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Enfoque ascendente del fitocromo en red, Asamblea.

Extracto
Las plantas han desarrollado sistemas sofisticados para monitorear el
aclimatamiento en los cambios ambientales. La luz es la principal fuente de
información ambiental durante el ciclo de vida de las plantas. La planta modelo
Arabidopsis thaliana posee 5 fitocromos (que va desde el fitoA al fitoE) jugando un
importante rol en la germinación y la estabilización en la siembra y el cuidado en la
sombra y en la floración. Sin embargo, nuestra comprensión acerca de la red de
señalización del fitocromo es incompleta y poco se conoce acerca de los roles
individuales de estos y como cooperan entre sí para mediar la reacción hacia la
luz. Hemos empleado un enfoque ascendente para el estudio de la red de
fitocromos. Agregamos cada uno de los 5 fitocromos a un fitocromo con menor
profundidad, para estudiar sus roles individualmente y luego colocarlos por parejas
para observar su interacción. Por el análisis de los 16 genotipos obtenidos, se
revelaron roles únicos para cada fitocromo y se identificaron nuevas interacciones
de los fitocromos que regulan el comienzo de la floración. Además, encontramos
que la temperatura ambiental posee efectos tanto dependientes como
independientes, para cada fitocromo; sugiriendo que múltiples rutas son
integradas y señaladas por la luz y la temperatura. Sorprendentemente ninguno de
los fitocromos ha dado una foto-periódica respuesta por sí solo. Aunque FitoE y
FitoB fueron los más fuertes represores de la floración, se necesitaron tanto fitoB
como FitoC para dar una respuesta durante el fotoperiodo. Por tanto, una
combinación específica de fitocromos es requerida para detectar cambios en el
fotoperiodo, mientras que los fitocromos sin pareja son autosuficientes para
responder a la cualidad lumínica, indicando, así como los fitocromos cambian con
las muestras lumínicas.

Resumen del autor.

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Así como los sésiles, las plantas responden a una información integral del
ambiente. Un aspecto curioso es cómo las plantas integran esa información.
Hemos estudiado las interacciones entre miembros de la familia de los foto-
receptores de los fitocromos, a través del cual se detectaron cambios en la calidad
de la luz que ocurría bajo la sombra de otras plantas, así como la duración del día,
el cual indicaba el cambio de estación. Hicimos esta clase de estudios en
Arabidopsis la cual soportó 5 fitocromos (fitA-fitE). Mostramos que los roles
individuales de cada fitocromo (en ausencia de otros) son diferentes, pero, lo más
importante es que sus combinaciones cambian las propiedades en el sistema. FitE
por ejemplo, regula la floración dentro de una temperatura esto es de manera
dependiente, indicando así que la ruta del FitE es un punto de integración entre la
entrada de la luz y la temperatura. A diferencia del FitC que es poco activo pos sí
solo, pero esto es esencial para el fitocromo dependiente durante el fotoperiodo de
floración. Durante los días largos (imitando el letargo de la primavera) FitC
promueve la floración indirectamente, debido a la inhibición de la ruta de los FitB y
FitE los cuales actúan como represores de la floración. En cambio, durante los
días cortos de invierno FitC se convierte en un represor de la floración debido a
que FitB necesita del FitC único para esta respuesta específica. Por lo tanto, FitC
es esencial para la detección del fotoperiodo por los fitocromos y señala un rol
conservador para el FitC en la foto periodicidad de los angiospermas.

Introducción
Las redes de ruta de la planta foto-receptora son sensibles a largos períodos de
exposición lumínica.
Los sistemas de ruta son suficientemente sensibles para inducir la germinación en
respuesta a períodos extremadamente cortos de exposición lumínica, como se
observó durante el cultivo del suelo y muy bajas intensidades de luz, como
también se experimentó bajo el suelo sembrado, detectándose variaciones sutiles
en la calidad de la iluminación bajo la fuerte luz solar o cambios en el fotoperiodo.
Estas habilidades dependen parcialmente de la existencia de múltiples familias
foto-receptoras con diferencias en las propiedades espectrales y la sub función de
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los miembros de la familia de los foto-receptores, cuyo resultado es el surgimiento

de foto-receptores con propiedades particulares y la capacidad de modular la
sensibilidad lumínica [1,2].
En la planta modelo Arabidopsis (Arabidopsis thaliana), han sido
seleccionados trece foto-receptores sensoriales para fechar, con un espectro
absorbente que va desde UV-B (280nm) hasta la luz roja (730nm) (FR) [3]. Los
fitocromos son una familia de luz roja (R) y los foto-receptores FR están
conformados por cinco miembros (FitA-FitE) [4] y el desarrollo de la planta bajo
condiciones naturales depende de su habilidad para cambiar entre la forma Pr
(inactivo) el cual absorbe R, y la forma Pfr (activo) la cual absorbe FR. Los
fitocromos son sintetizados en la forma Pr y fotoconvertidos a la forma Pfr después
de la absorción de R. Puede entonces FR revertirlo a Pr. Por tanto, la proporción
de los fitocromos en la forma Pfr es una función de la relación de R a FR. Así
como las plantas absorben R por fotosíntesis, pero refleja FR una baja en la
proporción de R/FR indica la presencia de una vegetación colindante, la cual
podría competir por alcanzar la fuente de iluminación en cierto punto [5]. Las
plantas intolerantes a la sombra responden a la baja proporción R/FR alargando
sus tallos y pétalos, para dejar fuera a su vegetación vecina, acelerando así la
floración para asegurar su éxito reproductivo. Estas respuestas son conocidas
comúnmente como el síndrome de evasión de la sombra (SES) [1]. Los fitocromos
regulan el desarrollo de las plantas durante el ciclo de vida, partiendo de la
germinación hasta la floración. Los fitocromos promueven la germinación por la
estimulación de las giberelinas (GA) resumidas y sensibles [6,7], promueve la
destilación durante los primeros días del desarrollo del plantón, inhibiendo el
hipocótilo y frenando el crecimiento por la alteración de los niveles de auxina [8],
consiguiendo los relojes circadianos y regulando el tiempo de floración [2].
Los fitocromos existen, así como los homodímeros o heterodimeros, los cuales
son desplazados hacia el núcleo sobre la foto-conversión la forma Pfr [9]. Sobre la
exposición lumínica durante el establecimiento del plantón, los fitocromos alteran
la expresión de miles de genes [1,2,10]. Inducen estas respuestas complejas por
su interacción con los miembros de una familia de hélice-circular hélice-básica
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(hCHB) factores de transcripción, los FACTORES DE INTERACCIÓN DEL

