Propagación y Micropropagación de Plantas

Fase 4 - Ensayo Micropropagación de Plantas

Presentado Por:

Clarenza Verónica Portilla

Código: 1.085.294.592

Grupo: 30161_7

Presentado A:

Oscar Eduardo Valbuena

Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD)

Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente ECAPMA

CEAD _Pasto

Octubre_ 2019
 Procesos de mejoramiento y transformación

Genética aplicada a la agricultura

La agricultura es una actividad fundamental para la humanidad; La producción agrícola

moderna es responsable del abastecimiento de alimentos y diversos recursos para el
uso de la humanidad, por tanto nuestro perfil profesional como agrónomos se orienta
en el aprovechamiento y aseguramiento de los recursos de manera eficiente. El curso
de propagación y micropropagación de plantas nos da las bases fundamentales y
específicas para planear, diseñar e implementar, diferentes sistemas y métodos de
propagación, orientados a la producción y al desarrollo sostenible y sustentable como
garantía de la seguridad alimentaria de las comunidades. Gracias a estudios se han
demostrado avances de la biotecnología vegetal, principal mente en la propagación de
especies vegetales; Para este propósito existe toda una tecnología biológica en
grandes laboratorios e invernaderos; a este sistema de propagación se le conoce como
micropropagación, que tiene como base principal el cultivo in vitro de tejidos vegetales,
una de las más importantes aplicaciones para la producción masiva de plantas.

Hoy en día se utilizan diferentes métodos de propagación, como lo es la propagación

sexual y la asexual, los cuales aplican diferentes técnicas que contribuyen a mejorar y
obtener nuevas plantas que produzcan mejor calidad de fruto, con mayores
rendimientos y más tolerancia a condiciones adversas y enfermedades.

Dentro de la propagación asexual encontramos la micropropagación, que tiene como

base principal el cultivo in vitro de tejidos vegetales, una de las más importantes
aplicaciones para la producción masiva de plantas de interés económico o biológico.

Según Ramos Amaya, J. E. (2012). La micropropagación es un sistema que a partir de

un segmento de una planta madre, da como resultado la propagación masiva de
plantas genéticamente idénticas, denominadas clones. Con esta biotécnica se
incrementa de forma exponencial el número de plantas en microexplantes menores a 1
cm de longitud o de diámetro, en los que se forman minúsculos brotes que se
desarrollan hasta la formación de plantas, mediante el fenómeno de la regeneración
vegetal. Lo anterior se explica debido a que las células vegetales son capaces de
generar una planta a partir de una célula, proceso conocido como “totipotencialidad”.

El cultivo in vitro de tejidos , significa cultivar algunas partes de las plantas llamados
“explantes”, como segmentos de hoja, tallo y raíces, u otros tejidos u órganos
vegetales, dentro de un frasco de vidrio en un ambiente artificial, en los que deben de
controlarse la asepsia, el crecimiento y el desarrollo de estos diferentes tejidos.
Salgado Garciglia (2011).

Fuente: cultivo in vitro de tejidos vegetales_ inta.gob.ar

Para lograr un cultivo in vitro de plantas, los tejidos y órganos (incluyendo semillas)
deben ser esterilizados de manera superficial (asepsia) y se cultivan en soluciones
nutritivas especiales, con frecuencia en medios solidificados con agar. A estos medios
de cultivo se le incorporan combinaciones adecuadas de auxinas y citocininas, dos de
las principales fitohormonas del crecimiento vegetal. Carrillo, E. L. (2005). Con la
aplicación de éstas sustancias y el cultivo controlado como el pH, la luz y la
temperatura, es posible reproducir todos los factores que puedan incidir en el
crecimiento y desarrollo de los tejidos o de las plantas in vitro.)

Según Ramos Amaya, J. E. (2012) El avance alcanzado por las ciencias biológicas ha
permitido en los últimos años el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular
como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente reproducir
todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las plantas. Este
principio general se aplica también al cultivo in vitro de plantas.

Reproducir en condiciones de laboratorio todos los factores que conforman el ambiente

de la planta en la naturaleza es técnicamente muy complejo. La composición del medio
depende de la especie vegetal y del tipo de cultivo que se requiere. Por esta razón se
realiza una simplificación de la realidad escogiendo aquellos factores que se puedan
mantener controlados.

