INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA

“José María Morelos y Pavón”

DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE LICENCIATURA

BIOQUÍMICA

ING. BIOQUIMICA

PRÁCTICA 8.

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA.

ALUMNOS:
Esteban Ramírez García - 18122001
Nancy Rodríguez Fonseca – 17120125
Alberto Moreno Reyes – 17120190
Erick Almaraz Mendoza - 16120198

MAESTRO:

D.C. JUAN CARLOS GONZÁLEZ HERNÁNDEZ

MORELIA, MICHOACÁN; OCTUBRE 2019

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Índice.
Introducción______________________________________________________________3

Objetivo_________________________________________________________________ 4

Hipótesis________________________________________________________________ 4

Materiales y Reactivos_____________________________________________________ 4

Diagrama de Flujo_________________________________________________________5

Discusión de Resultados__________________________________________________5 - 6

Anexos (Cuestionario)__________________________________________________6 - 11

Conclusiones____________________________________________________________12

Referencias Bibliográficas_________________________________________________ 12

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Introducción.
La glucosa, la principal fuente de combustible del cuerpo, se forma por la descomposición de los
alimentos en el aparato digestivo. Después de la digestión, se absorbe a la circulación sanguínea y
luego se utiliza como fuente de crecimiento y de energía de las células. Este rendimiento energético
es de aproximadamente 686 kilocalorías por cada mol de la sustancia.
Junto con la fructosa y la galactosa, la glucosa es uno de los tres tipos de monosacáridos que están
presentes en los alimentos y que durante la digestión se absorben directamente al torrente sanguíneo
humano; su presencia determina el nivel de azúcar en la sangre o glucemia.
Los niveles normales de glucosa en sangre en las personas que no padecen diabetes ni ninguna otra
enfermedad relacionada son de entre 70 y 100 miligramos de glucosa por decilitro de sangre (mg/dl)
cuando están en ayunas e inferiores a 140 mg/dl dos horas después de ingerir alimentos. En el caso
de los diabéticos, depende de cada caso concreto, pero es más alta; se han establecido unos niveles
óptimos que van de 80 a 100 mg/dl en ayunas, y también inferiores a 140 mg/dl dos horas después de
comer.
Por eso, los niveles de glucosa en sangre resultan útiles a la hora de determinar si una persona tiene
o no diabetes. Para conocer esos niveles existen una serie de pruebas, como la realización de un
examen de orina (en el que se busca la presencia de glucosa o cetonas), otra sencilla prueba de punción
del dedo mediante un glucómetro, que mide la cantidad de glucosa, aunque no suele ser suficiente, o
un análisis sanguíneo en ayunas, que es la prueba idónea.
También se puede realizar un análisis de sangre aleatorio, en cualquier momento del día
independientemente de si se han ingerido alimentos o no, o una prueba de tolerancia a la glucosa oral
(en la que, tras ayunar durante un lapso de tiempo de al menos 8 horas, se administra una dosis de
glucosa para proceder a la realización de un análisis sanguíneo basal, a la hora y a las dos horas).

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Objetivo General.
Determinar la concentración de glucosa de una muestra extraída de suero sanguíneo de dos
alumnos tomando en cuenta que uno de ellos está en ayunas y el otro desayunó previamente. La
muestra se llevará a cabo por medio de un kit enzimático

Objetivo Específico.
Dar a conocer la información necesaria sobre el principio del método de la práctica para tener un
correcto uso sobre el kit enzimático a utilizar.

Hipótesis.
Se determinará en un par de muestras de sangre a través del kit enzimático y espectrofotometría,
la concentración de glucosa en sangre y determinar si hay mucha variabilidad en las muestras o
niveles anormales en las mismas.

Materiales y equipos.
Espectrofotómetro UV-Vis. Micropipetas (1-10µl y 100µl)
Centrifuga. Puntas estériles
Termobaño a 37°C (±0.1°C). Guantes de látex
Tubos para centrifuga de 5ml. Cubre bocas
4 cubetas de 1 cm de paso de luz. 1 jeringa estéril de 5 ml
1 Pipeta Pasteur. 1 tubo de ensaye

Reactivos.

Suero o plasma sanguíneo.

