INTRODUCCIÓN:

La interacción entre las ondas electromagnéticas y la materia de la región UV-visible es el campo de estudio
de la espectroscopia UV-visibles o espectrofotometría. Esta basada en la relación que presenta un haz de
luz incidente en la muestra y el haz de luz que pasa por la solución.
Su estudio se basa en que la cantidad de luz absorbida por la materia presente en la solución es
característica del compuesto. La respuesta de dicho componente es función de las características del haz
de luz incidente en la muestra, lo que permite determinar la respuesta en función de la calidad del haz
proporcionado. Dicho conjunto de respuesta en el rango de longitud de onda de la gama UV-visible se
denomina espectro de absorción; dicha respuesta es característica de cada compuesto.

Marco teórico.

ANTECEDENTES

Espectro de absorción

La espectroscopia de absorción es la medida de la cantidad de luz absorbida por un compuesto en función

de la longitud de onda de la luz. En general, e irradia una muestra con una fuente de luz y se mide la
cantidad de luz transmitida a varias longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el fenómeno en
un gráfico. Al contrario que en los ensayos químicos, la mayoría de las técnicas espectroscópicas no son
destructivas, es decir, no destruyen las muestras durante el análisis; se pueden realizar diferentes tipos de
espectros sin pérdida o perdiendo muy poco de muestra.

Cuando un sólido incandescente se halla rodeado por un gas más frío, el espectro resultante presenta un
fondo continuo interrumpido por espacios oscuros denominados «líneas de absorción» que ocurren porque
el gas ha absorbido de la luz aquellos colores que éste irradia por sí mismo. Pero también se da el caso
que en la naturaleza cohabitan cuerpos que absorben radiación emitida por otros, eliminando del espectro
de radiación que reciben aquellas bandas absorbidas, las cuales quedan de color negro. A esas bandas,
se les suele llamar «rayas negras» o simplemente «rayas» espectrales.

Por otra parte, suele ocurrir que unos cuerpo absorben sólo la radiación de unas determinadas longitudes
de onda y no aceptan absorber otras de otras longitudes, por lo que cada cuerpo, cada elemento químico
en la práctica, tiene su propio espectro de absorción, el cual se corresponde con su espectro de emisión, al
igual como si fuera el negativo con el positivo de una película.

Un liviano, transparente y caliente gas en frente de una fuente productora de radiaciones espectrales,
especialmente de características continuas, genera un espectro de absorción, el cual se distingue por una
serie de líneas espectrales oscuras entre los colores brillantes del espectro continuo. En el gráfico de la
figura se grafica la intensidad lumínica versus la longitud de onda (visuales) contrastada con las líneas
espectrales sustraídas del resto de la luz.

En el caso de una estrella, cuando la luz del caliente y energético interior de ella atraviesa la más fría y
menos energética atmósfera exterior, alguno de los fotones son absorbidos por electrones, que saltan a

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niveles concretos de energía. Muchas de tales interacciones crean bandas oscuras en el espectro continuo
con longitudes de onda que corresponden con los intervalos entre pares de niveles energéticos.

Espectro electromagnético

Es el intervalo de todas las frecuencias posibles, desde cero hasta el infinito. En la práctica, en el espectro
se representan desde loas bajas frecuencias de radio utilizadas en las comunicaciones con submarinos
hasta las altas frecuencias de los rayos gamma. El espectro electromagnético es continuo.

(Figura 1: espectro electromagnético)

Todas las radiaciones electromagnéticas viajan a la velocidad de la luz (aproximadamente 3 x 10 10cm/s,

en el vacío), pero difieren en la frecuencia y en la longitud de onda.

Onda electromagnética

Una onda electromagnética es la forma de propagación de la radiación electromagnética a través del

espacio. En la naturaleza, las fuerzas eléctricas se originan de dos formas: Primero está la atracción o la
repulsión eléctricas entre las cargas eléctricas (+) y (-).

