PRÁCTICA # 04

MEDIOS DE CULTIVO: COMPOSICIÓN, CLASIFICACIÓN

OBJETIVOS:
 Conocer la clasificación y composición de los diferentes medios de cultivo.
 Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la práctica
microbiológica.

INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las
condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.

El conocimiento de las necesidades nutritivas y físicas de los microorganismos es fundamental para seleccionar
un medio de cultivo adecuado. Las características de los microorganismos a tener en cuenta al momento de
preparar un medio de cultivo adecuado para su desarrollo en el laboratorio son:
 Tipo trófico: se refiere a los requerimientos de carbono y energía, según los cuales se los clasifica en
autótrofos, heterótrofos, quimiotrofos (litotrofos u organotrofos) y fotótrofos.
 Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos y microaerófilos.
 Temperatura óptima de crecimiento: rango de temperatura al cual el microorganismo presenta su
mayor crecimiento, se los clasifica en sicrófilos, mesófilos y termófilos.
 Rango de pH: en general el rango óptimo de pH de las bacterias oscila entre 6,6 y 7,2.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

DE ACUERDO A LA CONSISTENCIA O ESTADO FÍSICO:

 Medios líquidos
 Medios sólidos
 Medio semisólidos

SEGÚN LAS SUSTANCIAS PRIMARIAS O SEGÚN SU ORIGEN

 Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por ejemplo, agua, suero, papa,
huevos, leche, sangre, tierra, etc.
 Medios sintéticos: Son medios que fueron creados por el hombre y por lo tanto se conoce
completamente su formulación, por ejemplo, todos los medios deshidratados que distribuyen las casas
comerciales.
  Medios semisintéticos: Son medios de cultivo que llevan una mezcla de medio naturales y medios
artificiales, como ejemplo de estos medios podemos encontrar el agar Baird Parker o el agar sangre.
 Medio vivos: son aquellos medios que contienen células u organismos vivos, por ejemplo, pueden ser
las células de riñón de mono, huevos embrionados o células de intestino de cobayos y conejos.

SEGÚN SU FINALIDAD
 Medios Simples o Comunes
 Medios Enriquecidos o Mejorados
 Medios Selectivos
 Medios Selectivos para Enriquecimiento
 Medios Selectivos para Aislamiento
 Medios Diferenciales
 Medios Especiales o de Ensayos
 Medio Auxanográficos
 Medios para Transporte o Carriers

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los elementos citados a continuación, son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de
cultivo, aunque pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación.
 Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento.
 Agar. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
 Extractos. Para su preparación, ciertos órganos o tejidos de animales o vegetales (por ejemplo, carne,
hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor, y concentrados hasta la forma final de pasta o
polvo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.
 Peptonas. Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales. Proveen proteosas, peptonas, polipéptidos y aminoácidos.
 Fluidos Corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo son
frecuentemente añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patógenos.
 Sistemas amortiguadores. Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo para mantener
el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano.
 Indicadores de pH. Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los medios de cultivo con objeto de
detectar variaciones del pH.
 Agentes reductores. Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que se añaden a los medios
de cultivo para crear condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o
anaerobios.
 Agentes selectivos. La adición de determindas sustancias al medio de cultivo puede convertirlo en
 selectivo (ver más adelante, clasificación de los medios de cultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales
biliares, azida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada, actúan como
agentes selectivos frente a determinados microorganismos.

CUESTIONARIO
1. Defina qué es un medio de cultivo y cuál es su utilidad.
Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten
el crecimiento de los microorganismos. Son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un
control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos. (1)

Utilidad de los medios de cultivo

o Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción purulenta, orina, órgano,
fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)

o Estudio morfológico de las colonias.

o Conservación de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).

o Clasificación y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas en medios

diferenciales.

o Obtención de toxinas o investigación de sus características.

o Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos (vacunas, antígenos,

bacterinas, toxoides, etc.). (2)

2. ¿Qué sustancias se emplean para modificar la consistencia de los medios de cultivo? Ejemplos
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos :
Los medios semisólidos y sólidos se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente
gelificante. Los más utilizados son la gelatina, albumina y el agar:
Los medios semisólidos se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente
solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias (3)
3. Qué utilidad tiene cada uno de los siguientes tipos de medios de cultivo: Líquido, Semisólido y Sólido
Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de células estresadas.
En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios sólidos, por ejemplo en la síntesis de
exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro Corazón,
Caldo Saboureaud, etc.
Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de colonias sobre la superficie
del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de las colonias, lo que no permiten los medios
 líquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar.
Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor porcentaje de
agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM. (4)

4. Explique en qué consisten los medios de cultivo clasificados según su Finalidad y cite dos ejemplos
de cada uno y que microorganismos pueden desarrollar.
 Medios Simples o Comunes : son aquellos medios apropiados para el cultivo y mantención de la mayoría
de las bacterias. Sirven de base para la preparación de los medios especiales. - Ejemplo: Caldo común,
Agua peptonada, Agar nutritivo, etc.
 Medios Enriquecidos o Mejorados : se obtienen añadiendo a los medios corrientes sustancias de mayor
valor nutritivo, que tienen el efecto de proporcionar condiciones favorables para el cultivo de bacterias
exigentes (Ej. Estreptococos, Corynebacterium).
 Medios Selectivos : generalmente el microorganismo patógeno causante del cuadro infeccioso que se
desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que convive con otras especies sin interés
diagnóstico. Así por ejemplo es frecuente que las fecas, orina, exudados, alimentos, agua, etc. estén
altamente contaminadas con bacterias saprófitas que por su desarrollo exuberante en los medios de
cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran la presencia del agente patógeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies bacterianas y a la vez
inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es aislamiento y diagnóstico de las bacterias con
facilidad y rapidez. Estas características se obtienen por la adición de sustancias tales como colorantes
de anilinas, sales biliares, antibióticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.
 Medios Diferenciales : son medios comunes o mejorados, con adicción de ciertas sustancias que ponen
de manifiesto determinadas propiedades bioquímicas, inherentes a algunas especies bacterianas, como
por ejemplo: producción de gas, H2S, de ácidos, de sustancias alcalinas, acción proteolítica, acción
lipolítica, etc.Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rápidamente una especie microbiana de
otra semejante; por este motivo se denominan medios indicadores o diferenciales. Ejemplo: Agar Baird
Parker, Agar Rambach, etc.
a) El agar Mac Conckey se utiliza para el aislamiento e identificación de Escherichiacoli. Es un medio
mejorado ya que tiene Cristal Violeta y Sales Biliares que inhiben el desarrollo bacterias Gram positivas.
b) El Caldo Tripticasa Soya es un medio corriente, ya que permite el desarrollo de una amplia variedad
de bacterias. Puede hacerse más selectivo para el desarrollo de Staphylococcusaureus, si se le agrega un
10% de NaCl, lo que no permite el crecimiento de otras bacterias saprófitas.
 Medios Especiales o de Ensayos : Son aquellos medios de cultivo que por su riqueza nutritiva, sirven
para el cultivo de bacterias muy exigentes. Contienen en su formulación sustancias inhibidoras para
ciertas bacterias, que permiten el aislamiento y diagnóstico precoz de aquellas bacterias que nos interesan
por ser los agentes etiológicos de las enfermedades infecciosas. También pertenecen a este grupo aquellos
 medios que por adicción de sustancias químicas determinadas, facilitan el diagnóstico por características
bioquímicas de algunas especies microbianas.
 Medio Auxanográficos : Son determinados medios a los que les falta ciertos factores nutritivos.El medio,
generalmente sólido se inocula con un microorganismo , y luego se distribuye con diferente compuestos
nutritivos que puedan requerir los microorganismo con el fin determinar que nutrientes favorecen o no al
desarrollo y crecimiento del microorganismo.
 Medios para Transporte o Carriers :Pueden ser medios sólido o semi sólidos que pueden contener o no
sustancias selectivas.Se preparan para detener la viabilidad de los microorganismo durante varias horas
o días , es to con el fin de aislar las especies menos resistentes con el paso del tiempo.
(3) (5)
5. ¿Cuál es la diferencia entre el agar sangre y el agar chocolate?
El Agar chocolate es un medio enriquecido muy parecido al agar sangre; la diferencia es que los glóbulos rojos
están lisados y liberan al medio nutrientes como la hemoglobina, factor X (hemina) y factor V (NAD). La lisis
se produce cuando se añade el agar base fundido a la sangre. La hemólisis le confiere un color marrón
característico parecido al del chocolate, de ahí su nombre.

(5)
6. ¿Qué precauciones deben tomarse en cuenta al preparar un medio de cultivo?

-Siempre preparar los medios con agua destilada Es necesario ajustar el pH

-Todos los utensilios deben estar perfectamente limpios
-Los medios se preparan en matraces cónicos ó erlenmeyer, se debe utilizar de capacidad al doble de la cantidad
de medio que se vaya a preparar.
-. A medida que se calienta se debe agitar para homogenizar la solución y para evitar que el medio se queme en
el fondo del recipiente.
- Todos los medios deben esterilizarse, se autoclava de 15 a 20 minutos a 121ºC y 15 libras de presión.
-Algunos medios de cultivo no pueden ser autoclavados por lo tanto se debe esterilizar cada uno de los
materiales por separado y al final se unen.
-Los medios de cultivo deben conservarse en lugar fresco (15 – 30ºC), seco, contra la luz y en envases bien
cerrados, que cuando se utiliza la cantidad que se necesita deben cerrarse muy bien y almacenarlos
correctamente, se debe tener en cuenta la fecha de vencimiento, tras periodos de almacenamiento mas
prolongados se presenta una alteración del pH que puede reajustarse con acido clorhídrico estéril o hidróxido
de sodio.
- Las cajas de petri deben estar previamente estériles por autoclave y frías. Las burbujas que se forman en la
superficie del medio se eliminan abanicando brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero
Bunsen.
-Se debe hacer prueba de calidad de los medios de cultivo elaborados dejando 24 horas en horno a 37ºC, para
mirar contaminación. Se refrigeran para ser utilizados posteriormente. Evitar que los medios de cultivos se
deshidraten una vez refrigerados, por lo tanto se deben usar en el menor tiempo posible o si se conservan durante
bastante tiempo se debe colocar una cinta adhesiva en le borde lateral de la caja para impedir fugas o guardarlas
en varias bolsas de plástico impermeables al aire, los tubos deben cerrarse con capuchones impermeables al
aire. La perdida de agua puede provocar precipitados o hacer que cristalicen ciertas sustancias del medio de
cultivo así como originar grietas en las placas que contengan medio de cultivo. (6)

7. Indique que son los medios cromogénicos y cómo funcionan.

Los medios de cultivo cromogénicos proporcionan un método rápido y preciso para aislar y enumerar
microorganismos de interés basado en la detección de actividades enzimáticas específicas.