FITOCROMO (FIF). Los PIFs son represores de la germinación y destilación
también son degradados por los protosomas en la interacción con los fitocromos.
Los roles de los fitocromos fueron mayormente estudiados en los Arabidopsis y
arroz (Oryza sativa) sistemas modelo, utilizando foto-receptores mutantes. [11-17].
Dadas las propiedades espectrales, no es posible diseccionar los roles de cada
fitocromo en el desarrollo de la planta sin emplear herramientas genéticas. Los
estudios han analizado mayormente fitocromos mutantes únicos y pocos han sido
examinados bajo un alto orden de combinación mutante [2]. Aunque estos
estudios han sido fundamentales en el establecimiento a través de los cuales los
fitocromos contribuyen a las respuestas evolutivas, han fallado en determinar cuál
fitocromo en particular activa el programa de ruta evolutiva. Mayor comunicación
entre las rutas de señalización de los fitocromos ha sido reportada [15,18,19]; sin
embargo, no está claro si la interacción de los fitocromos identificada es suficiente
para su interacción o necesita la presencia de otros. A mayor complejidad se
podría esperar, debido a que el modo de los heterodimeros forma parte de la
familia de los fitocromos [20,21]. En los estudios realizados en los cuales los
fitocromos fueron sobre expresados, otros fitocromos estuvieron en la base
genética, se incrementaron las dudas como se hizo para generar la ruta si fue por
sí solo o múltiples fitocromos [22-25].
Para resolver este asunto empleamos el método ascendente, similar al empleado
por Coen y Meyerowitz para generar su modelo de desarrollo de las plantas
floridas ABC [26]. Ellos usaron un antecedente mutante desprovisto de 3 clases de
genes de flores desarrollados (A, B, and C) a los cuales agregaron cada gen por
separado y luego en parejas para diseccionar los roles de cada gen y descifrar el
desarrollo mutuo en la floración. Utilizando un acercamiento parecido, obtuvimos
todo el conjunto de cuádruples y triples fitocromos mutantes en los mismos
antecedentes genéticos (Ejem. Columbia). De esta manera, “agregamos” cada
fitocromo único y cada pareja de fitocromos posible a un fitocromo superficial, para
estudiar así los efectos de cada fitocromo individual aislado y para examinar todas
las interacciones inteligentes, tanto las directas como las indirectas. Nuestro
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trabajo revela los roles distintivos de cada fitocromo e identifica como los
fitocromos interactúan entre sí, revelando solo así, nuevas propiedades en el
sistema de la ruta de señalización de los fitocromos, que son necesarios para la
regulación de la respuesta del fotoperiodo.

Resultados
Roles de interacción de fitocromos individuales y binarios en el fomento de
la germinación.

Después de haber obtenido el conjunto triple y cuádruple de fitocromos mutantes

en el suelo de Columbia, evaluamos su germinación bajos diferentes condiciones
lumínicas. Bajo la luz blanca continua (LB), FitA, FitB o FitC no indujeron la
germinación. El quíntuple fitocromo mutante falló bajo LB (Ver Fig.1). Bajo los
tratamientos R y FR, solo FitB produjo una respuesta reversible R/FR, mientras
FitA produjo una continua respuesta FR y una única intermitente FR (denominado
baja respuesta afluente, BRA) (Fig.1), como se esperaba [18]. Como bajo LB, FitC
no indujo la germinación en lo absoluto bajo FR continuo o FR intermitente y solo
fitE rara vez lo hizo. La explicación más sencilla en relación a la poca actividad de
fitC se debe a la incapacidad de PHYC apoproteína para acumular durante la
ausencia de fitB [20,27] (Ver Fig.2). Por otra parte, fitD promovía la germinación en
respuesta a R continuo, pero no a R pulsos únicos (Fig.1). El requerimiento de R
continuo por fitD es consistente con las observaciones previas en fitD líneas sobre
expresadas, las cuales requieren R continuo también, para inhibir el alargamiento
del hipocótilo [24].
Las combinaciones mutantes triples nos permitieron estudiar las
interacciones de los fitocromos. Pese a su rol insignificante como germinador
único, fitE actuó de manera sinérgica con fitC y fitD para inducir la germinación
después de la exposición R continua o a una intermitencia única R (Fig.1). Hubo
mayor consistencia (Ejemplo durante los tratamientos de FR), en la baja
proporción de R:FR con fitB durante la cual fitE actuó de manera sinérgica [6,19].
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FitC, fitD y fitE interactuaron sinérgicamente bajo los FR continuos con fitA, un
tratamiento para activar específicamente fitA [18].
Explicación de la Fig.ura 1
El efecto de los foto-receptores y fitocromos únicos en la regulación de la germinación
y sus interacciones sinérgicas.
La germinación de los genotipos indicados en el eje de abscisa bajo diferentes
regímenes de iluminación en 23º C (para aclarar, los fitocromos presentes en cada línea
están indicados en la parte superior de la imagen previa con letras mayúsculas y los
genotipos en la parte inferior con letra itálica). Los regímenes lumínicos: FR continuos
(60 umol m-2 s-1), rojo continuo (R) (30 umol m-2 s-1), alternando pulso R 15-min, un
pulso FR 15-min, un pulso R 15-min seguido por el pulso FR 15-min inmediatamente
(R/FR), seguido por el pulso FR 15-min, inmediatamente por el pulso R 15-min (FR/R) y
oscuridad. El registro promedio va + desde 16 placas independientes SE con cada 20
semillas y 4 reservas de semillas independientes (recolectadas de plantas cultivadas de
manera independiente).

cuando evaluamos la sensibilidad de varios mutantes GA surgió una nueva

imagen. FitB y fitA eran los reguladores positivos más importantes de la
sensibilidad GA (tabla, Fig.ura S1, S3A y S3C) y cuando ambos eran opuestos por
fitC, fitD y fitE (Fig.ura S3A).
Estos resultados indican que fitC, fitD y fitE no solo promueven la germinación por
actuación sinérgica (Fig.ura1), pero se opone también a la germinación por
reducción de efectos de fitA y fitB sobre la sensibilidad GA (Fig.ura S3A y S3C).
Este comportamiento de “aceleración y freno” podría ser importante en la
regulación GA de la señalización homeostática, una vez, las semillas ya
germinadas, como GA y la oposición lumínica entre sí durante el crecimiento de la
semilla [1]. Como fue mencionado anteriormente, la acumulación de apoproteína
PHYC depende de fitB (Fig.. S2) [20,27].
También encontramos un incremento en los niveles de PHYA bajo la presencia de
fitC, FITd o fitE en semillas cultivadas bajo la luz (Fig.. S2). Además, las
interacciones sinérgicas en la promoción de la germinación podrían ser explicada
por alguna extensión debido al incremento de los niveles de los foto-receptores.
En cambio, las interacciones antagónicas que disminuyeron la sensibilidad GA
indican roles más específicos para fitC, fitD y fitE.

