ELISA Handbook

Prinsip, Troubleshooting, Preparasi Sampel

dan Assay Protokol â € | â € |

https://www.bosterbio.com/ebooks
Daftar Isi Halaman

1. Pendahuluan â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â €2 | â € | â € | ...

2. General ELISA Prosedur â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | ... 2

3. ELISA Jenis â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 3

saya,·Langsung ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |.â € | 4

saya,·Tidak langsung ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 4

saya,·Sandwich ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 5

saya,·Kompetitif ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 5

4. ELISA Interpretasi Data â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |. 6

5. Preparasi Sampel â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â7€ | â € |.

saya,·Sel Budaya Supernatan â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â7 € |.

saya,·Sel Ekstrak â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 7

saya,·AC Media â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |7..

saya,·Tissue Extract â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 8
â € | â € | â € | ...

6. Direkomendasikan Protokol â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â 9€ | â € |.

saya,·Reagen Persiapan â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â9€ | â € | ...

saya,·Sandwich ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 10

saya,·Tidak langsung ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â 12

€ | â € | â € | â € | â € |.

saya,·Langsung ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 14

saya,·Kompetitif ELISA â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 16

7. Panduan Pemecahan Masalah â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â €19

| â € | â € | â € | ..

saya,·Lemah atau No Signal â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â 19

€ | â € | â € | â € | ..

saya,·Jenuh Signal â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â20

€ | â € | â € | ..

saya,·Tinggi Latar Belakang â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â €21

| â € | â € | â € | ....

saya,·Rendah Sensitivitas â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 23

saya,·Poor Standard Curve â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â €24

| â € | â € | ...

saya,·Miskin Meniru data â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â25

€ | â € | â € |.

saya,·Tidak konsisten Assay-to-Assay Hasil â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |. 26

saya,·Lambat Pembangunan Warna â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |. 26

saya,·Piring Pencitraan Masalah â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | 27

8. TANYA JAWAB â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | .. 28

9. Pengurutan Informasi â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € | â € |. 30

1
pengantar

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) adalah teknik pengujian berbasis piring yang dirancang untuk mendeteksi dan
mengukur peptida, protein, antibodi dan hormon. Dalam ELISA, antigen harus bergerak ke permukaan padat dan kemudian
kompleks dengan antibodi yang terkait dengan enzim. Deteksi dilakukan dengan menilai aktivitas enzim terkonjugasi melalui
inkubasi dengan substrat untuk menghasilkan produk terukur. elemen penting yang sebagian besar strategi deteksi interaksi
antigen-antibodi yang sangat spesifik.

ELISA biasanya dilakukan di 96-baik (atau 384-baik) piring polystyrene, yang akan antibodi pasif mengikat dan protein. Hal ini ini mengikat

dan imobilisasi reagen yang membuat ELISA begitu mudah untuk merancang dan melakukan. Memiliki reaktan dari ELISA bergerak ke

permukaan lempeng memudahkan untuk memisahkan terikat dari bahan non-terikat selama pengujian tersebut. Kemampuan untuk

membasuh bahan nonspesifik terikat membuat ELISA alat yang ampuh untuk mengukur analit tertentu dalam persiapan mentah.

General ELISA Prosedur

Kecuali Anda menggunakan kit dengan piring yang pra-dilapisi dengan antibodi, ELISA dimulai dengan lapisan langkah, di mana lapisan pertama,

yang terdiri dari antigen target atau antibodi, yang teradsorbsi ke 96-baik piring polystyrene. Hal ini diikuti dengan pemblokiran Langkah di mana

semua situs terikat dilapisi dengan agen blocking. Setelah serangkaian mencuci, piring adalah diinkubasi dengan antibodi enzim-terkonjugasi. seri

lain dari mencuci menghapus semua antibodi terikat. SEBUAH substrat kemudian ditambahkan, menghasilkan sinyal kalorimetrik. Akhirnya, piring

adalah

Baca baca.

Karena penggunaan assay permukaan mengikat untuk pemisahan, beberapa mencuci diulang dalam setiap langkah ELISA untuk menghapus materi terikat.

Selama proses ini, adalah penting bahwa kelebihan cairan dihapus untuk mencegah pengenceran solusi ditambahkan pada langkah uji berikutnya. Untuk

memastikan keseragaman, mesin cuci piring khusus yang sering digunakan.

