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GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE

LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA
LABORATORIO, TALLER O CAMPO DCVI-GS-v3-2018-001 LABORATORIO, TALLER O CAMPO DCVI-GS-v3-2018-001
CÓDIGO: CÓDIGO:
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DEPARTAMENTO: CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA  Identificar y diferenciar mediante observación microscópica tamaño, forma y estructuras de las células sanguíneas
PERIODO 201950 PREGRADO. S-I. (leucocitos, glóbulos rojos, plaquetas), comparándolas con una galería de imágenes desde bibliografía confiable.
ASIGNATURA: SISTEMAS BIOLÓGICOS NIVEL: 1
LECTIVO: MARZO - JULIO 19  Emplear correctamente colorantes, reactivos y materiales para fijación y tinción de células sanguíneas, respetando normas de
DOCENTE: LOURDES KARINA PONCE LOAIZA NRC: 5367, 5369, 5372, 5373 PRÁCTICA N°: 8 bioseguridad y el medio ambiente.
LUGAR DE LA PRÁCTICA: DOCENCIA DE BIOTECNOLOGÍA. PLANTA BAJA. BLOQUE G.  Evaluar con criterio y en forma grupal, la información investigada acerca de las células sanguíneas.
IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA DE CÉLULAS SANGUÍNEAS (EUCARIOTES) A PARTIR DE  Compartir los resultados obtenidos entre los compañeros de la clase y los demás paralelos.
TEMA DE LA
MUESTRAS TOMADAS DE LA PUNCIÓN DEL DEDO PULGAR, UTILIZANDO TINCIÓN GIEMSA Y  Mantener correctamente el cuaderno de laboratorio con investigación científica actualizada de la práctica y sus resultados.
PRÁCTICA:
WRIGHT.  Realizar apropiadamente registros fotográficos y/o videos de resultados en red social para la asignatura, cuaderno de laboratorio
INTRODUCCIÓN: y aula virtual.
El cuerpo humano tiene alrededor de 5 litros de sangre, que consiste de tres tipos de células suspendidas en el plasma y se  Redactar correctamente un informe con uso de método científico en base a la práctica de laboratorio.
componen en la médula ósea, los glóbulos blancos o leucocitos son las células del sistema inmunitario, eritrocitos o glóbulos rojos MATERIALES:
transportan el oxígeno y las plaquetas o trombocitos se encargan de la coagulación (Reece, Taylor, Simon, Dickey, 2012; Madigan, REACTIVOS: Colorante Giemsa, Wright, metanol, INSUMOS: Placas portaobjetos, pipetas desechables, vasos de
Martinko, Parker, 2012; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008). agua destilada, alcohol antiséptico (nuevo). precipitación 500 mL y 100 mL, pisetas, bandeja para depositar colorantes,
La sangre es un tejido renovable con funciones necesarias para la vida lancetas, vasos de coplin, papel especial para limpieza de microscopios,
como la defensa ante infecciones, intercambios gaseosos y MATERIALES DE PROTECCIÓN PERSONAL: torundas de algodón, papel toalla, recipiente para cortopunzante,
distribución de nutrientes, ante determinadas situaciones de salud, Mandil, guantes, mascarillas. recipiente estéril para torundas, goteros.
puede aumentar su producción, por ejemplo, ante una hemorragia EQUIPOS: Microscopios ópticos de campo claro (lentes objetivos 4, 10 y 40x).
aumenta la producción de glóbulos rojos y ante una infección aumenta MUESTRA: Gota de sangre obtenida de la punción del dedo pulgar de cada estudiante.
la producción de glóbulos blancos (Alberts et al., 2008). Organismos: Estudiantes de la clase de Sistemas biológicos.
Los glóbulos rojos o eritrocitos, cuya estructura se adapta a su función INSTRUCCIONES:
principal, que es llevar el oxígeno, son pequeños discos bicóncavos,  Revisar los libros e información subidos al aula virtual.