Los medios cromogénicos no solo permiten una detección más rápida de microorganismos específicos en
comparación con los medios de cultivo clásicos, sino que también mejoran la sensibilidad y pueden reducir la
necesidad de sub-cultivos o pruebas de confirmación. (7)

8. Investigue ¿qué son y cuáles son? las ventajas y desventajas de las placas Petrifilm
Son medios de cultivo en formato listo para sembrar la muestra.
Constituidas de adhesivos,películas y nutrientes.
Semejantes a las metodologías tradicionales para llevar a cabo pruebas microbiológicas Rápidas. (8)

Ventajas
-Rápido
-Menos espacio
-Fáciles
-No hay que prepara medio
-Distinción entre CFU vs Particulas de alimentos
Desventajas
-Morfologia de la colonia
-Costoso
-Dificil de leer
(9)
CONCLUSIONES
• Se logró conocer la clasificación y composición de los diferentes medios de cultivo.
• Se pudo adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo en la
práctica microbiológica.

BIBLIOGRAFÍA
1 EcuRed. [Online]. Disponible en:
. https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa).
2 Wikibooks. [Online]; 2019. Disponible en:
. https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/Medios_de_cultivo.
3 Slideplayer. [Online]; 2018. Disponible en: https://slideplayer.es/slide/13908921/.
.
4 Wikibooks. [Online]. Disponible en:
. https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/Medios_de_cultivo.
5 Cuevas LB. Microbiologia Clinica. [Online]. Disponible en:
. https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf.
6 Saavedra SL. Programa de Bacteriologia y Laboratorio Clinico. [Online]. Disponible en:
. https://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:BhTmG8pFQn0J:https://issuu.com/sa
ndralucia.71/docs/manual_preparacion_de_medios_de_cul+&cd=14&hl=es&ct=clnk&gl=pe.
7 Neogen. [Online]. Disponible en: https://foodsafety.neogen.com/sp/chromogenic-media.
.
8 Placas Petrifilm Folleto. [Online]. Disponible en: https://es.scribd.com/doc/39748641/Placas-
. Petrifilm-Folleto.
9 Slideplayer. [Online]. Disponible en: https://slideplayer.es/slide/3886969/.
.
1 SlideShare. [Online]; 2015. Disponible en: https://es.slideshare.net/waldemarc1/tuberculosis-
0 microbiologia.
.
1 Lifeder.com. [Online]. Disponible en: https://www.lifeder.com/medio-lowenstein-jensen/.
1
.
1 Padlet. [Online]. Disponible en: https://padlet.com/kerlis1993/yqlqa6zmv56o.
2
.
 PRACTICA # 05
SELECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVOS
 Conocer la preparación, esterilización y distribución de los medios de cultivo.
 Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.
 Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de cultivo utilizando los
protocolos establecidos en el laboratorio de microbiológica.
 Adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus componentes individuales.
 Reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como de los demás
elementos utilizados en el laboratorio de microbiología.

INTRODUCCION
Un medio de cultivo es aquella solución que contiene los nutrientes necesarios para recuperar, multiplicar, aislar
e identificar los microorganismos bajo condiciones favorables de temperatura y pH.

Para el aislamiento de bacterias de un material patológico, es necesario su cultivo en medios especiales con una
determinada concentración de iones de hidrógeno, sales, compuestos nitrogenados, hidratos de carbono,
humedad y temperatura. Según su utilización pueden ser: simples, enriquecidos, selectivos y diferenciales.
1. Disponibilidad de nutrientes adecuados 5. Luz ambiental
2. Consistencia adecuada del medio 6. pH.
3. Presencia o ausencia de oxígeno 7. Temperatura
4. Condiciones adecuadas de humedad 8. Esterilidad del medio

Independientemente de los medios de cultivo y métodos utilizados, el éxito del trabajo en el laboratorio de
microbiología depende de la adecuada elección y buen uso de los métodos de esterilización y técnicas asépticas.

PREPARACIÓN:
Los medios de cultivo se pueden preparar a partir de los componentes primarios, o pueden adquirirse
deshidratados o listos para usar.

A continuación, se enumeran algunas precauciones que deben tenerse en cuenta durante la elaboración de los
medios:
 La balanza a utilizar en la pesada del medio o de sus ingredientes debe estar calibrada.
 Los recipientes y materiales a utilizar en la preparación y envasado de los medios deben estar limpios, ya
que residuos de detergentes puede causar efecto inhibitorio en la capacidad de crecimiento de los
microorganismos.
 Los recipientes destinados a la preparación de medios de cultivo deben ser lo suficientemente grandes para
que el medio de cultivo que se prepara pueda ser agitado con facilidad, y los destinados al envasado para
que durante la esterilización por autoclave no haya derrames.
 El agua para disolución de los medios debe ser Agua Purificada o Destilada.
 Cuando el envase de medio de cultivo se abre por primera vez deberá anotarse la fecha de ingreso, la fecha
de apertura (día, mes y año).
 Para la selección del envase a abrir usar el concepto FIFO (First In First Out = primero en entrar primero
en salir) y el concepto FEFO (First Expiry First Out = primero en vencer primero en salir).
 Verificar que el medio de cultivo no se encuentra vencido. En caso que esto suceda, descartarlo y utilizar
otro envase.
 Agitar el envase para favorecer la mezcla de sus componentes.
 Pesar exactamente la cantidad deseada de acuerdo al volumen total a preparar, siguiendo las indicaciones
descriptas en la etiqueta del envase.
 Cerrar herméticamente el envase del medio de cultivo pesado (para evitar absorción de humedad y/u
oxidación) y guardarlo en su correspondiente lugar de almacenamiento.
 Rehidratar con el volumen correcto de agua. Para ello, primero es conveniente agregar aproximadamente
la mitad de la cantidad de agua necesaria y agitar suficientemente para conseguir una suspensión
homogénea; luego incorporar la cantidad de agua restante.

Medición del pH:

Si bien cuando se utiliza agua neutra para su preparación los medios de cultivo muestran un valor correcto de
pH, se recomienda comprobar el mismo y proceder su corrección en caso necesario. Para la toma del pH se
recomienda usar un peachímetro. Para asegurar un pH final correcto, en caso necesario ajustarlo añadiendo
cantidad suficiente de NaOH 0,1 N o HCl 0,1 N, o lo que indique el fabricante del medio de cultivo deshidratado.

Etiquetado:
Cada recipiente de medio de cultivo elaborado en el laboratorio debe etiquetarse como mínimo con los
siguientes datos:
- Nombre o abreviatura del medio de cultivo.
- Identificación del medio elaborado
- Fecha de vencimiento.
Esterilización:
Todos los medios de cultivo que lo requieren deben ser esterilizados el mismo día de la preparación y
preferentemente dentro de las dos horas.
Deben seguirse las recomendaciones del fabricante, típicamente se usa 121 °C durante 15 minutos, utilizando
una autoclave calificado y ciclos validados. Sin embargo, algunos medios de cultivo pueden requerir
esterilización por vapor fluente o a temperaturas menores como 115ºC para evitar el deterioro de componentes
lábiles al calor.

En los ciclos de esterilización en los cuales se tarda mucho en alcanzar la temperatura deseada puede ocasionar
sobrecalentamiento con el consiguiente deterioro del medio de cultivo: reducción en la capacidad de crecimiento
o selectividad de los microorganismos, cambio de color, pérdida de claridad, alteración de agar, cambio de pH,
etc.

Almacenamiento:
El almacenamiento de los medios de cultivo preparados debe realizarse siguiendo las indicaciones del
fabricante. Por ejemplo, algunos se almacenan a temperatura ambiente, otros refrigerados (principalmente
aquellos que contienen sangre, yema de huevo, telurito, etc.), o al abrigo de la luz, o en ambiente con humedad
controlada, etc.
Respecto a la fecha de vencimiento de los medios de cultivo esterilizados se deben seguir las recomendaciones
del fabricante. Si el fabricante no establece el período de vigencia, éste debe ser establecido en el laboratorio.

Control de esterilidad:
Se recomienda preincubar una muestra de los medios de cultivo o una porción de sus envases, a 30-35 °C
durante no menos de 3 días para asegurar la esterilidad del medio de cultivo elaborado.

CONTROL DE CADUCIDAD
En el momento de preparar los medios es preciso anotar de forma visible sobre cada tubo, placa, frasco o matraz,
el nombre del medio de cultivo, fecha de preparación y su fecha de caducidad. De esta forma será fácil en todo
momento llevar un control de los medios en cuanto a su fecha de caducidad.

POSIBLES FUENTES DE ERROR EN LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.

 Medio inadecuado.
 Pesaje erróneo.
 Material de vidrio mal lavado.
 Agua de mala calidad.
 Sobrecalentamiento.
 Esterilización inadecuada.
 No ajustar pH.
 Distribución incorrecta.
 Inadecuado almacenamiento.