ELISA bisa sangat kompleks dan termasuk beberapa langkah intervensi, terutama ketika mengukur konsentrasi protein pada sampel yang

heterogen seperti darah. Yang paling kompleks dan bervariasi langkah dalam proses keseluruhan deteksi, di mana beberapa lapisan antibodi

dapat digunakan untuk sinyal Amplify.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

2
Jenis ELISA

ELISA dapat dilakukan dengan sejumlah modifikasi prosedur dasar: langsung, tidak langsung, roti
atau kompetitif. Langkah kunci, imobilisasi antigen yang menarik, dapat dicapai dengan adsorpsi langsung ke piring assay atau secara

tidak langsung melalui capture antibodi yang telah melekat pada piring. antigen tersebut kemudian dideteksi baik secara langsung

(enzim-label antibodi primer) maupun tidak langsung (enzim-label antibodi sekunder). Antibodi deteksi biasanya diberi label dengan

alkali fosfatase (AP) atau horseradish peroxidase (HRP). Sebuah pilihan substrat yang tersedia untuk melakukan ELISA dengan HRP

atau AP konjugasi. Pilihan substrat tergantung pada sensitivitas uji yang diperlukan dan instrumentasi yang tersedia untuk

sinyal-deteksi (spektrofotometer, fluorometer atau luminometer).

Di antara format uji standar dibahas dan digambarkan di bawah, di mana perbedaan kedua menangkap dan deteksi adalah kekhawatiran,

penting untuk membedakan antara strategi tertentu yang ada khusus untuk deteksi langkah. Namun antigen ditangkap ke piring (dengan

adsorpsi langsung ke permukaan atau melalui pra-dilapisi "menangkap" antibodi, seperti dalam sandwich ELISA), itu adalah langkah deteksi

(baik sebagai deteksi langsung atau tidak langsung) yang sangat menentukan sensitivitas ELISA.

3
1. langsung ELISA

Untuk deteksi langsung, antigen dilapisi untuk piring multi-baik terdeteksi oleh antibodi yang telah langsung konjugasi enzim.

metode deteksi ini adalah pilihan yang baik jika tidak ada tersedia secara komersial kit ELISA untuk protein target Anda.

Keuntungan

saya,·Cepat karena hanya satu antibodi dan lebih sedikit langkah-langkah yang digunakan.

saya,· Reaktivitas silang antibodi sekunder dihilangkan.

kekurangan

saya,· Immunoreactivity dari antibodi primer mungkin terpengaruh oleh label dengan enzim atau tag.

saya,· Pelabelan antibodi utama untuk setiap sistem ELISA spesifik memakan waktu dan mahal.

saya,· Tidak ada fleksibilitas dalam pilihan label antibodi primer dari satu percobaan ke yang lain.

saya,· Minimal sinyal amplifikasi.

2. tidak langsung ELISA

Untuk deteksi tidak langsung, antigen dilapisi untuk piring multi-baik terdeteksi dalam dua tahap atau lapisan. Pertama antibodi

primer berlabel, yang spesifik untuk antigen, diterapkan. Berikutnya, sebuah antibodi sekunder enzim-berlabel terikat ke antibodi

pertama. Antibodi sekunder biasanya antibodi anti-spesies dan sering poliklonal. Assay tidak langsung, format yang populer paling

untuk ELISA, memiliki keuntungan dan kerugian:

Keuntungan

saya,· Berbagai macam antibodi sekunder berlabel tersedia secara komersial.

saya,· Serbaguna karena banyak antibodi primer dapat dibuat dalam satu spesies dan diberi label antibodi sekunder yang sama dapat digunakan

untuk deteksi.

saya,· immunoreactivity maksimum antibodi primer dipertahankan karena tidak berlabel.

saya,· Sensitivitas meningkat karena setiap antibodi primer berisi beberapa epitop yang dapat terikat dengan antibodi sekunder berlabel,

memungkinkan untuk amplifikasi sinyal.

kekurangan

saya,· Reaktivitas silang mungkin terjadi dengan antibodi sekunder, sehingga sinyal spesifik.

saya,· Langkah inkubasi ekstra diperlukan dalam prosedur.