Kit enzimático que se compone de dos

partes:

TRIS pH 7.4…………….……92 mmol/L Fenol………………………………0.3 mmol/L

Glucosa oxidase (GOD)… …..15000 U/L Peroxidasa (POD)…………………...1000 U/L

4-Aminofenazona (4-AF…...2.6 mmol/L

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Diagrama de Flujo.

Resultados.

Blanco Patrón 1 2

R (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0

Patrón (μL) - 5 - -

Muestra (μL) - - 5 5

Tabla 1. Proporciones adecuadas para una muestra determinada (SPINREACT, 2014).

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 𝒎𝒈
de glucosa en la Factor de Resultado en
Tubo Absorbancia Fórmula 𝒅𝑳 𝒎𝒎𝒐𝒍
muestra conversión
𝑳

Blanco 0 - - - -

Patrón 0.869 - - - -

(𝑨) 𝑴𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝒎𝒈
1A 0.739 𝒙 𝟏𝟎𝟎 85.04 x 0.0555 4.66
(𝑨) 𝑷𝒂𝒕𝒓ó𝒏 𝒅𝑳

(𝑨) 𝑴𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝒎𝒈
2B 0.781 𝒙 𝟏𝟎𝟎 89.87 x 0.0555 4.98
(𝑨) 𝑷𝒂𝒕𝒓ó𝒏 𝒅𝑳

Cuestionario.
I. Defina un carbohidrato.
Los glúcidos, carbohidratos, hidratos de carbono o sacáridos son biomoléculas compuestas
principalmente de carbono, hidrógeno y oxígeno, aunque algunos de ellos también contienen otros
bioelementos tales como nitrógeno, azufre y fósforo.

II. Explica la clasificación de los carbohidratos de acuerdo a diversos criterios

Monosacáridos
 Hexosas (6 carbonos):
1. Glucosa
2. Fructosa
3. Galactosa

Pentosas (5 carbonos):
1. Ribosa
2. Xilosa
3. Arabinosa
Disacáridos
 Sacarosa: glucosa + fructosa
 Maltosa: glucosa + glucosa
 Lactosa: glucosa + galactosa

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Polisacáridos
 Digeribles
1. Almidón y dextrinas
2. Glucógeno
 Parcialmente digeribles
1. Inulina
2. Manosanos
3. Rafinosa
4. Galactósidos
5. Estaquinosa

 No digeribles (fibra)
1. Insoluble: celulosa, hemicelulosa
2. Soluble: pectinas, gomas, mucílagos, sustancias agar.

SOLUBLES INSOLUBLES

 Gomas
 Arábiga
 Tragacanto
 Guar
 Beta-  Celulosa
glucanos  Hemicelulosa
 Algas  Xilanos
 Alginatos Legumbres,  Galactanos
 Carrageninas espesantes Algas, aditivos  Mananos
 Agar alimentarios Frutas formadas  Lignina Frutas,
 Pectinas por geles Cubierta de (no cereales,
 Mucílagos cereales polisacárido) vegetales

Celulosas
 Retiene agua en las heces (100 g pueden fijar 40 ml de agua)
 Aumenta el volumen y peso de las heces
 Favorecen el peristaltismo del colon
 Disminuye el tiempo de tránsito por el colon
 Aumenta el número de deposiciones intestinales
 Reduce la presión dentro de la luz del colon
 No tiene efecto sobre la absorción de metales, ni el colesterol o los ácidos biliares. Puede
reducir la absorción intestinal de calcio, magnesio, fósforo, hierro y cinc.

Hemicelulosas
 Aumentan el peso y volumen de las heces
 Reduce presión de la luz colónica
 Aumenta la excreción de ácidos biliares en las heces

Pectinas
 Absorben agua

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  Retardan el vaciamiento gástrico
 Fijan los ácidos biliares y aumentan su excreción en las heces
 Reducen la concentración plasmática de colesterol
 Mejoran la tolerancia de los diabéticos a la glucosa
 Fermentables por las bacterias intestinales, proporcionando una fuente energética para las
células intestinales

Gomas
 Retardan el vaciamiento gástrico
 Reducen la concentración plasmática de colesterol
 Mejoran la tolerancia de los diabéticos a la glucosa
 Fermentables por las bacterias intestinales, proporcionando una fuente energética para las
células intestinales.

Mucílagos
 Retardan el vaciamiento gástrico
 Fijan los ácidos biliares y aumentan su excreción en las heces
 Fermentables por las bacterias intestinales, proporcionando una fuente energética para las
células intestinales.

