen) del ARNR).

RESULTADOS

Actividad a largo plazo del cultivo enriquecido

Al alimentarse sólo con nitrato y metano, el cultivo N-damo se enriquecieron y el sistema se operó
más de 600 días. La actividad de desnitrificación del cultivo enriquecido en los SBRs fue reflejada
por los cambios de concentración de nitrato y nitrito, y los resultados fueron mostrados en la Fig.1.
En la figura 2 se mostraron los NRR correspondientes a los cambios de concentración de nitrato. El
reactor A pasó por dos diferentes fases de temperatura, 22°C a 0–143 días y 30°C a 144–600 días.
Durante la fase de 22°C, y el NRR fluctuó en el rango de 0,5–5,2 mg de NO3 N L-1 día-1 con una
tendencia general primero de aumento y luego descenso. En el día 144, la temperatura en el reactor
A se ajustó a 30°C. Después de 20 días estables en NRRs bajos, el NRR comenzó a aumentar, seguido
de una etapa de aceleración de 4.1 a 29.7 mg NO3-N L-1 día-1. Los sistemas se mantienen en 21,91
± 0,73 mg NO3- L-1 día-1 durante 116 días (día 384–500). Entonces el NRR comenzó a caer y se
mantuvo a una velocidad constante de 12,8 mg NO3 N L-1 día 1 en el día 575. A la espera del
funcionamiento a 30°C durante todo el proceso, el estado en el reactor B fue similar al del reactor
A. Como se muestra en la Figura 2, en el reactor B, el NRR fluctuado en el rango de 0,7–6,0 mg NO3-
N L-1 día-1 con una tendencia general primero de aumento y luego descenso de 0 a 75 días. El NRR
comenzó a aumentar en el día 80, y el NRR máximo en el reactor B alcanzó 16,27 NO3-N L-1 día 1
en el día 260. Y después del día 260, una prueba por lotes con anammox bacterias se llevó a cabo
para investigar los efectos del proceso de anammox en este sistema N-damo. En la prueba por lotes,
el amonio se añadió al reactor y luego la bacteria anammox se inoculó en el período del día 261 al
día 450. Durante esta fase, el NRR alcanzó 66,43 mg de NO3 -N L-1 día 1. Desde el día 451, el sistema
fue recuperado para alimentarse con sólo metano y nitrato. Sin la coexistencia de bacterias
anammox en el reactor, el NRR disminuyó rápidamente y luego se mantuvo en 10,4 mg de NO3-N
L-1 día-1 a partir del día 564. Durante todos los procesos, la acumulación de nitrito en los dos
reactores no se produjo obviamente (Fig. 1). Además, el carbono orgánico total en los cultivos fue
bajo el límite de detección y podría ser insignificante.

Prueba por lotes a corto plazo de la conversión de nitrógeno

Se realizaron dos pruebas por lotes a corto plazo cuando el estado estacionario se alcanzó en el
sistema. La prueba del lote A se llevó a cabo para identificar la capacidad de remoción de nitrito de
bacterias damo en el sistema. Desde que no hay acumulación de nitrito se encontró en los dos
reactores, la adición artifcial de nitrito se ha insertado en los reactores. Fed con metano y nitrito en
los dos reactores, la concentración de nitrito disminuyó gradualmente. Una extirpación estable de
nitrito tasa de 51,91 mg NO2 N L-1 día 1 fue obtenida, que era casi dos veces mayor que el de
remoción de nitrato. La prueba del lote B se llevó a cabo para investigar la tasa de rotación de
nitrógeno y metano de cultivo damo y verificar el balance de masas. La estequiometría observada
de la conversión de nitrato sin consumo de metano fue de 8:4.7 a 0,7. La conversión de nitrato cesó
cuando el metano fue reemplazado por gas nitrógeno en las pruebas por lotes.
Figura 1: Concentraciones de nitrato y nitrito en el reactor durante los 600 días. a Cambios en la
concentración de nitrato y nitrito en el reactor A; b cambios en la concentración de nitrato y nitrito
en el reactor B.

