UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Frecuencia de Escherichia coli productoras de Beta

lactamasas de espectro extendido aislados de muestras
de orina de pacientes con infecciones urinarias atendidos
en Clínica particular. Trujillo – 2017.

TESIS
PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL
BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO

Autor: Br. Carmen María Rioja Ramírez

Asesor: Dr.Luis Alberto Llenque Díaz

TRUJILLO --PERU

2018
 CONTENIDO

Resumen…………………………………………………………………………........iii

Abstract..........................................................................................................................iv

INTRODUCCION…………………….……………………………………………....1

Objetivos…………………………………………………………………………...….8

MATERIAL Y MÉTODOS……………………………………………………….…..9

1. Material biológico……………………………………………………..………9

2. Procedimiento……………………………………………….……….……......10

2.1. Obtención de cultivos puros..............…………………………..…….……...10

2.2. Preparación de inoculo………………………………………...…………......11

2.3. Determinación de cultivos productores de Betalactamasas de espectro extendido

(BLEE).......................................................….…………………..……..……..11

2.4. Análisis de resultados.......................................................................................12

RESULTADOS……...………………………………………………………………...13

DISCUSIÓN……………...……………………………………………………..……..16

CONCLUSIONES..................................................,.......................................................20

RECOMENDACIONES…………...…………………………………………….…....21

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…...…………………………………….....…...22

ANEXOS………………………………...………………………………………...…..31

ii
 RESUMEN

La presente investigación descriptiva, tuvo por objetivo determinar la frecuencia de

Escherichia coli productoras de Beta lactamasas de espectro extendido (BLEE) en pacientes

con infecciones urinarias atendidos en la clínica Peruano Americana de Trujillo 2017. La

muestra estuvo constituida por 209 uro cultivos. Se utilizó Método de difusión en disco

(Kirby-Bauer) para detectar E. coli productoras de BLEE y el Método de Jarlier (Comité de

la Sociedad 8 Francesa de Microbiología) para determinar la presencia de BLEE. Se aisló

209 cultivos de pacientes con infecciones urinarias atendidos en una clínica particular

Trujillo; 70 de estos (33.5%) dieron positivos para Escherichia Coli y 139 (66.5%) dieron

negativo. Se identificó los cultivos de Escherichia coli en las 70 muestras que dieron positivo

para E. Coli (Tabla 1) el 37.5% (26 cultivos) dieron positivo para BLEE. 62.5 % (44

cultivos) dieron negativo para la producción de BLEE. Se determinó la producción de

betalactamasas de espectro extendido en los cultivos identificados con Escherichia coli. De

los 26 cultivos que presentaron BLEE 19.2% (5 cultivos) presentaron producción BLEE

frente a ceftazidima, 26.9% (7 cultivos) presentaron producción de BLEE frente a la

Ceftriaxona, 73.1% (19 cultivos) presentaron producción de BLEE frente al aztreoanam, y

un 61.5% (16 cultivos) presentaron producción de BLEE frente a la cefotaxima,

Palabras Clave: Escherichia Coli, Betalactamasa, Espectro extendido, Infecciones urinarias.

iii
 ABSTRACT

The objective of this descriptive investigation was to determine the frequency of Escherichia

coli producing extended-spectrum beta-lactamases (ESBL) in patients with urinary

infections treated at Peruano Americana clinic in Trujillo 2017. The sample consisted of 209

uro cultures. Disc diffusion method (Kirby-Bauer) to detect E. coli producing ESBL and the

Jarlier Method (Committee of the French Society of Microbiology) to determine the

presence of ESBL. We isolated 209 cultures of patients with urinary tract infections attended

in a particular clinic Trujillo; 70 of these (33.5%) tested positive for Escherichia Coli and

139 (66.5%) tested negative. Escherichia coli cultures were identified in the 70 samples that

tested positive for E. coli (Table 1), 37.5% (26 cultures) tested positive for ESBL. 62.5% (44

crops) were negative for the production of ESBL. The production of extended-spectrum

beta-lactamases was determined in the cultures identified with Escherichia coli. Of the 26

crops that presented ESBL 19.2% (5 crops) presented ESBL production against ceftazidime,

