17.

10 - ​Agitação/Aeração  
Variação de Escala em Processos Fermentativos

Conceitos de agitação e aeração

Ao mesmo tempo em que se agita se pode também aerar um sistema.
➢ Inclusive a diferença no biorreator é que a aeração pode ser feita de uma forma mais precisa → se
consegue produzir oxigênio no microorganismo de uma forma mais eficiente, coisa que não é possível
ser feita com a agitação.

No ​Shaker​ se consegue estudar muitas variáveis, como pH, temperatura, substrato, concentração de inóculo.
➢ Mas a agitação não pode ser estudada em shaker, se consegue estudar apenas a agitação. Quando
se agita um shaker se está aerando mas a essa aeração não é possível dimensionar.
➢ Existem algumas sondas e shakers que tem alguns sensores mas na maioria das vezes se consegue
quantificar mas não dosar de uma forma eficiente.

Já no ​Biorreator​ já se consegue estudar a bioaeração de forma mais precisa.

O ar colocado no reator deve ser estéril: se pode comprar oxigênio puro para aerar o sistema mas
dependendo da molécula que se vai utilizar é mais barato usar o ar comprimido estéril.

Possibilidades de se colocar oxigênio em um biorreator: 

❖ Forma 1​: ​aeração superficial​, usada para o tratamento de efluentes.
➢ se tem um tanque e o ar vem por cima

❖ Forma 2 ao 6​: ​aeração em profundidade​.

➢ ar entra por baixo
➢ biorreator onde se tem células imobilizadas (se utiliza alginato de cálcio para imobilizá-las)
➢ 4: o meio vai caindo no biorreator e o ar vai entrando por baixo dele
 ➢ 5 e 6: são os mais comuns → formas de aeração em profundidade
■ a agitação em 5 é mecânica (pás, impelidores, chicanas, etc).
■ já em 6: gases por levantamento do ar, chamado de air-lift, que geralmente é usado
para cultivo de fungos filamentosos, principalmente de células animais → a agitação
não será tão agressiva pois não é uma agitação mecânica → se fosse uma agitação
mecânica, os impelidores poderiam romper as células, que seria ruim pois as células
são a maquinaria metabólica.

Na foto da direita se tem um sistema de air lift, que é um sistema de agitação eficiente (apesar de não tão
potente quanto na agitação mecânica (foto da esquerda)), principalmente para células de cultivo animais.
Quando se usa a variação de escala?
A variação de escala é um processo onde primeiro, para se regular o sistema, é necessário extrair o maior
número de informações possíveis para que depois, quando se sai de uma escala pequena para uma escala
maior, se mantenha a mesma geometria, as mesmas configurações e as mesmas variáveis.

Para se conseguir simular em grande escala um processo de pequena escala se tem que ter:
➢ um processo que seja reprodutível em escala maior → deve-se fazer experiências para saber se o
processo dá certo. Algumas vezes, para que se tenha uma certa potência, será necessário um motor
muito grande e algumas vezes não compensa o gasto que se terá dependendo do valor agregado que
se terá no produto.

Na indústria farmacêutica a redução de escala é muito utilizada ⇒ é usada para rever alguns parâmetros e
otimizá-los: trocar o meio, o inóculo, etc para saber se o processo será viável.

Ampliação (Scale up) e Redução (scale down)

Tudo o que se faz em uma escala pequena se deve garantir que é reprodutível em uma escala maior.

➢ Desafios na variação de escala

○ manter um ​grau de mistura eficiente → pode ocorrer a formação de compostos tóxicos se não
for misturado corretamente, por exemplo.
○ um ​consumo de potência​ viável
○ grau de cisalhamento​ das células é importante → a velocidade de impelidor é fundamental.
○ velocidade de transferência de oxigênio → deve-se fornecer oxigênio o suficiente para o
microrganismo realizar suas atividades metabólicas (principalmente se o produto for um
metabólito primário em que quanto maior a quantidade de células, maior a quantidade de
produto) → deve-se garantir uma distribuição de oxigênio uniforme.
Nem sempre o processo de maior rendimento significa que é o processo mais otimizado pois o custo pode ser
preponderante.

Problemas
➔ Obter um grau de mistura perfeito é difícil → uma coisa é ​manter a uniformidade do sistema​ em um
biorreator pequeno, outra coisa é manter em uma grande escala e manter uma ​distribuição de
oxigênio​ eficiente também não é tão trivial assim → quando se aumenta a escala:
◆ o fluxo aumenta,
◆ já não será possível utilizar um oxigênio puro,
◆ se usarmos ar comprimido o filtro deve ser muito eficiente,
◆ não se pode usar uma aeração muito elevada pois tem um custo e não há filtro para lidar com
altos graus de aeração,

Em situação de graus de mistura não eficientes se pode gerar compostos tóxicos.

A geometria deve ser mantida tanto em um reator de pequena escala quanto de grande escala
● distância entre os impelidores do biorreator deve ser padrão
● a largura do reator
● a altura do impelidor
● distância entre as pás
● largura das chicanas, etc

Ao respeitar essa proporção de valores mínimos se consegue ter uma eficiência no escalonamento.
Ao mudar o tamanho do reator se pode mudar a aeração do sistema, a agitação, etc. Isso também se altera
alterando a geometria do reator.

