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Sólido
transparente,
REM incidente líquido REM transmitida
o gas
Clase 2 Absorciometría Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepción
NIVELES DE ENERGÍA DE UNA MOLÉCULA ORGÁNICA FLUORESCENTE
E Electrónica:
Energía electrónica
de la molécula o
átomo
E vibracional:
Energía resultante de
vibraciones de varios
átomos en una
molécula
E rotacional:
Energía resultante de
la rotación de la
molécula en torno a
su centro de
gravedad
Niveles de
Energía rotacional
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TRANSICIONES DE ENETRGIA EN ESPECTROSCOPIA
E ELECTRÓNICA > E VIBRACIONAL > E ROTACIONAL
D E = E Foton
TRANSICIONES EN
REGIÓN UV-VIS Transiciones electrónicas de la molécula:
(l =200-780 nm)
ABSOR- EMISION
CION
Lo que se obtienes es un
ESPECTROGRAMA
%T
A
lo۷
l min
l max lo۷ Dra. C. Mardones / Dr. D. von Baer, Depto. A. Instrumental. Fac. Farmacia, U.de Concepción
3s 3p
ÁTOMOS
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3s 3p
ÁTOMOS
ESPECTROS ATÓMICOS
SON MÁS SENCILLOS
QUE ESPECTROS
MOLECULARES
MOLÉCULAS
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ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR
La absorción de REM por un medio depende de:
1. l de la radiación (en otras palabras, de su energía)
2. Naturaleza de la especie molecular que absorbe
3. Concentración de la especie molecular que absorbe
4. Camino óptico que debe recorrer la REM a través del medio que absorbe
=2
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Potencia luminosa
transmitida
por la muestra
Pi P
MUESTRA
P
TRANSMISIÓN: T =
Po
Potencia luminosa
transmitida
Pi Po por el blanco
BLANCO P
% TRANSMISIÓN = * 100
Po
Límites de T y %T:
Si P = P0 T=1 %T = 100
Si P = 0 T=0 %T = 0
Unidades de e y a
A = a (e) x b x C
2
a = 1 / cm x (g/1000cm3)
a = cm2 / mg
mg
M= moles/L
e=A/bc = 1 / cm x (mol/L)
1 L= 1000 mL= 1000 cm3
2
e = 1 / cm x (moles/1000cm3)
e = cm2 / mmol
mmol
a y e dependen de:
Por lo tanto: a x PM = e • Naturaleza de la sustancia
• Longitud de onda
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La absorción de REM por un medio
depende de:
1. l de la radiación
3. Concentración de la especie
A (l) = a (e) (l) x b x c
molecular que absorbe
a = cm2 / mg
Unidades:
e = cm2 / mmol
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CURVAS DE CALIBRACIÓN Ecuación de una recta
y = b ± mx
P= P0 x 10 -kc A= a (e) x b x c A = 0 + (ab) x C
A = 0 + (eb) x C
%T - log T A
Desviaciones LLB:
• Origen Químico (+ o -)
• Origen Instrumental (-)
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Ejemplo Cr2O7= + H2O 2 CrO4= + 2H+
pH
Curva de calibración
(sin ajuste de pH)
l = 450
A
Espectrograma
C
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Desviaciones de la LLB por efecto de radicación policromática
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Desviaciones de la Ley de LLB por efecto de radicación policromática
(suponiendo que a l 1 tenemos e1 y a l2 tenemos e2)
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Desviaciones de origen instrumental:
•Pueden producirse por falta de monocromaticidad
•Pueden producirse por presencia de luz “parásita” o “espúrea” (luz que
proviene de otras fuente y no del haz de luz incidente).
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EFECTO DEL % DE LUZ ESPÚREA SOBRE LA LINEALIDAD DE LLB
ABSROBANCIA
(Ps/P0) x100
Concentración M x 103
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EFECTO DE LA LUZ ESPÚREA EN MEDIDAS DE ABSORBANCIA
A % A
Verdadera Luz espúrea Observada
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a = cm2/mg
e= cm2/mmol
RESUMEN: LLB: A = a x b x c dependen de l y de la
naturaleza de la sustancia
Valores de A : entre 0 y infinito
A= - log T ó 2 - log %T Valores de T : entre 0 y 1
Valores de % T: entre 0 y 100
Limitaciones de LLB:
Desviaciones de origen Químico: Desviaciones de origen Instrumental:
Equilibrios químicos • Falta de monocromaticidad del haz de medida
Desviaciones + ó – Desviaciones –
• Presencia de luz espúrea
Desviaciones -
A
Si obtenemos una recta:
Desv. Química
Si la recta se curva: Desv. Instrumental
Desv. Química
C
Si el resultado es una recta, significa que e=cte (b*c cte), y por lo tanto no es el
sistema químico que falla.
Si hay desviación significa que e ≠ cte entonces si hay un equilibrio químico de por
medio que hace que e varíe.
2C = C
b 2b
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APLICACIONES CUANTITATIVAS
1.- Método absoluto: cMP = A MP/ a (e) x b
•Aplicación directa de la LLB Donde a (e) se ha determinado
•Método exige que se cumpla LLB previamente con un patrón de
concentración conocida
2.- Método del factor:
• Se prepara una solución patrón de la A MP = a x b x cMP
sustancia (concentración conocida) y
se hace regla directa con la muestra
A ST = a x b x cST
problema (MP)
• Método exige que se cumpla LLB C MP = A MP x c ST /A ST
3.- Método de la curva de calibración: factor
• Se preparan varias soluciones de A
concentraciones conocidas del patrón
y se grafica vs A de cada solución.
m=axb
• La muestra problema se interpola A MP
m=exb
dentro del rango lineal obtenido
a o e se obtienen como un valor C MP C
promedio por lo tanto es la
mejor manera de determinarlo
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