FitoE y fitoB represores de la floración durante los días largos bajo una
temperatura de manera dependiente.
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Para evaluar como la ruta de cada fitocromo influye en la floración y esta es

influenciada por la temperatura, medimos el tiempo de floración para todos los
genotipos bajo condiciones de temperaturas que van desde 18 hasta 24ºC durante
días largos (DL). (Fig. 2ª y Fig. S4A).
El quíntuple fitocromo mutante dio una respuesta débil bajo este rango de
temperaturas (ladera: -2121+ 0,389 hojas/ºC Fig.ura 2A). Los efectos de la
temperatura dependiente de fitE y fitB enfatizando la interacción entre la
señalización de la ruta de la temperatura y la luz. (Fig.2A). Por el contrario, fitD fue
un represor débil en la floración, bajo todas las condiciones en las que fue
analizado, mostrando así que fitD y fitE tienen roles distintivos, con los entes más
efectivos antes señalados en la promoción de la germinalización y el último más
efectivo en la influencia de la floración. (Fig.s. 1y2).

Fig.2 una red de interacciones de fitocromos es necesaria para regular la

respuesta en la floración de la temperatura del fotoperiodo.
Las plantas soportan los fitocromos indicados, estos fueron cultivados bajo días
largos DL, 16h luz/8h oscuridad) (A) o DL y días cortos (DC, 8hluz/16oscuridad)
(B), con temperaturas que van desde 18 hasta 24ºC registros de DL en (B) son los
mismos que en (A) e incluidos por el propósito de comparación directa. El total de
número de hojas durante el tiempo de floración fue registrado. Los puntos del
registro mayor + SE de al menos 18 plantas desde 2 experimentos independientes
para la condición de cada genotipo.

El efecto antagónico represivo de fitoA y fitoC; fitoE y fitoB.

FitoA tuvo un comportamiento como represor débil en la floración bajo DL

en todas las temperaturas probadas. (Fig. 2ª y Fig.S4A) sin embargo cuando
fueron combinados con otros fitocromos, fitoA surgió como el más fuerte oponente,
mayormente por la antagonización de la señalización de fitoE. La presencia de
fitoA eliminó la mayoría de las respuestas de las plantas bajo temperaturas
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soportando solo fitoE, desde oposición entre la señalización de fitoE Y fitoD (Fig.
2). Este efecto de fitoA es improbable debido a los bajos niveles de PHDY o PHYE
en presencia de fitoA (Fig.2 S2). Tomados juntos, estos resultados enfatizan la
importancia de la interacción de los fitocromos tanto positivos como negativos,
para alcanzar una respuesta WT para ambos, el fotoperiodo y la temperatura.
Finalmente, cuando solo fitoA y fitoC estuvieron presentes, las plantas florecieron
ligeramente más rápido que el quíntuple fitocromo mutante y las plantas solo
soportaron fitoA o fitoC liderando el fomento de la floración. (Fig. 2ª y Fig. S4A).

Ambiente de baja temperatura represor de la floración durante los días

cortos en fitocromos dependientes y modos independientes.

El comportamiento en la floración de las plantas soportando fitoE y fitoA

reveló que la señalización del fitocromo fue fuertemente influenciada por la
temperatura ambiental (Fig. 2ª y Fig. S4A). Además, la ausencia de fitocromos en
el quíntuple fitocromo mutante, redujo significativamente la sensibilidad a la
temperatura bajo la condición de DL (Fig. 2A) y la respuesta foto-periódica estuvo
ausente en la temperatura de 24ºC (Fig. 2B y Fig.S4B). Sorprendentemente,
durante el período de días cortos(DC) el quíntuple fitocromo mutante floreció
mucho más tarde bajo una temperatura de 18ºC comparándose con la de 24ºC,
mostrando que la temperatura también regula la floración en un fitocromo de
manera independiente (Fig. 2B y Fig.S4B). Sin embargo, el fitocromo individual
también contribuyó a la represión de la floración durante días cortos (DC) bajo la
temperatura de 18ºC. FitoE fue de nuevo el represor más eficiente, seguido por
fitoA y fItoB. FitoD mostró solo débiles efectos por sí solo, considerando que los
efectos de fitoC fueron insignificantes. Así como durante los días largos (DL), fitoC
actuó en forma antagónica para fitoE, pero el caso contrario sucedió en los días
largos (DL), en los DC bajo una temperatura de 18ºC fitoC actuó sinérgicamente
con fitoB y fitoD para reprimir la floración. Notablemente, el quíntuple fitocromo
mutante, respondió al foto-período solo bajo la temperatura de 18ºC, pero no bajo
24ºC (Fig. 2B, ver Fig.S5 para el efecto del foto-periodo). Estos resultados
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destacan la importancia de las interacciones entre la temperatura y la señalización

del fitocromo para el control de la floración, pero también muestra que hay al
menos una temperatura reactiva en la ruta que es el fitocromo independiente (Fig.
2B and Fig. S4A).

Las interacciones de fitoC y fitoB son esenciales para la detección del fot-
periodo bajo la temperatura de 24ºC.

Para evaluar la respuesta foto periódica de los mutantes, comparamos el

tiempo de floración de las plantas cultivadas bajo la condición de DL y DC, bien
sea bajo 18ºC o 24ºC (Fig. 2B, FIG.S5). Ninguno de los fitocromos otorgó una
respuesta foto-periódica cuando se presentaron solos. Aún fitoB, el cual tiene los
roles en las respuestas foto-periodicas que han sido estudiadas ampliamente en
simples análisis mutantes [29], falló al dara una foto-periodica respuesta bajo las
condiciones ya probadas. Los genotipos portadores de fitoA mostró una débil
respuesta foto-periódica; fitoA tuvo un débil comportamiento como represor en la
floración bajo la condición de DL (Fig.2B). Curiosamente, solo la combinación de
fitoB y fitoC produjo una fuerte respuesta foto-periódica bajo 24ºC (Fig. 2B, Fig.
S5) fitoC y fito B forman heterodimeros y fitoC requiere de fotoB tanto durante el
proceso de Arabidopsis como en el del arroz [21,30].
Sin embargo, nuestros resultados muestran que ambos tanto fitoB y fitoC
son requeridos para conferir una respuesta foto-periódica, sugiriendo que el
heterodimero fitoB/fitoC podría tener un rol importante y específico. Mas esta
especificidad parece ser esencial para la respuesta foto-periódica, pero no para la
respuesta del hipocótilo para R (Fig. 3) desde fitoB fue suficiente para dar una
respuesta WT para R por sí mismo, mientras otros fitocromos promovieron solo el
fenotipo sutil en respuesta a los cambios para R (Fig. 3). Consistente con el rol del
par fitoB-fitoC en el fotoperiodismo, este par de fitocromos actuaron como
inhibidores del crecimiento del hipocótilo más efectivos, bajo DC y DL, pero no en
respuesta a la luz azul (Fig. S6). Estos resultados subrayan el rol de fitoC en la
respuesta foto-periódica, el cual pasa de ser un promotor de la floración bajo la
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condición de DL (por antagonismo entre fitoB y fitoE; Fig. 2A) un represor bajo la
condición DC (por la combinación fitoB; Fig. 2B).

