LABORATORIO BIOQUIMICA PRACTICAS 2 Y 3

ELABORADO POR:

CARLOS ADRIÁN BEDOYA

AGELA MARIA CASTAÑO

YULY TATIANA HENAO CAICEDO

MARIA ISABEL ESCOBAR AGUDELO

TUTOR:

OBED SUAREZ

UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)

CEAD DOSQUEBRADAS

ADMINISTRACION EN SALUD

17 DE OCTUBRE DEL 2019

 INTRODUCCIÓN

La práctica de laboratorio introduce al estudiante en diferentes procedimientos bioquímicos

experimentales, como el análisis de macromoléculas de carbohidratos, lípidos, proteínas y

ácidos nucleicos. Además, la práctica de laboratorio busca familiarizar al estudiante con las

instalaciones también nos da la oportunidad de conocer las normas de seguridad y las

normas que se deben de tener en el laboratorio y como parte fundamental cumplir

meticulosamente con las medidas de seguridad tanto en comportamiento, accesorios como

guantes, gafas de protección, tapa bocas, bata larga, zapatos cerrados y pantalón.

En este laboratorio abordaremos las pruebas que nos permitan el estudio de las propiedades

bioquímicas de aminoácidos y de las proteínas y sus cambios.

 OBJETIVOS

• Realizar las reacciones propuestas en la guía de actividades

• Observar los cambios químicos en las reacciones

• Analizar las muestras finales de las reacciones

• Identificar las propiedades bioquimicas de los aminoacidos y las proteinas

Practica 2: PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS.

Reacción con la Ninhidrina

● En el tubo 1 se agregó una cantidad de 1.5 mL de Glicina al 1% y se mezcló con 2 mL de

solución de ninhidrina al 0.3%. En esta reacción se puede deducir que esta mezcla se

compone por aminoácidos libres, los cuales al ser calentados con la ninhidrina dan esta

coloración de violeta oscuro, debido a la formación de un producto de condensación entre

aminoácido y reactivo, con esta reacción se pueden identificar grupos aminos libres en

posición alfa.

● En el tubo 2 se agregó una cantidad de 1.5 mL de Arginina al 1% y se mezcló con 2 mL

de solución de ninhidrina al 0.3%. En esta reacción al igual que la anterior se pudo observar

que también está compuesta de aminoácidos libres los cuales al ser calentados con la

ninhidrina dan esta coloración de violeta oscuro, debido a la formación de un producto de

condensación entre aminoácido y reactivo.

● En el tubo de ensayo 3 se agregó una cantidad de 1.5 mL de Tirosina al 1% y esta se

mezcló con 2 mL de ninhidrina al 0.3%. Según lo observado, la reacción es una proteína

compuesta de prolina ya que después de pasar por un calentamiento, su color se volvió

rojizo.

● En el tubo de ensayo 4 se agregó una cantidad de 1.5 mL de albúmina al 1% y se mezcló

con 2 mL de ninhidrina al 0.3%. Se pudo observar que en esta reacción, aunque no esté tan

oscura al igual que las dos primeras se compone de aminoácidos libres, los cuales al ser

calentados con la ninhidrina dan esta coloración de violeta oscuro, debido a la formación de

un producto de condensación entre aminoácido y reactivo, con esta reacción se pueden

identificar grupos aminos libres en posición alfa.

● En el tubo de ensayo 5 se agregó una cantidad de 1.5 mL de triptófano al 1% y se mezcló

con 2 mL de ninhidrina al 0.3%. Esta mezcla después de calentarse dio como resultado un

color de amarillo fuerte expresando que puede ser hidroxiprolina o prolina.

Reacción de Biuret

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su

identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las

proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-

NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de

Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces

peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color

depende de la concentración de proteínas.

Color característico de una prueba positiva Biuret el color violeta claro.

Procedimiento.

Se preparan 4 tubos de ensayo con 1,5 ml Albumina, Tirosina, Glicina y Triptófano, luego

se agrega 1,5 de NaOH 3 N + 3 Gotas de sulfato cúprico al 1% a cada tubo de ensayo.

Después debemos agitar cada tubo de ensayo y observar los cambios que ha dado cada tubo

de ensayo.
 • Primer tubo de ensayo preparado con la Albumina se torna un color violeta suave

que nos estaría indicando la presencia de enlaces peptídicos y por ende el de

proteínas.

• En los tubos de ensayo como lo son Tirosina, Glicina y Triptófano se tornaron de un

color translucido celeste debido a la usencia de enlaces péptidos porque entre mayor

concentración menor presencia de proteínas.