26.9% (7 crops) presented ESBL production against Ceftriaxone, 73.1% (19 crops)

presented ESBL production against aztreoanam, and 61.5% (16 crops) presented ESBL

production against cefotaxime,

Keywords: Escherichia Coli, Betalactamase, Extended Spectrum, Urinary Infections

iv
 INTRODUCCIÓN

Las infecciones del tracto urinario (ITU) constituyen un importante problema de salud

que afecta a millones de personas cada año en el mundo y son la segunda causa de

infección más frecuente en los humanos. Existe un renovado interés en estas infecciones

dada su elevada prevalencia en poblaciones aparentemente sanas y porque su morbilidad

y mortalidad han permanecido estáticas, pese a que se dispone de nuevos y efectivos

agentes antimicrobianos.1

Las infecciones urinarias se definen como la presencia y multiplicación de

microorganismos en el tracto urinario, desde la uretra hasta el córtex renal. Esto genera

presencia de gérmenes en la orina y síntomas característicos del síndrome miccional

como disuria, polaquiuria, tenesmo y dolor supra púbico presentándose con mayor

frecuencia en mujeres y se estima que entre el 20 y el 50 % de ellas durante su vida

presentan algún episodio de infección urinaria y entre el 25 y 30 % presentan posteriores

infecciones recurrentes.2, 3

Las infecciones de tracto urinario (ITU) son la complicación médica más frecuente en

el embarazo, con una prevalencia de 7 a 10%. Además, un tratamiento inadecuado se

asocia a un alto riesgo de padecer complicaciones maternas y fetales, que precisan de

exámenes complementarios para su diagnóstico y terapia apropiada. Entre los factores

de riesgo descritos en la literatura se encuentran, entre otros, aumento en la frecuencia

de actividad sexual en el último mes, un nuevo compañero sexual en los últimos 12

meses, uso de espermicidas, la inserción de catéteres de drenaje o de derivación sobre la

vía urinaria posquirúrgicos y episodios previos de ITU. En adultos mayores, estos

factores incluyen además la presencia de incontinencia urinaria, una pobre higiene del

área genital o vivir en hogares de cuidado geriátrico.4, 5

Las ITU son producidas generalmente por bacilos gramnegativos (entero bacterias) de

los cuales la mayor frecuencia corresponde a serotipos de Escherichia coli, seguidas

de Klebsiella spp, Proteus spp, Enterococos spp, Staphylococos spp, así como especies

de Pseudomonas y hongos del género Candida. Sin embargo, en la mayoría de los casos

se desconoce el agente etiológico de la infección y la sensibilidad antimicrobiana

correspondiente, por lo que resulta mucho más adecuada la realización del cultivo de las

muestras de orina o uro cultivo, antes del inicio del tratamiento antibacteriano.6, 7

Muchos microorganismos pueden infectar las vías urinarias, entre ellos el de mayor

prevalencia encontrado en los cultivos de orina es E. coli, afectando en mayor proporción

a mujeres en edad fértil. El diagnostico de este tipo de infección se sustenta en el cuadro

clínico, presencia en el uro análisis de leucocituria (leu ≥8 / ml3) y bacteriuria en

cualquier cantidad; se confirma con el Gram de Orina Sin Centrifugar cuando se

encuentra una o más bacterias por campo de alto poder y solo, si está indicado, por uro

cultivo cuando se documenta la presencia de microorganismos en cantidad igual o mayor

de 100.000 unidades formadoras de colonias (UFC) por ml de orina; por lo tanto el

tratamiento inicial de esta enfermedad generalmente es empírico, siendo en la actualidad

considerado una buena opción terapéutica.8,9

E. coli es una de las principales causas de infección en humanos tanto de origen

nosocomial como comunitaria, el agente etiológico más frecuente en la infección del

tracto urinario y una de las causas principales de meningitis neonatal; también puede

ocasionar una amplia variedad de infecciones intestinales y extra intestinales, como

2
neumonía nosocomial, colecistitis y colangitis, peritonitis, celulitis, osteomielitis y

artritis infecciosa, además de figurar como una de las causa más frecuentes de

bacteriemia. Todo esto supone un importante impacto médico y económico.10

E. coli, contaminan las zonas perianal, perineal y genital, ingresan por la uretra y

ascienden hacia la vejiga, este mecanismo es por el cual se producen la mayoría de las

ITUs y es llamada vía ascendente. Cuando las bacterias ascienden a la vejiga, colonizan

el urotelio de la vejiga. Estas células tienen una membrana asimétrica apical el cual le

sirve de barrera impermeable a la vejiga aunque también sirve como receptor de bacterias

como E. coli uro patógena. E. coli se puede introducir a la vejiga adhiriéndose a la

superficie vesical con ayuda de los pili tipo 1, y así penetrar y replicarse en el citoplasma

celular luego las bacterias salen de su nicho intracelular y se adhieren a otras células del

huésped, logrando así un ciclo infeccioso. Durante este proceso las células infectadas de

la vejiga son arrojadas a la orina mientras que los neutrófilos son atraídos al sitio de la

infección. 11, 12

Existen diferencias en el perfil etiológico y el patrón de sensibilidad de los uro patógenos

aislados en pacientes hospitalizados y no hospitalizados, debido a que los pacientes

hospitalizados tienen mayor exposición a antibióticos, por lo tanto más riesgo de hacer

resistencia. El fenotipo salvaje de E. coli presenta una gran sensibilidad a la mayoría de

los tratamientos disponibles, aunque en las dos últimas décadas se ha producido un

aumento de infecciones por patógenos multirresistentes, entre los que se encuentra E.

