Genética Forense

M. en C. GUILLERMO EDUARDO CUÉLLAR NEVÁREZ

MEDICINA GENÓMICA
 Herramientas
científicas

Herramientas
tecnológicas

GENÉTICA
FORENSE
 • Método para identificar orígenes
Usos
• Casos civiles y penales

• Saliva
• Manchas de sangre
Tipos de
muestras • Manchas de origen biológico

• Determinar la identidad
• Inocencia
Apoyo
judicial • Culpabilidad
Identificar
víctimas de
catástrofes
• Tsunami de Asia en
2004
• Ataques terroristas 11
septiembre 2001 NY.
 Métodos

Huella basada en Perfiles mediante STR Perfil STR cromosomas Perfil ADN Polimorfismos de un
VNTR autosómicos sexuales mitocondrial solo nucleótido

Regiones no Regiones no
Cromosomas sexuales
codificantes del codificantes del
XeY
genoma genoma

Secuencias repetidas Microsatélites o Microsatelites o

de ADN entre 15 y 100 repeticiones cortas en repeticiones en
pb. tándem. tándem.

Varían desde 2 y 9 Varían desde 2 y 9

Los VNTR varían desde
nucleótidos repetidos nucleótidos repetidos
1 y 20 kb
desde 7 y 40 veces. de 7 y 40 veces

Usa enzimas de Utiliza la PCR y Utiliza la PCR y

restricción electroforesis capilar electroforesis capilar.

Instrucciones: Rellena los recuadros faltantes.

Investigación Integral y Científica
Criminalística

Medicina

Química

Genética
Genética Forense

“El uso de técnicas de biología molecular

para la identificación de individuos con base
en el análisis de los polimorfismos del ADN.”
¿Qué es una Prueba de ADN?

• Prueba compleja que se compone de una

batería de pruebas y procedimientos analíticos
(Biología molecular). Se parte de una muestra
de origen biológico y siempre se basa en la
Comparación de Perfiles Genéticos.
¿Por qué el ADN?

• Es individualizador (excepto gemelos

univitelinos).

• Se encuentra en todas las células del

cuerpo.

• Herencia mendeliana (paterna, materna).

• Se aprovecha el principio de intercambio de

Locard.
El ADN en la Célula
 2 Tipos de DNA
a) Nuclear b) Mitocondrial
Sexual y Autosómico = STR´s HV1 y HV2 = Secuenciación
 ADN Nuclear (AUTOSÓMICO)
• Contenido en el núcleo celular.
• Incluye los 22 pares de cromosomas
autosómicos y el par sexual (cromosoma
Y).
• Se hereda según las Leyes Mendelianas:
50 % madre y 50 % padre.
Herencia ADN Autosómico
Cromosoma Y (vía Paterna)
 Sus aplicaciones son:
 Determinación de vínculos de filiación en
ausencia de progenitor
 Investigación de identidad y sexo en desastres
masivos
 Identificación de sospechosos en casos de
violación hetero y homosexual o en agresiones
tumultuarias.
 Estudios de migración poblacional.
 Herencia Cromosoma Y

+ + + +
ADN mitocondrial (vía Materna)
 Sus aplicaciones son:
 Determinación de vínculos de filiación en
ausencia de progenitor
 Investigación de identidad y sexo en desastres
masivos
 Identificación en muestras degradadas
 Estudios de migración poblacional.
Herencia ADN mitocondrial
+

+ + + +
¿Objetivo de la prueba?
Utilización del ADN
• Casos de Violación
• Homicidio
• Pruebas de paternidad
• Desastres masivos
• Reportes de Desaparecidos.
• Actualmente se están creando bases de Datos.

“Se busca en cualquier caso la comparación

entre evidencia y sospechoso. “
 Tipos de Muestras

Evidencia Biológica

Muestras de REFERENCIA
(Muestras Indubitadas)
Fuentes de muestra biológica
• Sangre
• Semen
• Saliva
• Pelo
• Diente
• Hueso
• Médula
• Tejido
• Raspado de Uñas
Muestras indubitadas (Víctima-Agresor-familiares )

Sangre en FTA
Muestras indubitadas (Víctima-Agresor-familiares )

MUCOSA ORAL
Muestras indubitadas (Víctima-Agresor-familiares )

SANGRE LÍQUIDA CABELLO

Flujograma de trabajo

Evaluación de las
Extracción del ADN Cuantificación del DNA
muestras

Amplificación por PCR

Separación y detección Determinación del
de múltiples
de productos de PCR genotipo
marcadores STR
 Antes de realizar cualquier tipo de análisis, el DNA debe ser aislado de
los componentes celulares así como de cualquier tipo de material no
biológico.

Métodos de Extracción utilizados en el

Laboratorio

Extracción por
DNA-IQ ™
afinidad

Purificación del Extracción Fenol :Cloroformo:A.