Reacción Xantoproteica

Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico (tirosina,

fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos

también darán la reacción. La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo

o verde debido a la formación de nitrocompuestos.

Para el desarrollo de esta reacción la dividiremos en 3 pasos muy importantes los cuales

nos ayudaran a identificas los aminoácidos, para esta reacción utilizaremos 3 soluciones

diferentes las cuales son triptófano, fenilamina y albumina todas al 1%.

Primer paso: en cada solución agregamos 0,5 ml de ácido nítrico concentrado.

Podemos observar en el primer tubo de ensayo que es el triptófano que los aminoácidos se

encuentran presentes ya que se torna un color amarillo y naranja en el parte superior y más

oscura en la parte inferior que es en donde se encuentra la mayor concentración, con esta

reacción confirmamos la presencia de triptófano.

En el segundo tubo de ensayo con la solución de albumina podemos observar que la

solución se separa y se concentra un color amarillo claro en la parte de media donde hay

pocos aminoácidos y en la parte superior e inferior da blanca y transparente lo que nos dice

que la reacción fue negativa y que son otro tipo de aminoácidos diferentes al triptófano,

tirosina o fenilamina.

En la tercera muestra con fenilamina observamos que todavía no hay ningún tipo de

reacción entre las soluciones y se torna transparente.

Segundo paso realizamos el baño de las muestras en agua hirviendo durante 10 minutos
En la muestra con el triptófano que es el primer tubo de ensayo ya se torna un color naranja

oscuro dando positivo para la presencia de aminoácidos aromáticos.

En la muestra con la fenilamina todavía sigue con un tono transparente dando negativo para

la presencia de aminoácidos aromáticos.

En la muestra con la albumina podemos observar un color amarillo más oscuro a

comparación de la primera foto antes de hervir ya se visualiza de mejor manera la presencia

de aminoácidos.

Tercero y último paso dejamos enfriar 10 minutos y adicionamos amoniaco concentrado al

40%
Como análisis final las tres muestras en el primer tubo ensayo con triptófano se tornan dos

colores naranja oscuro y negro en la parte inferior dando positivo final para aminoácidos

aromáticos y dejando por debajo los aminoácidos azufrados.

En la segunda muestra con fenilamina observamos nuevamente transparente dando como

resultado la reacción negativa para otro tipo de aminoácidos.

En el último tubo de ensayo con albumina se define que son aminoácidos aromáticos en la

parte inferior de la muestra.

Reacción de Sakaguchi

Rotule tres tubos como Tirosina, albumina, emunción de huevo, agrego a cada tubo2 ml de

cada solución correspondiente , se enfría por diez min en un baño de a hielo, agrego un ml

de (NaOH), se enfría por diez min en un baño de a hielo, agredo dos gotas Alfa-Natal al

1%, se enfría por diez min en un baño de a hielo, agrego dos gotas de hipoclorito de sodio

al 10% a cada tubo, la mezcla se torna de color rosado claro la cual da positivo el grupo

guanidina, el color rosado marca la reacción positiva y se debe a la presencia del grupo

guanidina, caracteriza la arginina, cuando mesclamos arginina reacciona con la solución de

Alfa- Naftol en presencia de un medio alcalino formando una mezcla de color rosado, esto

quiere decir que es positiva.

Practica 3. BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

Reacción de Biuret

Este reactivo es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros

compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.

En el caso del color obtenido por la emulsión de huevo y la leche, quiere decir que sus

iones cúpricos en medio alcalino se complejan con los electrones no saturados de los

atomos de nitrogeno y oxigeno de los enlaces. La cantidad de color producido es

proporcional a la cantidad de proteínas. En el caso del primer y tercer tubo de ensayo, se

puede observar que estos no tienen presencia de proteínas, razón por la cual obtuvieron una

reacción incolora.

Paso a paso

Para el primer paso preparamos las 5 muestras en los tubos de ensayos el primer tubo con
solución de tirosina en el segundo tubo emulsión de huevo, el tercero con azúcar, el cuarto

con aceite vegetal y el quinto tubo con leche, cada uno con 3 ml de la solución

correspondiente.

Para el segundo paso a cada tubo de ensayo le agregamos 4 gotas de CuSO4 sulfató cúprico

al 1%

Para el tercer paso agregamos 2 ml de hidróxido sódico al 20% a cada solución y

posteriormente agitamos cada tubo y observamos los cambios.