PREGUNTAS
1. ¿Por qué se deben esterilizar los medios de cultivo?
Porque los microorganismos se encuentran en todos los ambientes y es necesario trabajar con cultivos
puros.
2. ¿Si no se realizan los cálculos adecuadamente para la preparación de los medios qué puede ocurrir
en el momento de sembrar y en su incubación?
Para preparar un medio de cultivo se requiere realizar cálculos que permiten conocer las proporción que se
necesitan para la cantidad de medio de cultivo con que se desea trabajar.Al mezclar las proporciones
correctas de todos los ingredientes , se busca formar una solución de contextura ideal , dependiendo si es
un agar que debe ser sólido, o si es un caldo que debe ser un líquido, lo que puedo ocurrir es que el
microorganismo no tengo un medio suficiente para alimentarse y al final no pueda desarrollarse en el medio
correctamente para finalmente pueda morir el microorganismo.
3. ¿Cuál es el nombre del medio de cultivo para tuberculosis y cómo se prepara?
Crecen en medios especiales como en el de Lowestein-Jensen. (10)
MEDIO DE CULTIVO DE LOWESTEIN-JENSEN
Preparación
Pese 37,3 g del medio deshidratado en 600 ml de agua destilada a la que previamente se le ha
adicionado 12 ml de glicerol. Se calienta la mezcla, agitando frecuentemente hasta su disolución total.
Autoclavar el medio a 121 ° C por 15 minutos.

Por otra parte, se debe preparar una suspensión homogénea de 1000 ml de huevos frescos en
condiciones asépticas. Adicionar la suspensión de huevo a los 600 ml de medio preparado a una
temperatura de 50 – 60 °C, evitando las burbujas de aire.

Las soluciones de antibióticos también se le agregan después de la esterilización en el autoclave.

Vierta el medio en tubos de ensayo estériles con tapón de rosca. Calentar los tubos a 85°C por 45
minutos en posición inclinada.

El color del medio preparado es verde aguamarina y puede presentar puntos blanquecinos por la
presencia de lípidos del huevo.

El pH del medio debe quedar en 7,2 ± 0,2

Guardar los tubos en nevera y protegidos de la luz directa hasta su uso. Atemperar antes de sembrar.

Existe una modificación del medio denominado «modificación de Gruft del Löwenstein Jensen». Este
contiene los mismos compuestos que el medio clásico pero se le agrega RNA-5mg/100 mL, y como
inhibidores contiene verde de malaquita 0,025 g/100 mL, penicilina 50 U/mL y ácido nalidíxico 35
 ug/mL. (11)

4. Indique 20 medios de cultivo, señalando la siguiente información:

 Nombre del medio de cultivo : Agar sangre

 Composición química: Infusión de Corazón,Peptona de Carne, Sodio Cloruro y .Agar Agar
 Fundamento del medio: Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de
prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes. Si se añade sangre se
pueden determinar las distintas formas de hemólisis que pudieran tener lugar. Si se calienta se
obtiene el Agar Chocolate, también muy empleado. Por la adición de distintos antibióticos se
obtienen medios con caracteres selectivos.
 Preparación: Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir
durante 1 minuto. Esterilizar a 121º C durante 30 minutos (para cantidades de más de 1 litro).
Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y esterilizar a 121º C durante 15 minutos. Para
preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de Sangre desfibrinada antes de distribuir en
placas. Para una mejor conservación de la placa de Agar Sangre y para obtener halos
hemolíticos más claros ajustar el pH a 6,8 ±0,2. Si se utiliza como medio basal se obtendrán
mejores crecimientos a pH 7,3 ±0,2.
 Utilidad: El medio de cultivo agar sangre es uno de los más comúnmente utilizados en el
laboratorio de microbiología.Entre los microorganismos capaces de crecer en el medio agar
sangre se tienen: bacterias aerobias estrictas, facultativas, microaerófilas, anaerobias, Gram
positivas o Gram negativas, bacterias de crecimiento rápido o crecimiento lento.También
crecen algunas bacterias exigentes o fastidiosas desde el punto de vista nutricional, así como
hongos y levaduras. Así mismo, es útil para realizar subcultivos o reactivar cepas que
metabólicamente estén muy débiles. Diferenciación de Estreptococcus según su hemólisis y de
Estafilococcus según coloración (no totalmente característico).
 Interpretación: Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo de
colonias y sus características, especialmente el patrón de hemólisis La evaluación de los
patrones hemolíticos es válida solo para las condiciones de tiempo y temperatura de incubación
señaladas. Períodos de incubación prolongados o a mayores temperaturas alteran la respuesta
del medio de cultivo para este aspecto.

 Nombre del medio de cultivo :Agar chocolate

 Composición química : Proteasa Peptona n°03 , Hidrolizado de hígado, Extracto de Levadura,
Cloruro sódico ,Sangre de Caballo calentada 7% ,Cloruro sódico ,Agar y Factores de
crecimiento .
 Fundamento del medio: Este medio está compuesto por una base de agar rico en nutrientes y
sangre calentada. La hemólisis de los glóbulos rojos proporcionan al medio factor X (hemina)
y factor V (NAD), necesarios para el crecimiento de algunos microorganismos, como el género
Haemophilus. También es muy útil para el aislamiento de Neisserias sp.Al igual que el agar
sangre, se puede usar como agar base diferentes medios dependiendo de la necesidad. Entre los
medios utilizados se encuentran infusión cerebro corazón y agar soja tripticasa, aunque los más
recomendados son agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC y agar Thayer Martin.Algunas
variantes de agar chocolate incluyen un suplemento enriquecido disponible comercialmente
llamado Isovitalex o Polivitex.Estos suplementos contienen vitamina B12, L-glutamina,
adenina, clorhidrato de guanina, ácido p-aminobenzoico, nicotinamida adenina dinucleótido
(NAD), pirofosfato de tiamina, nitrato férrico, clorhidrato de tiamina, hidrocloruro de cisteína,
L-cistina y glucosa.Es importante resaltar que el agar chocolate es más enriquecido que el agar
sangre, pero no permite la observación de los patrones de hemólisis.
 Preparación :
Se deben ver las indicaciones de preparación del agar base que se va a utilizar. Las mismas
se encuentran al reverso del envase del medio deshidratado. Generalmente describen cuánto se
debe pesar para preparar un litro de medio de cultivo.
En el laboratorio se puede preparar la cantidad exacta necesaria, puede ser más o menos de un
litro.
Cálculos
Se realiza una regla de tres para calcular cuánto se debe pesar para preparar el volumen que se
desea.

Pesar y disolver
Se procede a pesar la cantidad necesaria y se coloca en una fiola con el agua.

Se calienta a fuego moderado y se va mezclando suavemente con movimientos rotatorios hasta

disolver completamente el medio deshidratado, dejando hervir por 1 minuto.

Esterilizar
Se introduce la fiola en el autoclave para esterilizar el medio a 121°C por 20 minutos.

Agregado de la sangre
Al salir del autoclave se deja reposar hasta que la temperatura del medio esté aproximadamente
entre 56 a 70°C para colocar la sangre y mezclar hasta que el medio se torne color marrón.
Si se va a agregar suplementos, este es el momento de hacerlo. Posteriormente mezclar y servir
20 ml a cada placa de Petri estéril.
Todo el procedimiento se debe realizar en una campana de flujo laminar o alrededor del
mechero de Bunsen.Dejar reposar hasta que se solidifiquen y guardar de forma invertida en
nevera.
 Otra forma de preparar agar chocolate sin usar sangre
Se prepara el medio base como se describió anteriormente, se disuelve la hemoglobina
deshidratada obtenida comercialmente y se esteriliza en el autoclave.Ambas soluciones se dejan
enfriar a 50 °C, se unen y se agrega el suplemento. Mezclar en condiciones asépticas y luego
servir en placas de Petri estériles.

 Utilidad : Medio que se utiliza para el crecimiento de Neisseria gonorrhoae y Haemophylus

influenzae.
 Interpretación : Cualquier tipo de crecimiento debe correlacionarse con los demás medios
sembrados, en muestras estériles es importante identificar e informar cualquier microorganismo
aislado, en muestras que pueden contener flora microbiana acompañante, determinar que
microorganismos se deben identificar de acuerdo al tipo de muestra y la flora patógena posible
a encontrar.

 Nombre del medio de cultivo : Agar Schaedler.

 Composición química: Peptona de caseína-soja, Polipeptona bacteriológica,Extracto de
levadura.Glucosa, Tris (hidroximetil),amino-metano tampón,Cloruro Sódico ,Hemina, L-
cisteina y Agar-agar.
 Fundamento del medio: Medio de cultivo altamente nutritivo, adicionado de sangre de
cordero. El Agar Schaedler se basa en la modificación diseñada por Mata et al. a partir de la
fórmula descrita por Schaedler, Dubos y Costello. Este medio promueve fácilmente el
crecimiento de anaerobios del tracto intestinal y digestivo, y otros órganos, sin que interfiera la
flora aeróbica acompañante debido a sus altas propiedades nutritivas y su bajo potencial de
oxidación-reducción. En condiciones normales, la multiplicación de anaerobios se ve
disminuida por el rápido aumento de enterococos, Escherichia coli, Enterobacter y otras
bacterias intestinales facultativas. Aunque el tioglicolato es ampliamente utilizado para reducir
el potencial de oxidación-reducción que favorece el desarrollo de anaerobios, se ha demostrado
que es un inhibidor de otros organismos. En este caso, el medio incluye cistina que, junto con
la dextrosa, actúa como agente reductor. El caldo de soja y tripticaseína, la peptona y el extracto
de levadura, proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el
crecimiento. La dextrosa es el carbohidrato fermentable fuente de carbono y energía. Tris
(hidroximetil aminometano) actúa como un sistema tamponador. La hemina estimula el
crecimiento de los microorganismos. La L-cistina es un agente reductor. El agar bacteriológico
es el agente solidificante
 Preparación : Suspender 41,9 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y
disolver por calentamiento agitando con frecuencia. Hervir durante un minuto hasta su
completa disolución. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar a 45-
50 ºC y, si se desea, añadir 5% de sangre estéril desfibrinada. Homogenizar con cuidado y
 distribuir en placas de Petri. Tratar de evitar la formación de burbujas al añadir la sangre.

