UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO

FACULTAD DE QUÍMICA
LICENCIATURA EN QUÍMICA EN ALIMENTOS.

ALUMNA:
FRANCO DEL OLMO MAYTE
HERNÁNDEZ ARENAS ABIGAIL.

PROFESORA:
M. EN ASS BERTHA JAUREGUI RODRÍGUEZ

PRÁCTICA NO 9.
METABOLISMO BACTERIANO

ASIGNATURA:
MICROBIOLOGÍA GENERAL

SEMESTRE: 3° GRUPO: 34
 OBJETIVO:

Identificar en las diferentes pruebas bioquímicas la presencia de metabolitos
primarios y secundarios.
- Identificar el género de una bacteria específica de acuerdo a las pruebas
bioquímicas realizadas
INTRODUCCIÓN:
El término metabolismo se refiere al conjunto de reacciones que ocurren en la célula y
conducen a la transformación de diversos compuestos, en estas transformaciones
participan diferentes enzimas que catalizan reacciones de oxido-reducción, hidrólisis,
transferencia de grupos, isomerización y síntesis, lo que conduce a la degradación de
los compuestos incorporados y a la producción de nuevos compuestos.
Cuando las reacciones químicas determinan la degradación del compuesto
incorporado, el proceso desemboca en la producción de energía y se le denomina
colectivamente catabolismo; por el contrario, cuando los componentes incorporados o
los procedentes del catabolismo son utilizados para la síntesis de compuestos
celulares, se consume energía y el proceso recibe el nombre de anabolismo.

Pruebas bioquímicas
Las pruebas bioquímicas a ensayar son básicas para la identificación de
enterobacterias, sin embargo existen pruebas para determinar hidrólisis de
compuestos específicos.

Hidrólisis de polímeros: Polisacáridos como celulosa y almidón, proteínas, como

gelatina caseína, lípidos.
Utilización de glucosa por vía específica

Fermentación de azúcares:
TSI (triple azúcar hierro), fermentación de lactosa, prueba de Kliger. Rojo de Metilo y
Vogues Proskauer.

Utilización de oxígeno:
Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que está relacionada con la capacidad
de los microorganismos para utilizar oxígeno como aceptor final de electrones, ésta
cataliza la transformación de peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Este tipo de
enzima no existe en microorganismos anaerobios y algunas especies microaerofílicas.

Utilización de ácidos orgánicos:

Prueba de citrato

Utilización de compuestos nitrogenados y azufrados:

Aminoácidos: urea, cisteína, lisina, triptófano.
Prueba de Indol, LIA (Lysine, Iron Agar), MIO (Movilidad Indol Ornitina).

Principales pruebas bioquímicas para enterobacterias:

TSI, MIO, LIA, SIM (Azufre Indol Movilidad), Citrato, Rojo de metilo, Vogues Proskauer.,
Urea.
 INSTRUMENTOS
MATERIALES SUSTANCIAS
 
 Cepa pura o cultivo  Agar TSI
axénico de 24 hs  Agar LIA
 14 tubos de ensayo con  Agar Citrato
tapa de rosca de 13 X  Agar MIO
100
 Agar SIM
 Asa bacteriológica
 Rojo metilo Vogues-
 Mechero Fisher
Proskauer
o Gradilla

ANALISÍS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

PROCEDIMIENTO:
Se realizarán siete pruebas bioquímicas a diferentes cepas desconocidas para que al
consultar las tablas, se pueda inferir el microrganismo.
Utilizando un cultivo de 24 hs se realizará una tinción de gram para observar la
morfología microscópica y completar su identificación.
1. En zona estéril, tomar una asada de una sola colonia característica e inocularla en la
serie de tubos de la siguiente manera:

Inocular primero los tubos de agar sólido, enseguida el medio semisólido finalmente el
medio líquido.
2. Los tubos de agar sólido inclinado (Citrato, TSI, LIA) se inoculan primero por picadura
seguido de estría en superficie, los medios semisólidos (MIO, SIM) solamente por
picadura (3/4 partes del medio), finalmente los medios líquidos (caldos RM-VP), se
enjuaga el asa en el medio.
3. Se deja una serie de tubos sin inocular para comparar los tubos después de incubar,
puede ser una por grupo.
4. Incubar a 37 °C por 24 hrs excepto el de RM-VP que se deja incubar de 5 a 7 días
5. Después de incubación observar cambios en tubos, agregar reactivos cuando se
indique.
  Hacer las observaciones correspondientes y comparar los resultados obtenidos en las tablas. Discutir los resultados e
inferir microrganismo presente tomando en cuenta morfología microscópica

Medio de Prueba Resultados Bacteria Imagen

cultivo
TSI Glucosa Positiva

Lactosa sacarosa Negativo Escherichia coli

H2S Positivo

LIA Negativo en tubo 1

H2S Escherichia coli 1.
Positivo en tubo 2 2.
Lisina Negativo
CITRATO Negativo Escherichia coli
puede exhibir tazas
- de desarrollo pero
no cambios de
color
SIM Indol Negativo Escherichia coli
(+ 2 a 3 H2S Positivo
gotas de
react de Movilidad Positivo
Kovacs)

MIO Movilidad
(+ 2 gotas Positivo Positivo 1.
React. de
Kovacks) Escherichia coli 2.
Indol Positivos Positivos
Ornitina Negativo Positivo
tubo 1 tubo 2
RM-VP Rojo de Metilo Positivo
(2 a 3 gotas) (tubo 1) Escherichia coli
 α-naftalina/ KOH Negativo
(10 gotas de α-naftalina, (tubo 2)
5 gotas de KOH al 40%)

1. 2.