Ligina
 Efecto entero-adsorbente elimina los microorganismos de la luz intestinal, respetando la
ecología microbiana de la flora intestinal.
 Evita el sobrecrecimiento bacteriano
 Actúa como fuente energética de las células intestinales
 Fijan los ácidos biliares y aumentan su excreción en las heces
 Reducen la concentración plasmática de colesterol
 Efecto antitumoral

III. ¿Cuál es la estructura química de la glucosa? Desarrolle en esta parte tres maneras de
Representar dicha estructura.

IV. ¿Por qué se calibra el espectro a una longitud de onda de 505 nm?
Debido a que a esa longitud de onda se logra la excitación del grupo funcional, donde se logra
determinar este grupo.

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V. ¿Cuál es la importancia de la glucosa en los seres vivos?
Por ser la fuente de energía principal del organismo.

VI. Investigue el metabolismo de la glucosa en los seres humanos.

Durante la glucólisis, una vía antigua que se encuentra en casi todos los organismos, se captura una
cantidad pequeña de energía al convertir una molécula de glucosa en dos moléculas de piruvato. El
glucógeno, una forma de almacenamiento de glucosa en los vertebrados, se sintetiza por
glucogénesis cuando la concentración de glucosa es alta y se degrada por glucogenólisis cuando el
aporte de glucosa es insuficiente. La glucosa también puede sintetizarse a partir de precursores
distintos de los carbohidratos por medio de reacciones denominadas gluconeogénesis.

VII. Investigue y describa las reacciones en las que intervienen las enzimas en este método.
La D-fructosa y la D-glucosa presentes en la muestra generan, NADPH que puede ser medido por
espectrofotometría. La configuración de estos reactivos permite la determinación de D-glucosa y D-
fructosa (azúcares totales) si se adiciona la enzima PGI o de D-glucosa si no se adiciona.

VIII. Investigue cuáles son los parámetros estándar correspondientes al método establecido,
compararlos con los obtenidos y realizar una conclusión en base a ello.

Tomando en cuenta los resultados obtenemos valores de niveles de concentración de glucosa que
van dentro de los parámetros normales teniendo entonces que la muestra de la persona que hizo
ayuno obtuvo una concentración de glucosa expresada en mg/dl de 85.04 y la muestra de la persona
que no ayunó nos da un valor de 89.87.
Comparando los valores de concentración de la glucosa de los otros equipos también da como
resultado parámetros normales de la concentración de la glucosa, en el caso de algunos equipos las
absorbancias y la solución patrón son más altas que las que fueron vistas en nuestra tabla de
resultados, esto pudo deberse por errores durante el proceso de manipulación de las muestras.
Llegamos a la conclusión de que la muestra en la que no se presentó ayuno tiene una concentración
de glucosa más alta debido al contenido en carbohidratos del desayuno ingerido.

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IX. Investigue la importancia de este estudio en la medicina actual y cuáles son los problemas
que acarrea un desbalance de glucosa en el organismo.
Debemos cuidar los valores de glucosa porque precisamente el aumento anormal de sus niveles en
la sangre (hiperglucemia) caracteriza a la diabetes mellitus. Esta alteración metabólica puede
deberse a un defecto en la secreción de insulina por parte del páncreas, a una irregularidad en la
acción de la misma o a ambos fenómenos a la vez.
X. Investigue cuales son las interferencias más comunes en este método y mencionar cada una de
ellas.

XI. Investigue otro método similar determinación de glucosa y describirlo, destacando sus
ventajas y desventajas en comparación de este método presentado.
El control continuo de la glucosa (CGM por sus siglas en inglés) es una nueva manera en que las
personas con diabetes se mantienen al tanto de su nivel de glucosa. Mide el nivel de glucosa del
fluido entre las células del cuerpo cada determinado minuto día y noche. Las personas que usan
este tipo de control, en su mayoría, tienen diabetes de tipo 1 y posiblemente también tengan una
bomba de insulina.

El control continuo de la glucosa tiene muchas ventajas en comparación con la prueba de punción
del dedo. El control continuo.

 Permite que la persona verifique el control de glucosa sin una muestra de sangre.

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  Mide el nivel a intervalos de uno a cinco minutos.
 Le indica al usuario.