una cantidad baja de hemoglobina o un número bajo de glóbulos rojos  Obtener y resumir información en el cuaderno de investigación sobre los temas planificados: Células sanguíneas y su
representa una condición de anemia (Reece et al., 2012). clasificación. Al mismo tiempo contestar en redacción el siguiente cuestionario: ¿Qué son las células sanguíneas?, ¿Qué forma
Los glóbulos blancos o leucocitos destruyen los agentes infecciosos y tienen las células sanguíneas?, ¿Qué tamaño tienen las células sanguíneas?, ¿Qué organelos presentan las células sanguíneas y
células infectadas, segregan sustancias de protección como los cuáles puede observar al microscopio?, ¿Cuáles son las funciones de las células sanguíneas?, ¿Existe diferencia entre una tinción
anticuerpos, que combaten las infecciones, el conteo normal de y otra?, ¿En qué ocasiones se presentan un mayor o menor número de determinado grupo de células sanguíneas?, ¿Por qué el
leucocitos está entre 4.500 y 11.500 células por mm³ (o microlitro) de hombre tiene un número mayor de eritrocitos que la mujer?, ¿Cuál es el glóbulo blanco que se encuentra con mayor frecuencia en
sangre; según sus características microscópicas al ser teñidos, se una muestra normal de sangre?, ¿Cuál es la razón del incremento de leucocitos en la sangre durante una infección?, ¿Por qué los
dividen en (Tortora, Funke, Case, 2013; Madigan, Martinko, Parker, eritrocitos no poseen núcleo?, ¿Qué diferencias existen entre los leucocitos y eritrocitos?, ¿Para qué sirve la fijación de muestras
2012; Alberts et al., 2008; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008; con métodos químicos?, ¿Cuáles son los leucocitos granulares y agranulares?, ¿Cuántos lóbulos tienen los núcleos de los
Benson, 2001): neutrófilos, eosinófilos y basófilos?, ¿Cuál es la función de la tinción Giemsa y Wright utilizada en la práctica de laboratorio?, ¿las
 Los agranulocitos o células monomorfonucleares: linfocitos y tinciones utilizadas son simples o diferenciales?
monocitos; carecen de gránulos en el citoplasma con un núcleo  Graficar las formas y estructuras de células sanguíneas (eucariotes).
redondeado.  Graficar una célula animal señalando sus organelos y respectivas funciones.
 Los granulocitos o células polimorfonucleares: son los neutrófilos, Tomado de Reece et al., 2012
 Pegar o transcribir los objetivos y procedimiento de esta guía de laboratorio.
basófilos y eosinófilos; poseen un núcleo polimorfo y numerosos
 Depositar mochilas u otro en los lugares destinados a la entrada de los laboratorios de docencia.
gránulos en su citoplasma.
 Portar mandil manga larga con puño y cerrado, mascarilla, guantes, zapatos cerrados, pantalón, cabello recogido, cuaderno y
 Basófilos: entre 0,1 y 1,5 células por mm³, (0,2-1,2 % de los leucocitos), intervienen en el proceso de la inflamación, poseen un
esferos.
núcleo frecuentemente cubierto por gránulos.
 Ingresar al laboratorio con tiempo antes de la hora asignada, ya que, la clase empieza puntualmente.
 Eosinófilos: entre 50 y 500 células por mm³ (1-4 % de los leucocitos), aumentan en enfermedades producidas por parásitos, en
 Un estudiante según planificación realiza una exposición de 10 minutos (Células sanguíneas) para dar inicio a la introducción,
las alergias y el asma, su núcleo, característico, posee dos lóbulos también se las llama "células en forma de antifaz".
discusión y análisis del tema.
 Neutrófilos, entre 2.500 y 7.500 células por mm³, son los más numerosos, ocupando entre un 55 % y un 70 % de los leucocitos,
 Verificar que la bitácora correspondiente a cada microscopio esté junto con el equipo o en su defecto tomarla de las repisas
fagocitan sustancias extrañas, en infecciones aumenta en número, su núcleo posee de 3 a 5 lóbulos.
destinadas para estas.
 Linfocitos: entre 1.300 y 4000 por mm³ (24 % a 32 % del total de glóbulos blancos), aumentan sobre todo en infecciones virales y
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
enfermedades neoplásicas (cáncer) y pueden disminuir en inmunodeficiencias.
Toma de muestra y preparación de frotis
 Monocitos: entre 150 y 900 células por mm³ (2 % a 8 % del total de glóbulos blancos), aumentan en infecciones por virus o
1. Limpiar una placa porta objetos con papel toalla y alcohol antiséptico.
parásitos, tumores o leucemias, tienen núcleo en forma de riñón.
2. Rotular la placa y no confundirla.
La presente práctica tiene como objetivo principal: Identificar microscópicamente las células sanguíneas (eucariotes) a partir de
3. Con una torunda de algodón y alcohol antiséptico (nuevos) limpiar el dedo pulgar.
muestras tomadas de la punción del dedo pulgar, utilizando tinción Giemsa y Wright.
4. Sacar una lanceta estéril de su estuche y proceder inmediatamente a pinchar firmemente el dedo pulgar.
OBJETIVOS:
5. Depositar una gota de sangre en el extremo de la placa portaobjetos limpia y nueva.
 Definir con criterio los pasos necesarios para realizar el experimento en forma individual y grupal. 6. Limpiar el dedo con alcohol antiséptico, si necesita utilizar una banda adhesiva (curita) en su dedo, solicitar una.