coli. Este aumento de las resistencias ya ha sido recogido en diferentes estudios; a nivel

nacional la resistencia global en aislamientos urinarios llega en la ampicilina (AMP) al

58,7%, en el ciprofloxacino al 22,8% y al 33,9% en el trimetoprim-sulfametoxazol

(SXT). 13, 14,15

3
Los betalactámicos son los antimicrobianos más utilizados; son activos frente a las Gram

positivas, Gram-negativas y Espiroquetas. Su eficacia está en continuo reto debido a la

emergencia de cepas bacterianas resistentes que producen Betalactamasas de Espectro

Extendido (BLEE), un grupo de enzimas producidas por bacilos Gram-negativos que

hidrolizan Cefalosporinas de amplio espectro, los Monobactàmicos y últimamente las

Cefamicinas, pero no a los Carbapenèmicos. Las cuales son generalmente plásmidos y

derivan de otras enzimas con menor espectro hidrolítico; principalmente las del grupo

de las Cefotaximasas (CTX). 16,17

Las BLEE, son una familia de enzimas producidas por bacilos gramnegativos, que en

su mayoría derivan de las betalactamasas clásicas TEM y SHV a partir de una serie de

mutaciones puntuales que alteran su centro activo, como respuesta a la presión ejercida

por el amplio uso a la cefalosporinas de tercera generación permitiéndoles modificar su

perfil de sustrato, mejorando su capacidad de hidrólisis frente a los betalactámicos. Se

han descrito más de 200 β-lactamasas diferentes, algunas son específicas para penicilinas

(penicilinasas) o cefalosporinas (cefalosporinasas), mientras que otras tienen un espectro

amplio de actividad (BEEAs), incluyendo algunas que son capaces de inactivar la

mayoría de antibióticos β- lactámicos. Este último grupo BEEAs es problemático porque

con frecuencia están codificadas en plásmidos y pueden transferirse de un organismo a

otro. 18, 19

Las Betalactamasas de Espectro Extendido tienen capacidad de hidrolizar y causar

resistencia a penicilinas, oximino-cefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima,

cefepima) y monobactámicos (aztreonam), pero no a cefamicinas (cefoxitina) ni a

carbapenémicos (imipenem, meropenem y ertapenem), siendo inhibidas por el ácido

clavulánico. Los genes que las codifican se encuentran en elementos móviles que

4
facilitan su diseminación y con frecuencia presentan coresistencia a otros antibacterianos

como aminoglucósidos, cotrimoxazol y quinolonas.20

El uso de ciprofloxacina en microorganismos como E. coli, K. pneumoniae y P.

aeruginosa añade un riesgo de selección de resistencia bacteriana a diferentes tipos de

antibióticos por mecanismos como betalactamasas de espectro extendido (BLEE),

carbapenemasas tipo KPC, activación de bombas de eflujo, cierre de porinas y

mutaciones en el DNA, entre otros. 25 El mecanismo más importante y utilizado por E.

coli y K. pneumoniae es la producción de betalactamasas, enzima que degrada el anillo

betalactámicos, base estructural de las penicilinas, cefalosporinas, carbapenems y

monobactámicos. 21, 22.

Según estudios sobre sensibilidad antimicrobiana realizados en patógenos urinarios E.

coli es sensible a imipenem.23 En Japón se detectó la BLEE-FEC-1 en E. coli, la cual fue

posteriormente detectada en Alemania, Argentina, Francia e Italia denominándose

BLEE-CTX-M. 17

En el Perú, se tienen reportes locales sobre el avance de la resistencia antimicrobiana en

varios hospitales en Lima, Arequipa y Cajamarca. Zavala 200624, reportó que el 81.89%

de las Entero bacterias estudiadas fueron productoras de BLEE y determinó, además, que

este grupo poseía una mayor multirresistencia (12.9%) que el grupo no productor de

BLEE (3.96%). Mercado 200725, en un estudio realizado en Trujillo en E. coli aislados

de orina encontró que 44% son BLEE positivos. Rivera 200826, evaluó 45 cultivos de

Entero bacterias de importancia clínica, de los cuales 12 presentaron BLEE, cuatro E.

coli y cuatro E. cloacae fueron los más relevantes.

