Proyecto de investigación, presentado el 1 de Junio del 2017

Aislamiento de una bacteria anaerobia para el tratamiento de aguas

residuales que contienen lignina

De Jesus-Celestino, Lucero.

Biología de Procariontes, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autónoma de

México, Investigación científica s/n, Coyoacán, C.P. 04510, México, CDMX

Introducción

La lignocelulosa es un complejo de polímeros, que son sintetizados por los árboles para
formar la madera (Arana et. al., 2002), por lo que está presente en todos los residuos de los
productos que las industrias desechan.

Entre los mayores generadores de estos desechos se encuentra la agricultura, la industria

forestal, de producción de pulpa, papel y de alimentos, los cuales generan una gran
cantidad de residuos ricos en lignina, lo que producen contaminación ambiental y además
representan una pérdida por el desperdicio de materia que puede ser convertida en varios
productos con valor agregado como los biocombustibles (Vallejo, 2013).

Las bacterias anaerobias degradan la lignocelulosa en diversos ambientes anóxicos y

orgánicamente ricos (Korenblum et al., 2016). Aunque muy pocas son utilizadas o
cultivadas para degradar la biomasa lignocelulósica en un estudio realizado por Yang
(2009) demostró que Anaerocellum thermophilum DSM 6725, — bacteria anaerobia—
puede utilizar eficientemente varios tipos de biomasa vegetal no tratada así como celulosa
cristalina y xilano (Vallejo, 2013).

Estrategia experimental

De acuerdo a los estudios realizados la bacteria anaerobia elegida para degradar los
compuestos lignínicos es Anaerocellum thermophilum.

Medio de crecimiento y sustrato

Se utilizara muestras de biomasa vegetal tal como se recibieron sin tratamientos químicos
o físicos y se denominan biomasa no tratada (o sin pre-tratamiento) o sea los desechos
vegetales, asi como fuentes de celobiosa, xilosa, xilano de la avena y pectina, y en el
estudio particular de Yang (2016) álamo y pastizal.
El medio 516 se preparó anaeróbicamente bajo una atmósfera de N₂-CO₂ (80:20)
durante 30-45 min, se añadió NaHCO₃ (1 g / litro), y la mezcla se redujo usando (por litro)
0,5 g de cisteína y 0,5 g de N₂S. El pH final fue de 7,2. Se utilizó toda la biomasa soluble e
insoluble y sustratos definidos a una concentración final de 0,5%.
 A una temperatura de 75° C se cultivó la bacteria en frascos estáticos de suero de
100 ml o con agitación (150 rpm) en frascos de 0,5 ó 1,0 litros. Todos los medios se
esterilizaron por filtración usando un filtro estéril de tamaño de poro de 0,22. Los sustratos
insolubles se añadieron directamente a las botellas de cultivo esterilizadas, seguido por la
adición del medio esterilizado por filtración.
Los medios de cultivo que contenían los sustratos insolubles sin inoculación se usaron
como controles negativos.

Una de las pruebas realizadas para demostrar la efectividad de degradación de lignina por
medio de la bacteria Anaerocellum thermophilum, sería si la cantidad de sustrato gastado
en un primer cultivo es igualmente utilizado que uno no gastado.

Diagrama de flujo

Anaerocellum thermophilum

Preparación del cultivo

Medio en frascos estáticos
de suero de 100 ml
Medio de cultivo 516 Esterilización por
anaerobio filtración
Si hay agitación (150 rpm),
en frascos de 0,5 a 1L

Disolver reactivos, menos las Sustrato directo a los

vitaminas a atmósfera de N₂-CO₂ frascos seguido del
medio
El cultivo de la
bacteria a una
temperatura de 75° C
35 min después agregar NaHCO₃,
las vitaminas por filtración

Reducción del medio y finalmente

agregar la cisteína y el N₂S

El pH final del medio de 7,1 a 7,3

 Bibliografía

 Arana, A., Téllez, A., González, T., & González, A. (2002). Aspectos generales de la
biodegradación de la madera: aplicaciones industriales de las lacasas. Bio-Tecnología, 7(3), 40-
55.
 Korenblum, E., Jimenez, D. J., & Elsas, J. D. (2016). Succession of lignocellulolytic bacterial
consortia bred anaerobically from lake sediment. Microbial biotechnology, 9(2), 224-234.
 Vallejos, N. G. (2013). Degradación de residuos vegetales mediante inoculación con cepas
microbianas. Enfoque UTE, 4(1), pp-1.
 Yang, S. J., Kataeva, I., Hamilton-Brehm, S. D., Engle, N. L., Tschaplinski, T. J., Doeppke, C.,
... & Adams, M. W. (2009). Efficient degradation of lignocellulosic plant biomass, without
pretreatment, by the thermophilic anaerobe “Anaerocellum thermophilum” DSM 6725. Applied
and environmental microbiology, 75(14), 4762-4769.
 Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures. *Medio
Anaerocellum 2015. Recuperado de:
https://www.dsmz.de/microorganisms/medium/pdf/DSMZ_Medium516.pdf