ARTÍCULOS DE PROFUNDIZACIÓN PARA EL SEMINARIO

ENTREGADO A
FRANYER STEVAN LOPEZ VALIENTE

KAREN CELENIA TORRES CAÑON

JUAN JOSÉ TORREZ VIRGUEZ

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
TUNJA
2019
 1. TITULO
Detection of Astroviruses, Enteroviruses, and Adenovirus Types 40 and 41 in Surface Waters
Collected and Evaluated by the Information Collection Rule and an Integrated Cell Culture-Nested
PCR Procedure
AUTORES
CHRISTOPHER D. CHAPRON, NICOLA A. BALLESTER, JUSTIN H. FONTAINE, CHRISTINE
N. FRADESA, ARON B. MARGOLIN
UNIVERSIDAD/LUGAR DE PROCEDENCIA
 Departamento de microbiología, universidad de New Hampshire, Durham.
RESUMEN DE LITERATURA
Las aguas superficiales y subterráneas siguen viéndose afectadas por Contaminación fecal
proveniente de una variedad de fuentes asociadas a los humanos en áreas rurales y urbanas.
Numerosos estudios han documentado la presencia de virus entéricos en tanto agua cruda como agua
potable tratada. En 1996, la ICR requirió que todas las empresas de servicios de agua que sirven a
más de 100,000 hogares monitoreen sus fuentes de agua para virus cada mes durante 18 meses. Según
el ICR, el total de virus cultivables tenía que ser detectado y enumerado por el ensayo de virus
cultivable total método de número más probable (TCVA-MPN). Este método detecta virus en base
a la expresión de citopático viral, sin embargo, el nivel total de contaminación viral se subestima
enormemente cuando la línea celular BGMK se usa sola. Varios de los virus entéricos, incluidos los
tipos de adenovirus 40 y 41, no producen CPE durante sus ciclos de replicación, mientras que otros
virus entéricos, como los astrovirus humanos, no pueden replicarse en la línea celular BGMK. Por lo
tanto, no se puede utilizar un sistema de cultivo celular único para todos los virus humanos entéricos.
Algunos virus entéricos humanos se replican en la célula sin producir CPE aparente y muchos de los
virus entéricos epidemiológicamente importantes no pueden ser propagado en cultivos celulares. Los
adenovirus, particularmente los tipos 40 y 41, son considerados como los segundo, después de los
rotavirus como las principales causas de gastroenteritis en niños. Estos virus epidemiológicamente
importantes no son detectados por el método TCVA-MPN, es por eso que en el presente artículo se
evalúa el uso de un procedimiento integrado de transcripción inversa de cultivo celular-PCR (ICC-
RT-PCR) junto con PCR anidada para detectar astrovirus humanos, enterovirus y adenovirus tipos 40
y 41 en muestras de agua superficial que se recolectaron y evaluaron mediante el método de la Regla
de recopilación de información (ICR).
Los resultados obtenidos con el método de PCR anidada ICC-RT-PCR se compararon con los
resultados obtenidos con el método de ensayo de virus cultivable total-número más probable (TCVA-
MPN) y el método recomendado por la Agencia de Protección Ambiental de EEUU para el monitoreo
de virus en aguas superficiales y acabadas, permitiendo obtener los siguientes resultados de las 29
muestras analizadas:
- Quince de las 29 muestras (51.7%) fueron positivas para astrovirus según lo determinado por
el método de PCR anidado ICC-RT-PCR, y ocho de estas muestras (27.5%) contenían
astrovirus infeccioso.
- Diecisiete de las 29 muestras (58,6%) fueron positivas para enterovirus cuando se utilizó la
línea celular BGMK, y seis (27,6%) de estas muestras se determinaron como infecciosas.
 - Catorce de las 29 muestras (48,3%) fueron positivas para los tipos de adenovirus 40 y 41, y
11 (37,9%) de estas muestras se determinaron como infecciosas.
- Veintisiete de las 29 muestras (93.1%) fueron positivas para un virus, y 19 (68.9%) de las
muestras fueron positivas para un virus infeccioso.
- Solo 5 de las 29 muestras (17.2%) fueron positivas según lo determinado por el método
TCVA-MPN, demostrando que el método de PCR anidado ICC-RT-PCR proporcionó una
mayor sensibilidad en comparación con el método TCVA-MPN.
CONCLUSIONES
El método de PCR anidado ICC-RT-PCR descrito aquí incluyó un ensayo de infectividad, un RT-
PCR sensible y un método anidado PCR para eliminar resultados falsos positivos, aumentando así las
señales de amplificación, y proporcionando un método con altos niveles de sensibilidad y
especificidad.
Ninguna línea celular es efectiva para todos los virus entéricos.
El presente estudio sugiere que el análisis de enterovirus por el método TCVA-MPN subestima en
gran medida las concentraciones de virus en muestras de agua superficial, los virus como los
adenovirus y los astrovirus pueden no detectarse si no se utilizan otros métodos de monitoreo para
las muestras.
El objetivo de este estudio fue desarrollar y determinar la efectividad de un Técnica de PCR anidada
ICC-RT-PCR para analizar la superficie de muestras de agua y comparar los resultados con los
resultados obtenido con la técnica ICR TCVA-MPN.
REFERENCIA
o Chapron D., Ballester N. A., Fontaine J. H., Fradesa C. N., y Margolin A. B. (2000).
Detection of Astroviruses, Enteroviruses, and Adenovirus Types 40 and 41 in Surface Waters
Collected and Evaluated by the Information Collection Rule and an Integrated Cell Culture-
Nested PCR Procedure. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, p. 2520–2525

