Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Ciencias

Investigación

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Asignatura: Biología de procariontes

Nombre de las alumnas:

 Ibañez Bustamante Paula Mariana

 Moreno García Karen Abigail
 Reyes Sarro Alondra Mariela
 Martinez Martinez Ana Rebeca

Cd. Universitaria a 14 de Noviembre de 2019

 INTRODUCCIÓN

Para que una célula viva, crezca y se reproduzca, debe ser capaz de incorporar y
transformar (mediante el metabolismo) los compuestos químicos que necesita para
obtener energía (catabolismo), así como las moléculas que pasarán a formar parte
de su material celular (anabolismo). Todas las reacciones químicas que se llevan
acabo son catalizadas por enzimas (catalizadores biológicos de naturaleza proteica
y actividad específica), las cuales se clasifican, de acuerdo al lugar del ambiente
celular donde actúan, en exoenzimas y endoenzimas.

Una de la tareas fundamentales del laboratorio de microbiología es la aplicación de

una metodología precisa que permita la identificación de los microorganismos
implicados en procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que tienen
relación con el hombre. Con el objetivo de identificar el agente etiológico
responsable del proceso infeccioso y para conocer las implicaciones
patogénicas/patológicas, la evolución clínica, y aplicar una terapia antimicrobiana
eficaz, un pilar fundamental en la práctica de la microbiología clínica lo constituye la
asignación de especie a un aislamiento microbiano.

METODOS FENOTIPICOS DE IDENTIFICACION BACTERIANA

Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos

convencionales, basados en las características fenotípicas, puesto que su
realización y coste los hace más asequibles. Los métodos genotípicos suelen
reservarse para las bacterias que no se pueden identificar con métodos
convencionales.
La identificación fenotípica bacteriana se basa fundamentalmente en la
comparación de las características fenotípicas de bacterias desconocidas con
aquellas de cultivos tipo. La fiabilidad de la identificación está· en proporción directa
al número de características similares. En Microbiología Clínica, la experiencia y
asociación entre el microorganismo y el sitio y tipo de infección es de gran ayuda en
la identificación preliminar.
En el proceso de identificación bacteriana tradicional se establecen tres niveles de
procesamiento:
a) Todas las características fenotípicas conocidas son importantes y hay que
tenerlas en cuenta cuando se inicia el proceso de identificación, pero en
 principio se seleccionan aquellas que se consideran pruebas primarias, que
son rápidas y sencillas de realizar, como la morfología en la tinción de Gram
u otras tinciones, crecimiento en diferentes atmosferas de incubación,
crecimiento en varios tipos de medios de cultivo, oxidasa y catalasa.
Utilizando estas pocas pruebas generalmente es posible situar a las
bacterias, de manera provisional, en uno de los principales grupos de
importancia médica.
b) El segundo nivel de identificación debe especificar el género al que pertenece
el microorganismo. Tanto en este nivel como en el anterior, la hipótesis sobre
la probable identidad de un microorganismo se apoya en las características
del cultivo (por ejemplo atmosfera) y en pruebas primarias, con las cuales se
puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a la
que pertenece un aislamiento. Las pruebas primarias son: Gram, morfología,
catalasa, oxidasa, oxidación-fermentación, fermentación de glucosa,
producción de esporas, crecimiento en aerobiosis y anaerobiosis y movilidad.
c) Por ˙último, la conclusión debe hacerse con la identificación a nivel de
especie. El empleo de ciertas pruebas bioquímicas permite identificar con
un alto grado de precisión la mayoría de las bacterias clínicamente
significativas.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las

bacterias objeto de identificación. Las pruebas requieren para su lectura el
crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; ya que las
pruebas detectan componentes metabólicos o determinan la sensibilidad de un
microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que
contienen el sustrato a metabolizar.

IDENTIFICACIÓN BASADA EN CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS

FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol

Indicador pH : Rojo de fenol
Acido: amarillo ( pH= 6.8)
Básico= rojo ( pH= 8.4)
No inoculado = rojo ( pH= 7.4 )
Fundamento: este medio detecta los cambios de pH a medida que se forman
producto ácidos. Las bacterias que fermentan hidratos de carbono son anaerobios
facultativos.
Consistencia del medio: Liquido
Inoculación: Por difusión.
Incubacion: 24-48 horas a 35-37 °C
Resultados:

Interpretación:
Positivo: color amarillo (acido)
Negativo: color rosa (básico)

Microorganismos fermentadores de carbohidratos:

 Enterobacteriaceae
 Fermentadores de glucosa y lactosa: E. coli, Klesiella y grupos enterobacter.
 Fermentadores de manitol: staphylococcus aureus
 Fermentadores de inositol: Proteus rettgeri
 Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica
 PRUEBA DE LICUEFACCIÓN DE GELATINA

Medio de cultivo: gelatina nutritiva

Fundamento: determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas
proteolíticas ( gelatinasas) que licuan la gelatina.
Consistencia del medio: semisólido
Inoculación: picadura en posición vertical hasta una profundidad de 2 a 2.5 cm
Condiciones de incubación: 18 – 24 horas a 35-37 °C
Resultados :