Proceso de micro propagación

Para realizar el procedimiento se tiene en cuenta que el explante más usado para los
procesos de propagación in vitro son las yemas vegetativas de las plantas. Los frascos
que contienen las plantas se ubican en estanterías con luz artificial dentro de la cámara
de crecimiento, donde se fija la temperatura en valores que oscilan entre los 21 y 23°C,
además de controlar la cantidad de horas de luz. Ramos Amaya, J. E. (2012)

El laboratorio de micropropagación de tejidos vegetales debe contar con las

instalaciones, el equipo y los reactivos necesarios para realizar investigaciones en
diferentes tipos de plantas, permitiendo generar nuevos protocolos de
micropropagación de plantas in vitro, que logren una propagación masiva, libre de
enfermedades.

Las instalaciones del laboratorio

deben contar con:

- Área de oficinas

- Área de observación y examen

- Área de preparación de medios de

cultivos

- Área de lavado y esterilización

-Área de incubación o de
crecimiento in vivo,

- Área de flujos laminares o de transferencia

- Invernadero. Fuente: Ramos Amaya, J. E. (2012)

Materiales e Instrumentos para el cultivo in vitro

Balanza de precisión, autoclave, guantes, máscara, reactivos como sales minerales,
agar, sucrosa, antioxidantes, fitohormonas, desinfectantes como ácido hipocloroso,
alcohol etílico, soluciones jabonosas, agitador magnético, criba vibradora, cámara de
flujo laminar, vidriería.

Autoclave: recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético

que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o
una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la
presión y temperatura desarrollada en su interior.

Cámara de flujo laminar: es un recinto que emplea un ventilador para forzar el paso
de aire a través de un filtro de aire y que proporciona aire limpio a la zona de trabajo,
libre de partículas de hasta 0.1 micras. Este tipo de equipos se fabrican en forma
generalmente prismática con una única cara libre (la frontal) que da acceso al interior,
donde se localiza la superficie de trabajo, que normalmente permanece limpia y estéril.

Cámaras de cultivo: es un receptáculo diseñado para permitir el control de algunas

variables del ambiente físico. Se pueden controlar la temperatura, la iluminación y el
fotoperiodo y en algunos casos la humedad del aire y su composición.

Invernadero: es un lugar cerrado, estático y accesible a pie, que se destina a la

producción de cultivos, dotado habitualmente de una cubierta exterior translúcida de
vidrio o plástico, que permite el control de la temperatura, la humedad y otros factores
ambientales para favorecer el desarrollo de las plantas. es un lugar preparado
artificialmente para cultivar las plantas fuera de su ambiente y clima habituales.

Vidriería

Bureta: son tubos cortos, graduados, de diámetro interno uniforme, provistas de un

grifo de cierre o llave de paso en su parte inferior llamado robinete. Se usan para medir
con precisión volúmenes de líquido variables.

Pipeta: instrumento volumétrico de laboratorio que permite medir la alícuota de líquido

con bastante precisión. Está formada por un tubo transparente que termina en una de
sus puntas de forma cónica, y tiene una graduación (una serie de marcas grabadas)
indicando distintos volúmenes.

Probeta: Es un instrumento que se utiliza, sobre todo en análisis químicos, para

contener o medir volúmenes de líquidos de una forma aproximada. Es un recipiente
cilíndrico de vidrio con una base ancha, que generalmente lleva en la parte superior un
pico para verter el líquido con mayor facilidad.

El proceso de micropagacion de plantas lleva un proceso o fases para su adecuado

desarrollo o procedimiento los cuales consiste en las siguientes fases.

Fases para la micropropagación in vitro

0: Selección y Preparación de la
planta madre

Para obtener explantes sanos es

recomendable mantener a las plantas
madre, es decir la planta donadora de
yemas, durante un período de tiempo
que puede oscilar entre unas
Fuente: Biotecnología vegetal_ https://pt.slideshare.net semanas o varios meses en un
invernadero bajo condiciones controladas. En ese ambiente se cultiva la planta en
condiciones sanitarias óptimas y con un control de la nutrición y riego adecuados para
permitir un crecimiento vigoroso y libre de enfermedades.

1: Desinfección de las yemas de la planta y/o desinfección de semillas

Una vez elegida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los cuales se
obtendrán los explantes. Los explantes pueden ser yemas, trozos de hojas, porciones
de raíces, semillas, etc. Antes de extraer los explantes se hará una desinfección de los
fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Los
contaminantes más comunes son los hongos y las bacterias que habitan en forma
natural en el ambiente. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en
condiciones de asepsia. A efectos de obtener las condiciones de asepsia, se trabajará
en cabinas de flujo laminar para extraer los explantes a partir del material vegetal.
Estos explantes se introducirán en un tubo de cultivo conteniendo medio de iniciación
para poder controlar la sanidad y la viabilidad, luego de realizar la desinfección del
material con hipoclorito de sodio (agua clorada comercial), pura o diluída durante un
período de 5 a 15 minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en agua esterilizada.