2. TITULO
Evaluation of Human Enteric Viruses in Surface Water and Drinking Water Resources in
Southern Ghana
AUTORES
Kristen E. Gibson, Melissa C. Opryszko, James T. Schissler, Yayi Guo, Kellogg J. Schwab.
UNIVERSIDAD/LUGAR DE PROCEDENCIA
 Department of Environmental Health Sciences, Division of Environmental Health
Engineering, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health and the Johns Hopkins
Center for Water and Health, Baltimore, Maryland.
RESUMEN DE LITERATURA
Actualmente, millones de personas al rededor del mundo no cuenta con accesos a fuentes mejoradas
de agua potable, diferentes estudios estiman que aproximadamente una sexta parte de la población
mundial está expuesta microbiológicamente a la hora de acceder al recurso agua para cubrir fines
esenciales, presentando enfermedades infecciosas desencadenadas por animales entéricos (derivados
fecales), patógenos (Vibrio cholerae, Escherichia coli, Campylobacter y Salmonella), protozoos
(Cryptosporidium, Entamoeba histolytica y Cyclospora caryentensis) y virus (norovirus, enterovirus,
hepatitis A y E virus y rotavirus), dejando un saldo anual de 9400 muertes, 3.5 billones de episodios
diarreicos, donde la población más afectada son niños de países en desarrollo representando casi el
20% de las 10 millones de muertes totales en niños menores de 5 años cada año y poblaciones
ubicadas en las afueras de las grandes urbes, donde la capacidad de proporcionar un sistema
centralizado de agua potable se reduce drásticamente y la calidad microbiana en el agua es a menudo
desconocida. El presente estudio tiene como objetivo principal proporcionar una evaluación más
representativa de fuentes de agua disponibles en el sur de Ghana, con un enfoque en recuperación y
detección de virus entéricos del agua potable tratada que sale de los quioscos de agua, fuentes de agua
superficial y subterránea en seis aldeas rurales dentro del sur de Ghana, utilizando el método de
ultrafiltración de fibra hueca (UF), que permiten la recuperación de bacterias indicadoras de virus en
muestras de agua de 100 L, métodos moleculares que incluyen en tiempo real reacción en cadena de
la polimerasa (PCR) y transcripción inversa, aplicaron del PCR (RT-PCR) para la detección de virus
entéricos, incluidos el norovirus humano (HuNoV), enterovirus (EV), adenovirus humano (HuAdV),
poliomavirus humano (HuPyV) y el virus de la hepatitis E (HEV).
Dentro de los resultados se destacó la presencia de virus entéricos humanos, incluidos norovirus GI
y GII, adenovirus y poliomavirus, en cinco muestras diferentes, incluyendo una de agua subterránea,
tres de agua superficial y una de agua potable. Coliformes totales y Escherichia coli evaluada para
cada muestra antes y después de la UF reveló una falta de correlación entre los indicadores bacterianos
y la presencia de virus entéricos humanos. Además, se detalló que Las muestras de agua potable
tratadas de los quioscos de agua tenían niveles de turbidez más bajos, debido principalmente al uso
de un coagulante antes del tratamiento, así como a una serie de filtraciones técnicas durante el
tratamiento. La turbidez está regulada principalmente como un indicador de la efectividad de la
filtración; niveles más altos de turbidez podrían corresponden a la presencia de microorganismos
patógenos. Sin embargo, esta relación entre la presencia de patógenos y la turbidez elevada no
siempre es cierto, puesto que los niveles de nitrato se excedieron en siete (cuatro GW y tres SW)
muestras, seis muestras adicionales tenía niveles elevados (5–9.9 mg / L-N) de nitrato, incluidos dos
muestras de kiosco de agua indicando contaminación agrícola (es decir, escorrentía superficial de
fertilizantes nitrogenados inorgánicos) y contaminación fecal humana y animal, es decir, mala gestión
de aguas residuales y colocación inapropiada de letrinas de pozo.
En general, este estudio ha mostrado la aplicación de una metodología combinada de flujo tangencial
UF y PCR en tiempo real, como una técnica para ampliar la evaluación de la calidad microbiana de
agua subterránea, agua potable tratada y fuentes de agua superficial en comunidades rurales del sur
de Ghana. Hasta la fecha, estas técnicas de muestreo y detección no se han aplicado para evaluación
microbiana de muestras de agua de gran volumen en países en desarrollo.
CONCLUSIONES
En los casos en que se evalúan las fuentes mejoradas de agua, las bacterias indicadoras fecales se
basan principalmente en proporcionar información sobre la presencia de bacterias patógenas,
entéricas virus y protozoos.
El combinado Flujo tangencial UF y metodología de PCR en tiempo real aplicada en este estudio
permite una evaluación más representativa de Calidad microbiana del agua. Además, la capacidad de
analizar 100 L de agua dentro de un concentrado de 300 ml proporciona una imagen más completa
de la verdadera calidad del agua que un volumen más pequeño
Este estudio informa la detección de ARN viral entérico humano y ADN en GW, SW y DW tratado;
sin embargo, las implicaciones para la salud pública no están claras. A diferencia de los sistemas de
cultivo celular, la PCR en tiempo real y la RT-PCR no detectan infecciones partículas de virión, y
existe evidencia insuficiente con respecto a la estabilidad de la NA viral cuando se produce la
inactivación en el medio ambiente debido a diversos factores estresantes, incluida la luz ultravioleta
y cambios en los niveles de temperatura y pH.
El uso de un estándar interno de ARN o ADN durante la PCR y RT-PCR ha sido un método común
reportado para evaluar la inhibición de la muestra en entornos clínicos y ambientales complejos.