Material Genético Orgánicas Isoamilico (25:24:1)

Extracción
Lisis Diferencial
Diferencial
Orgánica
 Lisis
Diferencial
Purificación
Afinidad
IQ DNA

Afinidad iónica

Perlas magnéticas

Positivamente

Purificar ADN
Métodos automatizados
de extracción de ADN
 Electroforesis en Gel de Agarosa

• Se verifica la cantidad e integridad del ADN que se

extrajo de las muestras.
• El gel cargado con las muestras se somete a un campo
eléctrico y debido a la carga del ADN, éste migra hacia
el ánodo.
 PCR Tiempo Real
• Hibridación con sondas específicas.
• Sondas para DNA humano y se establecen concentraciones control para calcular la
concentración de DNA de la muestra.

• Sistema de detección por fluorescencia.

• Analiza ciclo a ciclo los cambios en la señal de fluorescencia

La señal fluorescente permanece

relativamente constante. La
amplificación concluye.

La reacción es limitada, existe

decaimiento de la actividad
enzimática.

La señal es detectada y aumenta de

manera directamente proporcional al
aumento del producto de PCR.
Eficiencia alta y constante.
 Quantifiler® Duo DNA Quantification
• Cuantifica simultanemente la cantidad total de ADN
humano y ADN masculino.
• Cantidad relativa de ADN masculino o femenino.
• Presencia de inhibidores.

VIC

FAM
Amplificación del ADN por PCR
 Se amplifican marcadores moleculares contenidos en el
ADN extraído por medio de PCR

 Se utilizan primers específicos para 15 STR´s multiplex, loci (D8S1179,

D2S11, D7S820, CSF1PO, D3S1358, THO1, D13S317, D16S539,
D2S1338, D19S433, vWA, TPOX, D18S51, D5S818 y FGA ) y un
marcador de sexo (AMEL).

 Los primers están marcados con 4 fluorocromos (6FAM (blue), VIC

(green), NED (yellow), PET (red)) para que puedan detectarse los
fragmentos amplificados por CE.
 Analizador Genético
ABI Prism 310 Genetic Analyzer Applied Biosystems 3130 Genetic Analyzer

capillary

Syringe with
polymer solution

Injection
electrode

Outlet Autosampler
buffer tray

Inlet
buffer
Fragmentos de ADN marcados (productos de PCR )
Capilar
Detección de la Muestra

Separación
Ar+ LASER
Ar+ LASER
(488 nm)
CCD Cámara
por tamaño
(488 nm)

Separación por
Región
Color
detectora

Fluorescencia
Electroferograma
Representación grafica de la migración de cada una de las moléculas

presentes en un amplificado.
 DIRECCIÓN DE SERVICIOS PERICIALES Y CIENCIAS FORENSES

ADN en Identificaciones
MAMA

HIJO

PRESUNTO
PADRE

“2015, Año de José María Morelos y Pavón”

 Exclusión.

Tres posibles conclusiones: No concluyente.

Inclusión.

VALIDACIÓN ESTADÍSTICA.
JOSÉ MARÍA

víctima
PACO

Victima Víctima
SOLE
1 2

VÍCTOR
GMO ALY

Víctima
ROB
1

Víctima Víctima
2 3
 Víctima
1

ANA GPE

Víctima
2
 MADRE VÍCTIMA PADRE
D8S1179 10,11 10,12 12,15
D21S11 30,30 30,33.2 33.2,33.2
D7S820 11,13 11,13 8,11
CSF1PO 12,12 12,12 10,12
D3S1358 16,17 15,17 15,16
TH01 7,7 6,7 6,7
D13S317 12,14 10,12 10,14
D16S539 11,12 11,12 11,12
D2S1338 23,23 23,23 17,23
D19S433 14,14 13.2,14 12,13.2
vWA 16,17 17,17 16,17
TPOX 8,8 8,8 8,11
D18S51 12,12 12,17 15,17
Amel X,X X,Y X,Y
D5S818 11,11 11,11 11,12
FGA 22,26 22,26 21,22

Perfiles genéticos de un trio para identificación de una víctima.

 HISOPADO
PERIVULVAR,
SANGRE EN
MANCHA DE
VAGINAL 1 Y CHAMARRA, SOSPECHOSO SOSPECHOSO SOSPECHOSO
VÍCTIMA SEMEN EN
VAGINAL 2 Y EN 1 2 3
ABDOMEN,
PANTALON
CHAMARRA Y
PANTALÓN
D8S1179 14,15 12,14,15 12,14 14,15 11,15 11,14 12,14
D21S11 30,30 28,30,31.2 28,31.2 30,30 29,30 30,31.2 28,31.2
D7S820 10,11 10,11,12 11,12 10,11 11,12 10,12 11,12
CSF1PO 11,12 10,11,12 10,10 11,12 11,13 10,12 10,10
D3S1358 16,16 15,16,17 15,17 16,16 16,19 14,15 15,17
TH01 7,9 6,7,8,9 6,8 7,9 7,9 7,9 6,8
D13S317 11,13 11,12,13 12,13 11,13 8,8 13,14 12,13
D16S539 9,12 9,11,12 9,11 9,12 11,12 9,11 9,11
D2S1338 16,24 16,22,23,24 22,23 16,24 23,23 23,23 22,23
D19S433 13,14 13,14,15,15.2 15,15.2 13,14 13,16 13,15.2 15,15.2
vWA 17,19 17,19 17,19 17,19 18,19 16,17 17,19
TPOX 8,12 7,8,11,12 7,11 8,12 8,12 8,8 7,11
D18S51 12,15 12,15,16 15,16 12,15 14,16 15,17 15,16
Amel X,X X,Y X,Y X,X X,Y X,Y X,Y
D5S818 11,11 11,13 11,13 11,11 10,11 11,11 11,13
FGA 23,24 21,23,24 21,24 23,24 18,23 24,25 21,24