4
3. Sandwich ELISA

Sandwich ELISA biasanya membutuhkan penggunaan pasangan antibodi cocok, di mana masing-masing antibodi spesifik untuk berbeda, bagian

non-overlapping (epitop) dari molekul antigen. Sebuah antibodi pertama (dikenal sebagai capture antibodi) adalah dilapisi dengan sumur. Larutan

sampel kemudian ditambahkan ke sumur. Sebuah antibodi kedua (dikenal sebagai antibodi pendeteksi) berikut langkah ini dalam rangka untuk

mengukur konsentrasi sampel. Jenis ELISA memiliki keuntungan sebagai berikut:

spesifisitas
saya,· tinggi: antigen / analit secara khusus ditangkap dan terdeteksi

Cocok
saya,· untuk sampel kompleks (atau crude / tidak murni): antigen tidak memerlukan pemurnian sebelum pengukuran

Fleksibilitas
saya,· dan sensitivitas: kedua metode deteksi langsung atau tidak langsung dapat digunakan

4. kompetitif ELISA

Acara utama ELISA kompetitif (juga dikenal sebagai inhibisi ELISA) adalah proses reaksi kompetitif antara antigen sampel
dan antigen terikat pada sumur piring mikrotiter dengan antibodi primer. Pertama, antibodi primer diinkubasi dengan
antigen sampel dan antibodyâ yang dihasilkan € “kompleks antigen ditambahkan ke sumur yang telah dilapisi dengan
antigen yang sama. Setelah masa inkubasi, setiap antibodi terikat dicuci off. Semakin banyak antigen dalam sampel,
antibodi lebih utama akan terikat pada antigen sampel. Oleh karena itu, akan ada jumlah yang lebih kecil dari antibodi
primer yang tersedia untuk mengikat antigen dilapisi pada sumur, menghasilkan penurunan sinyal. Keuntungan utama
dari jenis ELISA muncul dari sensitivitas yang tinggi terhadap perbedaan komposisi dalam campuran antigen kompleks,

5
Ringkasan Langkah kunci di Jenis ELISA Berbeda

tidak langsung Langsung Sandwich kompetitif

Menangkap Ab Coating X X sebagai X
antigen Coating sebagai sebagai X sebagai
Pemblokiran sebagai sebagai sebagai sebagai
Sampel (Antigen) Inkubasi X X sebagai sebagai
Primer Ab Inkubasi sebagai sebagai sebagai sebagai
Sekunder Ab Inkubasi sebagai X sebagai sebagai
substrat Prep sebagai sebagai sebagai sebagai
signal Deteksi sebagai sebagai sebagai sebagai
Analisis data sebagai sebagai sebagai sebagai

ELISA Interpretasi Data

ELISA uji menghasilkan tiga jenis data output:

1) Kuantitatif: Data ELISA dapat diartikan dibandingkan dengan kurva standar (pengenceran serial yang dikenal,
dimurnikan antigen) dalam rangka untuk secara tepat menghitung konsentrasi antigen dalam berbagai sampel.

2) Kualitatif: ELISA juga dapat digunakan untuk mencapai jawaban ya atau tidak menunjukkan apakah suatu antigen tertentu
hadir dalam sampel, dibandingkan dengan kosong juga tidak mengandung antigen atau antigen kontrol yang tidak terkait.

3) Semi-kuantitatif: ELISA dapat digunakan untuk membandingkan tingkat relatif dari antigen dalam sampel uji, karena
intensitas sinyal akan bervariasi langsung dengan konsentrasi antigen.

Data ELISA biasanya digambarkan dengan kerapatan optik vs konsentrasi log untuk menghasilkan kurva sigmoidal seperti yang ditunjukkan di bawah

ini. konsentrasi dikenal antigen yang digunakan untuk menghasilkan kurva standar dan kemudian data ini digunakan untuk mengukur konsentrasi

sampel tidak diketahui oleh dibandingkan dengan bagian linier dari kurva standar. Bahkan, itu adalah daerah yang relatif panjang linier dari kurva yang

membuat hasil ELISA akurat dan direproduksi. Konsentrasi diketahui dapat ditentukan secara langsung pada grafik atau dengan kurva software fitting

yang biasanya ditemukan pada pembaca piring ELISA.

6
Persiapan sampel

Prosedur di bawah ini memberikan panduan umum untuk persiapan sampel umumnya diuji untuk penggunaan di tes ELISA. Pada Boster, kita bekerja pada

rinci protokol persiapan sampel kami yang mencakup lebih dari 20 jenis sampel dan mengharapkan untuk memperbarui buku ini dalam waktu dekat. Silakan

periksa dengan literatur untuk eksperimen serupa dengan Anda untuk pengembangan alat tes baru Anda. Umumnya:

saya,· konsentrasi ekstrak protein setidaknya 1-2 mg / mL.

saya,·Sel dan jaringan ekstrak diencerkan dengan 50% dengan penyangga mengikat.

saya,·Sampel disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 5 menit pada suhu 4 ° C untuk menghilangkan endapan sebelum digunakan.

