REPORTE 8: CONDICIONES AMBIENTALES PARA EL DESARROLLO Y CONTROL DE LOS

MICROORGANISMOS.
Elaboró y firma:_____________________________________________ Calificación:______
Revisó y firma:______________________________________________ Calificación:______
Resultados

a)Efecto de la temperatura, pH y concentración de solutos

Se realizó la inoculación de diferentes tubos a diferentes [%NaCl], pH y temperaturas, con una cepa de
referencia de Escherichia coli en SSIE a 0.5N escala de MCF, después de su incubación a 37°C/24 h
se procedió a observar la turbidez en cada tubo, obteniendo los siguientes datos.

Tabla y gráfica 1. Efecto de %NaCl

%NaCl

1 ++++

4 +++

7 ++

10 +

15 -

Tabla y gráfica 2. Efecto de pH

pH

3 -

5 +++

7 ++++

9 ++

11 +

Tabla y gráfica 3. Efecto de la temperatura

Temperatura (ºC)

4 -

28 +++

37 ++++

42 +++

55 ++
b) Efecto letal mutagénico de UV
Para observar el efecto letal mutagénico de UV se usó la cepa de Micrococcus Luteus en medio TSA,
se realizó una siembra con hisopo a cada una de las 2 cajas petri con el medio TSA, la caja se dividió
en 4 cuadrantes, de los cuales 3 de ellos se expusieron a luz UV (Control, 30, 60 y 90 s), una de las
cajas además de ser expuesta a luz UV, se expuso a la luz solar, por 30 minutos, para poder observar
el efecto de fotorreactivación, ambas placas se envolvieron en papel aluminio y se mandaron a incubar
a 37°C/24h.

Tabla 4. Caracteristicas coloniales y microscópicas del desarrollo de Micrococcus Luteus, zona control.
Control

Características Características de desarrollo Luz solar Oscuridad

Color blanco amarillas

Coloniales
Aspecto superficial circular, convexa, borde entero circular, convexa, borde entero

Consistencia Cremosa Cremoso

Forma diplococos diplococos

Microscópicas Gram positiva positiva

Tabla 5. Caracteristicas coloniales y microscópicas del desarrollo de Micrococcus Luteus, zona

expuesta 30 segundos.
30 segundos

Características Características de Luz solar Oscuridad

desarrollo

Color amarillas amarillas

Coloniales

Aspecto superficial circular , convexa, borde entero circular, convexa, borde entero

Consistencia cremosa cremosa

Forma cocos sin agrupación diplococos

Microscópicas
Gram positiva positiva
Tabla 6. Caracteristicas coloniales y microscópicas del desarrollo de Micrococcus Luteus, zona
expuesta 60 segundos.
60 segundos

Características Características de Luz solar Oscuridad

desarrollo

Color amarillas amarillas

Coloniales

Aspecto superficial circular, convexa, borde entero circular, convexa, borde entero

Consistencia cremosa cremosa

Forma Bacilos largos y cocos bacilos largos

Microscópicas
Gram positivas y negativas negativo

Tabla 7. Caracteristicas coloniales y microscópicas del desarrollo de Micrococcus Luteus, zona

expuesta 90 segundos.
90 segundos

Características Características de Luz solar Oscuridad

desarrollo

Color Amarillas y blancas ----------------------

Coloniales

Aspecto superficial circular, convexa, borde entero ----------------------

Consistencia cremosa ----------------------

Forma cocos y bacilos ----------------------

Microscópicas
Gram positivas y negativas ----------------------
c) Ensayo Kirby Bauer
Se utilizó la cepa de Enterococcus faecalis y el medio Muller-Hinton, al ser la cepa una Enterobacteria,
los antibióticos utilizados son los siguientes:

Tabla 8. Antibióticos para enterobacterias

Antibiótico dosis μg Diámetro del halo (mm) Clasificación

ampicilina 10 μg 15 R

trimetropin/ 1.25/23.75 μg 25 ----

sulfametoxazol

penicilina 10 u 9 R

linezolida 30 μg 27 S

Tabla 9. Información de los antibióticos del manual CLSI utilizados para inhibir enterobacterias
Enterococcus spp.
d) Efecto de agentes químicos y colorantes
Se nos proporcionó una cepa de Serratia marcescens de la cual se realizó una inoculación en SSIE
0.5 MCF, se procedió a sembrar la cepa por extensión masiva con hisopo, utilizando agar chocolate,
cada caja se dividió en 4 cuadrantes, de colorantes se ocupó verde de malaquita y cristal violeta al
(0.1, 0.5 y 1 %) y se utilizaron diferentes agentes químicos: hipoclorito, isodine, listerine, H2O2, violeta
de genciana, lysol, y merthiolate. Se incubó a 37°/24-48 h, obteniéndose los siguientes resultados:

Tabla 10. Diámetro de efecto de los colorantes

Colorantes

Verde malaquita Cristal violeta

Concentración mm de diámetro del Concentración mm de diámetro del

halo halo

Control ≤6 Control ≤6

0.1% ≤6 0.1% ≤6

0.5% ≤6 0.5% ≤6

1.0% ≤6 1.0% ≤6

Tabla 11. Diámetro del efecto de los agentes químicos

Agentes químicos mm de diámetro halo

Hipoclorito ≤6

Isodine 10

Listerine ≤6

H2O2 8

Violeta genciana ≤6

Lysol 15

Merthiolate 15

Control ≤6
Análisis de resultados

a)Efecto de la temperatura, pH y concentración de solutos

Según los datos obtenidos de la cepa de referencia de Escherichia coli proporcionada, se trata de un
microorganismo no halófilo, ya que se observó mayor turbidez a menor concentración de NaCl, es un
neutrófilo, ya que tuvo un mejor desarrollo a un pH de 7, y mesófilo, debido a que su temperatura
óptima fue de 37°C.

b) Efecto letal mutagénico de UV

Los datos obtenidos al irradiar con rayos UV a Micrococcus Luteus fueron positivos ya que se
encontraron mutaciones ya que en el medio se encontraron bacterias diferentes al control tanto si
estaban expuestas al sol o no se hicieron notar a simple vista debido a que se presentaron dos colores
diferentes y pequeñas variaciones en su morfología. Lo que determinó el cambio fue llevar a cabo una
tinción de Gram la cual nos permitió conocer que tipo de mutaciones se habían generado, entre ellas la
modificación de ADN que daba la forma del microorganismo, así como los componentes de la pared
celular. Al someterla 90 segundos a radiación se inhibió el crecimiento, pocas colonias crecieron a la
luz del sol.

c) Ensayo Kirby Bauer

El antibiótico difunde de manera radial y crea un gradiente de concentración, entre más cerca del disco
este tendrá una mayor concentración de antibiótico. Entre más grande sea el halo necesitará una
menor concentración de antibiótico para inhibir el crecimiento. Para Enterococcus faecalis se
analizaron los diámetros de los halos basados en los “Estándares de rendimiento para antimicrobianos,
2015” con ello se determinó que presenta resistencia a ampicilina a dosis de 10 μg, resistencia a
penicilina 10 u, mientras que para linezolida 30 μg presenta sensibilidad. Para
trimetropin/sulfametoxazol no hay intervalos reportados de sensibilidad o resistencia, debido al halo
creemos que puede ser sensible a este.

d) Efecto de agentes químicos y colorantes

Se utilizó una cepa de Serratia marcescens para analizar el efecto inhibitorio sometida a colorantes a
diferentes concentraciones tanto de violeta cristal y verde de malaquita la inhibición se puede suponer
≤6mm debido a que es donde se ha colocado el papel filtro impregnado, alrededor de ello se
desarrollaron colonias uniformes. Cabe destacar que para cristal violeta en concentraciones de 0.5 y
1% se difundió el colorante en el agar y alrededores, mientras que para verde de malaquita solo el
color se observó difundido en 1%, con ello se puede concluir que estos colorantes no hacen
combinaciones específicas con macromoléculas alterando al microorganismo.
Al someter la cepa a diferentes factores químicos se puede decir que es resistente o poco sensible a
aquellos que tienen un diámetro ≤6mm que fueron: hipoclorito de sodio, listerine y violeta de genciana,
mientras que para el agua oxigena ha presentado una ligera sensibilidad ya que el desarrollo en el
diámetro obtenido no fue homogéneo, seguido se nota que el isodine hizo una inhibición uniforme de
10 mm de diámetro, y los que más inhiben el crecimiento de Serratia marcescens son el Lysol y
Merthiolate ambos a un diámetro de 15 mm, lo que nos indica que es sensible a compuestos con yodo,
al cloruro de benzalconio, a fenoles y derivados.
Se realizaron las observaciones a las 24 horas y se volvieron a mandar a incubación otras 24 horas
para ver si había cambio alguno en el crecimiento, a pesar de ellos los resultados fueron los mismos.
Referencias:
● Clinical Laboratory Standards Institute. M100-S25. Performance Standards for antimicrobial
susceptibility testing; twenty-fifth informational supplement. January 2015. Vol 35. No. 3
● Madigan, M. T., J. M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock. Biología de los
microorganismos. 10ª Ed.
Prentice Hall Iberia. España
● Ramírez-Gama, R. M., B. Luna Millán, O. Velásquez Madrazo, L. Vierna García, A.
Mejía Chávez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernández Gómez, I. Müggenburg, A. Camacho
Cruz y M del C. Urzúa Hernández. 2006. Manual de Prácticas de Microbiología General.
5ª edición. Facultad de Química, UNAM. México. p.p 209