Perfiles genéticos de un caso de agresión sexual con tres sospechosos.

Con base a los resultados anteriores, determine:
1. ¿Cuál sospechoso es el donador de la muestra?
2. Explique la presencia de mas de dos alelos en las muestras de
VAGINAL 1 Y VAGINAL 2.
3. ¿Cómo validaría estadísticamente su conclusión?
4. ¿Cuál es la frecuencia del perfil genético encontrado en las
muestras?
• Calcular las frecuencias genotípicas del perfil genético obtenido de la
evidencia considerando que la población se encuentra en equilibrio H/W.
 Alelo 1 Alelo 2 Frecuencia 1 Frecuencia 2
D8S1179 14 15 0.29193 0.11801 2pq
D21S11 30 30 0.29503 0.29503 p2
D7S820 10 11 0.30124 0.27019 2pq
CSF1PO 11 12 0.29193 0.34783 2pq
D3S1358 16 16 0.26087 0.26087 p2
TH01 7 9 0.30435 0.1646 2pq
D13S317 11 13 0.26398 0.09627 2pq
D16S539 9 12 0.1118 0.2764 2pq
D2S1338 16 24 0.03106 0.05901 2pq
D19S433 13 14 0.2236 0.31056 2pq
VWA 17 19 0.30745 0.07143 2pq
TPOX 8 12 0.58385 0.06211 2pq
D18S51 12 15 0.13975 0.1646 2pq
D5S818 11 11 0.40994 0.40994 p2
FGA 23 24 0.17391 0.15839 2pq
 Alelo 1 Alelo 2 Frecuencia 1 Frecuencia 2 Frec genotipo
D8S1179 14 15 0.29193 0.11801 6.89013E-02
D21S11 30 30 0.29503 0.29503 8.70427E-02
D7S820 10 11 0.30124 0.27019 1.62784E-01
CSF1PO 11 12 0.29193 0.34783 2.03084E-01
D3S1358 16 16 0.26087 0.26087 6.80532E-02
TH01 7 9 0.30435 0.1646 1.00192E-01
D13S317 11 13 0.26398 0.09627 5.08267E-02
D16S539 9 12 0.1118 0.2764 6.18030E-02
D2S1338 16 24 0.03106 0.05901 3.66570E-03
D19S433 13 14 0.2236 0.31056 1.38882E-01
VWA 17 19 0.30745 0.07143 4.39223E-02
TPOX 8 12 0.58385 0.06211 7.25258E-02
D18S51 12 15 0.13975 0.1646 4.60057E-02
D5S818 11 11 0.40994 0.40994 1.68051E-01
FGA 23 24 0.17391 0.15839 5.50912E-02

Frecuencia del perfil genético = 2.9332E-18

Índice forense (LR) = 3.4092E+17

1. Es aproximadamente 340 mil billones de veces mas probable
que el SOSPECHOSO 3 sea el donador de la muestra de
semen encontrada en las prendas y en el cuerpo de la víctima
a que si procede de un individuo tomado al azar de la
población de Chihuahua.
 BIBLIOGRAFÍA
1. GUTIÉRREZ-ALARCÓN, AB., MOGUEL-TORRES, M.,
LEÓN-JIMÉNEZ, AK., CUÉLLAR-NEVÁREZ, GE., RANGEL-
VILLALOBOS, H. ALLELE AND HAPLOTYPE DISTIBUTION
FOR 16 Y-STRs (AmpFISTR Y-filer kit) IN THE STATE OF
CHIHUAHUA AT NORTH CENTER OF MEXICO. LEG. MED
(TOKYO), 2007, MAY; 9(3): 154-7. 2007 Jan 2.

2. KLUG, W. S., CUMMINGS, M. R., SPECER, C. A.,

PALLADINO, M. A. “CONCEPTOS DE GENÉTICA”, 10ª
EDICIÓN. PEARSON EDUCACIÓN. S.A., MADRID. 2013.
PG 544-555.

3. LUIS J. MARTÍNEZ-GONZÁLEZ Y COLS. MEXICAN

POPULATION DATA ON FIFTEEN STR LOCI (IDENTIFILER
KIT) IN A CHIHUAHUA (NORTH CENTRAL MEXICO)
SAMPLE. J. FORENSIC SCI, 2005, VOL 50, NO.1.