1. Sel Budaya Supernatan

Media kultur sel centrifuge di 1.500 rpm selama 10 menit pada suhu 4 ° C. Aliquot supernatan segera dan terus di

- 80 ° C, menghindari freeze / siklus mencair.

2. Ekstrak Sel

Tempat piring kultur jaringan di atas es. Lepaskan media dan lembut mencuci sel sekali dengan dingin PBS. Lepaskan PBS dan tambahkan 0,5 ml

penyangga ekstraksi per 100 piring mm. Miringkan piring dan mengikis sel-sel ke dalam tabung prechilled. Vortex sebentar dan mengeram di atas es

selama 15-30 menit. Centrifuge di 13.000 rpm selama 10 menit pada suhu 4 ° C (ini menciptakan pelet dari konten tidak larut). Aliquot supernatan ke

bersih, dingin tabung (atas es) dan toko sampel pada -80Â ° C, menghindari freeze / thaw siklus.

3. Media AC

Piring sel-sel dalam media tumbuh lengkap (dengan serum) sampai tingkat yang diinginkan dari pertemuan tercapai. Hapus media pertumbuhan dan lembut

mencuci sel-sel menggunakan 2- 3 mL hangat PBS. Ulangi langkah mencuci. Lepaskan PBS dan lembut menambahkan media serum pertumbuhan bebas.

Inkubasi selama 1-2 hari. Hapus media ke dalam tabung centrifuge. Centrifuge di 1.500 rpm selama 10 menit pada suhu 4 ° C. Aliquot supernatan dan

menjaga sampel pada -80Â ° C, menghindari freeze / thaw siklus.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

7
4. Tissue Extract

Mince jaringan di atas es dalam buffer dingin, sebaiknya di hadapan protease inhibitor. Tempatkan jaringan dalam tabung mikro-centrifuge dan mencelupkan

ke nitrogen cair untuk membekukan sekejap. Jauhkan sampel pada -80Â ° C untuk kemudian digunakan atau terus es untuk homogenisasi segera.

Untuk setiap 5 mg jaringan, tambahkan 300 ÂμL ekstraksi buffer untuk tabung dan menyeragamkan:

100
saya,· mM Tris, pH 7,4

150
saya,· mM NaCl
1 mM
saya,· EGTA
1 mM
saya,· EDTA
1%
saya,· Triton X-100 0,5%
0,5%
saya,· natrium deoksikolat

(Bagian dari buffer dapat dipersiapkan terlebih dahulu dan disimpan pada suhu 4 ° C. Segera sebelum digunakan, buffer harus dilengkapi dengan

fosfatase inhibitor cocktail [seperti yang diarahkan oleh produsen], protease inhibitor cocktail [seperti yang diarahkan oleh produsen] dan PMSF

untuk 1 mM untuk menghasilkan ekstraksi lengkap penyangga solusi.)

Bilas pisau homogenizer dua kali dengan 300 ÂμL buffer ekstraksi. Tempatkan sampel pada shaker pada suhu 4 ° C selama 2 jam.

Centrifuge sampel selama 20 menit pada 13.000 rpm pada suhu 4 ° C. Aliquot supernatan ke dalam tabung pra-dingin duduk di es. Jauhkan sampel pada

-80Â ° C, menghindari freeze / siklus mencair.

Catatan: Lisis Volume penyangga harus ditentukan sesuai dengan jumlah yang hadir jaringan. Konsentrasi khas ekstrak protein

akhir adalah minimal 1 mg / mL.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

8
Direkomendasikan Protokol

reagen Persiapan

1. Solusi standar
10.000 pg / mL: Tambahkan 1 mL sampel pengencer buffer ke satu tabung standar (10 ng per tabung) dan aduk rata. Catatan: Simpan
saya,·

solusi ini pada suhu 4 ° C hingga 12 jam (atau -20Â ° C selama 48 jam) siklus dan menghindari freeze.

5.000 pg / mL: Mix 0,3 ml 10.000 pg / mL dengan 0,3 mL sampel pengencer penyangga dan aduk rata.
saya,·

2.500 pg / mL: Mix 0,3 ml 5.000 pg / mL dengan 0,3 mL sampel pengencer penyangga dan aduk rata.
saya,·

Lakukan pengenceran yang sama sampai solusi standar dengan konsentrasi ini (pg / mL) yang dibuat:
saya,·

1250, 625, 312, 156 dan 78.

saya,·
Tambahkan 100 ÂμL dari masing-masing solusi standar diencerkan dengan sumur kosong yang sesuai. Ulangi dalam rangkap dua atau rangkap tiga

untuk akurasi.