Podemos observar que en los tubos de ensayo 2 y 5 se observa un tono violeta intenso y

claro dando positivo para la reacción de biuret identificando proteinas en estas dos

soluciones, el tubo de ensayo dos con la emulsión de huevo tiene una alta carga proteica
por tal motivo se observa una buena tonalidad del violeta ya que los enlaces peptídicos que

son los que unen los aminoacidos para formar los proteinas son bastentes. El tubo de

ensayo 5 con la leche muestra una tonalidad violeta clara dando también positivo para

proteinas no tan oscuro ya que el porcentaje proteico no es tan alto, mostramos su table

nutricional como evidencia de su carga proteica.

Leche tabla nutricional

En los tubos de ensayo 1 y 4 da una tonalidad azul clara y transparente dando negativo para

identificación de proteinas, quiere decir que no cuentan con enlaces peptídicos y tiene muy

pocos aminoacidos o no cuenta con estos.

En el tubo de ensayo 3 contamos con aceite vegetal a base de soya el cual nos da una

tonalidad amarilla clara en la parte superior y azul transparentosa en la parte inferior quiere

decir que es negativa la solución para proteína y polipéptidos, y su carga de aminoacidos es

muy baja eso quiere decir que en su tabla nutricional la soya es de muy bajo porcentaje

REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se

basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el

cual, al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.
Reacción de la leche y el huevo.

Se rotulan 5 tubos como tirosina, glucosa, emulsión de Huevo, Leche y Aceite de cocina;

añado 2ml de solución de Hidróxido Sódico al 20 % + 10 Gotas de Solución De Acetato de

Plomo al 5% se calientan los tubos hasta llegar al punto de ebullición, observo que cabios

han tenido los tubos de ensayo de Leche y Huevo.

Se tornan de color negruzco lo cual indica que se ha formado sulfato de plomo, utilizándose

el Azufre de los Aminoácidos.

Nutrición de la Leche
Reacción del Aceite

Se evidencia que el aceite se separa en 2 capaz están formadas casi de forma exclusiva por

triglicéridos en una cantidad mayor al 95% cuyo contenido es una molécula de Glicerol que

tiene tres acidos grasos esterificados que pueden ser de muy diversa longitud de cadena y

grado de instauración en estas otras moléculas:

Fosfolípidos

Carotenoides

Colesterol
Vitamina A, D, E K.

La capa pertenece al estado de cristalización alfa siendo su estabilidad en el orden que se ha

expuesto de mayor a menor habitualmente las formas beta hacen referencia cristales que se

han formado por la disminución rápida de la temperatura y con agitación produciendo

cristales pequeños y en gran numero quedaran una grasa muy clara. Cocina sana 2019

Información nutricional Aceite.

Reacción de Glucosa

Esta reacción es específica para azucares con grupos reductores libres, todos los

monosacáridos posen un grupo reductor libre. Se basa en la capacidad que tiene el

carbohidrato para reducir en un medio ambiente alcalino, esto se oxida y precipita

obteniendo una coloración positiva de la reacción, es decir por el contacto de azucares que

no reducen, no muestran ningún cambio y mantiene su color.

Reacción Tirosina

En la siguiente imagen se puede decir que al observar el tubo de ensayo de la tirosina no

muestra cambios por esta razón su color es igual y su forma.

 CONCLUSIONES

Este laboratorio practico se realizó para profundizar los conocimientos adquiridos a través

de las actividades propuestas a lo largo del curso en el que se aborda el tema de la

bioquímica que es la ciencia que estudia los componentes químicos de los seres vivos, en

este laboratorio pudimos conocer las proteínas ya que son parte el elemento más

imprescindible para la vida del ser humano.

Las actividades de laboratorio constituyen una parte importante del aprendizaje ya que en

ellas podemos ver y conocer las reacciones y cambios que se generan a lo largo de estos.

También el laboratorio nos da la oportunidad participar de forma individual y grupal

reconociendo y abordando las pruebas que nos permitan el estudio de las propiedades

bioquímicas de aminoácidos y de las proteínas y los cambios que se producen en cada una

de ellas.
 REFERENCIAS

Revista urbana de química (2013) Caracterización fisicoquímica y contenido de proteinas

de extractos fluidos del ostión de mangle (pp 5,8) Recuperado de:

https://www.redalyc.org/pdf/4435/443543737009.pdf

Emilio Fernández Reyes y Aurora Galván Cejudo (2008) Métodos para la cuantificación de

proteínas (pp 3,5) Recuperado de:

http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/acym/27_METODOS_PARA_LA_CUANTIFIC

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Mataix verdu, J, Proteínas (capitulo 5), hergon 2002.(pp 1,5) Recuperado de

http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/TP-

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Pagina web “La cocina sana” Recuperado de https://www.lacocinasana.com/buscar-

recetas#sort=position&sortdir=desc