SEPARACION DE AMINOACIDOS POR (phase stationary), on which the components
CROMATOGRAFIA are deposited in specific places
SEPARATION OF AMINO ACIDS BY
CHROMATOGRAPHY
Autores
Arturo J. Suarez
Daniela A. Pedroza
Juan D. Patrón
Keila D. Vellogin
Víctor M. Jiménez
Resumen
La cromatografía es una técnica de análisis
químico cuyo objetivo es la separación de
sustancias puras en mezclas complejas. Esta
técnica depende del principio de absorción
selectiva. Debido a ciertas limitaciones que se
presentan para la identificación de sustancias
se hace necesario recurrir a métodos más
confiables tales como la cromatografía de
papel, en la cromatografía en papel, una
muestra liquida (fase móvil) fluye por una tira
vertical de papel absorbente (fase
estacionaria), sobre la cual se van
depositando los componentes en lugares
específicos.
Abstract
Chromatography is a chemical analysis
technique whose objective is the separation
of pure substances in complex mixtures. This
technique depends on the principle of
selective absorption. Due to certain
limitations that arise for the identification of
substances it is necessary to resort to more
reliable methods such as paper
chromatography, in the chromatography on
paper, a liquid sample (mobile phase) flows
through a vertical strip of absorbent paper
Palabras claves: cromatografía, capilaridad,
papel, separación, adsorción, fase
Key words: chromatography, capillarity,
paper, separation, adsorption, phase
Introducción
En bioquímica se emplean diversos métodos
para trabajar en el laboratorio. Uno de los
más utilizados es la de la cromatografía en
papel, las diversas técnicas de cromatografía
se utilizan para aislar y separar los diversos
compuestos, medir su peso molecular y
evaluar la pureza de los mismos. La
cromatografía en papel es un tipo de
cromatografía de reparto, en donde los
componentes de una mezcla se separan en
base a una distribución diferente entre la fase
móvil y la fase estacionaria. Existen diferentes
tipos de cromatografía en los cuales se
utilizan una fase móvil y una estacionaria. De
acuerdo a los tipos de fase estacionaria y
móvil, los tipos de cromatografía pueden ser
en papel, en capa fina, gas, liquido, en gel y de
afinidad. El presente artículo pretende
interpretar un cromatograma de una corrida
cromatografía en papel y calcular su RF para
identificar una muestra determinada.
Materiales y métodos
1. Papel de filtro (Whatman N° 1)
2. Muestra (solución de aminoácidos)
3. Soluciones estándar de aminoácidos
0,1M.
4. Solvente: mezclar en volúmenes 100
partes de n-butanol, 30 partes de
ácido fórmico y 25 partes de agua.
5. Revelador: solución de ninhidrina al
0,1% en acetona
6. Cámara cromatografíca
7. Tubos capilares
8. Estufa a 100 ◦c
9. Nebulizador
Para realizar la práctica se cortó un papel con
aproximadamente 15 x 15 cm. Luego, se trazó
con lápiz una línea a lo largo de una de las
extremidades a 2,5 cm del borde. Se
marcaron cuatro puntos distintos con
distancias adecuadas a lo largo de la línea, se
aplicó trionina (p1), valina (p2), lisina (p3) y el
punto de muestra (p4) de 0,5 cm de diámetro
usando tubos capilares. Se grapo el papel en
forma circular se introdujo el papel en la
cámara cromatografía cuidando que la línea
marcada no tocara el solvente. Se selló la
cámara cromatografía y dejó que el solvente
actuara por aproximadamente 30 min hasta
que alcanzó 1cm sobre la parte superior del
papel. A continuación, se retiró el cilindro de Figura 2: Corresponde a los primeros pasos
papel y se marcó con lápiz la altura que de la técnica, que es marcar con líneas y
alcanzo el solvente, se llevó a secar a la estufa, colocar los puntos para las muestras.
finalmente se adiciono ninhidrina al 0,1 en
acetona y se dejó secar. En el grupo de trabajo
se tomaron anotaciones al respectó.

Resultado y discusión

A continuación, se ilustra los resultados

obtenidos en la práctica:

Figura 3: se aprecia como el solvente (fase

móvil), asciende por capilaridad a través del
papel cromatográfico (fase estacionaria)
Figura 1: En la imagen se observa las
distintas muestras que se utilizaron en la .
práctica p1, p2, p3, p4.
 𝟐.𝟔 𝒄𝒎
 𝑹𝑭𝒑𝟒 = = 𝟎, 𝟒𝟕𝟐 𝒄𝒎
𝟓,𝟓 𝒄𝒎