 Utilidad: utilizado principalmente para la recuperación de microorganismos anaerobios

especialmente los pertenecientes a las especies de Bacteroides, Prevotella y otras especies de
anaerobios.
 Interpretación : El agar Schaedler fue originalmente formulado por Schaedler y
posteriormente modificado con cambios en la formulación para cultivo y enumeración de
microorganismos aerobios y anaerobios.
El agar Schaedler suplementado con vitamina K1 y 5% de sangre de oveja se usa para la
recuperación de bacterias anaeróbicas fastidiosas como Bacteroides. Inclusión de colistina y
ácido nalidíxico en la formulación (agar Schaedler CNA) junto con 5% de ovejas ,la sangre se
usa para el aislamiento selectivo de los cocos anaerobios gram-positivos (4), Peptococcus y
Peptostreptococcus. Se utiliza la inclusión de Kanamicina y Vancomicina en la formulación
(agar Schaedler KV) junto con un 5% de sangre de oveja para el aislamiento selectivo de
anaerobios gramnegativos.
El agar Schaedler sirve como un excelente medio basal al que se puede agregar sangre u otros
enriquecimientos para mejorar la recuperación de fastidiosos organismos anaerobios.
La combinación de hidrolizado enzimático de caseína, peptona proteosa y digestión papaica de
harina de soja, extracto de levadura y liststina proporciona factores de crecimiento
nitrogenados, vitaminas y otros nutrientes esenciales para el crecimiento. La dextrosa sirve
como fuente de energía.La sangre de hemina y oveja estimula el crecimiento de
microorganismos fastidiosos y estimula el crecimiento de otros Bacteroides. Se recomienda la
adición de sulfonato de polianetol sódico (SPS) al usar este medio para hemocultivo . Inhibe la
fagocitosis y neutraliza la actividad antibacteriana de los componentes sanguíneos frescos.
La vitamina K1 permite el cultivo de Bacteroides melaninogenicus y estimula el crecimiento
de otras Bacteroides especies y formadores de esporas grampositivas

 Nombre del medio de cultivo : Agar MacConkey

 Composición química: peptona de carne,peptona de gelatina,tripteina,lactosa,mezcla de sales
biliares n°03, cloruro de sodio, rojo neutro,cristal violeta,agar y agua purificada.
 Fundamento del medio: En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano,la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran
parte de la flora Gram positiva.El agar es el agente solidificante. Por fermentación de la lactosa,
disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de Ph
(rojo neutro), la absorción de las colonias, y la precipitan de las sales biliaresLos
 microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
 Preparación: Rehidratar 50 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos.
Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo
por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45°C. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2 a
8ºC.
 Utilidad: La variedad de bacilos Gram negativos que crecen en este medio expresan
características fenotípicas que ayudan a un diagnóstico presuntivo de la especie en cuestión.
Por ejemplo el tamaño, color, consistencia y olor de las colonias, son algunas de las
características que pueden orientar.En este medio las especies de Escherichia coli, Klebsiella
sp y Enterobacter sp producen colonias rosadas fuertes, rodeadas de una zona de bilis
precipitada. En tanto que, las bacterias como Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp y
Hafnia sp pueden aparecer sin color después de 24 horas o rosa pálido en 24 -48 horas.Así
mismo, los géneros Proteus, Edwadsiella, Salmonella y Shigella producen colonias incoloras o
transparentes.
 Interpretación
Microorganismo fermentadores de lactosa : colonias rosadas-rojizas.Puede observarse halo
de precipitación biliar .
Microorganismos no fermentadores de lactosa : colonias del color del medio,incoloras.

 Nombre del medio de cultivo : Agar eosina-azul de metileno (EMB o Levine).

 Composición química :peptona,lactosa,sacarosa.fosfato dipotasico,eosina,azul de metileno y
agar.
 Fundamento del medio : El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague
con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de
enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos.
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo micorbiano.La diferencia
entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa , y aquellos son incapaces de
hacerlo, esta dada por lo indicadores eosina y azul de metileno ; estos ejercen un efecto
inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente
solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico
brillo metálico .Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.
También, pueden crecer esepcies de Candida y se observan como colonias rosadas y
 puntiformes ; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en
C.albicans.Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes,
mientras que Acinetobacter spp. Y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de
color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas nos sean capaces de acidificar a partir
de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas .En
este medio se obtiene además , un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

 Preparación : Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua purificada .Reposar 5 minutos

.Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su disolución total. Esterilizar en
autoclave 121 °C durante 15 minutos .Distribuir en placas Petri estériles.

 Utilidad : Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gramnegativos de

rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies
de la familia Enterobacteriaceae.

 Interpretación
Microorganismo fermentadores de lactosa y/o sacarosa:
Colonias de color negro azulado o amarronado .Pueden tener centro oscuro y brillo metalico.
Microorganismo no fermentadores de lactosa y sacarosa:
Colonias del color del medio, incoloras.

 Nombre del medio de cultivo : Caldo de tioglicolato.

 Composición química : Peptona,Lecitina,Glucosa,Cloruro de sodio ,Tioglicolato de sodio,
Agua destilada ,Sulfito de sodio y Agar.
 Fundamento del medio : El caldo tioglicolato se considera un medio de enriquecimiento, no
selectivo ya que permite el desarrollo de la mayoría de las bacterias no exigentes. Los
requerimientos nutricionales son proporcionados por el extracto de levadura, el digerido
pancreático y la glucosa.
Por otra parte, este medio a pesar de ser un caldo contiene una pequeña cantidad de agar; esto
hace que posea un bajo potencial de oxido-reducción, debido a que frena la entrada de oxígeno,
de tal manera que el oxígeno va disminuyendo a medida que se profundiza hacia el interior del
tubo.Es por ello que este medio es ideal para el desarrollo de bacterias aerobias facultativas,
microaerofilas y anaerobias estrictas, estas 2 últimas sin necesidad de incubar bajo estas
condiciones. El mismo medio regula la cantidad de oxígeno dentro del medio, estando ausente
en el fondo del tubo y en cantidad suficiente en la superficie.Así mismo, el tioglicolato y la L-
 cistina actúan como agentes reductores, contribuyendo a la prevención de la acumulación de
sustancias nocivas para el desarrollo bacteriano, como lo es el peróxido. Además, estos
compuestos contienen grupos sulfidrilos (-SH-), neutralizando los efectos inhibitorios de los
derivados mercuriales, arsenicales, entre otros metales pesados.
Por su parte, la resazurina es un indicador de óxido –reducción. Esta sustancia es incolora
cuando está reducida y color rosa cuando está oxidada. Existen las variantes de caldo
tioglicolato con indicador y sin indicador. Su uso dependerá del tipo de muestra y la preferencia
del laboratorio.Entre tanto, el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del caldo
tioglicolato y el uso de la glucosa en forma anhidra previene el exceso de humedad en el medio
deshidratado.
 Preparación : Disolver 30 grs en 1000 ml de agua desmineralizada. Dispensar en tubos de
tapón de rosca, aproximadamente de 5ml del caldo, luego autoclavear a 121 °C por 15 minutos.
 Utilidad :
El caldo tioglicolato es útil para el enriquecimiento de muestras clínicas, especialmente para
aquellas provenientes de sitios estériles. También es útil para muestras no clínicas, como
cosméticos, medicamentos, etc.

Para la inoculación de muestras líquidas (como LCR, líquido sinovial, entre otros), primero se
centrifugan las muestras y luego se toman 2 gotas del sedimento y se colocan en el caldo
tioglicolato. Incubar a 35°C por 24 horas. Si en este tiempo no hay crecimiento (turbidez), se
incuba hasta un máximo de 7 días.

Si la muestra es tomada con hisopo, primero se inoculan los medios de cultivo en placas y por
último se introduce el hisopo en el caldo, se parte la porción que sobresale y se tapa el tubo,
dejando el hisopo dentro. Se incuba a 35°C por 24 horas, 7 días como máximo.

Para muestras sólidas, debe homogeneizarse en solución salina fisiológica (SSF) y luego
inocular el caldo tioglicolato con 2 gotas de la suspensión.

En ocasiones puede utilizarse como medio de transporte para muestras donde se sospecha la
presencia de anaerobios estrictos o como caldo de enriquecimiento de respaldo.

La variante de caldo tioglicolato con carbonato cálcico se usa para el mantenimiento de cepas
controles por más tiempo, debido a que tiene la capacidad de neutralizar los ácidos producidos
por la utilización de la glucosa; estos ácidos son tóxicos para ciertas bacterias.
 El crecimiento en el caldo tioglicolato se observará por la turbidez del medio. Se recomienda
realizar una tinción de Gram y posteriormente subcultivar en medios no selectivos y selectivos,
dependiendo del tipo de muestra y de los microorganismos del cual se sospeche.
 Interpretación : . La turbidez, la presencia de flóculos, de artefactos flotando en superficie o
de sedimento en el fondo son indicadores de crecimiento microbiano y por tanto, la muestra
no es estéril.

 Nombre del medio de cultivo : Agar S-S (Salmonella y Shigella).

 Composición química: Peptona pancreática de carne, extracto de carne,sales biliares,citrato
sodico, Tiosulfato sódico, Citrato férrico amoniacal ,Lactosa, Rojo neutro,Verde Brillante y
Agar-Agar.
 Fundamento del medio :
Cada componente del medio de cultivo Salmonella-Shigella posee una función específica, y el
conjunto de la mezcla le brinda las propiedades que lo caracterizan.