 Manipular material estéril para toma de muestras de sangre, respetando normas de bioseguridad y el medio ambiente. 7. Desechar la lanceta en el recipiente cortopunzante y la torunda en el basurero: funda roja, riesgo biológico.
 Realizar adecuadamente un frotis con la muestra seleccionada. 8. Con otra placa portaobjetos en forma inclinada (ángulo de 45º), extender la gota de sangre hacia el lado contrario de forma
 Aplicar fijación de muestras con el método químico (metanol), utilizando fundamento científico. firme y rápida.
 Discutir sobre la función de la tinción Giemsa y Wright utilizando bibliografía confiable. 9. Eliminar la placa con la realizó el barrido en el recipiente cortopunzante (riesgo biológico).
 Manipular correctamente el microscopio óptico de campo claro para la observación de células, siguiendo normas universales. 10. Cubrir la muestra totalmente con varias gotas de metanol para fijarla (método físico). Tener cuidado de no inhalarlo.
CÓDIGO DE DOCUMENTO: DCVI-v3-2018-001 REV. UPDI: F.MORENO CÓDIGO DE DOCUMENTO: DCVI-v3-2018-001 REV. UPDI: F.MORENO
CODIGO: FRM.7.3.001 FECHA: 21-12-2018 CODIGO: FRM.7.3.001 FECHA: 21-12-2018
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11. Dejar al aire libre para que se seque, durante 3 a 5 minutos.  Portar siempre el mandil cerrado.
12. Proceder con la tinción seleccionada.  Usar guantes y mascarilla para teñir las muestras.
13. Eliminar los guantes en el basurero con funda roja, riesgo biológico y cambiarse de guantes si es necesario.  Sacarse los guantes si desea abrir la puerta y/o manipular el celular.
 Usar correctamente los recipientes de desecho común e infeccioso: cortopunzantes (portaobjetos con muestras de
Tinción Giemsa sangre rotos o no, hisopos y/o palillos).
1. Teñir la muestra, cubriéndola totalmente con 1 o 2 gotas de colorante Giemsa, durante 5 minutos (mantener la placa sobre la  Lavar el material utilizado con detergente.
bandeja o cubeta para depósito de colorantes), o depositarla en un vaso coplin con colorante.  Limpiar los mesones con savlon diluido.
2. Enjuagar con agua destilada (piceta), desde el borde de la placa portaobjetos, depositando el exceso de colorante dentro de la  Lavarse las manos con jabón.
bandeja para este fin o depositar la placa en un vaso coplin con agua destilada.
 Asegurarse de que todos los materiales y equipos estén limpios y en completo orden para poder salir.
3. Secar la placa al aire libre o con papel toalla.
 Si son paralelos de la tarde colocar las bitácoras en la repisa respectiva, depositar todos materiales en la canasta destinada,
4. Observar en el microscopio óptico con los objetivos: 4, 10 y 40x e identificar las células sanguíneas.
cerrar las ventanas.
5. Eliminar la placa en el recipiente cortopunzante (riesgo biológico).
BIBLIOGRAFÍA:
Tinción Wright  Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of The cell. Garland Science. Fifth
1. Teñir la muestra, cubriéndola con 1 o 2 gotas de colorante Wright, durante 30 segundos a 1 minuto (mantener la placa sobre la edition. U. S. A. Pág: 1450- 1452.
bandeja para depósito de colorantes).  Benson. 2001. Microbiological applications. Laboratory Manual in general microbiology. Editorial interamericana Mc. Graw Hill.
2. Añadir a la placa agua destilada en la misma cantidad que se añadió Wright, dejar actuar durante 1 minuto. Eighth edition. U. S. A. Pág: 483 - 488.
3. Enjuagar con agua destilada desde el borde de la placa portaobjetos.  Mader, S., 2013. Laboratory Manual to accompany Biology. Mc Graw Hill. Eleventh edition. USA.
4. Secar la placa al aire libre o con papel toalla.  Madigan, M., Martinko, J., Parker. Brock Biología de los microorganismos. 2004. Pearson Prentice Hall. Décima edición, España.
5. Observar en el microscopio óptico con los objetivos: 4, 10 y 40x e identificar las células sanguíneas. Pág: 749 - 750.
6. Eliminar la placa en el recipiente cortopunzante (riesgo biológico).  Madigan, M., Martinko, J., Parker. 2012. Biology of microorganisms. Pearson Prentice Hall. Thirteeth edition, USA. Pág: 839
RESULTADOS OBTENIDOS:  Salomon, E. P., Berg, L., Martin, D., 2008. Biología de Villée. Editorial interamericana Mc. Graw Hill. Octava edición. España.
 Identificación microscópica de células sanguíneas, utilizando los lentes objetivos 4, 10 y 40x. Pág. 873 – 878.
