UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA NACIONAL

FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA

LICENCIATURA EN QUÍMICA

EXTRACCIÓN DE ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO A PARTIR DE

MATERIAL VEGETAL Y ANIMAL

DOCENTE: Sonia Muñoz Miranda

I. OBJETIVOS

Extraer con técnicas sencillas el DNA a partir de material vegetal y animal.

Establecer las diferencias entre las fibras de DNA de células vegetales y

animales.

Reconocer el ácido desoxirribonucleico extraído con el reactivo de

difenilalanina.

II. INTRODUCCION
El acido desoxirribonucleico (Fig.1) es un polímero de nucleótidos de
elevada masa molecular que se encuentra presente en el núcleo de las
células eucarióticas animales y vegetales, aunque otros organelos como las
mitocondrias y los cloroplastos presentan cantidades considerables de esa
molécula. En las células procariotas el ADN no esta incluido en organelos
diferenciados.

Figura 1. Estructura secundaria del ADN. Se ha establecido que la adenina esta

asociada a la timina por dos puentes de hidrógeno y la guanina a la citosina por tres
puentes de hidrógeno. Es una estructura de doble hélice que permite explicar el
almacenamiento de la información genética y el mecanismo de duplicación de ADN.

La molécula de ADN es el material encargado de conservar a lo largo de las

generaciones los caracteres hereditarios, y por tanto, dicha molécula
característica de cada especie de ser vivo, se transmita íntegramente a la
progenie.
 La extracción de ADN requiere de la ruptura de la célula que lo alberga, o
cual se consigue mediante el empleo de métodos físicos y químicos y su
purificación posterior eliminando proteínas acompañantes y fragmentos de
RNA.

En la actualidad la Ingeniaría Genética ha diseñado métodos para

manipular los ácidos aprovechando sus propiedades singulares, en
particular las del ADN. Sin embargo, existen métodos sencillos para la
extracción de ADN a partir de material vegetal y animal que permite
visualizar las hebras de este ácido nucleico y reconocer su presencia con la
reacción de difenilamina.

III. MATERIALES
1 Agitador de vidrio
Cinta de enmascarar o rótulos
1 Espátula
Estufa o mechero
Gasa o musselina
1 Gradilla
1 Mortero - pistilo
Papel alumínio, o parafil
3 Pipetas (1, 5 y 10 ml)
1 pipeta pasteur
1 termómetro
5 tubos de ensayo
3 tubos de ensayo con taparosca
3 vasos desechables
2 vasos de precipitado (50 ml)

IV. REACTIVOS Cantidad

NaCl 5% 50 ml
Isopropanol al 70 o alcohol isopropílico 300 ml
Champú transparente o detergente líquido 5 ml
Agua destilada
Reactivo de difenilamina 125 ml
(1 g de difenilamina en 100 ml de ácido acético glacial más 2,5 ml de H 2S04)

V. MATERIAL DE PRUEBA

1 cebolla pequeña, 1 papayuela, 6 fresas maduras.

VI. PROCEDIMIENTO

1. Extracción de DNA de células epiteliales animales.

1. Marque un tubo de ensayo taparrosca limpio y seco, con el numero 1.

2. Tome un sorbo de agua destilada en la boca y hágala circular de un lado a
otro durante aproximadamente 1 minuto.
3. Deposite el agua de la boca al vaso de precipitado. Después viértala con
cuidado en el tubo de ensayo.
4. Mida con la pipeta 1 ml (su equivalente 5 gotas) de champú y viértalo en el
tubo de ensayo para deshacer las células y liberar su contenido.
5. Tape el tubo con papel aluminio o parafil si el tubo no es tapa rosca.
Mezcle lentamente por inversión. Repita el movimiento 10 veces.
6. Déjelo reposar 10 minutos.
7. Transcurrido el tiempo, adicione por las paredes del tubo lentamente 3 ml
de alcohol isopropílico para precipitar el ADN. Observe al tiempo 0 de la
adición y nuevamente después de dejar reposar por tres minutos.
8. Anote los resultados.

2. Extracción de DNA de células vegetales.

1. Marque un tubo de ensayo taparrosca limpio y seco, con el numero 2.

2. Pele y corte la cebolla o la fresa, colóquela en el mortero y macérela con al
50 ml de NaCl 5% (mantenga el NaCl a 40°C).
3. Filtre con la gasa y recoja el filtrado en un vaso de precipitado.
4. Coloque la mitad del filtrado en el tubo 2.
5. Pele y corte la papayuela, colóquela en el mortero y macérela sin agregar
nada.
6. Filtre el macerado con gasa y recógelo en un vaso.
7. Adicione 2 ml de extracto de papayuela al tubo 2 y deje en reposo 10
minutos.
8. Transcurrido el tiempo, vierta poco a poco en el tubo de ensayo 3 ml de
alcohol isopropílico.
9. Deje reposar 3 minutos.
Observe y registre los resultados.

Marque un tubo de ensayo taparrosca limpio y seco, con el numero 3.

1. Coloque la otra mitad del filtrado de cebolla o de fresa en el tubo de ensayo

3.
2. Mida con la pipeta 1 ml de champú (su equivalente 5 gotas) y viértalo en el
tubo de ensayo.
3. Tape el tubo, mezcle lentamente por inversión. Repita el movimiento por 10
veces.
4. Déjelo reposar 10 minutos.
5. Transcurrido el tiempo, adicione por las paredes del tubo lentamente 3 ml
de alcohol isopropílico para precipitar el ADN. Observe y registre os
resultados.

3. Reconocimiento del ADN con la reacción de difenilamina

Realizadas las observaciones de los tubos 1,2 y 3, con una pipeta Pasteur
saque el DNA de la superficie en otros tubos debidamente marcados y
redisuélvalos con 3 ml del reactivo de difenilamina. Deposite los tubos en agua
hirviendo durante 10 minutos, sáquelos y enfríelos con agua que tenga hielo.
Observe los resultados. Si tiene un patrón de DNA realice el mismo
procedimiento. El color azul indica positivo para la prueba.
VII. RESULTADOS Y CONSULTA

1. ¿Por qué se utiliza NaCl 5% y por qué a la temperatura de 40C?

2. ¿Cuál es la utilidad del extracto de la papayuela?. Explique
detalladamente
3. ¿Para que se utiliza el champú? Explique.
4. ¿Se encuentra alguna diferencia entre el DNA de las células epiteliales y
las células vegetales?
5. Explique la reacción química de la difenilamina con el ADN para su
reconocimiento.

BIBLIOGRAFIA

Cattaneo C y cols., (1995). “A simple method for extracting DNA from old
skeletal material”. J. Forensic Sci. 74: 167-174.

Hochmeister MN y cols., (1995). “Confirmation of the identity of human skeletal

remains using multiplex PCR amplification and typing kits”. Journal of Forensic
Sciences, JFSCA, Vol. 40; No. 4, pp.: 701- 705.

Krings M y cols., (1997). “Neandertal DNA sequences and the origin of modern
humans”. Cell, Vol 90: 19-30

Página web.
http://www.ilstu.edu.depts/chemistry/che241/struct.html.