Poder nutritivo
El extracto de carne y la peptona (digerido de caseína y de tejido animal) proporcionan los nutrientes
requeridos (nitrógenos, carbono y vitaminas) para el desarrollo de los microorganismos capaces de
tolerar el resto de los componentes.
Consistencia
El agar-agar es el encargado de brindar la consistencia sólida al medio.
Selectivo
Este medio es altamente selectivo debido a que contiene sales biliares, citrato de sodio y verde
brillante. Por ello, inhibe el crecimiento de todas las bacterias Gram positivas y de la mayoría de los
bacilos Gram negativos, incluyendo algunos coliformes.Mientras que las bacterias del género
Salmonella y algunas cepas de Shigella si soportan estos compuestos.Principalmente, el género
Salmonella es muy resistente a las sales biliares, tanto que son capaces de vivir en la vesícula biliar
de algunos pacientes portadores que expulsan la bacteria constantemente por las heces.
Diferencial
La lactosa es el carbohidrato fermentable que ayuda a diferenciar las cepas fermentadoras de lactosa
de las no fermentadoras. Esta propiedad es evidenciada por la presencia del indicador de pH, que en
este medio es el rojo de fenol.Las cepas fermentadoras de lactosa dan colonias rojas, mientras que
las no fermentadoras son incoloras. Esta característica es importante, ya que Salmonella y Shigella
no fermentan la lactosa.Por otra parte, este medio contiene tiosulfato sódico como fuente de sulfuro
y citrato férrico como fuente de hierro. Ambos compuestos logran diferenciar a las bacterias capaces
de producir sulfuro de hidrógeno. Estas reaccionan para formar un precipitado negro de sulfuro
férrico insoluble y visible.
Esta propiedad la tienen algunas cepas del género Salmonella. Normalmente sus colonias son planas
incoloras con un punto negro en el centro de la misma. El resto de las Salmonellas no producen H2S
y se desarrollan como colonias incoloras.Por otra parte, las colonias del género Shigella son planas
incoloras sin ennegrecimiento.
 Preparación : Disolver 63 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta
ebullición para su disolución. Mantener la ebullición durante 2 minutos. Autoclavar 116 ºC
durante 5 minutos. El color final del medio es rojo-naranja.
 Utilidad : Se usa frecuentemente en el análisis de coprocultivos y en el estudio microbiológico
de muestras de agua residuales, aguas de consumo y alimentos.
Frecuentemente se preparan placas dobles, en un lado se coloca agar Salmonella-Shigella y en
el otro agar XLD.
 Interpretación: Salmonella, no fermenta la lactosa, sus colonias aparecen incoloras,
transparentes, con o sin centro negro debido a la producción de sulfuro de hidrógeno. Shigella,
aparece con colonias incoloras. Los coliformes que hayan conseguido crecer, formarán colonias
rojas o rosadas.
El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan
desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

 Nombre del medio de cultivo: Agar Thayer-Martin.

 Composición química : Proteosa peptona,Almidon,Dextrosa,K2HPO4,Cloruro de sodio y
Agar bacteriológico.
BIO-X ,Hemoglobina y Inhibidor CNVT.
 Fundamento del medio :
Las Neisserias son microorganismos catalogados como fastidiosos y por tanto su aislamiento
es difícil. Por ello, el Thayer Martín es un medio complejo y cada uno de sus componentes
cumple una función que a continuación se explican:

Agar base GC
El agar GC contiene proteosa peptona, almidón de maíz, cloruro de sodio, fosfato dipotásico,
fosfato monopotásico y agar-agar. Sus componentes aportan los nutrientes básicos para el
desarrollo microbiano, neutralizan los ácidos grasos tóxicos, contribuyen a mantener el balance
osmótico, definen el pH y brindan la consistencia sólida al medio.

Hemoglobina
 La hemoglobina brinda los factores V y X (nicotinamida adenina dinucleótido NAD y hemina
respectivamente). Por ello en este medio también crecen especies de Haemophilus. La
hemoglobina puede ser obtenida comercialmente de forma deshidratada o puede adicionarse
sangre bovina fresca desfibrinada al medio.

Suplemento de enriquecimiento
Por otra parte, al medio Thayer-Martin también se le debe adicionar un suplemento de
enriquecimiento, ya que los nutrientes que contiene el agar base no son suficientes para los
requerimientos del género Neisseria.

El suplemento de enriquecimiento más comúnmente utilizado se llama isovitalex. Este contiene

glutamina, adenina, NAD, cocarboxilasa, guanina, nitrato férrico, ácido p-amino benzóico,
vitamina B12, tiamina y glucosa. Todos estos compuestos son necesarios para el buen
desarrollo de las Neisserias patógenas.

Inhibidores
Por ser un medio altamente nutritivo se deben utilizar inhibidores que impidan el crecimiento
de microorganismos de la flora habitual del área y así favorecer el aislamiento del género
Neisseria.

El complejo de inhibidores está compuesto por vancomicina, colistina y nistatina. La

vancomicina inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas, la colistina impide el desarrollo
de bacterias Gram negativas como Pseudomonas y algunas Neisserias saprófitas, y la nistatina
actúa sobre las levaduras como Candida albicans.

Sin embargo, luego se modificó el agar Thayer Martin; los cambios consistieron en la adición
de trimetoprim, el aumento en la cantidad de agar y el agregado de glucosa extra. Estos cambios
mejoraron significativamente la recuperación de las especies de Neisseria gonorrhoeae.

Cabe destacar que el trimetoprim inhibe el crecimiento del género Proteus y su consecuente
formación de swarming. En este sentido, los antibióticos son los que proveen el carácter
selectivo al medio Thayer Martin.
 Preparación :
Agar Thayer Martin original
-Agar GC
Pesar 8,2 gr del medio GC deshidratado y suspender en 100 ml. Mezclar y hervir por 1 minuto
 con agitación frecuente para disolver en su totalidad. Esterilizar la mezcla en autoclave a 121°C
por 15 minutos.
-Hemoglobina al 2%
Suspender 2 gr de hemoglobina deshidratada en 2 o 3 ml de agua destilada caliente hasta formar
una mezcla uniforme. Adicionar poco a poco más agua hasta completar un volumen de 100 ml.
La suspensión debe quedar homogénea antes de esterilizar.
Esterilizar en autoclave por 15 minutos.
-Suplemento de enriquecimiento
Reconstituir el vial comercial con el diluente proporcionado por la misma casa comercial.
Mezclar bien. La cantidad de diluente a usar será especificada en el instructivo del kit.

-Suplemento de inhibición V.C.N (vancomicina, colistin, nistatina)

Reconstituir el vial con el diluente provisto por la casa comercial. Mezclar bien. La cantidad de
diluente a usar será especificada en el instructivo del kit.

-Preparado
Por cada 100 ml de agar GC proceder de la siguiente manera.
Al salir del autoclave el agar GC, dejar enfriar hasta una temperatura aproximada de 50°C y
adicionar 2 ml de la solución de hemoglobina preparada, 2 ml del suplemento de
enriquecimiento (isobitalex o britalex), y 2 ml del suplemento de inhibición. Mezclar y servir
en placas de Petri estériles.
Dejar solidificar y guardar en nevera hasta su uso.
El color del medio preparado es rojo cereza. El pH final del medio es de 7,2 ± 0,2

Agar Thayer Martin modificado

Pesar 8,2 gr del medio GC deshidratado y suspender en 100 ml. Agregar 1 gr de agar-agar y
adicionar 0,3 gr de glucosa. Mezclar y hervir por 1 minuto con agitación frecuente para disolver
en su totalidad. Esterilizar la mezcla en autoclave a 121°C por 15 minutos.
Preparar la hemoglobina y el suplemento de enriquecimiento como fue descrito anteriormente.
El suplemento de inhibición utilizado es V.C.N.T (vancomicina, colistin, nistatina,
trimetoprim).
-Preparado
Proceder de la forma descrita para el agar Thayer Martin original.
 Utilidad
El agar Thayer Martin debe dejarse atemperar antes de sembrar las muestras. Las muestras
comúnmente utilizadas son exudados faríngeos, exudados nasales, secreción vaginal, uretral
 y/o rectal y LCR.
Utilizar muestras recién tomadas y hacer inóculos fuertes sobre el agar. Las muestras se
siembran directamente por descarga de material y luego se estría por agotamiento sobre la
superficie.
Las placas se incuban a 35-37°C por 24 a 48 horas en jarra de microaerofilia (5% CO2).
Terminado el tiempo de incubación se examinan las placas en busca de colonias pequeñas,
color gris y algunas veces de aspecto mucoide.
Realizar Gram y las pruebas bioquímicas confirmatorias a las colonias sospechosas.
 Interpretación : Una vez completado el período de incubación, observar el desarrollo de
colonias y sus características. Las colonias de Neisserias patógenas son pequeñas (1 a 2 mm),
grisacaeas, y a veces mucoides. Realice una Tinción de Gram para verificar la morfología y
aplique las pruebas de identificación bioquímica necesarias para el diagnóstico de especie.

 Nombre del medio de cultivo : Agar New York City (NYC).

 Composición química : Hidrolizado pancreático de caseína,mezcla de peptonas de
carne,almidon dde maíz,fosfato dipotasico,fosfato monopotasico.Cloruro sódico,Agar
,Hematies lisados de caballo,Enriquecimiento polivitamínico,Trimetoprim
lactato,Anysomicina,Colistina y Vanconmicina.
 Fundamento del medio : Este medio es superior a otros medios generalmente empleados para
el aislamiento de especies de Neisseria . La naturaleza transparente del medio ayuda a estudiar
los tipos coloniales. La peptona proteosa, el plasma equino y la hemoglobina proporcionan
nutrientes para el crecimiento de N. gonorrhoeae y N. meningitidis . El fosfato amortigua el
medio. El suplemento selectivo agregado contiene los antibióticos vancomicina , colistina ,
nistatina y trimetoprima , para suprimir la flora acompañante. La vancomicina es inhibitoria
para las bacterias grampositivas . La colistina inhibe las bacterias gram negativas , incluidas las
especies de Pseudomonas , mientras que Proteus es inhibido por trimetoprima.. La combinación
de trimetoprima y colistina actúa sinérgicamente contra los bacilos gramnegativos . El almidón
neutraliza los metabolitos tóxicos producidos por Neisseria . El suplemento de levadura
autolysate cumple los requisitos de CO2 necesarios para mejorar el crecimiento de Neisseria .
La levadura contiene ácido oxaloacético que es metabolizado por los gonococos para producir
CO2 suficiente para el crecimiento de los gonococos capnofílicos. Además, la presencia de
autolisado de levadura reduce la fase de retraso del crecimiento de Neisseria, mejorando así el
tamaño y el número de colonias. La muestra se puede rayar directamente en el medio para
obtener el máximo aislamiento.
 Preparación :
Comenzando por suspender 25.50 gramos en 320 ml de agua destilada .
 Calentar a ebullición para disolver completamente el medio.
Esterilice en autoclave a 15 libras de presión (121 ° C) durante 15 minutos. También evite el
sobrecalentamiento y enfríe a una temperatura de 45-50 ° C y agregue asépticamente 100 ml
de glóbulos de caballo sedimentados y 60 ml de plasma de caballo citratado junto con el
contenido rehidratado de 1 vial de suplemento NYC y 1 vial de suplemento de levadura
Autolysate
Mezclar bien y verter en placas de Petri estériles.
La preparación del agar de la ciudad de Nueva York depende de la carga de trabajo de cada
laboratorio o del número de placas de cultivo disponibles. De todos modos, tenga en cuenta
que una placa de Petri estándar es equivalente a 20 ml cuando se vierte completamente.