Fig. 3 fitoB es suficiente para una respuesta completa de hipocótilo R.

Las plantas soportan los fitocromos indicados que han sido clasificados durante 3 días en la
oscuridad, bajo una temperatura de 4ºC en una solución de 100 Um GA 4+7 y luego plantados
en placas salinas Ms e incubados bajo una temperatura de 23ºC, tanto bajo la luz roja continua
(R) (20 umol m-2 S-1) como en la oscuridad durante 5 días. Los valores obtenidos bajo (R) son
relativamente dados gracias a la correspondencia del control en la osciridad en cada
experimento independiente. El registro alcanza + SE de 4 placas independientes.

Los roles mayormente dependientes en las propiedades intrínsecas.

Los efectos diferenciales de cada fitocromo podrían deberse a los

contrastes en las propiedades intrínsecas de cada foto-receptor o en los niveles de
expresión de m RNA o patrones de distribución o traducibilidad. Las propiedades
intrínsecas incluyen una capacidad diferenciada para acumular los niveles de
proteína, para heterodimizar o señalar los factores transformadores y las
propiedades fotoquímicas de cada fitocromo. Para prevenir los efectos de los
patrones de expresión y distribución, generamos líneas transgénicas, las cuales
fusionaron cada fitocromo a la hemaglutinina (HA) la placa fue dirigida `por el
promotor consecutivo 35S en la quíntuple base del fitocromo mutante. Al menos 8
líneas transgénicas independientes fueron obtenidas para cada fitocromo sin una
selección previa del fenotipo y otro tan resistente como el herbicida.
Las líneas individuales fueron evaluadas para la floración y la germinación
de los fenotipos (Fig. 57). El uso de la placa arquetipo nos permitió realizar una
comparación directa de los niveles de acumulación de la apoproteína PHY en
cada línea transgénica (Fig. S8). Solo 1 de 14 líneas de fitoC mostraron niveles
detectables, los cuales son consistentes con la dependencia de de fitoC en fitoB
(Fig.S2) [21]. La apoproteína PHYD fue expresada de algún modo por los bajos
niveles (dentro del promedio) y PHYE para los niveles aún más bajos (12%)
cuando las líneas de expresión PHYB fueron comparadas, las cuales son
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consistentes con los reportes previos en la sobreexpresión de estos fotoreceptores

[24] (Fig. 58). Empleamos muchas líneas independientes que también dieron
positivo en la acumulación de PHY, para comparar la efectividad de cada
fotoreceptor en la regulación de la floración y germinación durante la ausencia de
otros fitocromos (Fig. 4).
Muchas líneas 35S: fitoD-HA restauraron los niveles de germinación 50% por
encima pero solo en la débil y retrasada floración, para una sincronización similar aquella
del cuádruple de los mutantes fitoA, fitoB, fitoC, fitoE, excepto por la línea de floración
tardía (1 fuera de 8 líneas independientes). Por el contrario, las líneas 35S: fitoD-HA, no
germinaron mejor que las líneas fitoA, fitoB, fitoC, fitoD, excepto por una sola línea
expresada por fitoE, para los altos niveles (1 fuera de 12 líneas independientes, PS8),
pero muchas de estas líneas retrasaron la floración significativamente, pese a los niveles
relativamente bajos de apoproteína acumulada (Fig. 4 y tabla S2). Estos resultados
confirman, que los roles de fitD y fitoE difieren debido a la naturaleza de los foto-
receptores en sí mismos, en lugar de las diferencias entre los patrones de expresión en
sus m RNAs.
Fig. 4 Los roles individuales de fitoB, fitoD y fitoE dependen de la secuencia de la
proteína en vez de los patrones del nivel.
La medida de la germinación (A) y el tiempo de floración (B) de las líneas transgénicas
independientes ocultan cada fitocromo bajo un terreno libre de otros fitocromos. El promotor
35S. Las plantas que ocultaron los fitocromos indicados fueron cultivados bajo la condición DL
bajo una temperatura de 18ºC (B) o bajo la luz blanca en una temperatura de 23ºC (A) y un
total de número de hojas en la medida de la germinación fue determinada, como se puede
observar, en las Fig.uras 1y2 WT, los cuádruples y quíntuples fitocromos mutantes, fueron
comparados con las líneas transgénicas que soportaron HA, las versiones etiquetadas de fitoD
o fitoC en el terreno del quíntuple fitocromo mutante y las líneas del vector vacío. Los puntos
de registro representa el + importante SM de cuatro líneas transgénicas independientes por el
vector controlador y 6,8 y 12 líneas independientes para los constructos base, 35S:PHYB,
35S:PHYD y 35S:PHYE respectivamente. Los niveles de cuantificación de las proteínas en la
germinación y la floración respondería las líneas individuales que se muestran en la tabla S2 y
la Fig.ura S8).

Las líneas manifestadas 35S: fitoD-HA no restauraron la actividad de fitoA

completamente y obtuvieron solo efectos débiles del tiempo de germinación y
floración (FIG.S7) fitoA es conocido por acumular altos niveles en la plantación
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etiolada, alrededor de 8 grupos más que fitoB [31]. En nuestras líneas

transgénicas fitoA-HA acumularon en los niveles de las plantaciones etioladas un
número no mayor que fitoB-HA (Fig.S8). Por lo tanto, estos resultados pueden
deberse a las diferencias en los niveles de expresión comparados que en aquellos
manejados por el promotor fitoA [32].
Finalmente, la expresión de 35S: fitoC-HA no reestableció la germinación en lo
absoluto, tampoco retrasó la floración de manera significativa por sí sola, pero
retrasó la floración bajo la condición de DC cuando transformó en plantas fuertes
solo fitoB (Fig.5). Mas, también 35S: fitoC-HA antagonizó la actividad de fitoE,
consistente con los resultados previos (Fig. 2 y 5). Para tomar en cuenta las
diferencias entre los sitios de inserción de ADN-T, fueron mostrados en un
experimento similar de floración con las líneas f1 que obtuvieron cada producto
entre las líneas 35S: fitoC-HA (en el terreno del quíntuple fitocromo mutante) las
líneas soportaron solo fitoB (ejem, fitoA, fitoC, fitoD, fitoE mutantes cuádruples). A
pesar de ser heterogéneo para el punto PHBY (PHB/fitoB) y la homocigosis para
la inserción 35S: fitoC-HA, estas líneas f1 florecieron significativamente más tarde
que la homocigosis 35S: fitoC-HA (en el quíntuple origen mutante) y el fitoA, fitoC,
fitoD, fitoE cuádruple homocigosis mutante para PHYB (Fig. S9), mas,
confirmando el requerimiento mutuo de fitoB y fitoC para la regulación de la
respuesta foto-periódica.