REFERNCIA
o Gibson K. E., Opryszko M. C., Schissler J. T., y Schwab K. J. (2011). Evaluation of Human
Enteric Viruses in Surface Water and Drinking Water Resources in Southern Ghana. Trop.
Med. Hyg., 84(1), pp. 20–29

3. TITULO
Presencia de virus entéricos en muestras de agua para el consumo humano en Colombia: desafíos
de los sistemas de abastecimiento.
AUTORES
Dioselina Peláez, Blanca Lisseth Guzmán, Johanna Rodríguez, Felipe Acero, Gerardo Nava.
UNIVERSIDAD/ LUGAR DE PROCEDENCIA
 Laboratorio de Virus Entéricos, Grupo de Virología, Subdirección Laboratorio Nacional de
Referencia, Dirección de Redes en Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Bogotá, D.C.
Colombia.
 Grupo de Salud Ambiental, Subdirección Laboratorio Nacional de Referencia, Dirección de
Redes en Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Bogotá, D.C., Colombia.
RESUMEN DE LA LITERATURA
El agua de consumo humano puede ser vehículo de transmisión de agentes patógenos. La detección
de virus entéricos en estas muestras de agua es esencial para establecer las acciones adecuadas de
control y prevención de las enfermedades asociadas, es por eso que le presente artículo tiene como
objetivo principal analizar los resultados del diagnóstico de virus entéricos en muestras de agua para
el consumo humano recibidas en el Instituto Nacional de Salud y establecer su asociación con los
datos sobre la calidad del agua en los municipios de Colombia. Para ello se hizo un análisis descriptivo
retrospectivo de los resultados obtenidos en la detección de rotavirus, enterovirus, virus de la hepatitis
A y adenovirus, en muestras de agua recibidas para estudios complementarios en la investigación de
brotes de hepatitis entérica, de enfermedad diarreica aguda y de enfermedades transmitidas por
alimentos. Dicha información se correlacionó con los datos de la vigilancia de la calidad del agua
municipal determinada según el índice de riesgo de la calidad del agua (IRCA), logrando obtener los
siguientes resultados; se procesaron 288 muestras de 102 municipios de Colombia, de las cuales el
50,7 % fue positivo para algún virus: 26,73 %, para el virus de la hepatitis A; 20,48 %, para
enterovirus y rotavirus, y 18,05 % para adenovirus. Se detectaron virus en 48,26 % de las muestras
de agua no tratada y en 45,83 % de las de agua tratada. El IRCA no mostró correlación con la
presencia de virus.
CONCLUSIONES
La presencia de virus en el agua representa un riesgo para la salud pública. La prevención de la
transmisión de virus por medio del agua requiere políticas para fortalecer los sistemas de suministro
y para mejorar la vigilancia epidemiológica.
REFERNCIA
o Pelaez D., Guzman L. G., Rodriguez J., y Nava Gerardo. (2016). Presencia de virus entéricos
en muestras de agua para el consumo humano en Colombia: desafíos de los sistemas de
abastecimiento. Biomedica (36), 169-78.

4. TITULO
A review on recent progress in the detection methods and prevalence of human enteric viruses in
wáter
AUTORES
o Eiji Haramoto, Masaaki Kitajima, Akihiko Hata, Jason R. Torrey, Yoshifumi Masago, Daisuke