Comparando los valores conocidos de los

patrones con los valores obtenidos de los
aminoácidos de la sustancia problema
podemos afirmar que la lisina tuvo la
distancia recorrida más baja de todas,
seguida de la treonina que la distancia fue
baja, aunque un poco más que la lisina,
luego le sigue la mezcla y por último la
valina fue la que más recorrió en
distancia. Esto se debe a que podemos
Figura 4: apreciamos el resultado final de la comparar la polaridad de los
cromatografía de papel. aminoácidos, observando la distancia
Las medidas obtenidas fueron las siguientes: recorrida por cada uno de ellos en el
cromatograma. A mayor polaridad menos
Sustancia Distancia recorrida por distancia recorrerá como es el caso de la
la muestra lisina y treonina, a la inversa, una mayor
P1 Treonina 0.1 N 1.7 cm distancia recorrida indicara menor
P2 mezcla 2.3 cm polaridad, por tener afinidad por la fase
P3 lisina 0.8 cm móvil como es el caso de la valina.
P4 Valina 0.1 N 2.6 cm
Distancia recorrida 5.5 cm Investigación.
por el solvente:
Tabla 1: resultados del laboratorio o ¿Qué factores afectan el proceso de
cromatografía de papel?
Ahora aplicamos la fórmula del factor R/ a. La aplicación de muestra en
retención: exceso o de una disolución muy
concentrada de ésta en la placa o en
la columna de cromatografía:
𝑫𝒊𝒔𝒕𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒓𝒆𝒄𝒐𝒓𝒓𝒊𝒅𝒂 𝒑𝒐𝒓 𝒍𝒂 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 Cuando se inyecta una masa excesiva
𝑹𝑭 =
𝒅𝒊𝒔𝒕𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒓𝒆𝒄𝒐𝒓𝒓𝒊𝒅𝒂 𝒑𝒐𝒓 𝒆𝒍 𝒔𝒐𝒍𝒗𝒆𝒏𝒕𝒆 de solutos a separar, se sobrecarga la
columna, al realizar la separación la
columna de cromatografía puede ser
𝟏.𝟕 𝒄𝒎
 𝑹𝑭𝑷𝟏 = 𝟓.𝟓 𝒄𝒎 = 𝟎. 𝟑𝟎𝟗 𝒄𝒎 demasiado corta para separar
completamente la muestra,
generando una pérdida
𝟐.𝟑 𝒄𝒎 b. El uso de una fase móvil de
 𝑹𝑭𝑷𝟐 = 𝟓.𝟓 𝒄𝒎 = 𝟎, 𝟒𝟏𝟖 𝒄𝒎
alta polaridad en un sistema
cromatográfico en fase normal.
c. El uso de una fase móvil de
𝟎.𝟖 𝒄𝒎
 𝑹𝑭𝑷𝟑 = 𝟓,𝟓 𝒄𝒎 = 𝟎, 𝟏𝟒𝟓 𝒄𝒎 alta polaridad en un sistema
 cromatográfico en fase inversa. En la
cromatografía en fase inversa, el
compuesto unido químicamente es
no polar, frecuentemente
hidrocarburo alifático, y se emplean
las fases móviles son solventes
polares (agua, metanol, acetonitrilo).
En este caso, las sustancias más
polares eluyen primero y las
hidrofóbicas quedan más retenidas.
d. La disposición de una
cantidad excesiva de fase móvil en la
cámara de desarrollo cromatográfico
e. La aplicación de la muestra
muy cerca del extremo de la placa
que se sumerge en la fase móvil. Si se
aplica o siembre la muestra muy
cerca de un extremo del papel, puede
que al sumergirlo en el solvente en la
cámara cromatográfica, este en vez
de arrastrar la siembra a lo largo del
papel, esta se diluirá en el solvente sin
permitir ver la separación de la
siembra.
muy versátil; a sapiencia de que el
flujo de la fase móvil es producido
por capilares. Además de ello
presenta características tales como:
es sencilla, rápida y principalmente
no requiere el uso de aparatos
complicados.
Bibliografía
Murray. Bioquímica ilustrada de Harper.29
Ed. Mc Graw Hill. México. 2012.
LAITINEN, HERBERT Y HARRIS, WALTER.
Análisis químico 1ra edición. México: editorial
reverte S. A.
MERCK Y DARMSTADT. Información sobre
cromatografía en capa fina 1. Alemania.

Conclusión

 Este método es muy efectivo, ya que

permite observar de una manera fácil
los aminoácidos presentes en la
muestra.

 Para realizar una mejor cromatografía

en papel de aminoácidos, se sugiere
utilizar fases móviles polares y
corridas bidimensionales para que la
separación sea eficiente.
 La cromatografía en papel es una
técnica que mediante la ayuda de un
solvente permite separar diferentes
sustancias en este caso aminoácidos
gracias a su diferencia en los factores
de retención.
 Llevada a cabo esta práctica se pudo
comprender que la cromatografía en
papel, es una técnica de separación