Nota: también es aconsejable incubar una placa de Petri durante 24 horas para el control de
calidad a fin de evitar el desperdicio de recursos y facilitar la detección temprana de la
contaminación después de la preparación.

Apariencia del medio después de la preparación

El agar de Nueva York aparece en forma de gel de color amarillo claro a ligeramente
opalescente en placas de Petri después de la preparación Dependiendo del suplemento de
sangre utilizado, el cambio de color a marrón rojizo como agar de chocolate
 Utilidad : El New York City Agar es un medio semitransparente selectivo utilizado en el
aislamiento primario y determinación cuantitativa de los patógenos del género Neisseria.
 Interpretación : La morfología colonial típica es la siguiente:
N. gonorrhoeae puede aparecer como pequeñas (0.5–1.0 mm) colonias mucosas de color
blanco grisáceo a incoloras. N. meningitidis aparece como grandes colonias mucosas incoloras
a gris azuladas.Las colonias pueden seleccionarse para tinción de Gram , subcultivo u otros
procedimientos de diagnóstico.

 Nombre del medio de cultivo : Agar Sabouraud

 Composición química : glucosa,pluripeptona,agar-agar y cloranfenicol.
 Fundamento del medio : Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de
hongos, particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel ,pelo).
En el medio de cultivo, la peptona ,la tripteína y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos .El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido,
inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras .El agar es
el agente solidificante .Puede ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.
 Preparación :Suspender 65 g del polvo en 1 litro de agua purificada.Reposar 5 minutoss y
mezclar hasta uniformar.Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver
completamente. Distribuir en tubos o en otros recipientes apropiados y esterilizar en autoclave
a 118-121 °C durante 15 minutos.Colocar los tubos en posición inclinada para solidificar el
medio de cultivo (pico de flauta) .Tambien puede distribuirse en placas de Petri estériles.
 Utilidad : Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos, aunque también
pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias filamentosas tales como Nocardia.
 Interpretación : Los mohos aparecen con colonias filamentosas y las levaduras y bacterias con
colonias no filamentosas.

 Nombre del medio de cultivo : Agar CLED (cistina-lactosa deficiente en electrolitos)

 Composición química : Hidrolizado pancreático de caseína,hidrolizado pancreático de
gelatina, extracto de carne ,lactosa ,L-Cistina ,Azul Bromotimol Indicador Andrade(Fucsina
Ácida) y Agar.
 Fundamento del medio : El medio de cultivo CLED posee como fuente de energía extracto
de carne, hidrolizado pancreático de caseína e hidrolizado de gelatina. Los mismos
proporcionan los nutrientes para el desarrollo de bacterias poco exigentes.También contiene
cistina, un aminoácido que permite el crecimiento de coliformes, distinguibles por su pequeño
tamaño.Así mismo, contiene como carbohidrato fermentable la lactosa, por este motivo este
medio es diferencial; pudiéndose distinguir las bacterias fermentadoras de las no fermentadoras
de lactosa. Las bacterias fermentadoras hacen virar el pH del medio por la producción de ácidos,
desarrollando colonias de color amarillo, mientras que las bacterias no fermentadoras no
generan cambios en el medio, por tanto toman la coloración del agar original, color verde.La
reacción de fermentación es revelada gracias a la presencia del indicador de pH, que en este
medio es el azul de bromotimol. Por otra parte, la baja concentración de electrolitos del medio
inhibe el típico crecimiento invasivo del género Proteus, denominado efecto swarming. Esto
genera una ventaja con respecto a otros medios, ya que permite el contaje de las UFC,
incluyendo si está presente el género Proteus. Sin embargo, la baja concentración de electrolitos
inhibe el crecimiento de algunas especies del género Shigella, siendo esta una desventaja con
respecto a otros medios.
 Preparación : En una fiola con un litro de agua destilada disuelva 36,2 gr de agar CLED en
polvo. Después de 5 minutos de reposo, caliente el agar resuspendido, mezclando
constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.Luego esterilizar a 121°C por 15 minutos en el
autoclave. Culminado el tiempo, se retira del autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una
temperatura de 45°C. Posteriormente se sirve entre 15 – 20 ml en cada placa de Petri estéril.
El procedimiento de servido de las placas se debe llevar a cabo dentro en una campana de flujo
 laminar o frente al mechero de Bunsen para evitar su contaminación.
Las placas servidas se dejan solidificar, se ordenan en un portaplaquero de forma invertida y se
guarda en nevera (2-8°C) hasta su uso.
 Utilidad : El agar CLED se usa exclusivamente para el sembrado de muestras de orina. El
uso de este medio es especialmente frecuente en laboratorios europeos, mientras que en
América es menos utilizado.

 Interpretación :
Contajes por encima de 100.000 UFC/ml —–Indica infección urinaria

Contajes por debajo de 1000 UFC/ml—– No hay infección

Contajes entre 1000-10.000 UFC/ml —–Dudoso, posible contaminación, repetir toma de muestra.

 Nombre del medio de cultivo : Medio Lowenstein-Jensen

 Composición química :Sulfato de magnesio,Citrato de magnesio,Asparragina, Glicerina
,Huevos entero ( albumina y lípidos),Verde de malaquita y Agua purificada.
 Fundamento del medio : Los nutrientes de este medio de cultivo constituyen un rico soporte
para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias excepto Mycobacterium leprae. El
verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora acompañante Gram positiva y de algunas
bacterias Gram negativas. La glicerina estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis,
aunque gran parte de Mycobacterium bovis es inhibido.
 Preparación :
Realizar un estudio seriado con tres cultivos por cada paciente para aumentar la posibilidad de
aislar al gérmen y en caso de tratarse de una micobacteria diferente al Mycobacterium
tuberculosis, el estudio seriado permite contar con suficientes aislamientos para considerar a
dicha micobacteria como responsable de la enfermedad. La muestra a analizar tiene que ser
representativa, de “calidad y cantidad”, es decir provenir de la lesión a estudiar y en cantidad
suficiente. Mediante técnica aséptica, recolectar la muestra en recipiente estéril perfectamente
rotulado y conservarla refrigerada hasta su envío al laboratorio. Esputo: recolectar en un frasco
estéril todas las expectoraciones obtenidas durante 12 horas. Hisopado laríngeo: recolectar la
muestra mediante el uso de hisopos estériles. Lavado gástrico, lavado bronquial, aspirado
bronquial, líquido cefalorraquídeo, líquido peritoneal, pericardio, líquido sinovial y pus:
recolectar en frasco estéril. Orina: recolectar por separado en frascos estériles la última orina
nocturna y la primera orina de la mañana. En el laboratorio mezclar ambas muestras. Dejar
reposar en heladera durante 24 horas, luego centrifugar y analizar. Piezas quirúrgicas, biopsias,
ganglios: triturar las muestras en mortero con 2 ml de agua destilada estéril y una pequeña
cantidad de arena estéril para obtener una papilla que será utilizada en la siembra.
 Primeramente, realizar el exámen microscópico directo de la muestra y posterior coloración de
Ziehl-Neelsen. No aconsejamos realizar el examen directo a las muestras de orina y de lavado
gástrico. Se recomienda decontaminar la muestra antes de ser inoculada. Las técnicas de
decontaminación dependerán de la muestra en estudio y son las siguientes: Técnica de
decontaminación: Esputo: agregar igual volumen de NaOH 4% y agitar periódicamente durante
30 minutos a 37 ºC. Luego transferir a un tubo de centrífuga y centrifugar durante 30 minutos
a 3000 r.p.m. Volcar el sobrenadante sobre un recipiente que contenga desinfectante fenólico y
utilizar el sedimento para efectuar nuevos extendidos, neutralización y posterior siembra.
Contenido gástrico, lavado bronquial y aspirado bronquial: centrifugar 30 minutos a 3000 r.p.m.
Descartar el sobrenadante. Agregar al sedimento 3 ml de NaOH 4 % y luego proceder como se
describió para el esputo. Orina: sedimentar 24 horas en heladera. Descartar el sobrenadante.
Centrifugar el sedimento a 3000 r.p.m. durante 30 minutos. Descartar el sobrenadante y llevar
a 3 ml con solución fisiológica estéril. Agregar 3 ml de NaOH 4% y proceder de la misma
manera que para el esputo. Líquido pleural, líquido ascítico y líquido cefalorraquídeo:
centrifugar la muestra y descartar el sobrenadante. Observar microscópicamente el sedimento,
si no presenta gérmenes, no agregar NaOH 4% y sembrar en forma directa. Biopsias: agregar 5
ml de agua destilada estéril y centrifugar a 1500 r.p.m. durante 10 minutos. Decantar y
centrifugar el sobrenadante a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. Sembrar el sedimento en forma
directa previa homogeinización. Hisopado laríngeo: En la etapa de la decontaminación y
concentración, introducir el hisopo conteniendo la muestra en un tubo estéril que contiene
partes iguales de NaOH 4% y agua destilada estéril, presionando contra las paredes del tubo
para desprender el material adherido al hisopo. Toda muestra decontaminada debe ser
neutralizada previo a su siembra. Se recomienda utilizar H2SO4 5% en presencia del indicador
rojo de fenol a pH neutro que origina color salmón. No es aconsejado el uso de HCl por la
formación de cloruro de sodio que puede ser nocivo o tóxico para el bacilo de Koch. Siembra
Inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la superficie del medio de cultivo. Rotar los
tubos para lograr una distribución homogénea de la muestra. Generalmente se siembran dos
tubos de Lowenstein Jensen y un tubo de Stonebrink Medio. Este último contiene piruvato de
sodio y favorece el desarrollo de cepas disgónicas como bacilos isoniazida resistentes y sobre
todo de Mycobacterium bovis que es causal de algunos casos de enfermedades humanas.
Incubación En aerobiosis, a 35-37°C. Observar los cultivos dos veces por semana y registrar el
tiempo de aparición de las colonias. Si no se observa desarrollo, incubar hasta 8 semanas.
Importante: incubar los tubos con las tapas flojas, inclinados 5º aproximadamente. Esta
posición evita que el inóculo contacte con la parte superior del tubo. Controlar a las 72 horas
los tubos sembrados. Si el inóculo ha sido absorbido, ajustar las tapas y agrupar los tubos con
igual identificación. Si aún están húmedos, incubar hasta que se sequen y luego ajustar las tapas.
 Utilidad: Cultivo y diferenciación de micobacterias, fundamentalmente Mycobacterium
 tuberculosis.
 Interpretación : Observar las características morfológicas y la presencia o ausencia de
pigmento en las colonias. Tener en cuenta el tiempo que ha transcurrido desde la inoculación
hasta la observación de crecimiento. Los cultivos positivos generalmente se observan entre los
13 y 28 días de incubación, dependiendo del contenido de bacilos en las muestras sembradas,
mientras que el 3% de las micobacterias suele crecer a los 40 días de incubación. La aparición
de colonias color crema, rugosas o cremosas, amarillentas, es indicio de cultivo positivo, el cual
será confirmado realizando la coloración de Ziehl-Neelsen a un extendido del mismo, para
determinar la presencia de bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR). De la misma manera se
procederá para los cultivos contaminados y cultivos negativos (cuando no se observen
colonias).

