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1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................................... 2
2. RESUMEN................................................................................................................................................... 3
3. DETALLES EXPERIMENTALES...................................................................................................................... 4
3.1. Solución de enzima alfa-amilasa bacteriano: Bacillus subtilis. .......................................................... 4
3.2. Efecto de la variación de pH sobre la velocidad de reacción de alfa-amilasa, en la hidrolisis del
almidón. ......................................................................................................................................................... 4
3.3. Efecto de la variación de la temperatura sobre la actividad enzimática de alfa-amilasa en hidrolisis
del almidón. ................................................................................................................................................... 5
4. RESULTADOS .............................................................................................................................................. 6
4.1. Efecto de la temperatura en la hidrolisis del almidón....................................................................... 6
4.2. Efecto del pH en la hidrolisis del almidón ......................................................................................... 7
5. DISCUSION DE RESULTADOS ..................................................................................................................... 8
6. CONCLUSIONES.......................................................................................................................................... 9
7. RECOMENDACIONES ............................................................................................................................... 10
8. BIBLIOGRAFIA .......................................................................................................................................... 10
9. CUESTIONARIO ........................................................................................................................................ 11
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1. INTRODUCCIÓN
Se dice que las enzimas son proteínas “especialistas” y controlan la mayoría de las reacciones
químicas de nuestro cuerpo. Hay enzimas en todo lo que está vivo. También se dice que
son catalizadores, porque cada reacción química necesita una enzima para que se realice, es
las que intervienen enzimas. El estudio de las propiedades como la velocidad y de la dinámica
de la enzima, nos permite conocer a fondo el mecanismo de acción de dicha enzima, el rol que
por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario
saturadas de sustrato es decir que todos los sustratos en el medio presentan su enzima. En estas
de los reactivos.
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza la
específica es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por
Cada enzima actúa sobre una sustancia concreta, como una llave y una cerradura, esta es la
razón por la cual en esta práctica N°5 analizaremos dos de los múltiples factores que afectan
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2. RESUMEN
enzimas permitiéndonos conocer el mecanismo de acción de cada una de las enzimas. En esta
prueba, primeramente, estudiamos el efecto del pH del medio sobre la enzima Alfa- amilasa
sobre una solución de almidón que, en este caso, usamos la solución de Buffer Fosfato- Citrato
con diferentes valores de pH: 5,5; 6;6,5;7 y 8 y los rotulamos. Añadimos a cada uno 2mL de
reactivo Benedict y se colocó a baño maría a 100 por 5 minutos donde a temperatura ambiente
temperatura sobre la enzima Alfa- amilasa en la hidrolisis del almidón donde se colocó 25mL
se solución de enzima en cada uno de los 3 tubo de ensayo, rotulados previamente, y se dispuso
colocándolo a baño maría a 100 por 5 minutos donde a mayor pH presento una mayor
presencia de azucares reductores. Es necesario utilizar una mayor muestra de la solución para
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3. DETALLES EXPERIMENTALES
Tabla N°1
Tubo N° pH Sol. Buffer Vol. (gts) Sol. Vol. (mL) Sol. Vol. (gts)
Fosfato-Citrato Buffer Fosfato- Enzima Sol sustrato
Citrato Alfa-amilasa almidón 1%
1 5 20 2.5 2
2 6 20 2.5 2
3 6.5 20 2.5 2
4 7 20 2.5 2
5 8 20 2.5 2
Incubar a 37°C por 25 minutos
Se añadió a cada uno de ellos 2 ml del reactivó de Benedict, luego se colocó en baño maría
de agua a 100°C por 5 minutos.
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3.3. Efecto de la variación de la temperatura sobre la actividad enzimática de
alfa-amilasa en hidrolisis del almidón.
En tres tubos que previamente fueron rotulados, se procedió según indica en el siguiente
cuadro:
Tabla N°2
Tubo N° Sol. Enzima (mL) Acción de temperatura
1 2.5 Hervir en baño de agua por
5 minutos
2 2.5 No hervir (Temperatura
ambiente)
3 2.5 No hervir (Temperatura
ambiente)
Después se prosiguió de las siguientes adiciones y efectos a los tubos respectivos, según
indica la siguiente tabla:
Tabla N°3
Adición del sustrato
Temperatura de Tiempo de
Tubo N° (ml) de sol.
incubación incubación
almidón
1 2 37°C 20 minutos
2 2 37°C 20 minutos
Baño de agua
3 2 5 minutos
helada
Luego, se añadió a cada tubo 2ml de reactivo de Benedict, después se colocó en baño maría
de agua a 100°C por 10 minutos.
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4. RESULTADOS
Tabla N°4
Tubo Enzima Sustrato Intensidad Temperatura
(Almidón)
1 Alfa- Almidón Nivel 1(bajo) Baño María
amilasa
2 Alfa- Almidón Nivel 3(alto) Temperatura
amilasa ambiente
3 Alfa- Nivel Baño de agua fría
Almidón 2(intermedio)
amilasa
T vs Nivel de intensidad
3.5
2.5
INTENSIDAD
1.5
0.5
0
Temperatura
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4.2. Efecto del pH en la hidrolisis del almidón
Tabla N°5
Tubo pH Intensidad (Azucares
reductores)
1 5 Nivel 1(bajo)
2 6 Nivel 2(intermedia)
4 7 Nivel 3(alto)
5 8 Nivel 3(alto)
pH vs Nivel de intensidad
3.5
2.5
INTENSIDAD
1.5
0.5
0
PH
5 6 6.5 7 8
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5. DISCUSION DE RESULTADOS
En este experimento se toma a la hidrolisis del almidón como reacción enzimática a observar
valores que superan la actividad disminuye debido a que la enzima, sufre procesos de
de la coloración negruzca que poseían esto debido al reactivo Lugol agregado en la parte final.
