22/10/2015

(Universidad Del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

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MICROOGANISMOS DE IMPORTANCIA
AGROINDUSTRIAL

Blgo.
Blgo. José Manuel Bustamante Agreda

Bioprocesos industriales

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Bacterias y hongos de importancia industrial

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Principales clases de productos

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Microbiología Industrial
Disciplina que utiliza los microorganismos, cultivados
a gran escala, para obtener productos con alto
rendimiento con valor comercial o realizar
importantes transformaciones químicas.
Desarrollo:
- Procesos de fermentación alcohólica
- Síntesis de productos farmacéuticos (antibióticos),
aditivos alimentarios (aminoácidos), enzimas, y
productos químicos como butanol y ácido cítrico.

Biotecnología
Microbiana

Microbiología Industrial
Biotecnología Industrial
Tradicional

Evolución dirigida

Microorganismos nativos Microorganismos sintéticos

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Un microorganismos de uso
industrial debe:

Producir en grandes cantidades el producto de interés en
un periodo relativamente corto.

Crecer rápidamente sobre un medio de cultivo barato
disponible en grandes cantidades (Commodity chemicals)
o a partir de residuos de la agroindustria (maceración de
licores, suero de leche, restos de cosecha, etc.

Reproducción a base de estructuras (esporas, células
vegetativas) que facilite la inoculación.

Ser susceptible a ser manipulado genética: ingeniería
genética y mantenerse estable en el tiempo.

No ser patógeno del hombre, plantas ni animales.

Metabolismo

Catabolismo Anabolismo
Moléculas simples como
glucosa, aminoácidos,
glicerol y ácidos grasos.

Reacciones catabólicas Reacciones anabólicas

transfieren energía de transfieren energía
moléculas complejas del ATP hacia
hacia el ATP. moléculas complejas.

Moléculas complejas
como almidón,
proteínas y lípidos.

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Metabolismo Microbiano

Respiración
Celular
Respiración
Anaeróbica

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Respiración
Celular

1. Ruta Embden – Meyerhof (Glicolisis)

Respiración
Celular

1. Ruta Embden
– Meyerhof
(Glicolisis)

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Respiración
Celular

2. Ciclo de
Krebs (ác.
Tricarboxílicos)

Respiración
Anaeróbica

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Respiración
Anaeróbica

Respiración
Láctica

Respiración
Alcohólica

Integración del Metabolismo Microbiano

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Actividad enzimática

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Metabolitos Primarios y
secundarios

Metabolitos Primarios: Precursores indispensables para la biosíntesis

de aminoácidos, nucleótidos, vitaminas, azúcares, ácidos grasos.
Metabolitos Secundarios: Antibióticos, micotoxinas, alcaloides,
factores de crecimiento.

Producción de Metabolitos

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Metabolitos Primarios

Moléculas de bajo PM.

Se forman durante la fase
exponencial de crecimiento (producto
final o intermediario)

Esenciales para el crecimiento:
metabolismo energético.

Producidos por todos los m.o.
Ejm: Producción de etanol en
levaduras.
Ejemplos:
Alcoholes: Etanol
Aminoácidos: ác. Glutámico, Lisina,
ornitina
Ácidos orgánicos: acético, cítrico,
glucónico
Vitaminas: B12, riboflavina
Polioles: glicerol
Nucleótidos: purinas, pirimidinas
Relaciones entre los metabolitos primarios y secundarios
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Metabolitos Secundarios

Se forman al final de la fase de
crecimiento o en fase estacionaria

No son esenciales para el
crecimiento ni sobrevivencia.

Dependen de las condiciones de
cultivo (composición del medio)

La sobreproducción
generalmente es alcanzables.

Específicos de un grupo de m.o.
Ejemplos:
Antibióticos: Penicilina,
eritromicina
Alcaloides
Toxinas
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Finalidades de las regulaciones del

metabolismo microbiano

Coordinación metabólica: desarrollo de procesos vitales.

Síntesis integrada de enzimas – uso racional de los
nutrientes.

Evitar sobreproducción de metabolitos.

1. Inducción
Enzimas constitutivas Enzimas inducibles

Presentes en notable cantidad. Generalmente inactivas

Presentes en cualquier condición de Necesario la presencia del sustrato de
crecimiento. la enzima.
Ejm. Glicólisis: Glucosa a Piruvato. Ejm, Producción de amilasa por
Aspergillus sp o Rhizopus sp.

2. Represiones y Activaciones ligadas a la tasa de crecimiento

Crecimiento elevado Crecimiento lento o ausente

Metabolismo secundario reprimido Metabolismo secundarios activo.

Ejem. Producción de penicilina por
Penicillium sp. Alcaloides por
hongos.