Catatan: larutan standar yang terbaik digunakan dalam waktu 2 jam.

2. terbiotinilasi Antibodi
Hitung volume total yang dibutuhkan untuk pengujian dengan mengalikan 0,1 mL / baik dan jumlah sumur yang diperlukan. Tambahkan 2-3 sumur
saya,·

tambahan untuk jumlah dihitung dari sumur ke akun untuk kemungkinan kesalahan pipetting.

saya,·
Menghasilkan volume yang dibutuhkan antibodi diencerkan dengan melakukan pengenceran 1: 100 (Untuk setiap 1 ÂμL terkonsentrasi antibodi,

tambahkan 99 ÂμL antibodi pengenceran buffer) dan pencampuran secara menyeluruh.

3. Avidin-biotin-Peroxidase (ABC)
Hitung volume total yang dibutuhkan untuk pengujian dengan mengalikan 0,1 mL / baik dan jumlah sumur yang diperlukan. Tambahkan 2-3 sumur
saya,·

tambahan untuk jumlah dihitung dari sumur ke akun untuk kemungkinan kesalahan pipetting.

saya,·
Menghasilkan volume yang dibutuhkan solusi ABC diencerkan dengan melakukan pengenceran 1: 100 (Untuk setiap 1 ÂμL terkonsentrasi solusi ABC,

tambahkan 99 ÂμL ABC pengenceran buffer) dan pencampuran secara menyeluruh.

Catatan: Solusi ABC diencerkan tidak harus disiapkan lebih dari 1 jam sebelum percobaan.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

9
Sandwich ELISA

Semua kit ELISA dari Boster menggunakan Format Sandwich dan avidin-biotin kimia. ELISA kami tes memerlukan
pengenceran larutan standar, biotin antibodi (deteksi antibodi) dan avidin-biotinperoxidase.

1. Tangkap Antibodi Coating

(Langkah-langkah ini tidak diperlukan jika pra-teradsorpsi Picokine ELISA kit dari Boster yang digunakan)

Encerkan penangkapan antibodi untuk konsentrasi nal ï¬ dari 1-10 μg / mL di bikarbonat / karbonat antigencoating bu ï¬ € er (100 mM
saya,·

NaHCO 3 dalam air deionisasi; pH disesuaikan dengan 9,6).

saya,·
Pipet 100 μL antibodi diencerkan untuk masing-masing baik dari piring microtiter.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram pada suhu 4 ° C semalam (atau 37 ° C selama 30 menit).

Lepaskan larutan pelapis dan mencuci piring 3X dengan 200 μL PBS (Phosphate Buffered Saline) penyangga (10 mM Na 2 HPO 4 dan 1,8
saya,·

mM NaH 2 PO 4 dalam air deionisasi dengan 0,2% Tween 20; pH Disesuaikan dengan 7,4) dengan selama 5 menit setiap kali. Solusi coating
/ cuci bisa dihilangkan dengan menjentikkan piring atas wastafel. Tetes yang tersisa dapat dihapus oleh menepuk piring pada handuk
kertas atau dengan aspirasi. Jangan biarkan sumur mengering setiap saat.

2. Pemblokiran

(Langkah-langkah ini tidak diperlukan jika pra-teradsorpsi Picokine ELISA kit dari Boster yang digunakan)

Pipet 200 μL memblokir bu ï¬ € er (5% b / v susu kering non-lemak dalam PBS buffer) per baik untuk memblokir situs sisa protein mengikat. Atau,
saya,·

BSA atau BlockACE dapat digunakan untuk menggantikan susu kering non-lemak.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1-2 jam (s) pada suhu 37 ° C (atau suhu 4 ° C semalam).

Hapus solusi memblokir dan mencuci piring 2X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti
saya,·

yang dijelaskan dalam langkah coating.