Tipos de Impelidores
➢ O disco com pás planas é o tipo de impelidor mais usado → tem um fluxo e agitação perpendicular:
empurra o líquido para a lateral.
➢ Já a hélice terá um tipo de agitação paralela: o líquido vai para o fundo do reator.

O disco com 6 pás planas é o mais usado → geralmente usado para meios menos viscosos pois com esse
tipo de impelidor se causa uma maior turbulência → pode ser que o meio fique com muita espuma e isso não
é desejado. ⇒ em meios muito viscosos acaba sendo mais desejável usar o tipo hélice
➢ Apesar das desvantagens como o tipo hélice empurra o líquido para baixo ele acaba tendo uma
mistura bastante eficiente para o meio viscoso.

Qual deles poderia ser usado para um cultivo microbiano semi sintético?
➔ Geralmente se usa esse tipo de impelidor de Disco com pás planas para meios menos viscosos pois
nesse tipo de impelidor se causa uma maior turbulência
➔ Quando o líquido é mais viscoso dependendo da agitação que se usar se pode espumar muito

O​ ​tipo de impelidor​ e também a​ ​distância​ ​entre impelidores​ ​vai influenciar na mistura.​

Se muda completamente o índice de transferência de oxigênio.
Escala para o desenvolvimento de um processo produtivo 
➔ (bancada: erlenmeyer → reator 1 a 10 L) → escala piloto (etapa definitiva para o escalonamento
industrial: é uma checagem).

Um microrganismo ideal para cultivo deve ser:

❖ de fácil cultivo e manutenção
❖ fisiologicamente ativo e constante
❖ não pode ser patogênico
❖ deve produzir a substância desejada com bom rendimento
❖ não exigir condições de trabalho difíceis e caras

Deve-se atentar não somente à espécie do microrganismo mas também da linhagem ao qual pertence pois
diferentes linhagem podem ter diferentes reprodutibilidades dos rendimentos em um processo industrial.
Qual a principal importância da aeração em Bioprocessos?
São formadas bolhas de oxigênio e é necessário que essa bolha seja rompida para que o oxigênio fique no
meio → oxigênio tem baixa solubilidade em água → deve-se garantir que o oxigênio saia da bolha, do sistema
onde se tem uma película gasosa, atravesse a interface líquido/gás, atravesse a membrana estagnada, o
meio de cultivo, outra membrana estagnada, outra interface líquido/gás e, enfim, se ligue ao citoplasma da
célula ⇒ nesse processo quando o gás passa pela interface gás líquido essa é a zona de maior resistência.
Depois que ele passa por essa interface gás/líquido ele vai para o meio de cultura chega na célula.

Todo esse processo de ultrapassagem do oxigênio é calculado. Só que o ponto preponderante de resistência
é na interface gás líquido.
São feitos cálculos para prever essa resistência
O oxigênio vai se difundindo aos poucos. No início da calibração, se tem 100% do oxigênio, mas no marcador
será 0,0. No início ele estará zerado mas com o tempo esse oxigênio vai aumentando ⇒ a cada 5, 10
segundo se vai anotando valores de oxigênio está sendo dissolvido no meio.

Cálculo: dC/dt = K​L​a (Cs - C)

Linearização fica ⇒ y = ax + b
a = K​L​a

Em teoria na verdade se tem 100% de oxigênio, mas a sonda lê esse 100% como 0. Depois, ele vai
diminuindo (na leitura da sonda) com o aumento da difusão do oxigênio.

Métodos para determinação do K​L​a (coeficiente volumétrico de transferência

de massa)
Cálculo:
dC/dt = K​L​a (Cs - C)
 Para retirar a derivada se faz o logaritmo neperiano → se lineariza o valor e se tem então uma equação de
primeiro grau:

Linearização fica ⇒ y = ax + b
a = K​L​a
K​L​a = coeficiente de transferência de oxigênio

No início o aparelho marca 0 → se fizermos o logarítmo neperiano de 100 - 0 = logaritmo neperiano de 100.

Então, o 0 representa um valor constante.

Inulina é um prebiótico, que consiste em uma fibra (substrato) que é um polímero de frutose e que, na ponta
da sua cadeia, tem uma frutose ⇒ somente bactérias probióticas tem esse tipo de enzima. Quando ela
metabolizar esse açúcar, ela consegue crescer.
É por isso que se consumirmos muito prebiótico se melhora o crescimento de bactérias benéficas.
Ex: Biorreator

Se tem os valores obtidos para uma fermentação em um reator de 15L e em um reator de 300L e esses
valores são bastante parecidos.
Mas, o que é mais intrigante é que para que ele obtenha um K​L​a = 43 em um reator de 15L ele trabalha com
uma aeração X e uma agitação de 120rpm. Mas, no reator de 300L se trabalha com valores de agitação e
aeração menores ⇒ muitas vezes o que é esperado é o contrário já que em um reator maior se pensa que
seria necessário uma maior aeração e agitação para que se obtenha um grau de mistura adequado.

No de 300L se teve menor aeração e menor agitação que um reator de 15L → isso é bem contra
intuitivo → isso ocorre pelo número de impelidores e a distância entre os impelidores, que
influenciam na agitação.

Foi necessário uma menor aeração pois a distância entre impelidores no reator de 300L é menor, então a
bolha fica muito mais fácil de romper nesse reator e a menor agitação talvez seja pelo ​número de pás
existentes no reator, que permitem que em uma menor agitação se consiga o mesmo valor de KLa.