Sano, Hiroyuki Katayama.

UNIVERSIDAD/LUGAR DE PROCEDENCIA
o Water Research
RESUMEN DE LA LITERATURA
El articulo hace una revisión de los métodos de detección de virus entéricos, y estudia los medios de
concentración de los virus y su prevalencia en cuerpos de agua contaminados con un potencial mayor
de infección para los seres humanos, y su aplicación para establecer controles para evaluar los tipos
de virus que se puedan presentar en el agua. Tomando en cuenta que la mayoría de estos virus se
encuentra en las heces fecales de los organismos infectados y se trasmiten vía oral-fecal, como
alimentos y agua contaminadas se vuelve de vital importancia la eliminación de esos virus para
reducir de forma eficiente los virus en el medio. Por esta razón, se han desarrollado estudios que
permiten la detección de virus enteritos en cuerpos de agua, empezando por determinar formas de
concentrar los virus, para mejorar los ensayos con los mismo, y así facilitar la detección de diversos
virus para su respectivo análisis, ha grandes rasgos son ampliamente utilizados tres métodos para la
concentración y detección de los virus: métodos de concentración de virus, métodos para concentrar
simultáneamente microbios múltiples y métodos de detección de virus. El primero estudia varios
métodos para la concentración del virus de acuerdo con el tipo de muestra, debido que las
concentraciones de estos son bajas en aguas superficiales se establecen parámetros en cuestión a
diferentes factores que influyen en la concentración del virus, como la calidad del agua, la cantidad
de las muestras, la cantidad de agua por tramo (en algunos casos <100mL o de 10 a 1000L), también
toma en cuenta que algunos métodos son mas eficientes para diferentes virus, las técnicas de
separación(pequeñas muestras), VIRADEL (grandes muestras). El segundo utiliza la ultrafiltración
con un solo filtro para obtener una mayor concentración molecular simultanea de diversos virus a
partir de una muestra de agua. Y por ultimo los métodos de detección más utilizados son de PCR y
qPCR, debido a que son bastante rápidos, se pueden adaptar para la detección de virus específicos y
son sensible a la forma de cultivo para la proliferación del virus, hay que tomar en cuenta que estos
métodos también tiene sus desventajas como el hecho de ser susceptibles a ciertas sustantivas
inhibidoras. Los controles para evaluar la eficiencia en la detección de virus, que consiste en
determinar la concentración del virus, la extracción de DNA Y RNA, y la realización de qPCR y de
esta forma determinar la concentración de los virus para la aplicación de medios eficientes de
eliminación en las plantas de tratamiento de aguas. Los controles internos- externos se clasifican en
tres tipos, los controles completos (WPC), concentrados (MPC) y controles (RT) qPCR que se
agregan o implementan es diferentes fases del proceso de concentración y detección de los virus. De
acuerdo con todos los resultados obtenidos de los métodos se puede estable y determinar la
prevalencia de los virus en organismos infectados y en los cuerpos de agua.