5
Otros estudio realizado por García 201127, reportó que E. coli es el microorganismo más

frecuentemente implicado en bacteriemias nosocomiales y comunitarias, y el aislamiento

de cepas productoras de BLEE se sitúa en torno al 10%.

Yupanqui (2016)71 encontró de 220 cultivos de Escherichia coli aislados se detectó la

producción de betalactamasa clásica y betalactamasa de espectro ampliado mediante la

técnica yodométrica y de doble difusión en placa, respectivamente; encontrándose una

frecuencia de betalactamasa clásica de 31,8% y de betalactamasa de espectro ampliado

del 6,8%; al evaluarse estadísticamente estos valores fueron altamente significativos, en

ambos (p<0,05). En cuanto a la producción de betalactamasa de espectro ampliado de

los 15 cultivos de Escherichia coli en relación a los números de combinaciones de los

antibacterianos usados como ceftazidima, cefuroxima, aztreonam y cefotaxima

aplicando el test Chi cuadrado, se encontró que existe diferencia significativa (P<0,05)

en su patrón de resistencia, presentando a aztreonam y cefotaxima como los

antimicrobianos de mayor aporte al test, con 11 y 9 cultivos resistentes, respectivamente.

Paredes (2013)72 encontró en que la prevalencia de entero bacteriáceas productoras de

BLEE entre Marzo -Agosto del 2012 en la Clínica Good Hope fue de 21.2%. Las entero

bacteriáceas BLEE (+) aisladas proceden principalmente de las muestras para uro cultivo

(86.4%) y cultivo de secreción vaginal (11.0%), siendo el uro cultivo el examen en el

cuál se detectó en mayor cantidad las entero bacteriáceas BLEE (+) de los pacientes

hospitalizados (96.7%) y ambulatorios (86.4%). El 91.5% de las entero bacteriáceas

BLEE (+) fueron detectadas en muestras de pacientes ambulatorios mientras que el 8.5%

fueron de muestras de los pacientes hospitalizados en la Clínica Good Hope. La co-

resistencia a otros antibióticos por parte de las entero bacteriáceas BLEE (+) fue:

Escherichia coli a amoxicilina/ácido clavulánico, ciprofloxacino y sumetropin. La

6
sensibilidad a otros antibióticos por parte de las entero bacteriáceas BLEE (+) aisladas

fue: Escherichia coli a imipenem y amikacina.

Además de los objetivos y las preguntas de investigación es necesario justificar las

razones que motivan el estudio. La mayoría de las investigaciones se efectúan con un

propósito definido y existen ejes de justificación, para que tenga bases más sólidas para

justificar su realización. Las razones que justifican la presente investigación son:

Conveniencia: servirá para determinar el nivel de incidencia de Escherichia coli

productoras de beta lactamasas de espectro extendido, contribuyendo a la comprensión

de la evolución de resistencia de la bacteria E. Coli.

Relevancia Social: permitirá beneficiar a la comunidad de salud, al tener conocimiento

del nivel de crecimiento de la drogo resistencia de una de las causas principales de

infecciones del tracto urinario, contribuyendo a la solución de este problema de salud de

la sociedad.

Implicancias prácticas: contribuirá aportando instrumentos, métodos, procedimientos

sobre la determinación de frecuencia e incidencia de un microorganismo patógeno

determinado bajo determinadas condiciones (una clínica particular) contribuyendo a la

comunidad de microbiólogos como referencia y consulta. Además de disponer de

nuestros resultados para contrastar futuras investigaciones.

Con respecto al valor teórico, y siguiendo las recomendaciones de (Hernández Sampieri;,

Fernández Collado, & Baptista Lucio, 2003) responde a la pregunta ?, ¿se podrá conocer

en mayor medida el comportamiento de una o diversas variables o la relación entre ellas?,

y la principal frecuencia de E. coli es un tema desconocido en nuestra ciudad, y en

clínicas particulares, en general existe pocos estudios, si bien existe el marco teórico, la

7
 aplicación de esta a nuestra realidad muestra un gran vacío, por lo que preciso analizar

y documentar la naturaleza de este fenómeno en las condiciones estudiadas.

Utilidad Metodológica: la presente investigación tiene utilidad metodológica, pues

permite configurar variables de estudio adaptadas a la realidad investigada,

dimensionarlas y adaptar instrumentos de medición y análisis a fin de que estas variables

se puedan medir y analizar y de esta manera tener una idea objetiva, científica y técnica

sobre la realidad que se investiga.

