UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECIARIAS Y RECURSOS NATURALES

PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA

PREPARACIÓN MEDIOS DE CULTIVO MS

BIOTECNOLOGIA II

PRESENTADO POR:

Rivera L, Sergio Andrés1

VILLAVICENCIO-META
2019-2
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FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECIARIAS Y RECURSOS NATURALES
PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA

OBJETIVOS

• Comprender la metodología de preparación de medio de cultivo utilizada

habitualmente en el laboratorio de cultivo in Vitro.
• Preparar el medio de cultivo necesario para la propagación de plantas en el
laboratorio.

INTRODUCCION
La célula vegetal para su metabolismo requiere elementos esenciales, los cuales le
permiten completar su ciclo normal de vida, algunos los requieren en cantidades mayores,
por lo que se llama macroelementos (C, H, O, N, P, K, Ca, Mg y S), y los que requiere en
menores cantidades son llamados microelementos (Fe, Mn, Cu B, Mo, Zn, y Cl).

Dentro del Cultivo de Tejidos Vegetales, la preparación del medio de cultivo es fundamental
para el éxito en el establecimiento de cualquier cultivo, sea cual fuere el objetivo del mismo,
ya que a través del mismo, se proporciona a los explantes en primera instancia de los
nutrientes requeridos para su optimo desarrollo, así como carbohidratos Vitaminas,
aminoácidos, entre otros, y reguladores del crecimiento, con los cuales es factible de inducir
determinados patrones de desarrollo. Dicha solución generalmente se encuentra en estado
semisólido por el empleo de agár phytagel o gelrite.

Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100 veces

(Soluciones Madre o Stock). En la solución madre se pueden mezclar varias sales minerales
siempre que no se produzcan problemas de precipitación. Algunos elementos, como el Fe,
se utilizan en forma de quelatos para mantener su disponibilidad durante el cultivo. Los
medios de cultivo se pueden utilizar de forma líquida o con un agente gelificante como el
agar.
• MEDIO DE CULTIVO DE MURASHIGE Y SKOOG.

Es el medio más conocido, se elaboró tomando el cultivo in vitro de tabaco como

modelo y siguiendo un procedimiento cuantitativo se determinaron las
concentraciones más adecuadas de todos los nutrientes.
El medio MS es apto para la mayoría de las especies, por lo que es de amplia
utilización, excepto para las más sensibles a la salinidad ya que se caracteriza por
tener una elevada concentración salina.
El Medio de Cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) se realiza con las siguientes
sustancias:
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METODOLOGIA

Para preparar 1 litro de medio de cultivo se debe hacer el siguiente procedimiento.

1. Agregar 500 ml de agua destilada en un Erlenmeyer de 1000 ml.
2. Añadir los stocks teniendo en cuenta las cantidades específicas, según la
formulación de Murashige y Skoog, mezclar.
3. Adicionar 1.0 de M, mezclar.
4. Agregar 30 g de azúcar y esperar a que se disuelva.
5. Completar con agua destilada hasta un volumen de 1 L.
6. Colocar la mezcla en un Erlenmeyer y ajustar el pH hasta 5.8 (con KOH, NaOH O
HCL). Para subir el pH se puede utilizar KOH 0.1 N, y para bajarlo con HCL 0.1N.
7. Añadir agar o el gel para tener una concentración final de 8.0 g/l o 5.0 g/l
respectivamente.
8. Calentar el resultado final hasta que esté completamente disuelto.
9. Repartir el medio en los recipientes de cultivo previamente rotulados.
10. Esterilizar el medio en la autoclave durante 20 minutos a 121 grados centígrados.
11. Llevar los frascos a la cámara de flujo laminar.
12. Dejar enfriar antes de su utilización.

RESULTADOS

Imagen 1.1, Stocks Utilizados

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Imagen 1.2, Añadiendo stocks

Imagen 1.4, Estabilizando PH

Imagen 1.3, Proceso de agitación

Imagen 1.5, Autoclavando

Imagen 1.6, Llenado de recipientes

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ANALISIS DE RESULTADOS

El éxito que se obtenga en un cultivo de tejidos vegetales depende del uso del medio
nutritivo adecuado, como también del empleo de tejidos viables, incubación, calidad de
reactivos, etc. Usando las sustancias químicas necesarias y las combinaciones apropiadas
de nutrimentos, así como su forma química adecuada, ha sido posible establecer cultivos
para casi todas las partes de una planta en diversas especies vegetales.
Durante la practica en el laboratorio de Biotecnología vegetal, logramos establecer un
medio de cultivo optimo para el desarrollo de embriones o especie vegetal a propagar,
teniendo en cuenta los parámetros dados por el profesor, acatando las instrucciones dadas
para no cometer errores.
Se tuvieron en cuenta factores como la asepsia de los implementos y zonas de trabajo, la
buena toma de medidas en las soluciones stock y el uso adecuado de las herramientas a
utilizar. Para la concentración del pH fue necesario la adición de 3 gotas de Hidróxido de
sodio para nivelar a una concentración de 4.4.
Se dividió la mezcla final en dos recipientes, cada uno con 500 ml en donde se les adiciono
Acido naftalenacético y Acido Giberelico.
El Ácido Giberélico es un fitorregulador de crecimiento de acción hormonal que estimula y
regula el desarrollo de las plantas. La respuesta fisiológica de los vegetales tratados
dependerá del estado de desarrollo en que se encuentran, mientras que el Ácido
Naftalenacético (ANA) es un regulador de crecimiento vegetal auxínico sintético
ampliamente utilizado en agricultura, principalmente en la producción de cultivos
hortofrutícolas, así como especies ornamentales. Se emplea para el enraizamiento de
esquejes de plantas, para prevenir el aborto de frutos pre-cosecha, en la inducción floral, el
raleo de frutos, entre otros procesos.

CONCLUSIONES

• Durante la practica del laboratorio, logramos identificar la metodología óptima para

el establecimiento del medio del cultivo para la propagación in vitro, llegando al
punto de establecer una capacidad mínima para la elaboración del medio Murashige
y Skoog que nos ayudara a generar un amplio campo de aprendizaje para futuras
prácticas en el laboratorio.
• Se logro establecer el medio de cultivo optimo bajo condiciones estériles y de buena
asepsia para la propagación in-vitro en el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA

• http://ri.uaemex.mx/bitstream/handle/20.500.11799/64552/secme-
12254.pdf?sequence=1#page=6
• http://ocw.uniovi.es/pluginfile.php/2621/mod_resource/content/1/practicas/Cu
aderno_Pract_Biotec_11_OCW.pdf
• https://www.academia.edu/8124309/4_Pra_cticas_Biotecnologi_a_Vegetal
• https://www.intagri.com.co/articulos/nutricion-vegetal/acido-naftalenacetico-
ANA-y-su-uso-en-la-agricultura
• https://www.terralia.com/agroquimicos_de_mexico/view_composition?comp
osition_id=14515
• https://www.tecnicoagricola.es/acido-giberelico/