Las ondas electromagnéticas siguen una trayectoria rectilínea y su velocidad es constante en cada medio
específico. Al pasar de un medio a otro la única característica que permanece constante es la frecuencia.
La velocidad varía para cada longitud de onda. La frecuencia y la longitud de onda se relacionan según la
siguiente expresión matemática: Longitud de onda = C x T = C / f
Donde es la longitud de onda, C es la velocidad de la luz en el vacío, T el periodo y "f" la frecuencia.

La frecuencia de una onda es el número de ondas que pasan por un punto fijo cada segundo o el número
de vibraciones por unidad de tiempo; se representa por la letra griega  (>un<), y generalmente se mide
en hertzios (Hz) o ciclos por segundo. La longitud de onda, representada por la letra griega  (>lambda<),
es la distancia entre dos picos (o dos valles) de una onda. La longitud de onda es una distancia y por lo
tanto su unidad de medida es el metro. Como la luz es una radiación electromagnética que tiene unas
longitudes de onda muy pequeñas se usan submúltiplos del metro, como son el Ángstrom (Å) que es la
diezmilmillonésima de metro (1x10-8m) y el Nanómetro (nm) que es la milmillonésima de metro (1x10 -9m).
La longitud de onda y la frecuencia, las cuales son inversamente
proporcionales, están relacionadas por la ecuación:
c
  c o 


c = velocidad de la luz (3x1010 cm/s)

Donde:  = frecuencia de hertzios
 = longitud de onda en cm.

Las ondas electromagnéticas viajan como los fotones, corpúsculos de energía carentes de masa. La
energía de un fotón es proporcional a su frecuencia e inversamente proporcional a su longitud de onda. Un
fotón de frecuencia  tiene una energía dada por:
hc
  h  Donde h es la constante de Planck: 1.58x10-37 Kcal. /s o 6.62x10-37 kJ/s.

En ciertas condiciones, una molécula puede absorber la energía de un fotón que ha chocado sobre ella. En
este caso, la energía de la molécula aumenta una cantidad igual a la energía del fotón hv. Por esta razón,
la irradiación de una mezcla de reacción se suele representar por el símbolo hv.

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Los rayos X son tan energéticos que excitan a los electrones hacia todos los niveles de energía, produciendo
ionización. El ultravioleta-visible excita a los electrones a niveles de energía más altos dentro de las
moléculas. Las energías de infrarrojo producen vibraciones moleculares y las energías de microondas
producen rotaciones. Las frecuencias de onda de radio (energía muy baja) producen transiciones de espín
nuclear que se observan en la espectroscopia RMN.

Otras ondas electromagnéticas:

La naturaleza de onda de la luz origina que los diferentes colores se reflejen de forma diferente por una
superficie, generando finas rayas paralelas [a esto se debe el que un disco compacto láser (para uso musical
o para ordenador) brille en todos los colores del arco iris]. Las filas ordenadas de los átomos en un cristal
también forman líneas paralelas pero mucho menos espaciadas y resultan tener el mismo efecto sobre los
rayos X, mostrando que los rayos X, al igual que la luz, también son ondas electromagnéticas, pero con una
longitud de onda mucho más corta.

Se encontró posteriormente que los haces de electrones en un campo magnético, dentro de un tubo de
vacío, podían hacerse inestables y emitir ondas más largas que la luz: el tubo magnetrón donde ocurría
esto fue un dispositivo de radar de alto secreto durante la II Guerra Mundial e hizo posible posteriormente
la fabricación del horno microondas.

Las ondas electromagnéticas lideran la radio y la televisión y la enorme industria electrónica. Pero también
se generan en el espacio (por rayos de electrones inestables en la magnetosfera, así como en el Sol y en
el universo remoto, informándonos sobre las partículas magnéticas del distante espacio).

