DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES POR
ESPECTROFOTOMETRIA
Flores Chinchayhuara, J.
Escuela Profesional de Ingeniería Agroindustrial, EPIA, Universidad Nacional del Santa, Nuevo
Chimbote, Perú
I. INTRODUCCION
Se empleó en método del ácido 3,5
dinitro salicílico (DNS) para
calcular la concentración de
azúcares reductores en distintas
muestras. El procedimiento se basa
en una reacción redox que ocurre
entre el DNS y los azúcares
reductores presentes en la muestra.
Este método ha sufrido varias
modificaciones a través de los años
para adecuarse al análisis de
diferentes materiales y su principal
ventaja radica en su alta
sensibilidad y productividad
debido a que es un método
espectrofotométrico.
El método del DNS no es
recomendable utilizarlo para la
determinación de azúcares
reductores en muestras
intensamente coloreadas como
mieles y caldos de fermentación
que la contengan. Estudios de
Otero y colaboradores muestran
dispersión en la determinación de
azúcares reductores en mieles por
el método del DNS con la
modificación de Miller.
En el presente trabajo se desarrolla
un procedimiento para la
determinación de azúcares
reductores en la naranja por el
método del ácido 3,5
dinitrosalicílico. 2 Para la
determinación de la curva de
calibrado se hiso uso del equipo
Multi modal dándonos así una
curva de calibrado.
La curva patrón permitirá
relacionar la absorbancia a 540 nm
de los tubos con la cantidad
μmoles de glucosa y fructosa
presentes en la disolución y, por lo
tanto, haciendo el cálculo
correspondiente, se podrá estimar
la velocidad a la que ha funcionado
la enzima (μmoles de sacarosa
hidrolizados por la enzima por
unidad de tiempo), es decir, su
actividad.
Esta técnica tiene la ventaja de ser
un método preciso y rápido en
comparación con los que utilizan
derivados fenólicos. Presenta
desventajas por la presencia de
polifenoles que ocasiona la
reducción del reactivo.
Los objetivos de la práctica fueron
cuantificar azucares reductores por
espectrofotometría y
comparándolas con valores
teóricos establecidos.
II. MATERIALES Y METODOS
Reactivo DNS
Se usó Tartrato de Sodio y Potasio,
Hidróxido de Sodio, Metabisulfito
de Sodio, Reactivo DNS, cada
subgrupo trabajo con una naranja.
Preparación del Reactivo DNS
Se mezcló y disolvió en 250 ml. de
agua destilada 8 gr. de NAOH y 15
gr. de tartrato de Sodio y Potasio.
Luego se agregó 5 gr. de Acido 3,5
dinotrasalicilico bajo
calentamiento. Se aforó a 500 ml
con agua destilada y se almacenó a
temperatura ambiente
protegiéndolo de la luz. Primero se
utilizó un estándar de 1.0 mg/ml.
de glucosa, realizamos las
diluciones para obtener
concentraciones de 0, 0.2, 0.4, 0.6,
0.8 y 1.0, y realizamos una curva
patrón de glucosa. Luego se
extrajo 1 ml de cada solución y se
colocó en un tubo de ensayo
adicionando 1 ml de la solución
DNS, se agitó y llevó luego a
ebullición por 10 minutos. Se
enfrió rápidamente y agregamos
10 ml (ó 5ml) de agua destilada
con previa agitación. Llevamos la
muestra al espectrofotómetro a 540
nm y leímos su absorbancia.
A) Preparación de muestra
Se extrajo el zumo de naranja,
filtramos y medimos su volumen
(ml).
B) Análisis de muestra
Diluimos 1 ml. de cada muestra en
100ml. de agua destilada en una
probeta, luego se tomó 1 ml de esta
solución en un tubo de ensayo
adicionando un 1ml. de la solución
DNS, agitar y llevamos luego a
ebullición por 10 min. Enfriamos
rápidamente y agregamos 10 ml. (o
5 ml.) de agua destilada con previa
agitación. Llevamos la muestra al
espectrofotómetro a 540 nm y
leímos su absorbancia. Con este
dato encontrado insertamos en la
curva de calibración previamente
construida y el resultado se lee
como gramo de glucosa.
III. RESULTADOS Y DISCUSIÒN
Curva de Calibración
Representación gráfica de los
datos obtenidos por el
espectrofotómetro
Curva de Calibraciòn
0.04
Absorbancia
0.03
0.02 y = 0.0606x + 0.0055
R² = 0.9303
0.01
0
0 0.2 0.4 0.6
Concentracion(mg/ml)
Gráfico 1. Curva estándar de absorbancia
relacionada con la concentración de las
soluciones estándares de ácido ascórbico.
Al observar el gráfico 1, se obtuvo una
curva estándar muy similar a la obtenida
con los datos de absorbancia en distintas
concentraciones, para afirmar esto nos
basamos en el R2 = 0.9303, lo cual
significa que la curva estándar es la
adecuada para la ecuación:
Y= 0.0606x + 0.0055
Esta ecuación se usa para hallar la
cantidad de azucares reductores
presentes en la muestra analizada
(naranja).
Determinación de Azúcares
reductores
Luego de haber hecho nuestra curva de
calibración y su ecuación con ayuda del
espectrofotómetro en la naranja, ahora
reemplazamos en la ecuación de la recta
para determinar los azucares reductores
en la muestra en análisis.
Tabla 1. Cantidad de vitamina C (g/100ml) en V. REFERENCIAS
la naranja de acuerdo con su absorbancia Carlos, Ortiz Juan. 2014. Analisis de Azucares
Reductores . Barcelona : s.n., 2014. Córdova, Mauro
NARANJA
Fernandez. 2014. Reologia de Productos
MUESTRA % De Azucares Reductores
Alimentarios.
1 1.0525
2 1.0853
3 1.0699
PROMEDIO 1.0692 ± 0.01641

La cantidad de azucares reductores en la

naranja es 1.0692 (g/ml) con desviación
estándar de 0.01641, por lo que
llegamos a la conclusión que los datos
en los 3 grupos de trabajo fueron
similares.
(Carlos, 2014) en su investigación
presenta como resultado una cantidad
de azucares reductores de 2.11 con una
desviación estándar de 0.4, siendo
similar a lo obtenido en práctica, por lo
que se puede decir que los resultados
fueron óptimos.
IV. CONCLUSION
Sabiendo también que el valor teórico
de la naranja es de 1.053 (g/cm3) y al
haber obtenido 1.0692 (g/ cm3)
podemos concluir que la práctica se
realizó satisfactoriamente con datos
aproximados.
Después de determinar la cantidad de
azucares reductores en la naranja con un
valor de 1.0692 (g/ cm3) con una
desviación estándar de 0.01641, la
cantidad que se encontró permite decir
que la naranja representa una fruta
saludable y nuestro análisis sirve de
referencia para investigaciones dentro
del campo.