INVESTIGACIÓN TOXICOLÓGICA

DOCENTE: DRA. MARIA BRICEÑO

1. Conceptos

La investigación toxicológica es el conjunto de procesos analíticos, que tienen por objeto el

aislamiento, identificación y determinación cuantitativa de los tóxicos, tanto en el vivo como
en el cadáver, con el fin de permitir el diagnóstico de la intoxicación.

Estudios toxicológicos en sujetos vivos: tendientes a determinar la ausencia o

presencia de sustancias potencialmente tóxicas en distintas muestras biológicas y no
biológicas a fin de establecer su papel determinante o contribución en el hecho que se
investiga.

Estudios toxicológicos post mortem: tendientes a determinar la ausencia o presencia

de sustancias potencialmente tóxicas en distintas muestras biológicas y no biológicas a
fin de establecer su contribución a la causa o mecanismo de muerte.

Tipos de muestras
• Fluidos biológicos: sangre, orina, contenido gástrico (vómito, líquido que procede de
un lavado gástrico), saliva…
• Tejidos: hígado, riñón, cerebro, uñas, pelos, estómago, vesícula biliar, pulmón… Se
usan mayoritariamente en la toxicología forense. En la toxicología clínica es
necesario realizar una técnica invasiva para obtener la muestra de tejidos (se
intenta evitar).
• Productos sospechosos de ser la causa de la intoxicación: medicamentos, bebida,
comida…
• Aire: importantes en toxicología ambiental o laboral.
• Muestras del ecosistema: sedimentos de animales, aguas, plantas, animales,
productos que proceden de ellos

Una vez que la muestra llega al laboratorio para su análisis químico toxicológico, es
sometidas a diferentes procesos que pueden ser físicos (radiaciones caloríficas),
químicos (agentes precipitantes u oxidantes) o biológicos (enzimas proteolíticas) con el fin
de separar el toxico de las proteínas o estructuras celulares a las cuales se encuentra
ligada en la muestra.
Los métodos instrumentales empleados en toxicología de forma amplia podemos
mencionar los siguientes:

Métodos modernos que separan, identifican y cuantifican diferentes especies químicas

(orgánicas, inorgánicas, bioquímicas, etc.)

Se basan en fenómenos físicos-químicos conocidos. Su aplicación ha ido en paralelo

al desarrollo de la electrónica.

Para el análisis cuali o cuanti se miden las propiedades de los analitos.

Ej. Absorción o emisión de luz Conductividad o potencial de electrodo Dispersión, rotación,

refracción, difracción

Un instrumento para análisis químico debe: – convertir las señales químicas o físicas
almacenadas del analíto, en información que puede ser manipulada e interpretada por el
 ser humano. El instrumento es un dispositivo de comunicación entre el sistema de estudio
y el investigador. Para obtener información el analíto se estímula con energía
electromagnética, eléctrica, mecánica o nuclear.

 Cromatografía en capa fina CCF

Un método que se emplea para la selección del eluyente es una

cromatografía en capa fina con distintos disolventes y unas muestras patrón.
Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:

 Éter de petróleo, Éter dietílico, Ciclohexano, Tetracloruro de carbono, Acetato de etilo

 Cromatografía liquida de alta resolución HPLC

Cromatografías

 Cromatografía de gases GC


Espectroscopias de EAA
absorción atómica (a menudo llamada espectroscopia AA o AAS, por
atomic absorption spectroscopy) es un método
instrumental de la química analítica que permite
medir las concentraciones específicas de un
material en una mezcla y determinar una gran
variedad de elementos.

ICP-Masas

Técnica de análisis elemental inorgánico.

Alta precisión.
Bajos límites de detección.
Permite el análisis de la mayoría de
elementos e isótopos, de manera simultánea
y en poco tiempo.
La utilización del láser acoplado al ICP-MS
posibilita el
análisis de elementos trazas y tierras raras
en minerales,
fósiles, metales, semiconductores…
 Espectroscopia de absorción UV

En análisis toxiciológico y forense. • Screening de drogas. •

Determinaciones colorimétricas. (Amonios, nitratos,
hemoglobinas, amilasas) • Análisis de tintas y documentos.
• Análisis de color, vidrios, piedras preciosas y muestras
sólidas.
Espectroscopias de absorción
molecular
Espectroscopia de absorción VIS
La espectrometría UV/Vis se utiliza
habitualmente en la determinación cuantitativa
de soluciones de iones metálicos de transición y
compuestos orgánicos muy conjugados.