Las ondas, o 'disturbios', se dan en un medio invisible llamado el campo de fuerza eléctrico (que utiliza
partículas cargadas, como los electrones (-) y los protones (+) que se afectan y hacen mover entre sí); sin
estas partículas cargadas no puede haber campos de fuerza eléctrica y por tanto no hay ondas
electromagnéticas. Por lo tanto, los campos magnéticos podrían producir corrientes eléctricas y las
corrientes eléctricas producen campos magnéticos.

Espectrofotómetro

Un espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en función de la
longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de
radiaciones. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y
microorganismos. Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o
espectrofotómetro de masa.

Región UV-visible:

La espectroscopia visible es una de las técnicas más ampliamente y más frecuentemente empleadas en el
análisis químico; Para que una sustancia sea activa en el visible debe ser colorida: el que una sustancia
tenga color, es debido a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y
transmite otras más. Por ejemplo: una solución es amarilla debido a que dentro de la región visible absorbe
radiación en el rango de 435 a 480 nm. En este rango de longitud de onda se encuentra el color azul del
visible, por lo que este compuesto absorbe el color azul y transmite los colores complementarios que dan
origen al color amarillo de la solución mencionada.

La absorción y transmisión de las longitudes de onda de la región visible de esta parte del espectro no es
la misma en substancias que den diferentes tonalidades de amarillo, por lo que podemos tener una gama
diferente de tonalidades como: amarillo canario, amarillo limón, amarillo pálido, etc.

La siguiente tabla nos da una relación entre rango de longitudes de onda en que absorbe el compuesto,
color absorbido y color observado o transmitido.

Espectro visible  en nm
Violeta 400-450
Azul 450-480
Verde-azul 480-490
Azul-verde 490-500
verde 500-560
Verde-amarillo 560-575
Amarillo 575-590
Naranja 590-625

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 rojo 625-750 El Ultravioleta del vacío se considera aquella región comprendida de los
100 a los 190 nm. Se le llama así debido a que el nitrógeno atmosférico
absorbe este tipo de radiación, por lo que se debe efectuar el vacío para poder excluir las absorbancias de
este gas de las absorbancias del compuesto en estudio.

Las complicaciones técnicas asociadas al vacío necesario, además de la poca utilidad que se tiene en el
Ultravioleta del vacío, han hecho que esta técnica prácticamente no tenga uso y de hecho no hay equipos
disponibles comercialmente para aplicaciones de este tipo de espectroscopia. El espectro Visible y
Ultravioleta, por el contrario, tienen amplia aplicación y son técnicas que se emplean continuamente. El
rango visible se considera de los 380 a los 750 nm. El rango del Ultravioleta cercano o del Cuarzo es de
190 a 380 nm.

La base de la espectroscopia Visible y Ultravioleta consiste en medir la intensidad del color (o de la radiación
absorbida en UV) a una longitud de onda específica comparándola con otras soluciones de concentración
conocida (soluciones estándar) que contengan la misma especie absorbente. Para tener esta relación se
emplea la Ley de Beer, que establece que para una misma especie absorbente en una celda de espesor
constante, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración.

La coloración de la solución se debe a la especie absorbente y esta coloración puede ser natural o inducida.
La coloración natural puede ser la base de la cuantificación de una especie, como por ejemplo: la clorofila
en ciertas plantas, los complejos metálicos que se encuentran presentes en solución acuosa, como son los
iones de Cobre (II), Manganeso (VII), Cobalto (III), etc.

Más frecuentemente, se induce a la formación de un complejo colorido que absorba en el visible, y que sea
específico para el elemento o compuesto que se desea cuantificar colorimétricamente. Ejemplo: la
formación de un complejo colorido cuando el cloro libre reacciona con la ortotoluidina, o la cuantificación de
glucosa en la sangre y orina por la acción del molibdato en determinadas condiciones, o la intensificación
del color del ion cobre, al formar un complejo amoniaco-cobre, el cual se forma cuando a una solución
acuosa que contiene iones cobre se le agrega hidróxido de amonio.