OBJETIVOS:
General

Determinar la frecuencia de Escherichia coli productoras de Beta lactamasas de espectro

extendido (BLEE) en pacientes con infecciones urinarias atendidos en la clínica Peruano

Americana de Trujillo 2017.

Específicos

1. Aislar cultivos de E. coli a partir de muestras de orina de pacientes con

infecciones urinarias atendidos en clínica Peruano Americana de Trujillo, 2017

2. Identificar los cultivos de Escherichia coli productoras de Betalactamasas de

espectro extendido (BLEE) aislados a partir de muestras de orina en pacientes

con infecciones urinarias atendidos en una clínica Peruano Americana de

Trujillo, 2017

3. Determinar la frecuencia de producción de betalactamasas de espectro

extendido en los cultivos identificados con Escherichia coli.

8
 MATERIAL Y MÉTODOS

1. MATERIAL BIOLÓGICO
70 cultivos de Escherichia coli obtenidos en la Clínica Peruano Americana de

Trujillo (ANEXO 1).

1.1 Universo Muestral

El universo muestral estuvo constituido por las muestras de orina de pacientes con

infecciones urinarias en una clínica particular donde se realizó la investigación

durante el periodo de investigación

1.2 Selección de la Muestra

1.2.1 Tamaño

La muestra estuvo constituida por 209 uro cultivos calculado a través de la

fórmula para determinar el tamaño de las muestras en estudios de un solo grupo y

que evalúa variables cualitativas73. Siendo la cantidad 209 uro cultivos. El detalle

del calculo se detalla en el Anexo 01.

9
2. PROCEDIMIENTO

2.1 OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS

Los cultivos se identificaron diariamente a partir de la base de datos (informes de

resultados en el laboratorio) de la clínica.

Fueron separados todos aquellos que procedían de muestras de orina, y cuyo

patógeno encontrado fue Escherichia coli.

2.1.1. Reactivación de cultivos

Los cultivos de Escherichia coli, fueron inoculadas en Caldo Infusión Cerebro

Corazón (BHI) e incubadas a 37 °C por 18 horas.

2.1.2. Siembra en Agar Mac Conkey

Del crecimiento en caldo BHI se procedió a sembrar por agotamiento en

medio sólido Agar Mac Conkey y se incubó a 37 °C por 24 horas.

2.2 PREPARACION DEL INOCULO

Se procedió a preparar las suspensiones una de Escherichia coli aisladas en

Agar Mac Conkey, con Solución Salina Fisiológica y se ajustó la turbidez al

tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland (1.5x108 UFC/mL).28

2.3 DETERMINACIÓN DE CULTIVOS PRODUCTORES DE

BETALACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO (BLEE).

2.3.1Test de Tamizaje:

Método de difusión en disco (Kirby-Bauer).

10
 Se procedió a preparar agar Mueller Hintón (MH), se vertió en placas Petri y

luego de los 15 minutos de preparado se inoculó, se sembró, se secó en estufa

por 5 minutos. Luego se procedió a colocar los discos individuales de

antibióticos: aztreonam (30 ug), cefotaxima (30 ug), ceftazidima (30 ug) y

ceftriaxona (30 ug) 18, sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza

estéril presionando suavemente sobre cada disco. Se incubó por 24 horas a

37°C. Lectura: si el cultivo evaluado presenta halos de inhibición, para al

menos uno de estos antibióticos, iguales o inferiores a los diámetros referidos

en las tablas de CLSI deberá realizarse un test confirmatorio de la presencia de

BLEE. 29

2.2.2. Test Confirmatorio:

Método de Jarlier (Comité de la Sociedad 8 Francesa de Microbiología).

Los cultivos positivos al tamizaje anterior fueron evaluados con el test confirmatorio

para betalactamasas de espectro extendido (BLLE), según Clinical Laboratory

Standars Insitute29.