 Nombre del medio de cultivo : Agar manitol salado (Chapman).

 Composición química : digerido enzimático de caseína,digerido enzimático de tejido
animal,extracto de carne de vaca,D-manitol,NaCl ,rojo de fenol y Agar.
 Fundamento del medio: En el medio de cultivo, el extracto de carne, la peptona de arne y la
ripeteina , constituyen la fuente de carbono,nitrógeno y vitaminas y minerales que promueven
el desarrollo microbiano.El manitol es el hidrato de carbono fermentable.El cloruro de sodio es
el agente selectivo que inihibe el desarrollo de la flora acompañante , el rojo fenol es el
indicador de pH y el agar es el agente solidificante. Se trata de un medio altamente selectivo
por la alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad de fermentación del manitol
por los microorganismos.Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracio nde sal y
fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el
indicador de pH del color rojo amarillo.Los estafilococos crecen en altas concentraciones de
sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el
manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.Los
estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas , rodeadas de una
zona del mismo color o púrpura.
 Preparación :
Para preparar un litro de agar manitol salado se pesan 111 gr del medio deshidratado de la casa
comercial de preferencia y se disuelven en 1000 ml de agua destilada, utilizando una fiola.
Se aplica calor removiendo frecuentemente el medio para mejorar el proceso de disolución. Se
deja hervir durante un minuto.
Se coloca la fiola en el autoclave a 121°C por 15 minutos.
Terminado el tiempo, se saca la fiola del autoclave, se deja reposar y se sirve entre 15 a 20 ml
sobre placas de Petri estériles cuando la temperatura sea aproximadamente de 50 a 55°C.
Se deja solidificar, ordenando de forma invertida en plaqueros y guardando en nevera hasta su
 uso. Antes de sembrar una muestra, se debe esperar a que la placa tome la temperatura del
ambiente.
Se siembran las placas por estriamiento o por sembrado en superficie con espátula de
drigalski. El pH final del medio preparado debe quedar en 7,4 ± 0,2
El color del medio deshidratado es beige claro y el color del medio preparado es rojo naranja.
 Utilidad : Metodo de cultivo selectivo y diferencial , utilizado para el aislamiento y
diferenciación de estafilococos a partir de diversas muestra.Su formula cumple con los
requerimientos de la Armonizacion de Farmacopeas Europeas ,Japonesas y de los Estados
Unidos de Norteamerica.
 Interpretación :
Microorganismo fermentadores de manitol : colonias de color amarillo rodeadas o no de un
halo amarillo
Microorganismo no fermentadores de manitol: colonias del color medio , rojas rodeadas o
no de halo rojizo-purpura .

 Nombre del medio de cultivo : Agar bilis esculina (BEA)

 Composición química : Azida sódica,Bilis de buey,citrato de hierro y amonio , coruro de
sodio,esculina,extracto de carne , proteosa peptona n°03,tripteina y agar.
 Fundamento del medio : El medio bilis esculina contiene peptonas y extracto de carne, ambos
compuestos proporcionan las sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento de los
microorganismos.
También contiene esculina; este compuesto es un glucósido formado por la unión de un
monosacárido simple (glucosa) con un compuesto denominado 6,7-dihidroxicumarina o
esculetina (aglucona), unido por un enlace acetal o glucosídico.
La prueba se basa en demostrar si la bacteria es capaz de hidrolizar a la esculina. Si esto ocurre
la esculina se descompone en esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con el hierro
presente en el medio, formando un compuesto marrón oscuro, casi negro.
Esto quiere decir que el citrato férrico actúa como un revelador de la reacción. Esta
característica hace que el agar bilis esculina sea un medio diferencial.
Por su parte, la bilis es un inhibidor que impide el crecimiento de algunos microorganismos,
por tanto, la bacteria antes de desdoblar la esculina tiene que ser capaz de crecer en presencia
de la bilis. Por ello, este medio se considera selectivo.
Las bacterias que pueden desarrollarse en este ambiente son principalmente aquellas que viven
en el ambiente intestinal.
En este sentido, algunas casas comerciales adicionan al medio azida sódica para inhibir
adicionalmente el crecimiento de bacilos Gram negativos entéricos, aumentando la selectividad
 del medio para el crecimiento de Streptococcus.
Finalmente, el agar da la consistencia sólida al medio y el agua es el disolvente de los
compuestos.
 Preparación : Suspender 56.65 g del polvo en 1litro de agua purificada .Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar .Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver
completamente. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 °C durante
15 minutos. Distribuir en placas Petri.

 Utilidad: Agar Bilis Esculina se usa preferentemente para diferenciar

entre Enterococcus y Streptococcus. Los miembros del género Enterococcus son capaces de
crecer en presencia de un 4% de bilis (oxgall) e hidrolizar la esculina para
formar glucosa y esculetina. La Esculetina se combina con iones de hierro formando finalmente
un complejo de color negro.
En algunos casos, ciertas bacterias son capaces de hidrolizar la esculina. Una placa que
contenga esculina aparecerá fluorescente bajo luz ultravioleta. Algunas bacterias pueden
hidrolizarlo, produciendo colonias oscuras bajo luz ultravioleta, al contrario que las claras.
Cuando se descubren nuevas técnicas en la identificación de enterococos, normalmente se
comparan con el uso de la bilis esculina.

 Interpretación :
Positivo: se observa un oscurecimiento o ennegrecimiento del medio de cutivo.
Negativo : ausencia de oscurecimiento del medio de cultivo.

 Nombre del medio de cultivo : Agar Müller-Hinton.

 Composición química : Infusion de carne, peptona ácida de caseína,almidon y agar.
 Fundamento del medio : Por ser un medio nutritivo no selectivo es excelente para el
crecimiento de la mayoría de las bacterias patógenas.
Por otra parte, su composición simple hace que las sustancias difundan fácilmente sobre él,
siendo una característica esencial para la prueba de susceptibilidad por el método de difusión
en disco.
Otra de sus características es que contiene baja cantidad de inhibidores, lo que permite que
puedan evaluarse de manera efectiva las sulfonamidas, el trimetoprim y las tetraciclinas.
Sin embargo, se debe tener presente que el medio debe cumplir ciertas condiciones para
garantizar su buen funcionamiento, entre ellas:
El ajuste del pH, la profundidad del agar y la concentración adecuada de timina, timidina, Ca++,
 Mg++ y Zn++.
También hay que saber que la metodología está estandarizada y por tanto deben cumplirse todos
los parámetros, tales como:
La concentración del inóculo, la concentración y conservación de los discos de antibióticos, la
colocación del número adecuado de discos sobre el agar, la distancia entre un disco y otro, la
colocación estratégica de ciertos antibióticos, la atmósfera, la temperatura y el tiempo de
incubación.
 Preparación : Pesar 37 gr del medio Müeller Hinton deshidratado y disolver en 1 litro de agua
destilada. Calentar el medio mientras se agita para ayudar a su disolución. Dejar hervir por 1
minuto.Llevar al autoclave para esterilizar a 121°C por 15 minutos. Al sacar del autoclave, se
debe colocar la fiola en un baño de maría a 50°C para enfriar. Verter 25 a 30 ml en placas de
Petri estériles de 10 cm de diámetro.Las placas deben quedar con un grosor promedio de 4 mm
(ideal), siendo permitido un rango de 3-5 mm.Si se desea preparar agar sangre usando como
base agar Müeller Hinton, se vierte 5% de sangre de cordero estéril y desfibrinada antes de
servir en las placas.El pH final del medio debe quedar entre 7,2 a 7,4.
Invertir y guardar en nevera, hasta su uso. Dejar que la placa tome temperatura ambiente antes
de usar. El color del medio preparado es beige claro.
 Utilidad : Se utiliza para realizar el antibiograma o la prueba de susceptibilidad a los
antibióticos a la mayoría de los patógenos no exigentes de crecimiento rápido.
Si el agar es suplementado con sangre sirve para realizar el antibiograma de microorganismos
exigentes como: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, entre
otros. También ha sido utilizado para aislar Legionella pneumophila.
 Interpretación : Medir los halos de inhibición con un compás. Ver la tabla del MIC (Minimal
Inhibitory Concentration) del fabricante de los discos de antibióticos para establecer
correlaciones a la hora de decidir qué antibióticos son más recomendables en el tratamiento de
la enfermedad.