Comunidades microbianas de los reactores de enriquecimiento

El gen 16S rRNA de arqueal y bacteriano fue analizado para determinar la identidad filogenética de
los cultivos enriquecidos en los reactores SBR. Un total de 25 clones positivos de N-damo archaea
fueron seleccionados y secuenciado. Estas secuencias estaban relacionadas con el grupo ANME y se
dividieron en dos grupos distintos del grupo ANME euryarchaeote (Fig. 3a). Y un grupo fue
encontrado en sedimentos oceánicos anteriores (Quaiser et al. 2011). El análisis de secuencia de las
bacterias mostró todas las secuencias agrupadas en una subdivisión que estaba relacionada con
Candidatus M. oxyfera (Fig. 3b), que fue bien reconocido como las bacterias de oxidación de metano
anaeróbico dependientes del nitrito (Ettwig et al. 2010). La similitud de las secuencias entre N-damo
archaea recuperadas en este estudio con Candidatus M. nitroreducens fue del 93,4–98,1%
(secuencias 19/25), 94,2–97% (secuencias 6/25). Se llevó a cabo qPCR en tiempo real para
cuantificar Candidatus M. nitroreducens y Candidatus M. oxyfera en los dos reactores, y los
resultados mostraron que dos especies damo aumentaron con el tiempo de cultivo. En el reactor A,
Candidatus M. nitroreducens aumentó de 3.1-108 a 14.7-108 copias g-1VSS desde el día 240 hasta el
día 400, mientras que Candidatus M. oxyfera aumentó de 3,0 x 108 a 8,3 x 108 copias g-1 Vss.
Además, la relación de damo archaea a la bacteria damo aumentó de 1.05:1 a 1.77:1. En el reactor
B, Candidatus M. nitroreducens levemente aumentado de 9,1 x 108 a 12,1 x 108 copias g-1 VSS
mientras que Candidatus M. oxyfera aumentó fuertemente de 5,8 x 108 a 34,5 x 108 copias g-1 VSS.
La relación de damo arquea a bacterias damo disminuyó de 1.57:1 a 0.35:1.