1. El nivel actual de glucosa.

2. El nivel de glucosa durante un número determinado de horas.
3. Si el nivel de glucosa está subiendo o bajando.
4. La velocidad con que el nivel de glucosa está subiendo o bajando.

XII. Fundamento Bioquímico de operación de los dispositivos Accu check.

1. La sangre se deposita sobre el extremo de la tira, que por capilaridad, es absorbida hasta el
conducto interior de la misma, donde se encuentra el reactivo (las enzimas).
2. Un micro voltaje se aplica sobre la tira desde el medidor y activa la reacción química de
sangre y enzimas.
3. La enzima de la tira se une con la glucosa oxidándola, fruto de cuya reacción se desprenden
electrones.
4. Esos electrones son medidos por varios electrodos de la tira y generan un micro corriente
eléctrico, que es enviada al medidor.

Las Tiras Reactivas modernas son diseñadas para ser utilizadas por una única vez, por Aparatos
Medidores del Tipo Electroquímico, y llevan en un extremo una Enzima (llamada Glucosa Oxidasa)
de Referencia que está impregnada en un extremo de la Tira Reactiva. que en contacto con la
Glucosa de la muestra de sangre que es aspirada por capilaridad, sufre una transformación,
traducida en una Reacción Electroquímica que genera una muy pequeña corriente eléctrica
inofensiva y de muy baja intensidad, que el Medidor interpreta y la muestra como valor de la
Glucemia en general expresada en la unidad mg/dl.

XIII. ¿Qué es la hemoglobina glicosilada?

La hemoglobina glucosilada es el valor de la fracción de hemoglobina (glóbulos rojos) que tiene
glucosa adherida. Luego de que los alimentos son digeridos, el nivel de glucosa libre que circula en
torrente sanguíneo, se eleva, al estar circulando libremente, la glucosa, tiene contacto con los
glóbulos rojos y puede adherirse de manera permanente.

XIV. Curva de tolerancia de glucosa y en qué casos se aplica.

Antes de que se desarrollé la diabetes tipo 2 se experimenta una condición previa llamada
resistencia a la insulina, que se caracteriza porque las células del cuerpo no responden a esta
hormona que ayuda a aprovechar la glucosa. Este fenómeno, también llamado prediabetes, puede
detectarse con una curva de tolerancia a la glucosa.

Asimismo, permite diagnosticar la diabetes tipo 2 o la gestacional, ya que verifica la forma en que
el cuerpo metaboliza el azúcar. Se extrae una muestra de sangre tras el ayuno de una noche (8
horas), luego el paciente toma una bebida rica en glucosa (por lo general, 75 gramos) y, en intervalos
de 30 a 60 minutos (hasta las 3 horas), se toman muestras de sangre. El estrés agudo (por ejemplo,

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por una cirugía o una infección), el ejercicio vigoroso y algunos fármacos pueden afectar los
resultados del examen.

Conclusión.
En la práctica realizada se logró determinar la concentración o cantidad de glucosa en sangre,
primero se tuvo que tomar los resultados obtenidos en el espectrofotómetro y después se realizó
la formula marcada en la práctica para determinar la cantidad de glucosa.

La prueba de glucosa en sangre mide la cantidad de glucosa que hay en la sangre. El azúcar es una
fuente importante de energía, especialmente para el cerebro. El sistema endocrino controla con
exactitud la cantidad de glucosa en la sangre.

Si bien es más exacta la lectura de la muestra en ayuno o se puede decir que es más ‘’precisa’’ para
medir los niveles de azúcar, no varía mucho de la muestra que no es en ayuno, pero depende del
alimento ingerido por el sujeto o por el tiempo transcurrido después de ingerido el alimento.

Referencias.
● CuidatePlus. (2018). Glucosa. 20 de marzo de 2018, de © 2018 Unidad Editorial Revistas,
S.L.U. Todos los derechos reservados. Sitio web:
http://www.cuidateplus.com/alimentacion/diccionario/glucosa.html
● Mathews, C. k. Van Holde, K. E. Ahern, K. G. Bioquímica. (Reimpresión de la 4ta edición).
España: Pearson Educación, S.A., 2013., Cap. 2.
● McCurry, J. Química orgánica (Séptima Edición). Cengage Learning Latin America: México.
2008.
● Velázquez, R. (7 de 06 de 2009). UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA. Obtenido de
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf

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