3. Regulación catabólica por las fuentes de carbono y nitrógeno

Fuente de carbono Fuente de nitrógeno

Síntesis de enzimas necesarios para Represión de enzimas que actúan

degradar el sustrato más asimilable.
Después, actividad de otras enzimas.
Ejm. Síntesis de celulasas por
glucosa, almidón, celobiosa
(Metabolismo secundario)
sobre compuestos nitrogenados por
elevadas concentraciones de NH4+ o
aminoácidos.
Ejm: Proteasas, nitrato reductasas,
etc. Ciclo del ácido cítrico.

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4. Regulación por el fosfato

Concentraciones elevadas

Represión de algunas enzimas

(ortofosfatos).
Ejm. Biosíntesis de alcaloides

5. Regulación feedback

Inhibición Feedback Represión feedback

El metabolito final de una vía El metabolito final reprime la síntesis

biosíntesis inhibe la acción de una de todas las enzimas de una
enzima precoz (la 1ra enzima). secuencia

Reducción en la síntesis del metabolismo secundario.

Biosíntesis del
ÁC. Cítrico por
Asperigullus
niger

Bajo Mn++

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Diagrama de las operaciones en el proceso de recuperación de un

producto biológico a partir de un caldo fermentativo
Intracelular Extracelular
Product Células, tejido en el Producto en
o fermentador/reactor caldo
En células, O fase acuosa
etc. Reactor
Separador
Liberación del
Separación producto o especies
Separadores/
del caldo indeseadas desde las
Purificación
células
Sedimentación Precipitación
Desintegración de Extracción directa de Extracción por solvente
Filtración células: células completas: Intercambio Iónico
Mecánica Solvente/detergente Absorción
Centrifugación Física Etc. Filtración en gel
Química Métodos de Afinidad
Enzimática Destilación
Membranas
Biomasa, Liberación del producto Electroforesis
producto o de fragmentos Congelamiento
diferencial
desechos
Lixiviación

Secado Concentración
Pureza requerida?? Bandeja, rodillo, Evaporación, Membranas
Tambor, etc. Precipitación
Presencia de compuestos Fluidizado: Secado en Absorción, intercambio iónico, afinidad,
química y físicamente cama, Congelado- etc.
secado Congelado-Descongelado, cristalización
parecidos????

Operaciones Unitarias de
Recuperación
El caldo de fermentación puede ser tratado con los siguientes
métodos, que se divide en:

Mecánico Químico
Filtración Absorción
Centrifugación Intercambio Iónico
Evaporación Cromatografía de
columna
Cristalización Cromatografía de
afinidad
Secado Extracción por solvente
Osmosis Reversa Electroforesis
Ultrafiltración Electrodiálisis

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I. Operaciones Mecánicas

Filtración
1er en el aislamiento del producto de
fermentación: Sólidos suspendidos
separados de la fase líquida.

Centrifugación
2do. en el aislamiento. Sólidos
suspendidos separados de la fase
líquida por aumento del asentamiento
gravitacional.

Tiempo requerido para

completar la remoción
de partículas

Lodo líquido

Filtro
Filtro de
algodón
Soporte
Filtrado

Secado
Evaporación
Cristalización

Último paso en proceso
de separación. Remoción
de la humedad o del
solvente de partículas
sólidas.
Remoción de la
humedad o del solvente
de partículas sólidas.
Desventajas:
Inactivación de materiales
lábiles al calor.
Remoción del solvente a Cambio de solubilidad de uno
través de vaporización del de los compuestos disueltos de
mismo. tal manera que deja la solución
como un sólido.
Desventajas: Adecuado para aquellos
productos de fermentación que
Daño o destrucción de tienen una baja solubilidad en
productos si son expuestos el solvente utilizado.
a temperaturas muy altas
durante largos periodos de Ventajas:
tiempo. Mínima pérdida de
productos térmicamente
sensibles (Tto. a bajas
temperaturas)

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Microfiltración
Ultrafiltración
Ósmosis Reversa

Procesos de separación a través de una membrana, barrera entre dos fluidos.
La propiedad de la membrana es su permeabilidad o tasa de transferencia de
un componente a través de ésta.
Método/ Microfiltración Ultrafiltración Ósmosis Reversa
Característica
Tamaño del poro de nm 10 a 300 nm 1 a 1.25 nm 0.3 a 1 nm
Rango de presión 1 atm. 1 a 10 atm. 10 a 100 atm.
hidrostática
Separación de un soluto de una solución forzando al
solvente a fluir a través de una membrana usando
una gradiente de presión hidráulica.
Lodo líquido
Filtro
Filtro de
algodón
Soporte El soluto presenta
Filtrado dimensiones dentro
del orden de
magnitud de las
dimensiones del
solvente.

Extracción por Solventes

Equilibrio entre solventes inmiscibles usualmente agua y un líquido orgánico.
Pasos:
(1) Mezcla íntima de los dos solventes hasta que el solutos
esta distribuido en ambos líquidos
(2) Separación de las dos fases.