Para esto se requiere de un control de ciertas condiciones, que inhiben o favorecen la formación de
compuestos coloridos:

 pH: El pH es un factor determinante en la formación de ciertos complejos o compuestos coloridos.

Cuando el pH influye en la técnica analítica, se requiere de un control adecuado de este valor para lo
cual se agrega alguna solución buffer, o estabilizador de pH.
 Temperatura: La temperatura es factor importante, sobre todo en reacciones en las cuales el factor
cinético es la base del análisis.
 Tiempo: En ciertas reacciones, se requiere de un tiempo determinado para que se tenga una lectura
estable de absorbancia de la solución producida.
Es también factible que los complejos o compuestos formados sean lábiles, estos es que después de un
cierto tiempo se descompongan a otros productos diferentes, por lo que el tiempo indicado al que debe
hacerse la lectura debe establecerse con base a la experiencia y los resultados que se tengan.

Las técnicas analíticas UV-Visible han recibido gran aceptación debido, entre otras a las siguientes razones:
1. Amplio campo de aplicación: Como ya se ha mencionado, las técnicas espectroscópicas UV-Vis., son
ampliamente empleadas ya que son muchas las especies que son activas en el Visible, y muchas más las
que con un tratamiento adecuado son capaces de formar especies coloridas. Lo mismo puede decirse de
la espectroscopia UV.
2. Selectividad adecuada: Aunque no es muy común si es posible tener interferencias en UV-Visible.
Cuando esto ocurre, es posible emplear los métodos para análisis de multicomponentes. Otra alternativa
es aislar el analito de la interferencia, o separa la interferencia misma.
3. Buena Exactitud y Precisión: En estas técnicas espectroscópicas es normal tener errores relativos del 1
al 3 %, por lo cual se puede considerar que se tendrán resultados analíticos con un mínimo de incertidumbre
si se procede en la forma correcta.
4. Facilidad y Conveniencia: Aunque existen instrumentos altamente sofisticados acoplados a
computadoras y con sistemas ópticos y electrónicos de alta precisión, es posible obtener resultados muy
aceptables para análisis de rutina, con instrumentos o espectrofotómetros de los más sencillos en el
mercado, a un costo muy accesible.

En 1852, August Beer estudió la influencia de la concentración de soluciones coloridas sobre la transmisión
de luz. La conclusión a la que llegó fue que el valor de a' para una determinada sustancia es proporcional
a su concentración, es decir:

Donde, c es la concentración y ´ la absortividad (constante independiente de la concentración).

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La ley de Beer es análoga a la ley de Bouguer - Lambert. Mientras que Bouguer y Lambert estudiaron la
variación en la absorción de un haz de luz, en función de la variación de la espesura de la camada
absorbente, Beer hizo el mismo estudio en lo que se refiere a la concentración de la solución, manteniendo
la espesura constante. En ambos casos, el resultado es el mismo pues, ya que al variar la concentración,
o variar la espesura de la solución a ser atravesada por la luz, esencialmente aumentamos o disminuimos
el número de partículas que interaccionan con la radiación.

Para realizarse un análisis espectrofotométrico es también necesario conocer el espectro de absorción de

la muestra que se quiere determinar. Esto es hecho para definirse cual es la longitud de onda de la radiación
incidente, que causará la absorción máxima de la especie a ser determinada y así obtener la mejor
sensibilidad en su cuantificación. El espectro de absorción es obtenido variando la longitud de onda de la
radiación que incide sobre la muestra y mediéndose la cantidad de radiación absorbida en un
espectrofotómetro.