CONCLUSIONES
Del articulo se concluso que existen diferentes métodos para la concentración y detección de virus
como mecanismos de control. Cada método varia de uno a otros y no existe un método unificados
para la detección de virus entéricos, por tal razón es fundamental escoger uno de acuerdo con el tipo
de muestra que se tenga y los resultados que se quieran obtenerse de las pruebas, ya que ninguno de
los métodos es totalmente eficiente.
Dentro de los métodos, aquellos que son basados en qPCR son los más utilizados por que permite la
detección de genomas virales en muestras de aguas concentradas, pero tiene como defecto que en
algunos de los casos en susceptible a sustancias inhibidoras para PCR
Para el control y evaluación de estos procesos, se recomiendo como mínimos utilizar algunos de los
controles mencionados dentro del artículos el cada una de las fases de inoculación, para poder realizar
un mejor análisis de los resultados partiendo de las técnicas de concentración y procedimientos de
control aplicados
REFERENCIA
o HARAMOTO, Eiji, et al. A review on recent progress in the detection methods and
prevalence of human enteric viruses in water. Water research, 2018, vol. 135, p. 168-186.

5. TITULO
Enteric viruses in surface water and sediment samples from the catchment area of Peri Lagoon,
Santa Catarina State, Brazil
AUTORES
E. M. Elmahdy, G. Fongaro, C. D. Schissi, M. M. Petrucio and C. R. M. Barardi
UNIVERSIDAD/LUGAR DE PROCEDENCIA
 o Journal of Water and Health
RESUMEN DE LA LITERATURA
Este articula se centra en la recolección y análisis de muestras de aguas superficiales y sedimentos de
una laguna en Brasil y el rio de Sangradouri, para la identificación de virus perjudiciales para la salud
por medio de reacción en cadena de polimerasa (PCR) y la aplicación de varias técnicas, parta lo cual
se tomaron un aproximado de 50 muestras de 2 L de agua y 50 de sedimentos, en diferentes puntos
de control a lo largo del rio durante don temporadas del año (verano e invierno), de las cuales 17
fueron positivas para los análisis, para la obtención de resultados se realizó un análisis físico químico
de las muestras, la extracción de ácidos nucleicos virales, y una prueba de qPCR. De las 17 muestras
que salieron positivas 14 tenias presencia de microorganismos infecciosos, cabe resaltar que estos
resultados se obtuvieron en las muestras que se recolectaron en verano, para invierno los resultados
cambiaron circunstancialmente, 15 fueron positivas para los análisis, de las cuales solo 14
presentaban la presencia de virus. Tanto para las muestras de verano como a las de invierno se le
realizaron las mismas pruebas, para obtener resultados confiables.
CONCLUSIONES
Este tipo de estudios es de vital importancia, porque pueden indicar estudios para la salud pública, ya
que en la mayoría de las muestras se demostró la presencia de diferentes virus que son perjudiciales
para la salud, no solo de virus entéricos, también de adenovirus, rotavirus y el virus de la hepatitis A
Por medio de las diferentes pruebas aplicadas en las muestras, su determino que la mayoría de los
virus se encuentra en aguas superficiales y en una menor proporción en los sedimentos de los cuerpos
de agua lo cual puede deberse a una débil la absorción sobre las partículas viradas a las partículas de
sedimento
REFERENCIA
o Elmahdy, E. M., Fongaro, G., Schissi, C. D., Petrucio, M. M., & Barardi, C. R. M. (2015).
Enteric viruses in surface water and sediment samples from the catchment area of Peri
Lagoon, Santa CatarinaState, Brazil. Journal of water and health, 14(1), 142-154.