 Nombre del medio de cultivo : Agar BCYE

 Composición química : Carbón activado ,Extracto de levadura ,Agar Agar y Alfa-
ketoglutarato.
 Fundamento del medio : El extracto de levadura sumistra proteína y otros nutrientes necesaros
para favorecer el crecimiento.L-cisteina, un aminoácido esencial, y pirofosfato férrico soluble
, un suplemento de hierro,se incorporan para satisfacer los requisitos nutritivos específicos de
las especies Legionella.Se añade alfa-cetoglutarato para estimular el crecimiento.El carbón
activado descompone el peróxido de hidrogeno, un producto de metabolismo toxico para las
especies Legionella , y también puede recoger dióxido de carbono y modificarl a presión
 superficial.

 Preparación :
Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada. Calentar hasta hervir para la total
disolución. Autoclavar a 121 ºC, 15 minutos. El color final del medio es negro. Enfriar a 45-50
ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-
200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con -ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina
y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina) ;
para el medio BCYE-Cys, añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605,
tampón ACES/KOH, ketoglutarato y pirofosfato férrico); y para el medio BCYE, no son
imprescindibles los antibióticos. Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté
a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible.
No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir
aún más Agar-agar (BCB006) para minimizar la friabilidad del agar, si se va a sembrar con asa
(aceptado en ISO 11731).
 Utilidad : Se utiliza para el aislamiento primario y cultivo de Legionella pneumophila y oras
especies Legionella a partir de muestras ambientales y clínicas.
 Interpretación :Después de una incubación suficiente , las placas deben mostrar colonias
aisladas en áreas extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa. Legionella
pneumophila produce colonias de pequeñas a grandes, lisas ,de incoloras a pálidas , de color
gris azulado y ligeramente mucoides .Consultar las referencia para obtener información acerca
de la morfología , la presencia y el color de la fluorescencia, etc, de otras especies. Realizar
tinción de Gram , pruebas bioquímicas y procedimientos serológios para confirmar los
resultados.

 Nombre del medio de cultivo : Infusión de cerebro y corazón (o HBI, Brain Heart
Infusion).
 Composición química : Cloruro sódico, Fosfato disodico,Glucosa, infusión de cerebro de
vacuno, infusión de corazón de vacuno y proteasa peptona.
 Fundamento del medio : La infusión de cerebro y corazón ha resultado ser efectiva en el
cultivo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos muchos tipos de patógenos. Se
ha utilizado como medio base para las nuevas fórmulas de medios de cultivo cuando se
suplementa con sangre o agentes selectivos. Brain Heart Infusion (BHI) Agar sin suplemento
se recomienda actualmente como medio universal para bacteriología aerobia y para la
recuperación primaria de hongos y Actinomycetales a partir de muestras clínicas y no clínicas1-
5. BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar obtiene los nutrientes de la infusión de cerebro y
 corazón, la peptona y la glucosa. Las peptonas y la infusión son fuentes de nitrógeno orgánico,
carbono, azufre, vitaminas y sustancias de traza. La glucosa es la fuente de carbohidratos que
los microorganismos utilizan mediante fermentación. Se utiliza fosfato disódico como tampón
en el medio.
 Preparación : Extender la muestra tan pronto como sea posible después de recibirla en el
laboratorio, mediante un asa de inoculación estéril para obtener colonias aisladas. Consultar las
referencias correspondientes para obtener información acerca del procesamiento e incubación
de muestras2,3,5. Para el aislamiento de hongos de muestras potencialmente contaminadas, se
debe inocular un medio selectivo junto con uno no selectivo. Incubar las placas a 25 – 30 °C en
posición invertida con humedad aumentada. Para el aislamiento de hongos que causan micosis
sistémicas y el aislamiento de Actinomycetales aerobia, deben inocularse dos conjuntos de
medios: uno debe incubarse a 25 – 30 °C y el otro equivalente, a 35 – 37 °C. Según el
diagnóstico clínico y los agentes presuntivos causantes de la infección, deben incluirse otros
medios. Todos los cultivos deben examinarse al menos semanalmente para detectar crecimiento
y deben mantenerse durante varias semanas antes de notificarlos como negativos.
 Utilidad : es un medio de uso general adecuado para el cultivo de una amplia variedad de tipos
de organismos, incluidos las bacterias, levaduras y hongos filamentosos, a partir de muestras
clínicas.
 Interpretación : Después de una incubación suficiente, las placas deben mostrar colonias
aisladas en áreas extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa. Examinar
si las placas presentan colonias fúngicas y/o bacterianas con color y morfología características.
Se deben realizar pruebas bioquímicas y/o procedimientos microscópicos y serológicos para
confirmar los resultados. Consultar las referencias correspondientes para obtener más
información

 Nombre del medio de cultivo : Agar Hektoen entérico

 Composición química : proteosa peptona, extracto de levadura,sales biliares
,lactosa,sacarosa,salicina,cloruro de sodio, tiosulfato de sodio, citrato de hierro y amonio ,azul
de bromotimol, fucsina ácida y agar.

 Fundamento del medio :

El agar Hektoen contiene peptonas y extracto de levadura como fuente de nutrientes,
proporcionando los elementos esenciales para el desarrollo microbiano.

Sin embargo, también posee sales biliares que actúan inhibiendo el crecimiento de algunas
bacterias, especialmente Gram positivas y algunas Gram negativas. Es por este motivo que se
 considera un medio selectivo.

Por otra parte, el agar Hektoen es un medio diferencial. Esta propiedad es conferida por la
presencia de carbohidratos fermentables como la lactosa, la sacarora y la salicina, junto al sistema
indicador de pH, representado por el azul de bromotimol y la fucsina ácida.

Todas las bacterias capaces de crecer en este medio que no pertenezcan al género Salmonella y
Shigella desarrollarán colonias de color salmón o naranja a excepción del género Proteus. Esto
se debe a la fermentación de uno o varios de los carbohidratos presentes, lo cual acidifica el
medio, lo que hace virar al indicador de pH.

Por su parte, el género Shigella y Salmonella no son capaces de fermentar a ninguno de los
carbohidratos presentes, utilizando únicamente a las peptonas como fuente de energía, lo que
alcaliniza el medio y por ello sus colonias son verde-azuladas.
También en este medio se pueden distinguir las bacterias capaces de formar sulfuro de hidrógeno
(gas incoloro). El tiosulfato de sodio actúa como fuente de sulfuro mientras que el citrato de
hierro es el agente revelador. Ambos compuestos hacen posible la formación de un precipitado
negro de sulfuro de hierro que evidencia la reacción.

El precipitado negro en el centro de la colonia con un halo transparente alrededor da un aspecto

de ojo de pescado. Esta característica sugiere la presencia del género Salmonella.

Finalmente, el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico y el agar brinda la consistencia

sólida al medio.

 Preparación: Suspender 76 g del polvo en 1 litro de agua purificada .Dejar reposar de 10 a 15

miutos .Calentar con agitación frecuente y hervir hasta lograr una disolución completa.No
esterilizar en autoclave.Enfriar y distribuir en placas Petri estériles.
 Utilidad :Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento e Salmonella
spp y Shigella spp. A partir de heces y alimentos.
 Interpretación : Se debe determinar la fermentación de lactosa y la producción de SH2.
Microorganismo fermentadores de lactosa :colonias amarilla o anaranjadas.
Microorganismo no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio verde-azuladas.
Microorganismos productores de SH2 : Colonias con centro negro.

CONCLUSIONES
  Se logró conocer la preparación, esterilización y distribución de los medios de cultivo.
 Se pudo identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.
 Se logró adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparación del medio de
cultivo utilizando los protocolos establecidos en el laboratorio de microbiológica.
 Se pudo adquirir práctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de sus
componentes individuales.
 Se pudo reconocer la necesidad de evitar la contaminación tanto de los medios de cultivo como
de los demás elementos utilizados en el laboratorio de microbiología.

BIBLIOGRAFIA

Microbiología medica
https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28273706e44.pdf

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http://fsoria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/PLACAS%20DIFCO%20Y%20CROMOGENICA
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https://www.lifeder.com/agar-cled/#Interpretacion

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http://fsoria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/PLACAS%20DIFCO%20Y%20CROMOGENICA
S%20BD/FT%20NEW%20YORK%20CITY.pdf

https://en.wikipedia.org/wiki/New_York_City_agar#Procedure
http://winklerltda.cl/quimicav2/wp-content/uploads/2018/12/638160-FT-Thayer-Martin-P05.pdf

https://www.lifeder.com/agar-thayer-martin/

https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/Agar-Thayer-Martin-55mm.pdf

ANEXOS

Fotos previas de la preparación de medios de cultivos realizados en la escuela de Farmacia y Bioquimica en la

Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
Primeramente se procedió a limpiar las placas Petri , posteriormente se seleccionó las más limpias y se
procedió a envolver con papel kraff para finalmente llevarlas a la estufa donde estuvieron por 2 horas .

Después de sacarlas de la estufa procedio a separa las placas Petri para poder llenarlas de los medios de
cultivo.

Por otra parte preparamos las soluciones de cada medio de cultivo seleccionado para cada grupo de alumnos.
Según las condiciones que puso el fabricante y realizando una regla de tres.
Posteriormente para tener una solución homogénea se paso a una cocina eléctrica para calentar y moviendo de
rato en rato el matraz.

Seguidamente se pasó a maquina y después de ello se proceido a llenar las placa Petri con sus medios de
cultivo correspondientes (Como se muestra en la pizarra)
Después de llevar las placas Petri al refrigerador se procedió a realizar los medio de diferenciación