Una otra característica particular de la ley de Beer es la sumatoria de las absorbancias. En muchos casos,
es posible determinar simultáneamente dos o más especies diferentes presentes en una muestra,
utilizándose esta misma ley. Teóricamente, esto puede ser realizado desde que no ocurra ninguna
interacción entre las especies y que el espectro de absorción observado por la mezcla sea la suma de los
espectros individuales que serian obtenidos en el caso de que sólo una de las especies estuviese presente
en la solución y bajo las mismas condiciones experimentales. En la práctica, estas condiciones ideales no
ocurren, pero sin embargo es posible la determinación de especies químicas en una mezcla. En este caso,
para cada longitud de onda, la absorbancia total debida a las especies presentes en la solución puede ser
expresada como la suma de las absorbancias de cada una de ellas,

Para el caso particular de dos sustancias,

Donde A e A son los valores de absorbancia medidas a dos longitudes de onda diferentes, 1 e 2, y
los índices 1 y 2 representan las dos sustancias diferentes.

tico, trietanolamina, manitol, eritrol, etilen glicol, ésteres de etilenglicol, 1,2-propanodiol, 3-cloropropano-1,2-
diol, hidroxilamina, ácido oxálico en polvo, polipropileno y diclorosilano. Lo mismo ocurre con alcoholes
(metanol, etanol, isopropanol, pentanol o isopentanol) en presencia de ácido nítrico y disolución al 20 % de
permanganato de potasio. Por otro lado, se ha informado de reacciones exotérmicas violentas de este
compuesto con ácido fluorhídrico y con peróxido de hidrógeno. Con mezclas etanol y ácido sulfúrico y
durante la oxidación de ter-alquilaminas en acetona y agua, las reacciones son violentas. Con carburo de
aluminio y con carbón se presenta incandescencia. Trazas de este producto en nitrato de amonio, perclorato
de amonio o diclorosilano, aumentan la sensibilidad de estos productos al calor y la fricción. Puede
descomponerse violentamente en presencia de álcalis o ácidos concentrados liberándose oxígeno.

En general, es incompatible con agentes reductores fuertes (sales de fierro (II)y mercurio (I), hipofosfitos,
arsenitos), metales finamente divididos, peróxidos, aluminio, plomo, cobre y aleaciones de este último.

CONCLUSIONES

Por medio de esta práctica se logró familiarizarse y aprender el uso correcto y manejo del espectrofotómetro
de absorción UV-visible por medio de sustancias que presentan color y que por medio de la
espectrofotometría se puede observar su región de absorbancia en determinada longitud de onda que
nosotros podemos manejar de acuerdo a nuestras necesidades, así como lograr determinar en que región
se encuentra determinado compuesto si es que este es desconocido, ayudándonos también al graficarlo
para facilitar la determinación del mismo.

En esta práctica aprendimos a utilizar el espectrofotómetro que nos sirvió para medir, en función de la
longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de
radiaciones. También se puede utilizar para la cuantificación de sustancias, que fue lo que nosotros
realizamos con espectrofotómetro de absorbancia básicamente obtuvimos mejorar la resolución de los
espectros obtener mayor sensibilidad. Estuvo interesante la práctica por que fue la primera vez que pudimos
utilizar el espectrofotómetro de absorbancia y así poderlo ocupar con mucho más facilidad.

Se pudo realizar exitosamente el experimento ya que al colocar muestra nuestra muestra se obtuvo la
medida de la cantidad de luz de absorción del compuesto, para la obtención de su longitud de onda.

5
BIBLIOGRAFÍA

 Wade, L. G., Química orgánica, 5 edición, Prentice hall, Madrid, 2004, Págs.: 490-495,544.
 Manual de seguridad de sustancias peligrosas en laboratorio de Q.F.B : Trabajo monográfico para obtener
el titulo de Q.F.B por Bettina Herrera Fabela 2003, Pág. 160 y 239
 Skoog, Douglas A. Química Analítica,.Edit Mc Graw Hill 7ª ed. México 2001.Pág. 282
 http://www.doschivos.com/trabajos/quimica/484.htm
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 http://www.fquim.unam.mx/sitio/uploads/pdfs/hoja14.pdf
 www.monografias.com, consultada 18/02/07, hora 15:00hrs, actualización: 5/01/07