PRACTICA DE LABORATORIO

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE ENZIMA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

I. INTRODUCCION

Las enzimas son catalizadores de eficiencia y especificidad extraordinarias. En el proceso de la reacción que
catalizan, estas aceleran la aproximación de una reacción a su equilibrio, sin cambiar la posición de ese
equilibrio. Es decir, las enzimas como catalizadoras biológicos son tan efectivas que la, mayor parte de las
reacciones quien ellas catalizan no se efectuarían en su ausencia dentro de un tiempo razonable; sin que se
dieran extremos de la temperatura presión o pH.

La cinética estudia la velocidad de las reacciones químicas que son catalizadas por las enzimas.

El estudio de la cinética de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, y su papel en
el metabolismo , como es controlada su actividad en la célula y como puede ser inhibida su actividad por
fármacos o venenos o potencia por otro tipo de molécula.

En cinemática enzimática es importante conocer como afecta la concentración de la enzima , ello a pesar de
saber que lo menos importa es aumentar o no a la cantidad de enzimas ya que hay otros factores que influyen
mucho mas como son el número de centros activos de la misma , su afinidad por el sustrado , la
concentración de este , el PH , la temperatura , la ausencia de inhibidores , etc. Ello se debe a la relación
existente entre la velocidad con la concentración de enzima : la velocidad de la reacción es directamente
proporcional a la concentración de sustrato. Por ejemplo, si la concentración de enzima es disminuida a la
mitad , la velocidad inicial de la reacción es reducida también a la mitad de la original.

II. OBJETIVOS

El objeto de la presente experiencia es demostrar el efecto de la concentración de la enzima sobre la

actividad enzimática , utilizando para ello la enzima amilasa salival.

III. MATERIALES

a) Material biológico :enzima amilasa

b) Material y equipo de laboratorio
- Gradillas para tubos
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm (8)
- Pipetas de 1 mL (2), (luna de 1/100), dos de 2 mL y 5 Ml.
- Baño maría a 37°C
- Goteros o pipetas descartables de plástico
- Pizetas con agua destilada
c) Reactivos :
- Solución de almidón 1% pH 6.9
- Solución de NaCl 0.1 M
- Solución yodada
- HCL 0.05 N
 IV. PROCEDIENTO

RX ENZIMATICA

Tabla 1. Sistema de incubación

COMPONENTES ( ML) Y PROCESO TUBOS(ML)

1 2 3 4
SOLUCION DE ALMIDON BUFFEADO AL 1% 3.5 3.5 3.5 3.5
CLORURO DE SODIO (NACL) 0.1 M 1.0 1.0 1.0 1.0
AGUA DESTILADA 1.5 1.0 0.5
MEZCLAR SUAVEMENTE Y PRE INCUBAR POR 37°C POR 5 MIN
AMILASA SALIVAL 0.5 1.0 1.5
MEZCLAR SUAVEMENTE E INCUBAR POR 37°C POR 15 MIN

DETERMINACION RESIDUAL DEL SUSTRATO

Tabla 2. Determinación de la actividad enzimática de la amilasa salival

COMPONTES (ML) Y PROCESO TUBOS

1 2 3 4
HCL 0.05 N 3.0 3.0 3.0 3.0
DE LOS TUBOS 1 AL 4 DE LA TABLA 1 05 0.5 0.5 0.5
TRANSFERIR
SOLUCION YODADA 0.5 0.5 0.5 0.5

MEZCLAR SUAVEMENTE LOS CONTENIDOS DE LOS SISTEMAS DE REACCION Y OBSERVAR EL

COLOR RESULTANTE EN CADA SISTEMA DE REACCION
ANOTAR LOS RESULTADOS, ANALIZARLO Y LUEGO SACAR CONCLUSIONES

V. RESULTADOS

En la primera tabla se mezcla la solución de almidón con la amilasa salival, diferentes

proporciones para cada tubo, se incuba a una temperatura de 37°C por un tiempo de
15 min, para luego de dicha mezcla extraerla cantidad necesaria para el procedimiento
de la tabla 2.

En la segunda tabla se puede observar :

Tubo N° 1: al ser agregada la solución yodada a dicho tubo , se convierte en azul , ya
que dicha solución reacciona con el almidón ( no tiene enzimas por eso se torna mas
azul )
Tubo N°2 : Al agregar la misma cantidad de solución yodada al tubo , la color se torna
mas clara que el tubo n°1 , esto se debe a que tiene mas residuos de almidón
 Tubo N°3: Después que agregamos la solución yodada, da como resultado un color
amarillento escuro, se torna esa color debido a la poca cantidad de residuos de
sustrato.
Tubo N°4 : Luego de agregar la solución yodada al tubo final , se torna un color
amarillo claro , debido a la amilasa salival actúa mas al sustrado , y el residuo sustrato
es menor que los anteriores tubos

VI. DISCUSIÓN

En esta práctica se observó que la velocidad de una reacción enzimática es

directamente proporcional a la concentración de la enzima a cualquier
concentración de sustrato. Cuando aumenta la cantidad de enzima, las moléculas
actuarán independientemente en solución para transformar más sustrato en un
intervalo de tiempo.
VII. CONCLUSION
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3
https://es.scribd.com/document/281610803/P5-2-Bioquimica-Efecto-de-La-
Concentracion-de-Enzima-Sobre-La-Velocidad-de-Reaccion