 Gráficos o fotos con identificación microscópica, especificando el lente objetivo del microscopio y tinción utilizada.  Sigma-Aldrich. 2010. Tinción Giemsa Accustain, Procedimiento número GS-10. Alemania
CONCLUSIONES: http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/General_Information/1/insert_es_gs10.Par.0001.File.tmp/insert_es_gs10.pdf
Al final de la práctica el estudiante:  Sigma-Aldrich. 2010. Tinción Wright Accustain, Procedimiento número WS. Alemania
 Manipula material estéril para la toma de muestras de sangre, respetando normas de bioseguridad. (http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/General_Information/1/insert_es_ws.Par.0001.File.tmp/insert_es_ws.pdf).
 Adquiere destrezas en la preparación de muestras al realizar, un frotis correctamente.  Tortora, G., Funke, B., Case, Ch. 2013. Microbiology. An introduction. Pearson. Eleventh edition. U. S. A. Pág: 456 - 457.
 Define con criterio los pasos necesarios para realizar el experimento en forma individual y grupal.  Universidad de Cartagena. Laboratorio No. 4. Observación de células animales. Colombia.
 Aplica adecuadamente fijación química de la muestra utilizando metanol. (http://www.unicartagena.edu.co/librose/LABORATORIO%20No%204%20Observaci%C3%B3n%20de%20c%C3%A9lulas%20anim
 Distingue apropiadamente la función de los colorantes: Giemsa y Wright. ales.pdf)
 Emplea correctamente colorantes y materiales de laboratorio, respetando normas de bioseguridad. • Reece, J., Taylor, M., Simon, E., Dickey, J. 2012. Campbell Biology. Concepts & Connections. Pearson, Seventh edition. USA. Pp
 Adquiere destrezas en el uso del microscopio óptico de campo claro, al realizar observaciones con los lentes objetivos 4, 10 y 52-56.
40x, respetando normas universales. • Willey, J., Sherwood, L., Woolverton, C. 2008. Microbiología de Prescott, Harley y Klein. Mc. Graw Hill, Séptima edición. España.
 Maneja adecuadamente la bitácora correspondiente a cada microscopio. Pág: 744 – 745.
 Identifica y diferencia forma, tamaño y estructuras de células sanguíneas (eucariotes), comparándolas con bibliografía AUTORÍA DE GUÍAS PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO: Lourdes Karina Ponce Loaiza y María Fernanda Loayza Villa
confiable. (Docentes de la Carrera de Ingeniería en Biotecnología - Universidad de las Fuerzas Armadas - ESPE). Modificado: 21/05/2019.
 Analiza e interpreta adecuadamente los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio. FIRMAS
 Plantea y responde con criterio preguntas acerca de las células sanguíneas y observaciones obtenidas.
 Comparte los resultados obtenidos entre todos los miembros de la clase, incentivando el compañerismo y trabajo en equipo.
 Realiza registros de sus resultados tomando fotos y/o videos que serán compartidas en red social entre todos los estudiantes Nombre: KARINA PONCE LOAIZA M. S. Nombre: VALERIA OCHOA M. S. Nombre: PATRICIA JÍMENEZ PH. D.
de la asignatura.
DOCENTE DE LA CARRERA COORDINADOR DE ÁREA DE JEFE DE LABORATORIOS
 Respeta plazos de tareas programadas al cumplir con un control de lectura, investigación en el cuaderno de laboratorio. INGENIERÍA EN BIOTECNOLOÍA CONOCIMIENTO MULTIDISCIPLINARIOS
 Asiste puntualmente a clases.
 Realiza una exposición del tema investigado, respetando la propiedad intelectual, utilizando tecnología, comunicación oral
adecuada, bibliografía actual y confiable.
 Maneja adecuadamente el cuaderno de laboratorio con la investigación programada y los resultados obtenidos en la práctica.
 Desarrolla sus actividades dentro de la clase con honestidad, respeto, disciplina y responsabilidad.
 Retroalimentación de informes de laboratorio.
 Planifica la siguiente clase e investigación: Organelos de células vegetales (plastos y vacuolas), estomas, fotosíntesis y
transporte de membranas.
RECOMENDACIONES:
 Anotar cada uno de los detalles del proceso de la práctica y resultados obtenidos.
 Graficar los resultados en su cuaderno, señalando: identificación, muestra, estructuras, lente objetivo, detalles u otros.
 Tomar fotografías desde el ocular del microscopio para subirlas por equipo de trabajo en el grupo Facebook.
CÓDIGO DE DOCUMENTO: DCVI-v3-2018-001 REV. UPDI: F.MORENO CÓDIGO DE DOCUMENTO: DCVI-v3-2018-001 REV. UPDI: F.MORENO
CODIGO: FRM.7.3.001 FECHA: 21-12-2018 CODIGO: FRM.7.3.001 FECHA: 21-12-2018