La modulación de fitoC en la localización de patrones subcelulares de fitoB

bajo diferentes condiciones lumínicas.

Los fitocromos heterodimeros son conocidos gracias a la existencia de los pares

de fitoB/fitoC, fitoB/fitoD, fitoB/fitoE y fitoC/fitoD.
La división de los fitocromos en proteínas fluorescentes fue un instrumento
empleado en el estudio de la dinámica en la localización del fitocromo nuclear. Sin
embargo, estos estudios no hicieron distinción entre fitocromos homodimeros y
heterodimeros [22,33-35]. Por otra parte, la interacción directa sería posible si los
heterodimeros difieren en la localización de los patrones intracelulares,
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examinamos toda clase de combinación de los fitocromos por el análisis

bimolecular fluorescente complementario (BIFC) (pág. S10).

Dividimos la estación C de cada fitocromo tanto para mjorar la terminal N

de la proteína amarilla fluorescente (n.E.Y.F.P). como la terminal C (c. E.Y.F.P).
Cuando dos moléculas del fitocromo interactúan en las dos mitades de EYFP
están suficientemente cerca de reconstruir la actividad fluorescente, en estas
prácticas la complejidad de la maduración con el tiempo y el equilibrio podría
cambiar además ellas no pueden ser tomadas como una medida de afinidad fija,
por otra parte, probarnos la expresión de cada fitocromo en la Nicotiana
Benthamiana trascendiendo el sistema los cuales no fueron expresados como
niveles similares (Fig. S8C). Además, nuestras prácticas deben ser interpretadas
de manera cualitativa más que cuantitativa, coexpresamos cada uno de los pares
de los constructos en los niveles de Nicotiana, y mantuvimos las plantas en la
oscuridad durante 2 días antes de EYFP.

Al observar la luz fluorescente (Fig. S10). FitoC fue el único fitocromo que no
produjo fluorescencia detectable cuando se emparejó consigo mismo, el cual de
acuerdo a los registros no forman homodimeros fitoC [21], en contraste,
detectamos interacciones de fitoE y fitoE, emparejados con el fitoE encontramos
que es biológicamente activo en ausencia de otros fitocromos (Fig.2), estos
resultados sugieren fuertemente que fitoE forma los homodimeros. Además, las
interacciones fueron observadas por fitoA, fitoB, fitoD, consistente con estos
fitocromos formando homodimeros [21,22]. Fitoa, fitoB, fitoD y fitoE interactuaron
con cada uno (S10). El indicador de FitoA/fitoD y el fitoA/fitoC fue relativamente
débil aún en el terreno previo indicando que estos heterodimeros podrían ser
posibles. Las interacciones de fitoC con fitoB y fitoD y las interacciones de fitoD
con fitoE y fitoB al igual que las de fitoE con fitoB son consistentes con los
heterodimeros reportados, mientras que la interacción de fitoC en fitoE, fitoA con
fitoB y con fitoE, indican que en la existencia de fitoC/fitoE, fitoA/fitoB y fitoA/fitoE
los heterodimeros podrían ser curiosamente posible. La fluorescencia fue
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mayormente localizada en el núcleo cuando fitoB fue combinada con fitoC y

algunas extensiones fueron combinadas con fitoC (Fig.S10). La existencia de los
heterodimeros fitoB/fitoC que fue previamente descrita [21,30], pero la localización
de su patrón intracelular no fue nunca observada. Los heterodimeros fitoB/fitoC
podrían ser rápidamente transportados hacia el núcleo como respuesta a la luz
emitida durante la observación microscópica. Para evitar esto, recolectamos hojas
bajo una luz verde segura y las dejamos en la oscuridad antes de la observación
microscópica. Se encontró que una importante fracción fluorescente de fitoB/fitoC
permaneció en el núcleo (Fig.6A), mientras que bajo las mismas condiciones la
fluorescencia en la mayoría de fitoB/fitoD fue citoplasmática (Fig. 6ª en el panel
superior, citoplasma verde y el núcleo azul marcados por ECFP se dividieron en
SV40 NLS). Estos resultados sugieren que fitoC altera el núcleo/citoplasmático
dividido en fitoB y nicotiana benthamiana. Para probar esta posibilidad hemos
comparado el porcentaje de reacumulación de los homodimeros y heterodimeros
de fitoB/fitoC en el citoplasma en R y FR tratados en las plantas cultivadas bajos
LB (Luz Blanca).

Fig. 5 fitoB requiere de fitoC para regular la respuesta fotoperiodica.

El tiempo de floración de las líneas transgénicas que soportan fitoC bajo el promotor 35S en
un terreno contenedor solo de fitoB o fitoE. Las plantas ocultan solo los fitocromos indicados
que fueron cultivados bajo las condiciones de DC en una temperatura de 23ºC y el tiempo de
floración fue determinado como en la Fig.2. Los números dentro de cada barra representa el
número de las líneas T1 independientes usadas.

Después de la infiltración, las plantas fueron cultivadas durante 12 horas bajo LB