Positivo: medio licuado

Negativo: medio solido

Microorganismos positivos :
 Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermis
 Serratia liquefaciens
 Serrati marcecnscens
 Pseudomonas aeruginosa
 Flavobacterium

PRUEBA DE LECHE CON TORNASOL

Medio de cultivo: medio de leche tornasolada
Fundamento: el tornasol es un indicador de pH y de oxidaccion.reduccion que hace
que el medio pueda indicar diversas funciones metabólicas. Se pueden identificar
los siguientes propiedades metabolicas que ayudan en la identificación del
microorganismo:

1. Fermentación de lactosa: produce acido láctico, en consecuencia el pH acido

provoca un cambio de color. En caso de que las bacterias actúen sobre las
sustancias nitrogenadas, se libera amoniaco y el colo del pH básico es
purpura azulado.

2. Reducción del tornasol: algunos organismos reducen el tornasol a una

leucobase.

3. Formación de un coagulo: las enzimas proteolíticas provocan la hidrolisis de

las proteínas de la leche lo cual da como resultado su coagulación.

4. Peptonización: sucede cuando la bacteria contiene la enzima proteolítica

caseinasa. Se manifiesta por una aclaración acuosa del medio.

5. Formación de gas: se libera CO2 y H2 como producto de la fermentación de

la lactosa.

Consistencia del medio: liquido

Inoculación: difusión
Condiciones de incubación: tiempo de incubacion de 18 a 48 horas a 35-37
°C
Resultados:
Interpretación:
Rojo rosado: acido, fermentación de lactosa
Azul purpureo: no fermentación de lactosa
Azul: alcalino, sin fermentación de lactosa. El organismo ataca las sustancia
nitrogenadas.
Blanco: reducción del tornasol a leucobase.
Formación de coagulo: coagulación de la proteína de la leche.
Aclaración del medio: digestión de la proteína de la leche.
Gas: producción de burbujas en la campana de Durham.

SIN crecimiento:
 Clostridium cochlearium
 C. difficile
 C. putrefacienciens
 C. tetanomorphum
 Streptococcus equinus

Con crecimiento:
 Streptococcus bovis
 REDUCCION DE LA LECHE CON AZUL DE METILENO

Medio de cultivo: medio de leche con azul de metileno

Indicador: azul de metileno
Incoloro: estado reducido
Azul: esado oxidado, no inoculado (ph= 6.4)
Fundamento: permite diferenciar organismos por su capacidad de reducir el azul
de metileno en un medio con leche. el azul de metileno sustituye a los aceptores de
electrones naturales en cualquier cadena de trasporte de electrones, donde actúan
como reductores del sistema citocromo.
Consistencia del medio: liquido
Inoculación: difusión
Condiciones de inoculación: tiempo de incubacion de 18 a 24 horas a 35-37°C.
Resultados:

Positivos: enterococos
Negativos : especies de Streptococcus que no sean enterococos
 AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO
Medio de cultivo: agar TSI
Indicador: rojo de fenol
Acido : amarillo
Alcalino : rojo
Medio no inoculado : naranja rojizo

Fundamento: determina la capacidad de un organismo de atacar a un hidrato de

carbono especifico incorporado en un medio de crecimiento básico junto con la
determinación de posible acido sulfhídrico.
Consistencia del medio: solido en pico de flauta
Inoculación : picadura y estría
Condiciones de incubación: 18 a 24 horas a 35-37°C
Resultados:

Interpretación:
Rojo en pico de flauta : alcalino, degradación aerobia de glucosa
Amarillo en capa profunda: acido , degradacion anaeróbica de la glucosa
Amarillo en pico : acido
Amarillo en capa profunda: acido
Rojo en pico de flauta: alcalino
Sin cambio de color en capa profunda: alcalina
Producción de H2S : precipitado negro
Producción de gases : producción de burbujas

Reporte de resultados:
Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del
pico de flauta seguida de la reacción de capa profunda seguido de una barra.
1. K/A fermentación de glucosa solamente. Característico de bacterias no
fermentadoras de lactosa como Shigella.

2. A/A fermentación de glucosa y lactosa. Característico de coliformes

quefermentan lactosa como : E. coli, Klebsiella-Enterobacter.

3. K/A/H2S. glucosa fermentada, lactosa no fermentada y producción de H2S.

Caracteristico de bacterias no fermentadoras de lactosa como: Salmonella.
Arizona, Citrobacter y Proteus.

4. K/K no fermentación de glucosa ni lactosa. Característico de bacterias no

fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa
 PRUEBA DE ALMIDON
Medio de cultivo: agar almidon
Revelador: lugol

Fundamento:
El lugol con el almidón formal un complejo color café-purpura que
desaparece cuando el almidón ha sido degradado.
Consistencia del medio: solido en pico de flauta
Inoculación: estría
Condiciones de incubación: de 18 a 24 horas de 35 a 37°C
Resultados :