De cada cultivo se prepararó la suspensión en Solución Salina Fisiológica

ajustando la turbidez al tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland. Después de 15

minutos se inoculó en la placa que contenía agár MH con un hisopo estéril

estriando en tres direcciones, y secado por 5 minutos en estufa. Posteriormente

se colocó en el centro de la placa un disco con amoxicilina/ácido clavulánico

(30/10 μg) y alrededor se colocaran a una distancia de 25 mm, discos con

cefotaxima (30 μg), ceftazidima (30 μg), ceftriaxona (30 μg), y aztreonam (30

μg). E incubó a 37°C por 24 horas. Lectura: la presencia de una zona de

11
 inhibición que indica sinergia entre el antibiótico central con uno o varios de la

periferia es un resultado positivo para la producción de βLEE.30

2.4 ANÁLISIS DE RESULTADOS

Con los resultados obtenidos se los sometió al estadistico chi-cuadrado (X2) de

31
Pearson , para verificar estadísticamente si existe relación significativa de la

producción de betalactamasa ente los antibióticos cefaloporinas y

monobactamicos, mediante el programa computarizado SPSS vr.17 con un grado

de significancia de 0,05. Además se determinó mediante Estadística Descriptiva

con Distribuciones de Frecuencias, Porcentajes y la prueba No Paramétrica Chi

Cuadrada.

RESULTADOS

En la tabla 1, también se aprecia que del total de los uro cultivos procesados (209), el 35.5%

(70) fueron positivos (presencia de E. coli), en tanto que, el 66.5% (139) fueron negativos.

En la tabla 2 se aprecia que de los 70 cultivos de Escherichia coli (Tabla 1) el 37.5% (26

cultivos) presentaron halos de inhibición, a por lo menos a uno de los antibióticos evaluados,

de igual o inferior tamaño de diámetro referido de la tabla de CLSI.

12
En la tabla 3 se puede apreciar que de los 26 cultivos de E. coli analizados, el 19.2% (5) son

productoras de BLEE para ceftazidima, 26.9% (7) producen BLEE para Ceftriaxona,

73.1% (19) producen BLEE para aztreoanam, y un 61.5% (16) producen BLEE frente a la

cefotaxima.

13
Tabla 1 Frecuencia de Escherichia coli en muestras de orina de pacientes con

infecciones urinarias atendidos en una clínica particular Trujillo-2017.

MUESTRAS URO CULTIVOS % P

POSITIVAS 70 33.5 p = 0.000

p < 0.05
NEGATIVAS 139 66.5
Significativo

TOTAL 209 100

Fuente: Base de datos laboratorio clínica particular de Trujillo.

14
Tabla 2 Frecuencia de cultivos de E.coli productores o no de BLEE aislados de

muestras de orina en pacientes atendidos.

BLEE*
ESPECIE CULTIVOS P
N° %

POSITIVOS 26 37.5 P = 0.021

Escherichia coli
P < 0.05
NEGATIVOS 44 62.5
Significativo

TOTAL 70 100

N: cultivos de Escherichia coli

*detectada mediante el Método Doble Difusión en Placa.

15
Tabla 3 Producción de BLEE de los cultivos de Escherichia coli en relación a los
antibacterianos evaluados, ceftazidima, ceftriaxona, aztreonam y cefotaxima
aislados de muestras de orina de pacientes con infecciones urinarias en una clínica
particular de Trujillo -2017

Cultivos de Antibacterianos
Escherichia
coli ceftazidima Ceftriaxona aztreoanam cefotaxima P
N° CAZ CRO ATM CTX
1 + +
2 + +
3 + +
4 +
5 + +
6 + + +
7 +
8 + +
9 + +
10 +
11 + +
12 + +
13 + + 0.001
14 + + (p < 0.05)
15 +
16 +
17 + +
18 + +
19 + +
20 + +
21 +
22 + + +
23 +
24 + +
25 + +
26 + +
Total 5 7 19 16
% 19.2 26.9 73.1 61.5
+: Cultivo productor de betalactamasas de espectro ampliado para el antibiótico evaluado

16
 DISCUSIÓN

Nuestros resultados muestran un 33.5% de frecuencia de casos de Escherichia coli en las

pacientes con infecciones urinarias (tabla 1), de las cuales un 37.5% mostraron positivos

para BLEE (tabla 2), estos resultados difieren con los hallados por Zavala (2006) quien

reportó un 81.89%, la diferencia entre su estudio y el nuestro es que el antecedente lo realizo

en hospitales y el nuestro es en una clínica, donde las condiciones de higiene, el nivel

socioeconómico y cultural de los pacientes es completamente diferente, así, en la clínica

donde se realizó nuestro estudio, los pacientes tienen seguro privado, en el antecedente son

pacientes precarios que demandan los servicios públicos.

Nuestros resultados se aproxima más a los hallados por Mercado (2007) en Trujillo, donde

encontró un 44% de cultivos de E. Coli con BLEE, su investigación difiere de la nuestra en

que también fue en un nosocomio público a diferencia del nuestro una clínica privada.