Electrofores
Separación de
ismoléculas cargadas o iones usando un campo eléctrico.
Migración diferencial de solutos en este medio (soluciones acuosas, suspensiones o
geles) debido a la fuerza eléctrica que separa los solutos. Mayor grado de resolución al
incorporar un elemento de discontinuidad (gradiente de pH, membranas cargadas,
geles)
Método/ Electroforesis Electrodiálisis
Característica
Tipo de separación Acentúa pequeñas diferencias en la Concentra componentes
movilidad iónica en un campo sobre la base de la
eléctrico usando un transportador de electromigración a través
fluido en movimiento. de membranas iónicas.

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Adsorción
Intercambio
Cromatografía
Cromatografía

Iónico de columna de afinidad

Técnicas de separación en el cual los compuestos removidos o solutos

establecen un equilibrio en sitios de un material de fase sólida (columna)
y la solución.

Método/ Adsorción Intercambio Cromatografía Cromatograf

Característica Iónico de columna ía de
afinidad
Tipo de unión a Polaridad o Intercambio de Absorción, Unión con
la fase sólida Unión química iones entre la Intercambio alto nivel de
(columna) débil fase líquida y iónico o selectividad a
sólida material Sieve ligandos
molecular . covalentemen
1ro. Unión a la columna te unidos a la
del material de
separación. matriz sólida.
2do. Elución en
fracciones separadas
colectadas

Principales productos de la Microbiología

Industrial
Vitaminas

Vitamina B12 Riboflavina

Vitamina B12
Producido por por: Propionibacterium y Pseudomonas (Cobalto)
Importancia: Nutrición del Hombre y animales. Deficiencia produce
anemia perniciosa (B12).
Rivoflavina
Producido por: Mohos, levaduras y bacterias
Importancia: precursor del FAD y FMN (reacciones de oxido reducción)
Medio de cultivo: Co regula la alta producción de B12.

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Aminoácidos
Aminoácidos de uso alimentario: aditivos alimentarios, en medicina, en la
industria química.
AA más importante: Ác. Glutámico (glutamato monosódico)
Ac. Aspartico y fenilalanina: Edulcorante artificial de bebidas dietéticas
Aspartamo.
Lisina: AA esencial para el hombre y animales.

Ejm. AA lisina por Brevibacterium flavum

Cepas X
mutantes
Resitentes al análogo lisina S-
aminoetil cisteína

Biotransformación microbiana
Esteroides: Cortisona e Hidroxicortinosa
Uso de microorganismos como biocatalizadores de reacciones químicas a
través de su cultivo en fermentadores donde actúa sobre un compuesto
químico (esteroles).

Ejm. Producción de Hidroxiprogesterona por Rhizopus nigricans

Purificación del caldo fermentativo

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Enzimas
Intracelulares Extracelulares

Presentes en interior celular Presentes en el medio de cultivo.

Acción: Rx Anabólicas y Catabólicas Medio de cultivo: Celulosa, Almidón,
Proteínas
Industria: Alimentaria, láctica, téxtil,
Farmacéutica, Agrícola

Proteasas, amilasas y glucosa isomerasa

Proteasas: Mayor producción industrial. Ejemplo detergentes (lipasas, amilasas, etc.).
Microorganismos productores alcalófilos: Bacillus licheniformis (pH: 9 -10)

Amilasas y glucoamilasas: Producción de glucosa a partir del almidón.

Glucosa isomerasa: Producción de fructuosa a partir de glucosa (edulcorantes, jarabes)

producción supera los 10000 millones de kilogramos anuales.

Enzimas

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Extremoenzimas: A partir de m.o. extremófilos

Investigación:
- PCR (Taq polimerasa)

Producción:
- Proteasas, amilasas,
celulasas, xilanasas,
pululanasas

Ácidos orgánicos

Vinagre: Ác. Acético

Yogurt: Ác. Láctico
Ác. cítrico

Vinagre
Conversión del etanol en ác. Acético
Por bacterias del ácido acéticos:
Acetobacter y Gluconobacter. Poseen
la enzima Ubiquinona (quinonas).
Proceso aeróbico
Materia prima: vino, cerveza, arroz
fermentado, sidra

Ác. cítrico
A. niger
Previo tratamiento con Sacarosa
(Fructuosa + Glucosa)
Materia: Melaza, jarabe de glucosa,
hidrolizados de almidón, sacarosa,
jarabe de caña de azúcar, remolachas.
Proceso aeróbico

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Producción de Biomasa

Células de levaduras
Condición aeróbica Industria del vino, pan
Producción en fermentadores
Sustrato: Melaza, ác. Fosfórico, sulfato de amonio

Alcohol

Fermentación alcohólica Producción de etanol

Condición anaeróbica

Producción de Biomasa

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FERMENTACIONES INDUSTRIALES

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