El tubo que presentaba mayor intensidad de coloración fue el expuesto a altas temperaturas,
su coloración indicaba la presencia de una gran cantidad de almidón con pocos azucares
reductores, esto debido a la acción de la temperatura la cual ralentiza la hidrolisis del almidón.
Por otro lado, el tubo de menor intensidad indicaba mayor presencia de azucares reductores
La mayoría de los enzimas presentan un pH óptimo para el cual su actividad es máxima; por
encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente. Este efecto se debe a que,
al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras proteínas, se desnaturalizan y
agregado en la parte final, lo cual indica poca presencia de azucares reductores eso quiere
decir que la reacción fue ralentizada por acción del pH, situación que no ocurre cuando el pH
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6. CONCLUSIONES
4) Tabla N°6
Resultados
Tubo N° pH
Variación de temperatura:
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Tubo 1: sometido a baño maría a durante 5 minutos se observó una en alta intensidad de
Lugol, esto se debe a que hay poca producción de azucares reductores, se concluye que la
temperatura si afecta en las propiedades cinéticas de la enzima alfa-amilasa de Bacillus subtilis
al hidrolizar. Se le considera nivel 1
Tubo 2: sometido a temperatura ambiente se observó poca intensidad del Lugol, esto se debe
a la alta presencia de cantidades de azucares reductores, se concluye que a temperatura
ambiente es el óptimo para que la enzima pueda hidrolizar al almidón. Se le considera nivel
3.
Tubo 3: sometido a baño de agua helada durante 5 minutos, si hubo una reacción intermedia,
podemos concluir que a baño de agua helada no desnaturaliza las enzimas, por lo cual se
considera un medio apto para la hidrolisis del almidón. Se le considera nivel 2.
7. RECOMENDACIONES
Agitar constante mente la solución de sustrato de almidón, para que se homogenice y no nos
cause errores en la práctica.
Usar 2ml de la solución de almidón ya que 1 ml no se puede apreciar las reacciones.
Rotular cada tubo para evitar confusiones y errores en la práctica.
Evaluar los efectos del pH en las propiedades cinéticas en la actividad de la enzima alfa-amilasa.
Tener cuidado en el baño maría, para evitar quemaduras.
Tener cuidado de contaminar los reactivos, para lo cual se recomienda usar una pipeta para
cada reactivo.
8. BIBLIOGRAFIA
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9. CUESTIONARIO
a.- Efectuar un breve estudio sobre las características más importantes de la enzima
Alfa-amilasa.
Las α-amilasas que se encuentran en la naturaleza pueden tener rangos óptimos de pH muy
diferentes para su funcionamiento; por ejemplo, el óptimo para las α-amilasas animales y
vegetales está entre 5.5 y 8.0 unidades de pH, pero algunas bacterias y hongos tienen enzimas
más alcalinas y más otras acídicas.
Una característica compartida entre las enzimas del grupo de la α-amilasa es que estas, al igual
que otras amilasas, pueden ser inhibidas por iones metálicos pesados como el mercurio, el
cobre, la plata y el plomo.
b.-Describir el tipo de enlace presente en el almidón que ha sido hidrolizado por la Alfa-
amilasa bacteriana (procedente de Bacillus subtilis).
c.-Señale los tipos de productos agroindustriales que pueden ser tratados por hidrolisis
con enzimas amilolíticos, a nivel industrial y que productos importantes se obtienen en
cada caso.
Los hidrolizados de pescado han venido siendo una fuente con importante potencial para el
mejoramiento de los productos y los procesos a nivel tecnológico. El hidrolizado de proteínas
de hueva de atún ha sido utilizado para mejorar las propiedades emulsionantes de las
salchichas de bagre, su adición por ejemplo, mejora las propiedades físico-mecánicas del
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producto, aumentando su firmeza, su cohesión y su resistencia, además genera glóbulos de
grasa más finos, haciendo la emulsión más estable y sin ningún efecto sobre las propiedades
organolépticas, ya que podría prevenir el desarrollo de rancidez debido a que también posee
propiedades antioxidantes.
CARACTERISTICAS MORFOLÓGICAS:
Las células de las Bacillus subtilis tienen forma de barra con bordes redondeados, las cuales
miden aproximadamente 1 micra de ancho por 2-3 micras de largo. Estas se encuentran
individualmente formando cadenas.
Con algunos cultivos forman colonias que tienen aspecto rugoso, liso o mucoide
Posee un cromosoma circular con 4100 genes aproximadamente los cuales codifican a ciertas
proteínas.
IMPORTANCIA EN LA INDUSTRIA
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En la industria de artículos de limpieza esta bacteria es utilizada en la elaboración de
detergente, ya que esta produce una enzima llamada proteasa (degrada sustancias proteicas),
la cual es usada como aditivo en la elaboración causa por la que elimina manchas.
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