Nuestros resultados encontraron mayor producción en Ceftriaxona, 73.1%, un 61.5%. En

Cefotazima, de otro lado los antibióticos que presentaron más resistencia a la producción de

BLEE fueron cefotazidima 19.2% y Ceftriaxona 26.9%. Estos difieren con Yupanqui (2013)

quien encontró también alta efectividad con la cefotaxima y aztreonam, sin embargo,

nosotros encontramos alta efectividad con ceftazidima y ceftriacona,

Nuestros resultados coinciden con los de Paredes (2013) quien los realizó en una clínica de

Lima, y encontró una prevalencia de 21.2%, sin embargo la resistencia encontrada fue a

imipenem y amikacina, no se utilizaron los mismos antibióticos que en nuestro estudio. De

los antecedentes y nuestro estudio, las poblaciones han estado sujetas a diferentes

exposiciones y usos previos de antibióticos y de microrganismos, lo que puede dar indicios

de porque la diferencia de sensibilidades en los diferentes estudios.

17
Con respecto a la presentación en otros países, en Estados Unidos y España se han observado

una frecuencia de aislamiento de E. coli en uro cultivos de 73% y 64,17%

respectivamente3843. En Latinoamérica como Uruguay44, Mexico45, Venezuela46, se han

presentado frecuencias de 75%-90%, 41.3% y 56%, respectivamente.

La importancia de determinar la cantidad de betalactamasa producida por un

microorganismo pasa por el hecho de que una hiperproducción de la enzima podría ser causa

de resistencia frente a inhibidores como el ácido clavulánico, subastan, entre otros; aunque

un alto número de bacterias producen la enzima en grandes cantidades de forma inducida o

constitutivamente de tal manera que este fenómeno inactivaría a todo antibiótico

betalactamico, por ejemplo cuando la bacteria es capaz de adquirir secuencias de inserción

de plásmidos en su gen promotor de betalactamasas, no se han hallado reportes que permitan

comparar nuestros resultados. Por tanto si el grado de resistencia que determinan las

betalactamasas se correlaciona con la concentración de la enzima producida y siendo

estadísticamente igual en las cepas aisladas, esto indicaría una importancia semejantes en

ellas, aun cuando sus mecanismos de producción de la enzima podrían ser diferentes 48

Los resultados emitidos por Mendoza, Loayza, Sánchez y Yupanqui coinciden con lo

obtenido en la Clínica , esto se debe a que la bacteria tiene la capacidad de sintetizar esta

enzima al entrar en contacto con betalactámicos, puesto que la bacteria E. Coli puede poseer

en forma nativa la información genética de plásmidos o genes cromosomales, necesaria para

la producción de betalactamasa (de forma estable o estimulada por la exposición a un

antibiótico betalactámicos) o adquirir la capacidad de hacerlo por mutación en sus genes de

resistencia por transferencia del DNA de una generación de cepa a otra49,50,51. La universidad

18
Nacional del Nordeste Argentina, reporta a la bacteria gram negativa, E. Coli con más

frecuencia de producción de betalactamasa clásica en pacientes ambulatorios con ITU 52,53.

E. Coli presento más resistencia a aztreonam y cefotaxima datos semjantes a Loayza y

57,66
Sánchez quienes reportan más resistencia a aztreonam ; en cambio García reporto

resistencia a cefotaxima 56. Esto difiere con lo de Mendoza (2003), quien reporta resistencia

a cefuroxima55. Según el MINSA, en el 2004, las cefalosporinas de tercera generación,

cefotaxima, ceftazidima y aztreonam presentan mayor estabilidad frente a betalactamasas58.

Estadísticamente fue significativo (P<0.05), es decir los valores obtenidos en cada grupo de

antibiótico son diferentes, constituyendo mejores niveles de resistencia de E. Coli productora

de BLEA para unos antibióticos más que otros.

Los determinantes genéticos de ADN que codifican las BLEA generan resistencia

transferibles entre distintas cepas de la misma especie bacteriana facilitando su diseminación

con incremento en su espectro de hidrolisis67, 68

que podría ser causa de resistencia frente a

inhibidores inactivando a ciertos antibióticos betalactámicos como cefalosporinas de tercera

generación y monobactámicos. La resistencia se atribuye al uso incorrecto de antibiótico por

desconocimiento del agente causal de la infección sin pruebas diagnósticas, retraso del inicio

de una terapia, inadecuada duración del tratamiento, falta de un seguimiento periódico

institucional de la misma para poder optimizar el tratamiento, controlar, limitar la resistencia

a los betalactámicos y disminuir la mortalidad del paciente69.