(Luz Blanca), bajo una intermitencia FR y luego cultivada durante 36 horas en la
oscuridad. Después de la fase oscura, las plantas fueron tratadas con R durante 3
horas y analizadas microscópicamente (fig 6B y 6C, R control hora cero). Ambos
homodimeros fitoB/fitoB y los heterodimeros fitoE/fitoC fueron localizados en
ambos, los citoplasmas y núcleos. Sin embargo, después de los tratamientos con
FR, una cantidad substancial de fitoB/fitoC los heterodimeros permanecen en el
núcleo (núcleo verde), mientras que la mayoría de los homodimeros fitoB/fitoB
fueron citoplasmáticos (citoplasma verde y núcleo azul, fig 6B y 6C). Para más
 15

pruebas de estos patrones de localización con ensayos independientes de BiFC,

pudimos evaluar la localización de fitoC y fitoB cuando interactuaron entre sí
(fig6D y 6E). Con este propósito empleamos GFP y la división de los cerúleos fitoB
y fitoC. Después de la agroinfiltración con estos constructos, las plantas fueron
cultivadas bajo LB durante 12 horas, con una intermitencia FR y luego cultivadas
durante 36 horas en la oscuridad. Después de la fase oscura, las hojas fueron
recolectadas bajo la luz verde segura, arregladas y analizadas con microscopía
confocal. Una vez más, observamos que fitoB fue mayormente citoplasmático
cuando se encontraba solo, mientras que fue mayormente nuclear cuando
interactuó con fitoC. Curiosamente, el patrón de fitoC fue mayormente nuclear
cuando interactuó con fitoB. De manera contraria para el registro BiFC (fig10),
fitoC pudo ser detectado cuando se encontraba solo (fig6D), sugiriendo que fue
estabilizado por asociación con los fitocromos de tabaco endógeno. Curiosamente,
fitoC fue más nuclear en su localizción que fitoB. Estos resultados sugieren que
fitoC forza fitoB para localizar el núcleo, después de las fases de oscuridad y bajo
una cualidad de luz independiente. Sin embargo. En el núcleo Arabidopsis, fitoB
permanece en el núcleo bajo largos periodos de oscuridad, la baja calidad o la
baja luminosidad, pero cambia sus patrones de localización en cuerpos nucleares.
Desde grandes a pequeños cuerpos nucleares [36,37]. Para registrar el
comportamiento de fitoB en la presencia de fitoC Arabidopsis, generamos fitoB-
GFP, tanto las líneas en el terreno del quíntuple fitocromo mutante o en un terreno
en el que haya solo fitoC por el cruce de las líneas de fitoB-GFP fitoA fitoB fitoC
fitoD fitoE con o bien el quíntuple fitoA fitoB fitoC fitoD fitoE mutante o el fitoA fitoB
fitoD FitoE soportando el cuádruple mutante soporta solo fitoC.
Las líneas F1 fueron cultivadas en la condición DC (Días Cortos) en las cuales se
observaron los efectos de fitoC y fitoB en el alargamiento del hipocótilo (fig S6B) y
la floración (fig2B). observamos que la localización de los patrones de fitoB en dos
momentos. Durante la última hora del DC y durante la última hora de una larga
noche, (fig 6F y 6G). fitoB-GFP fue localizado en un gran núcleo después de la
fase lumínica a pesar de la presencia de fitoC. Sin embargo, después de 15 horas
en la oscuridad, fitoB-GFP en un gran núcleo en presencia de fitoC, mientras que
 16

en ausencia de fitoC, fitoB-GFP mostró patrones más difusos en el núcleo (fig 6F y

6G). Fue demostrado recientemente que los cuerpos nucleares del fitocromo son
requeridos para la inhibición del crecimiento de hipocótilo durante la prolongada
fase oscura [37]. A la luz de estos descubrimientos, nuestros resultados sugieren
un fuerte resultado en relación a la importancia de mantener FitoC y fitoB en estos
cuerpos nucleares. Además de la localización de los patrones de fitoC podría
afectar totalmente el núcleo de fitoB. Hemos medido los niveles de fitoB y FitoC en
los extractos de plantas que soportan solo fitoB, solo fitoC o ambos (figS11A y
S11B) durante la última hora del DC (Día Corto) o durante la última hora de la
larga fase oscura. Como se esperaba, fitoC no hay acumulación de fitoC en
ausencia de fitoB (fIg S11B), pero los niveles nucleares de fitoB alcanzaron un alto
nivel en la presencia de fitoC (fig S11A), sugiriendo que los heterodimeros
fitoB/fitoC podrían ser más estables en el núcleo que con los homodimeros fitoB.
Para la realización de futuras pruebas fitoC podría incrementar la actividad de fitoB
al final de la fase nocturna, hemos medido la expresión de los genes que
responden tanto a la cualidad lumínica como al alba durante la transición de la
noche al día (fig S11C-S11F), una condición a través de la cual fitoC promueve la
acumulación de fitoB en los grandes cuerpos nucleares (fig 6F y 6G). los niveles
de m RNA de PIF3- LIKE 1 (PIL1) y la HOMEOSECUENCIA PROTEINICA DE LA
ARABIDOPSIS THALIANA2 (H2PAT) fueron reprimidas por los fotoreceptores
fitoB y fitoC en un bajo nivel que solo fitoB, aun durante las últimas horas de la
fase oscura (figS11C y S11D) [37]. Los genes mostraron en la mañana EL RELOJ
REGULADOR1 Y LA INDUCCIÓN POR LA LUZ NOCTURNA. (R1ILN) y EL
RELOJ CIRCADIANO1 ASOCIADO (RC1A) [38,39] se mostraron respuestas más
fuertes a la luz cuando fitoB y fitoC estuvieron presentes (figS11E y S11F).
Curiosamente la expresión de la fase RC1A fue más retardada en plantas que
soportaban fitoB y fitoC comparadas con aquellas que solo soportaban fitoB. Esto
podría ser un mecanismo que subraya la sensibilidad de las plantas que poseen
fitoB y fitoC en el fotoperiodo. Juntos, estos estudios de expresión genética
muestran una acción coordinada de fitoB y fitoC en la que se espera una mayor
presencia de los heteridomeros nucleares fitoB/fitoC en los cuerpos nucleares
 17

durante la transición entre las fases oscura y lumínica después de un largo periodo
nocturno.
Discusión
Durante más de 25 años los fitocromos mutantes han sido extensivamente usados
en el estudio de los roles de los fitocromos. Los fitoB y fitoA han surgido de los
fitocromos más importantes [1, 2, 18, 29], mientras que los roles de fitoD, fitoE y
fitoC han sido asumidos para ser el menor y redundante fitoB [6, 11, 12, 14, 15,
22, 24, 40, 41], sin embargo, nuestro conocimiento acerca de la capacidad
individual de los fitocromos para suscitar interacciones y respuestas específicas
entre ellos aún está incompleta.

Los roles individuales de cada fitocromo y sus interacciones.