Restos de pinturas. – Tintas – Fibras – Explosivos – Drogas

ilícitas – Huellas digitales – Materiales biológicos – Otros:
Materiales, polímeros, suelos, cosméticos, pelo, etc.
Tipo de determinación

 Cualitativa: Cuando sólo se necesita saber si en la muestra hay o no un

xenobiótico (toxicología forense). En algunos casos, la presencia del mismo ya
indica intoxicación, y esto permite llegar al diagnóstico.
 Cuantitativa: Cuando se necesita saber la concentración en la que se encuentra el
tóxico para establecer si hay o no intoxicación. En toxicología clínica es necesaria la
determinación cuantitativa para determinar la gravedad de la intoxicación, y así
deducir las medidas terapéuticas más convenientes.
 CUESTIONARIO

1. ¿Mencione 3 agentes químicos que pueden emplearse para la precipitación

de
proteínas en muestras de suero?
R.- Acido tricloroacético
Ácido túngstico
El cobre
2. ¿Qué es extracción liquido –liquido, cuál es su fundamento, cuál es su
importancia en toxicología, que tipos de tóxicos pueden extraerse mediante este
método?
R: - Es una operación básica, de naturaleza física, cuyo fin es l separación de dos o más
componentes de una mezcla liquida mediante la adición de un disolvente en el cual uno o
más componentes son preferentemente soluble.
Fundamento
La extracción liquido-liquido es una técnica empleada habitualmente en química y cuyo
objetivo es la separación de un soluto que se distribuye entre dos líquidos inmiscibles
entre sí. Por lo tanto, el objetivo de la técnica puede ser tanto la separación de
compuestos, así como su concentración en una determinada fase.
Tóxicos éter etílico, cloroformo, diclorometano

3. ¿Qué es extracción en fase sólida, ¿cuál es su fundamento?

Es una técnica utilizada para la preparación de muestras, básicamente consiste en la
extracción de un analito de interés mediante sistemas sólido-líquido, empleando
principalmente cartuchos, discos o fibras.

Fundamento

Técnica de extracción que se basa en la retención sobre un adsorbente sólido del os

compuestos deseados disueltos en una muestra líquida.
La adición de un eluyente permite eliminar los componentes de la matriz que interfieren,
para después el ir y concentrar los analitos de interés.
La extracción en fase sólida sustituye a la extracción líquido-líquido clásica.
De acuerdo con el carácter químico del grupo funcional unido a la sílice o al copolímero,
las fases resultantes se pueden clasificar en: no polares, polares o de intercambio iónico.
La elección de los disolventes utilizados depende de la naturaleza de la fase estacionaria.
4. ¿Para qué tipos de tóxicos se emplea la SPE de fase reversa y de fase normal?

Fase reversa: la fase sólida es de sílice enlazada con cadenas alquílicas (tipo C18,
C8 o C4) aunque existen alternativas a la sílice. Es apolar mientras que la fase líquida es
polar por lo que se retienen los analitos no polares. Se producen interacciones
hidrofóbicas por fuerzas de Van der Waals o puentes de hidrógeno que pueden romperse
con acetonitrilo o metanol.
Fase normal: al contrario que la anterior, la fase sólida es polar y la fase líquida es apolar
reteniéndose los analitos polares. Se producen interacciones hidrofílicas como son
puentes de hidrógeno o dipolo-dipolo.
5. Explique en que consiste y cuál es el fundamento del método de
radioinmunoensayo, cite 3 ejemplos de tóxicos en los que se emplee el método de
radioinmunoensayo como análisis toxicológico.
Es un método sensible y especifico para determinar reacciones Ag – Ac, en el cual un
reactante marcado radiactivamente se utiliza directa o indirectamente para la medición
cuantitativa del reactante no marcado, estableciendo una fijación de Ac específico u o
trosistema receptor.
Fundamento
El radioinmunoensayo o RIA es una técnica competitiva en la que la molecula antigénica
que se quiere determinar compite por unirse a un nticuerpo especifico con un trazador
radioactivo.
Las técnicas de radioinmunoensayo se emplean en la detención de hormonas, drogas,
IgE, vitamina B12, CO.

6.Explique en qué consiste y cual el fundamento del método de

fluoroinmunoensayo.Cite 3 ejemplos de tóxicos en los que se emplee el método
de fluoroinmunoensayo como análisis toxicológico

7.Que es un cromatografo de gases acoplado a un detector, indique sus

partes,
Cual es su fundamento, que tipo de tóxicos pueden determinarse por GC.

8.Que significa GC/MSD, qué importancia tiene en toxicología

9.Que es un HPLC/ UV, cual es su fundamento, indique sus partes, que tipo de
tóxicos pueden determinarse por este método

10.Que es un espectrómetro de masas, cual es su fundamento, indique sus

componentes, que información brinda en el análisis químico,

11.Qué importancia tiene la espectroscopia de absorción molecular UV-VIS