La resistencia de microorganismos a los antibióticos se trata de un problema progresivo con

tendencia a empeorar si no se toman medidas al respecto. Existen herramientas para ayudar

a optimizar el uso de antibióticos en un establecimiento de salud y hacer un manejo racional

de los mismos es aquí donde el laboratorio juega un rol importante con la detección y

tipificación de gérmenes en el menor tiempo posible dando además su perfil de

19
susceptibilidad para pasar de la terapia empírica a la especifica con el antibiótico indicado

para el germen identificado a través de la instauración de formularios de antibióticos 70.

Considerando los resultados de esta investigación es necesario indicar la necesidad de que

se realicen más estudios en clínicas que permitan elaborar cuadros de evolución de las

enzimas bacterianas toda vez que los patrones de resistencia han venido cambiando con

mucha celeridad sobre todo en servicios hospitalarios críticos donde los pacientes están más

expuestos a los antibióticos betalactámicos.

20
 CONCLUSIONES

De los 209 uro cultivos procesados en pacientes con infecciones urinarias atendidos en una

clínica particular Trujillo-2017; el 33.5% (70) dieron positivos para Escherichia coli y

66.5% (139) dieron negativo. Asimismo, de los 70 cultivos de E. coli, el 37.5% (26) fueron

considerados productores de BLEE mediante la prueba de tamizaje, mientas que el 62.5%

(44) dieron negativo para la producción de BLEE. Finalmente, se determino que de los 26

cultivos de E. coli BLEE, 19.2% (5) fueron BLEE para ceftazidima, 26.9% (7) fueron BLEE

para la Ceftriaxona, 73.1% (19) fueron BLEE para aztreoanam, y un 61.5% (16) fueron

BLEE para cefotaxima,

21
 RECOMENDACIONES

 Se recomienda en el protocolo de atención de infección urinaria, hacer el uro cultivo

y proceder a la medicación estándar los 3 primeros días a la confirmación del análisis

y corregir el tratamiento según resultados del urocultivo, sobre todo en caso de

presentarse infección con BLEE y de esta manera restituir rápidamente la salud y

calidad de vida del paciente

 Difundir el correcto aseo y limpieza al realizar los procesos fisiológicos de excreción,

ya que la infección es una consecuencia de la falta de aseo y desconocimiento de

adecuados hábitos de limpieza después de las excreciones.

 Evitar la automedicación y siempre asistir a la consulta con el médico, tomar la dosis

correcta de los medicamentos prescritos y el tiempo recomendado por el médico y

así evitar futuras resistencias.

 Realizar trabajos de investigación referentes a la tipificación de betalactamasas

producidas por Escherichia coli, así como la identificación de factores de

patogenicidad y toxinas producidas por este microorganismo.

 Realizar estudios de susceptibilidad antimicrobiana según áreas geográficas para así

ser más eficientes en la prescripción y abastecimiento de antibióticos.

22
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31
ANEXOS

32
Anexo 01: Calculo de población

El cálculo se hizo de la siguiente manera:

𝑍2 (𝑝)(𝑞)
𝑛= 1
𝑒2

n : Tamaño de la muestra

Z : Nivel de confianza (95%; Z=1.96)

P : prevalencia esperada (50%)
q : prevalencia no esperada (50%)
e : Intervalo de error (0.05 = 5%)

1.962 (0.5)(0.5)
𝑛= = 188.16 = 188
0.52

Calculo de perdidas
𝑛
𝑛𝑐 =
1 − 𝑝𝑑
nc = muestra corregida con perdidas
n = número de muestras
Pd = porcentaje esperado de perdidas (10%)

188
𝑛𝑐 = = 208.8 209
1 − 0.1

1Fuentelsaz Gallego C Calculo del tamaño de la muestra Barcelona España Matronas Profesión 2004 5(18)
https://ecaths1.s3.amazonaws.com/seminarioi/1400533589.1%20Muestreo.pdf

33
34
Anexo 2: Testimonio fotográfico

Figura 1 Cultivos puros de Escherichia coli.

Lac +

Figura 2 Crecimiento de colonias de Escherichia coli en medio selectivo Mac Conkey con
características morfológicas compatibles a Escherichia coli lactosa positiva (Lac+)

35
Figura 3 Halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli por efecto de los
antibioticos ensayados por el test de tamizaje

36
Figura 4 Identificación bioquímica del microorganismo gram negativos Escherichia coli
en medios TSI “agar tres azucares hierro”, LIA “agar lisina hierro”, agar citrato, caldo úrea
y SIM “medio sulfuro indol motilidad”

37
 Figura 5 Preparación de medio de cultivo

Figura 6 Seleccionando cultivos productoras de Betalactamasas positivas

38