Cuando se encuentra solo, fitoC es escasamente activo, pero causa una ligera
disminución en la sensibilidad GA durante la germinación (fig S3B), una pequeña
inhibición en el crecimiento de hipocótilo bajo R luz blanca y azul (fig 3; S6 y
S12A) y un incremento en la apertura de los ganchos (fig S12B), son consistentes
con los reportes previos [14, 40, 42]. Esta baja actividad residual de fitoC es
consistente también con la falta de una detectable homodimeración de fitoC [21]
(fig S10) y la baja acumulación de fitoC en ausencia de fitoB (fig S2) [20, 27]. Sin
embargo, la humedad de Triticum aestivum fitoC homodimeriza en Arabidopsis y
suscita respuestas morfogenéticas [43], forzando la homodimeración de fitoC
desencadenando respuestas morfogenéticas en Arabidopsis [22]. Por lo tanto, es
posible que los efectos residuales de fitoC podrían deberse a los bajos niveles de
homodimeros fitoC.
No está claro si fitoE es independientemente activo de otros fitocromos y si
forma los homodimeros. Clack et al. No detectaron homodimeros fitoE [22]. No
obstante, el origen de fitoE no fue probado en un terreno desprovisto de otros
fitocromos. Nuestros resultados señalan que el fitoE origen forma homodimeros,
como fitoE es biológicamente activo en la ausencia de otros fitocromos (fig 1,2 y 4:
S6 y fig S7) y este interactúa por si solo en un ensayo BiFC )fig S10). Sin
 18

embargo, el fitoE origen no puede ser excluido por la falta de homodimerización de

fitoE reportado previamente podría deberse a los cambios naturales al uso de
diferentes inserciones [21,22]. Curiosamente, encontramos que fitoE reprime la
floración más amplia aún mejor que fitoB (fig2). Esta represión fue altamente
dependiente en un ambiente bajo LD (Luz Diurna) explicada por la temperatura de
la floración dependiente de las mutaciones de fitoB [13, 41]. Por lo tanto, fitoE
podría compensar la falta de fitoB a bajas temperaturas. Contrariamente, los
efectos individuales de fitoE en la germinación y el crecimiento del hipocótilo
fueron discretos (fig 1,3 y 4; S1, S3 y S7B, tabla S2), pero surgieron interacciones
con otros fitocromos (ver fig 7 debajo).
En comparación con fitoE, fitoD fue el germinador más eficiente (fig 1y 4; S1
y S7B; tabla S2), pero un débil represor durante la floración (fig 2 y 4; S7A; tabla
S2). Por consiguiente, fitoD y fitoE, de los cuales se creyó que trabajarían más de
una manera redundante [6, 11, 12, 14, 15, 22, 24, 40, 41], tienen claros roles. En
este punto no está claro como esto podría ocurrir. Podría implicar diferentes
capacidades de fitoD y fitoE para interactuar siguiendo la ruta de los componentes.
Por otra parte, aún si nuestros registros no respaldan los cambios generales en la
estabilidad de los fitocromos podría explicar las diferencias entre fitoD y fitoE, no
podemos descartar los mecanismos específicos para regular el nivel de cada
fitocromo en un tejido de manera detallada. Podría ser y contar para el rendimiento
opuesto con los cuales fitoD Y fitoE ayudan a la germinación y la represión en la
floración.
Después de fitoB, fitoA fue el germinador más importante y la sensibilidad
GA y estos efectos fueron más evidentes bajo FR (fig 1; fig S3). Estos
descubriemientos son consistentes con los roles establecidos de fitoA [18]. Sin
embargo, en lugar de comportarse como un germinador [28], fitoA, cuando est
aislado, se transforma en un débil represor en la floración, sugiriendo fuertemente
que fitoA activa la floración de manera indirecta, modulando la señalización de la
ruta transducida por fitoE y fitoD en menor grado (fig2 y 7). FitoA fue el único
fitocromo que otorgó algún grado de sensibilidad fotoperiodica por sí mismo,
mostrando un rol fuertemente represivo en DC (Dias Cortos) (fig 2B).
 19

Como era de esperarse, fitoB fue el fitocromo que tuvo un efecto

estimulador en la germinación y sensibilidad GA (fig1; S1, S3 y S7D) y el mayor
efecto inhibidor hipocotíleo en el crecimiento (fig 3). Pese al rol ampliamente
aceptado por fitoB en la respuesta de la floración fotoperiodica [29], fitoB no
confirió una sensibilidad fotoperiodica por sí misma, mostrando que fitoB es
necesario, pero no suficiente para la respuesta fotoperiódica (fig 2B).
En nuestro análisis de interacciones binarias, detectamos interacciones
tanto positivas como negativas (fig 7). Mientras que fitoC, fitoD y fitoE actuaron
sinérgicamente para promover la germinación en respuesta a la luz )fig 1; S1),
antagonizaron ambos fitoA y fitoB en términos de sensibilidad GA (fig 2; tabla S1).
Como GA promueve la germinación, pero antagoniza los fitocromos en el control
del alargamiento de hipocótilo [1], este mecanismo podrías permitir al plantón
recuperar el control de los fitocromos en el alargamiento hipocotilitico (salen las
semillas) después de la germinación. Curiosamente, fitoC, fitoD y fitoE también
actuaron sinérgicamente con fitoA para inhibir el alargamiento hipocotilico bajo las
luza azul (fig S6A). Este efecto sinérgico, similar al observado por FR-germinador
(fig 1 y S3), posría deberse a altos niveles de proteína de fitoA en presencia de
cualquiera de los 3 fitocromos, fitoC, fitoD o fitoE (fig 7 y S2).
Las interacciones entre los fitocromos aquí mostradas podrían deberse en
parte al menos a la formación de los heterodimeros. Heterodimeros de fitoB/fitoC,
fitoB/fitoE y fitoD/fitoE y en un grado menor, fitoD/fitoC fueron previamente
demostrados [20, 21]. No obstante, los heterodimeros que contienen fitoA y los
heterodimeros fitoC/fitoE no fueron encontrados. En este estudio detectamos las
interacciones entre fitoA y todos los heterodimeros (incluyendo la débil señal de
fitoA/fitoC) y también las interacciones de fitoC/fitoD y fitoC/fitoE utilizando BiFC
(fig S10). Estos resultados debieron ser tomados con cautela como
agroinfiltratción en las hojas de tabaco podrían liderar unos niveles más altos (fig
S8D). Sin embargo, estos resultados alcanzan la posibilidad que el par de
interacciones sabias podrían deberse en parte a la interacción entre proteína-
proteína de los miembros de los fitocromos y sugieren que la red de señalización
del fitocromo es más compleja que lo expuesto previamente.
 20

La coacción es esencial y suficiente para la foto-periodicidad de fitoB y fitoC.