Discusión

Es ampliamente aceptado que el enriquecimiento de damo archaea es más difícil que la de las
bacterias damo (Hu et al. 2009, 2011; 2017). Las propiedades fisiológicas de damo archaea los hizo
necesitar un removedor de nitrito para ayudar a aliviar su toxicidad (Hu et al. 2011). Así, los estudios
previos sobre el N-damo a menudo introducen el proceso de anammox mediante la alimentación
de amonio. Sin embargo, sólo hay nitrato (no hay nitrito o amonio) en algunos medios ambientales,
como agua subterránea contaminada por nitrato o el efluente del proceso tradicional de
nitrifcation–denitrifcation. Por lo tanto, el establecimiento de un sistema de cultivo damo capaz de
la eliminación completa de nitratos con sólo nitrato y el metano tiene signo ecológico y significados
prácticos. En este estudio, los microorganismos N-damo fueron enriquecido con éxito en dos SBR
alimentados con sólo nitrato y metano, sin la ayuda de bacterias anammox. La eliminación de nitrato
depende únicamente del metano y la relación estequiométrica de CH4 a NO3 estaba de acuerdo
con la expectativa teórica de 0,63 en productos químicos (Raghoebarsing et al. 2006). Y el análisis
de la estructura microbiana mostró que este sistema ganó una población estable con una mezcla de
damo archaea y bacterias damo. La relación de células archaeas a bacterianas en dos reactores
aumentaron de forma significante después del enriquecimiento que era mucho mayor valor que la
relación obtenida en otros estudios (Raghoebarsing et al. 2006; 2014, 2017a). No se observó
acumulación de nitrito durante más de 600 días. Todos estos resultados demostraron que la
cooperación de damo archaea con bacterias bajo condiciones de nitrato y metano podría lograrse.
Mediante el uso de metano como donante de electrones, damo archaea reduce aún más el nitrato
a las bacterias de nitrito y damo reduce el nitrito al gas nitrógeno. La tasa de eliminación de nitrito
del sistema de acoplamiento establecido de damo archaea y bacterias fue casi dos veces más alto
que el de nitrato. El resultado iluminó que el primer paso del proceso de nitrato a nitrito la conducta
por damo archaea es el paso limitante del sistema microbiano de acoplamiento. Además, la
constante de afinidad de metano para Candidatus M. oxyfera ha sido calibrada para ser 1.47 mg
CH4 L-1 (El et al. 2013), que es más de una magnitud menor que la de los procesos archaeas de
AOM. Por tanto, damo archaea podría ser fundamental para establecer este sistema. Después de
600 días de funcionamiento, el promedio de NRR de 21,91-0,73 mg NO3 N L-1 día 1 y el NRR máximo
de 29,7 mg NO3 N L-1 día 1 fueron más altos de lo reportado anteriormente en condiciones similares
(Hu et al. 2011). El NRR de 21,91-0,73 mg NO3 N L-1 día 1 obtenido en este estudio fue casi el
reportado al valor máximo en SBR. Estas tasas se acercaron a lo necesario para la eliminación de
nitratos en una transmisión lateral de Los EDAR (5,6–135 mg-N L-1 día 1) o alguna corriente principal
con baja concentración de nitratos (Cai 2015; 2017). Recientemente, el gobierno chino ha
establecido un riguroso estándar de descarga de nitrato concentración de efluente de las EDAR.
Para cumplir con el estándar de descarga, es necesario eliminar aproximadamente 5 mg/L de nitrato
adicionales en efluente desnitrificante. Según la NRR y HRT (3,5 meses) obtenido en este estudio,
es posible para eliminar el nitrato en varias horas, lo que implica la posible aplicación de ingeniería.
Además, el metano podría obtener en el lugar en las EDAR y el metano extra desnitrificante efluente
se puede eliminar fácilmente. Así, la eliminación de nitrato dependiente del metano podría ser una
tecnología rentable y respetuosa con el medio ambiente para tratamiento de aguas residuales de
nitrato de bajo concentrado. La razón por la que damo archaea no fue de enriquecimiento no está
claro (Wang et al. 2016; 2017). Uso en solitario inóculo de sedimentos de agua dulce podría ser la
posible razón de acuerdo con el hecho de que ninguna damo archaea fueron encontrados en el
sedimento de agua dulce (Zhu et al. 2013). En este estudio, tanto los reactores A como B pasaron
por un proceso por microorganismos heterotróficos. Durante este proceso, microorganismo
desnitrificante heterotrófico utilizó materia orgánica residual y el NRR aumentaron rápidamente.
Después de que la materia orgánica se agotó, el cultivo damo se convirtió en los microorganismos
funcionales. Y la hora de inicio de la actividad del cultivo de N-damo en el reactor B (día 75) fue
mucho antes que la del reactor A (día 100) debido a la temperatura más alta en el reactor B. Podría
concluirse que la temperatura también puede afectar el cultivo damo de enriquecimiento. Además,
30°C podrían ser más adecuados que 22°C para el enriquecimiento de la arquea N-damo según la
variación de la RNR, que se ha notificado en otros estudios (Ettwig et al. 2009; 2009). Una mayor
abundancia de damo archaea en el sistema N-damo proporciona ventaja según el estudio de damo
Archaea. En este estudio, la relación entre damo archaea y damo bacterias fue 1.77:1, que necesita
ser promovido aún más. Recientemente, se utilizaron varias técnicas nuevas para enriquecer y
purificar las arqueas damo. (2017a) desarrollaron un sistema de pila de combustible microbiana
(MFC) para purificar damo archaea consorcio enriquecido de damo archaea, bacterias damo y
bacterias anammox. Después de 45 días, la proporción de damo archaea a las bacterias damo en el
consorcio aumentó de 1:2.7 a 2:1, que es similar a nuestro resultado (1.77:1). Además, combinando
otros métodos como clasificación celular integrada para separar damo archaea de bacterias damo
podrían facilitar el enriquecimiento de damo archaea (Qi et al. 2017). Hasta ahora, damo archaea
casi siempre se enriquecieron junto con la bacteria anammox alimentándose con amonio para evitar
una posible acumulación de nitrito. Los NRR altos reportados también se obtuvieron en el sistema
de damo y anammox. En este estudio, no hay acumulación de nitrito se observó durante todo el
proceso en los dos reactores (excepto la prueba por lotes en el reactor B), que indicaba que el
sistema de damo archaea junto con las bacterias damo podría ir constantemente. En el lote de
adición de anammox en el reactor B, el NRR alcanzó a 66,43 mg NO3 —N L-1 día 1. Y después de
quitar la cooperación de la anammox (detener el suministro de nitrógeno de amoníaco) del sistema,
el NRR en el reactor B cayó rápidamente, y el cultivo damo pasó más de 2 meses para alcanzar un
estado estable. Los resultados de Te mostraron que el NRR obtenido en un sistema damo tan único
podría acelerarse mediante la coexistencia de la anammox (Cai et al. 2015). En términos de tipo
reactor, se informó que el biorreactor de membrana de fibra hueco enriquece a la arquea damo y
nRR (Cai et al. 2015; 2017). Sin embargo (1998) demostraron que SBR es una poderosa herramienta
para enriquecer los microorganismos de crecimiento lento con ventajas de la retención de biomasa
eficiente, una distribución de sustratos, una operación confiable desde hace mucho tiempo.
Mientras tanto, este estudio apoyó que el SBR puede para enriquecer y ejecutar damo archaea y
bacterias sistema cooperativo con sólo metano y nitrato. Además la hora de inicio del sistema N-
damo en los SBR (re-infectados por el aumento de la RNR o el aumento del número de 16S copias
del gen rRNA de Candidatus M. nitroreducens) en este estudio fue de unos 75-100 días, que fue más
corto que los reactores continuos de 200 días (Hatamoto et al. 2014). (2017a) también informó que
la hora de inicio de la actividad de N-damo en SBR fue menos de 200 días. En resumen, la
alimentación con nitrato y metano en Los SBR, un consorcio microbiano de damo archaea y
bacterias se enriquecieron con éxito. Mantuvo la estabilidad a largo plazo por el modo de
cooperación que damo archaea reduce nitrato a nitrito acoplado a la oxidación anaeróbica de
metano y las bacterias damo reducen el nitrito generado al gas nitrógeno utilizando metano como
donante de electrones. Los NRR obtenido en este estudio es el más alto en condiciones. La
competencia por metano entre damo bacterias archaea y damo, y el primer paso más de nitrato a
nitrito tomado por damo archaea podría ser pasos limitantes del sistema de cooperación. N-damo
mostró un potencial de capacidad en aplicaciones de ingeniería.