MEDIOS DE CULTIVO SIN INOCULAR

 MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA de E. Coli:
CARACTERÍSTICAS CARACTERÍSTICAS
MORFOLÓGICAS COLONIALES

- Bacilo Gram negativo. - Las colonias de E. Coli en agar

- No forma esporas
- Móviles (flagelos perítricos).
- Miden 0.5 µ de ancho por 3 µ de
largo. Catalasa positivos.
- Oxidasa negativos.
- Reducen nitratos a nitritos.
- Producen vitamina B y K
E.M.B. (eosina y azul de metileno)
tienen 2 a 4 mm de diámetro, un
centro grande de color oscuro e
incluso negro, y tienen brillo verde
metálico cuando se observan con luz
refleja.
- En agar MacConkey las colonias son
rojas con halo turbio

CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante realizar pruebas bioquímicas a las cepas bacterianas?
Para conocer las características metabólicas de los microrganismos
inoculándolos en diferentes medios de cultivo, con sustratos que pueden utilizar
como fuente de energía, fuente de carbono y otros nutrientes esenciales para su
crecimiento.

2. ¿Qué precaución debe tener al momento de sembrar el medio SIM y MIO?

Al momento de realizar la picadura puede existir un error y desviar la dirección
de la picadura hacia uno de los extremos del tubo, se puede llegar al fondo del
tubo, o se puede inocular de manera inadecuada al momento de estriar.

3. Explica el fundamento de la prueba de catalasa y cuál es su importancia

Es una metodología usada en los laboratorios de bacteriología para poner en
evidencia la presencia de la enzima catalasa en aquellas bacterias que la
poseen. Las bacterias que contienen citocromo poseen la enzima catalasa, es
decir, que las bacterias aerobias y anaerobias facultativas deberían poseerla.
se usa principalmente para distinguir a las familias Staphylococaceae y
Micrococaceae (ambas catalasa positivas) de la familia Streptococaceae
(catalasa negativa).

4. Explica en qué consisten las pruebas que determinan la presencia de enzimas

proteolíticas de caseínas y gelatinas
Se incorpora gelatina a diversos medios para determinar la capacidad de un
organismo de producir enzimas de tipo proteolítico, que son capaces de la
gelatinósis (gelatinasas). Son detectadas por la digestión o licuefacción de la
gelatina. El catabolismo de las proteínas por las gelatinasas es un proceso en
dos etapas que da como resultado final una mezcla de aminoácidos individuales.
 5. Qué nos indican las pruebas de rojo de metilo y Vogues Proskauer
Se utiliza para ayudar a la identificación de bacterias pertenecientes a la
familia Enterobacteriaceae. Especialmente es útil para diferenciar cepas de
Escherichia coli de Klebsiella y Enterobacter, entre otras.
El test Voges-Proskauer revela la capacidad del microorganismo de formar
acetil metil carbinol (acetoína), producto intermediario del 2,3-butanediol en
condiciones de aerobiosis.
CONCLUSIONES
Podemos concluir que las pruebas bioquímicas generalmente determinan la
actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio
de cultivo y que la bacteria al crecer se transforme o no. La identificación bioquímica
se caracteriza por los metabolismos específicos de cada microorganismo y que son
capaces de modificar el ambiente que las rodea utilizando el medio para su
crecimiento lo que define a cada tipo bacteriano. Y por medio de los resultados de
las mismas, se concluye que la enterobacteria inoculada (empleada para las
pruebas) se trata de E. coli.

REFERENCIAS
Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica - Mac
Faddin - Ed. Panamericana - 1° edición – Argentina – 1980
 ACTIVIDAD DE SÍNTESIS
- El alumno elaborará un mapa conceptual relacionado con la práctica

Hecho a mano
  Elaborará un glosario de términos
Bacteria: Organismo unicelular, microscópico, sin clorofila ni núcleo, pero con
gránulos de cromatina dispersos en el protoplasma y provistos a veces de flagelos
o cilios mediante los cuales se mueve en un medio líquido. Muchas de sus especies
viven en las aguas, dulces o marinas; abundan en sustancias orgánicas, en el suelo
y en materias orgánicas en putrefacción; otras son parásitas, más o menos
patógenas.
Cepa: En microbiología, conjunto de virus, bacterias u hongos que tienen el mismo
patrimonio genético.
Colonia: Asociación de talófitos en la que las células proceden todas de una sola
célula madre, similar a los cenobios pero más permanentes y en la que se suceden
las generaciones
Enzima: Catalizador biológico, normalmente una proteína, que mediatiza y
promueve un proceso químico sin ser ella misma alterada o destruida. Son
catalizadores extremadamente eficientes y muy específicamente vinculados a
reacciones particulares.
Medio de Cultivo: Es una solución acuosa bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel en la que están presentes todas las sustancias necesarias
para el crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s).
Medios diferenciales: Son aquellos que permiten distinguir a simple vista dos o
más tipos de bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún
nutriente del medio. Ese comportamiento diferencial se traduce normalmente en un
viraje de color de una sustancia Indicadora presente en el medio.
Medios selectivos: Son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o unos pocos
tipos) de Microorganismos. En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos
sólidos que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas
bacterias, pero permiten el crecimiento de otras. (Ej. medios que llevan violeta cristal
inhiben el crecimiento de bacterias Granpositivas).
Esterilización: Es la eliminación completa de toda forma de vida microbiana. Puede
conseguirse a través de métodos químicos, físicos y gaseosos