El rol de fitoB en la respuesta foto-periódica ha sido reportado

extensivamente en muchas especies [29, 44, 45]. No obstante, aunque fitoB
pueda reprimir la floración por sí mismo, este requiere de la presencia de fitoC
para conferir la respuesta foto-periódica (fig 2 y S5). Por otra parte, fitoC requiere
de fitoB, esto es consistente con los reportes previos en ambos, tanto en el arroz
como en el Arabidopsis [ 15, 30, 40]. Los estrictos requerimientos, para la actividad
de ambos fitoB y fitoC podría indicar que los componentes de los fotoreceptores
interactúan o que la actividad de los heterodimeros fitoB/fitoC, difiere de los
fotoreceptores individuales. Nuestros registros se inclinan hacia la segunda
opción. Primero la existencia de los heterodimeros fitoB/fitoC fue previamente
reportada tanto en el arroz como en el Arabidopsis [21, 30] hemos demostrado que
fitoB y fitoC interactúan in vivo (fig 6 y S10). Segundo, mostramos que los
heterodimeros fitoB/fitoC se localizan en el núcleo en las practicas realizadas en
Nicotiana benthamiana, aún después de periodos prolongados de oscuridad o bajo
la luz roja más allá de las proporciones lumínicas, sugiriendo el surgimiento del
sistema en la propiedad de fitoB-fitoC (fig6 y S10). Tercero, ni fitoB ni fitoC
concedieron una respuesta foto-periódica sutil por si solos. Es improbable que la
coacción se deba a la interacción de los componentes de fitoB y fitoC en la ruta.
Curiosamente, fitoB reprime el alargamiento hipocolitico en respuesta a R por sí
mismo (fig 3) y reprima la floración bajo las condiciones de DC y DL (fig2), pero
solo en presencia de fitoC fue fitoB capaz de restaurar la foto periodicidad.
Los reportes recientes, refuerzan la idea que fitoB en un gran cuerpo
nuclear está activo y activa necesariamente la ruta durante el periodo nocturno
[35-37]. Mostramos que fitoC promueve la localización de fitoB en grandes
cuerpos nucleares después del periodo nocturno (fig 6F y 6G), sugiriendo que los
heterodimeros fitoB/fitoC están activos durante una larga fase oscura. Por lo tanto,
la actividad extendida de los heterodimeros fitoB/fitoC por la noche y su
 21

disponibilidad durante el alba podría ser importante en la represión de la floración

y el alargamiento hipocotilico específicamente bajo la condición DC.
Dos observaciones interesantes previas, podrían explicar claramente
nuestros resultados. Se reportó que las líneas sin sentido de PHYB redujeron un
75% en la muestra de hipocótilo prolongada de fitoB como harían los fitoB
mutantes, pero un tiempo de floración normal [46]. Igualmente, los alelos 28. FitoB
cuya falta de dominio de HKRD, tiene hipocótilo prolongado, pero en un periodo de
floración casi normal [47]. Estas observaciones podrían ser explicadas si bajos los
niveles de fitoB, fitoB se encuentra mayormente como un heterodimero con fitoC
por lo tanto mantiene las respuestas foto-periódicas normales, con respecto a la
floración mientras que afectan las respuests de hipocótilo debido mayormente a
los homodimeros fitoB/fitoB. De manera similar, los efectos de alelos fitoB-28
podrían ser explicados si en esta mutación fuesen afectados los niveles de fitoB
(el cual no es el caso) o si los heterodimeros fitoB/fitoC fuesen más abundantes
que los homodimeros fitoB/fitoB. Mostramos que fitoB por si solo es autosuficiente
para conferir mucho hipocótilo como respuesta R durante la germinación y
represor en la floración, el cual es también consistente con fitoB siendo
autosuficiente para dar una buena respuesta lumínica (respuesta en la proporción
de R/FR) [42]. No obstante, no ha sido fácil dividir el rol de fitoB en la respuesta de
la floración para la cualidad lumínica. Desde su rol en la floración foto-periódica
[28, 29, 48]. Nuestro registro respalda la noción que los homodimeros fitoB/fitoB
participan en la respuesta de la calidad lumínica, mientras que los heterodimeros
fitoB/fitoC participan en la respuesta foto-periódica. El rol de fitoC en la foto-
periodicidad podría ser ampliamente conservada. En los estudios de la población
fueron encontrados fuertes alelos fitoC para hacerse más abundantes en latitudes
más altas [49], las cuales podrían indicar que estos alelos han aumentado la
sensibilidad en el foto-período. En el húmedo, Brachypodium distachyon y apenas
Hordeum vulgare, fitoC promueve la floración más efectivamente en condiciones
lumínicas diurnas [43, 50, 51]. Estos resultados resaltan la importancia de fitoC en
las respuestas foto-periódicas en distintos hábitats y especies que son
consistentes con nuestros descubrimientos en la respuesta foto-periódica esencial.
 22

Sería interesante estudiar si fitoC promueve también la floración bajo las

condiciones de antagonización fitoB en césped húmedo para establecer la posible
participación de los heterodimeros fitoB/fitoC en la respuesta foto-periódica de
estas especies.

Novedosas interacciones entre la temperatura y el sistema Fito-cromático.

Un aspecto interesante de los fitocromos es que sus efectos son alterados por la
temperatura (fig2A). Un resultado de la ausencia de los fitocromos es la baja
sensibilidad a la temperatura bajo condiciones lumínicas diurnas, no obstante,
fitoE y fitoB reprimieron la floración más eficiente, así como la disminución de la
temperatura, indicando que existe una comunicación entre el fitocromo y la
señalización de la ruta (fig 2A). El efecto específico de fitoA en una temperatura
dependiente de la señalización de fitoE, pero no en la señalización de fitoB, sufiere
fuertemente que exiten diferencias en la señalización de la ruta de fitoB y fitoE (fig
2A). Como fitoE regula la floración no se conoce aún, pero estos resultados
muestran la posibilidad que un (CO) constante mecanismo independiente que se
diferencia de fitoB con un efecto mediador en la estabilidad CO podría funcionar
en la ruta de fitoE [29]. Pensamos en dos posibles mecanismos para explicar
cómo los heterodimeros fitoB/fitoC podrían contribuir en la detección del foto-
periodo. Una posibilidad es que los efectos de fitoB sobre la estabilidad de CO
podría deberse además a los heterodimeros FitoB/fitoC. Una segunda posibilidad
es el respaldo del role de fitoB en la regulación la fase de reloj circardiano [52] y
también respaldada por el registro de la expresión de nuestro gen (fig S11): los
heterodimeros fitoB/fitoC podrían afectar la fase del reloj y el tiempo de floración
de los genes, por lo tanto, la detección del foto-periodo.
La floración fue reportada como insensible en ausencia de los fitocromos
durante el foto-periodo [10], encontramos resultados similares cuando las plantas
fueron cultivadas bajo una temperatura de 24ºC. Sin embargo, también
encontramos que la respuesta del foto-periodo fue reestablecida en bajas
temperaturas (fig 2B). Estos resultados juntos sugieren la existencia del fitocromo
 23

dependiente y los mecanismos independientes que regulan la respuesta de la

floración en la temperatura, consistente con las evidencias genéticas previas [53].