2: introducción del material seleccionado in vitro

Luego de la desinfección superficial, las semillas o las yemas dependiendo del material
seleccionado, se ponen en medio de cultivo estéril. En un período de una semana o
quince días, comienza el proceso de germinación o regeneración de nuevos tejidos
vegetales, iniciando el ciclo de cultivo in vitro.

3: Multiplicación de brotes

Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron la FASE 1 y 2
originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas. En la base de
cada hoja hay una yema que se desarrollará luego de ser puesta en contacto con el
medio de cultivo. Periódicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un
nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes
adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar o en un lugar
aislado que nos permita mantener las condiciones de asepsia. De esta forma aumenta
el número de plantas en cada repique o división de las plantas. El número de plantas
que se obtiene dependerá de la especie vegetal y de las condiciones del medio de
cultivo. El número de plantas que se obtiene por la vía de la micropropagación permite
alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los factores que afectan
el crecimiento hayan sido optimizados.

4: Enraizamiento

Para enraizar los explantes se utilizan principalmente plantines individuales de un

tamaño aproximado de 2 centímetros. Los brotes obtenidos durante la fase de
multiplicación se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo
contenga hormonas del tipo auxinas. Algunas especies de plantas no necesitan pasar
por esta etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de cultivo donde desarrollan
yemas nuevas, por lo tanto el proceso de multiplicación y enraizamiento transcurren en
forma simultánea.

• 5: Aclimatación

Consiste en la adaptación de las nuevas plantas a condiciones naturales. Los explantes

recién enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, por tanto deben ser
aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo
progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad
de luz. Estos plantines se plantarán en contenedores (almacigueras) cubiertos por un
plástico, para mantener la humedad relativa elevada. Todos los días se debe controlar
el nivel de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se aplica un riego con una
pulverizadora manual, para mantener un ambiente húmedo a nivel del sustrato. A los
15 días del trasplante, se puede comenzar a levantar la cobertura de nylon en las horas
de menor calor (temprano en la mañana o en la última hora de la tarde). Al comienzo
las plantas se dejan media hora por día destapadas. A la semana siguiente se dejan
destapadas durante una hora. Al mes del trasplante, se dejan tapadas durante la noche
y si hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden permanecer destapadas. Las
condiciones del cultivo in vitro, generan cambios en algunos aspectos anatómicos y
fisiológicos de las plantas, por esta causa, durante la aclimatación, los cambios deben
ser muy graduales, para minimizar el estrés y tener mayor tasa de sobrevivencia.
Castillo, (2004)

De acuerdo con los estudios realizados se puede considerar que la micropagacion in

vitro es un método exitoso para la propagación masiva de diversas plantas. Este
sistema permite obtener plantas idénticas a las plantas progenitoras y además se
puede obtener un alto registro fitosanitario y libre de enfermedades, más sin embargo
debido a la sofisticada técnica este método es aplicado solo en laboratorios de
investigación o en grandes empresas que cuentan con recursos para el mantenimiento
del proceso, este método es justificable en plantas con reproducción natural difíciles,
plantas en peligro de extinción o plantas con alto valor agregado.
Referencias Bibliográficas

Carrillo, E. L. (2005). Auxinas. [Santa Fe, Argentina]: El Cid Editor. Recuperado

de http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=edsebk&AN=17
7657&lang=es&site=eds-live
Ramos Amaya, J. E. (2012). Avances de la micropropagación in vitro de plantas
leñosas. Recuperado
de http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=ir00913a&AN=u
nad.10596.2515&lang=es&site=eds-live
Valbuena, O (2019). Objeto Virtual de Información Unidad 3 Micropropagación.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia - Propagación y Micropropagación de
Plantas. Recuperado en http://hdl.handle.net/10596/23638
Saber más revista de divulgación de la universidad michoacana de San Nicolás de
Hidalgo_ Rafael Salgado Garciglia (2011).
https://www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/75-numero-10/153-la-propagacion-
de-plantas-in-vitro-un-exito-biotecnologico.html
Propagación de plantas por cultivo in vitro: una biotecnología que nos acompaña hace
mucho tiempo. Unidad de Biotecnología, INIA _ Alicia Castillo, 2004
http://www.inia.uy/Publicaciones/Documentos%20compartidos/111219220807102417.p
df