3. Persiapan Reagen

Mempersiapkan solusi yang diencerkan standar, antibodi biotin dan solusi ABC seperti yang ditunjukkan pada hal.9.
saya,·

4. Contoh (Antigen) Inkubasi

Serial
saya,· encer sampel dengan memblokir bu ï¬ € er segera sebelum digunakan. Pengenceran optimal harus ditentukan oleh
uji titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
Pipet 100 μL dari masing-masing solusi sampel diencerkan dan mengontrol satu sama juga kosong. Ulangi dalam rangkap dua atau
saya,·

rangkap tiga untuk akurasi. Kontrol negatif harus spesies dan isotype-cocok serta imunoglobulin spesifik diencerkan dalam PBS
penyangga.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 2 jam pada suhu kamar.
saya,·

Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring
saya,·

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

5. Biotinylated Antibodi Inkubasi

Pipet 100 μL antibodi diencerkan ke sumur dengan kontrol, solusi standar dan sampel diencerkan.
saya,·

10
 Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1 jam pada suhu 37 ° C (atau 2 jam pada suhu kamar). kali inkubasi ini
saya,·

harus cukup untuk menerima sinyal yang kuat. Namun, jika sinyal lemah diamati, melakukan inkubasi semalam pada suhu 4 ° C untuk
sinyal yang lebih kuat.

saya,·
Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti yang

dijelaskan dalam langkah coating.

6. ABC Inkubasi

Pipet 100 μL solusi ABC diencerkan ke sumur dengan kontrol, solusi standar dan sampel diencerkan.
saya,·

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 0,5 jam pada suhu 37 ° C.

saya,·
Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

7. Substrat Persiapan

Siapkan larutan substrat segera sebelum digunakan atau membawa substrat pra-dibuat untuk suhu kamar. Kedua enzim banyak
digunakan untuk deteksi sinyal yang kuda lobak peroksidase (HRP) dan alkali fosfatase (AP), dan substrat yang sesuai mereka,
menghentikan solusi, deteksi absorbansi panjang gelombang dan warna dikembangkan adalah sebagai berikut:

Enzim substrat * stop Solution Absorbansi (nm) Warna Dikembangkan

HRP TMB 2M H 2 BEGITU 4 450 Kuning
AP pNPP 0.75m NaOH 405 Kuning
* TMB: 3,3â € ™, 5,5â € ™ -tetramethylbenzidine; pNPP: p-nitrofenil-fosfat

catatan:

saya,·
TMB substrat harus disimpan di suhu 37 ° C selama 30 menit sebelum digunakan.

saya,·
Hidrogen peroksida juga dapat bertindak sebagai substrat untuk HRP.

Natrium azida adalah inhibitor dari HRP. Apakah tidak termasuk azida dalam buffer atau solusi mencuci jika conjugate HRP-label digunakan untuk
saya,·

deteksi.

8. Signal Deteksi

Pipet
saya,· 90 μL solusi substrat ke sumur dengan kontrol, solusi standar dan sampel diencerkan.
Menetaskan pelat di 37 ° C dalam gelap. Jika TMB digunakan, nuansa biru akan diamati dalam sumur dengan solusi yang paling terkonsentrasi.
saya,·

sumur lain mungkin tidak menunjukkan warna yang jelas.

Warna harus dikembangkan di sumur positif setelah 15 menit. Setelah pembangunan warna yang cukup, pipet 100 μL dari stop solution untuk
saya,·

sumur yang sesuai (jika diperlukan).

saya,·
Baca absorbansi (OD: Optical Density) masing-masing dengan baik dengan pembaca piring.

9. Analisis Data

Siapkan kurva standar menggunakan data yang dihasilkan dari solusi standar diencerkan. Gunakan absorbansi pada sumbu Y (linear) dan
saya,·

konsentrasi pada sumbu X (skala log).

Menafsirkan
saya,· konsentrasi sampel dari kurva standar.

11
tidak langsung ELISA

Ini adalah protokol umum di mana antigen coating dan memblokir mungkin tidak diperlukan jika sumur dari produsen telah
pra-teradsorpsi dengan antigen.

1. Antigen Coating

Encerkan dimurnikan antigen ke bu ï¬ nal konsentrasi 1-10 μg / mL di bikarbonat / karbonat antigen-lapisan ï¬ € er (100 mM NaHCO 3 dalam
saya,·

air deionisasi; pH disesuaikan dengan 9,6).

saya,·
Pipet 100 μL antigen diencerkan untuk masing-masing baik dari piring microtiter.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram pada suhu 4 ° C semalam (atau 37 ° C selama 30 menit).

Lepaskan larutan pelapis dan mencuci piring 3X dengan 200 μL PBS (Phosphate Buffered Saline) penyangga (10 mM Na 2 HPO 4 dan 1,8
saya,·

mM NaH 2 PO 4 dalam air deionisasi dengan 0,2% Tween 20; pH Disesuaikan dengan 7,4) dengan selama 5 menit setiap kali. Solusi coating
/ cuci bisa dihilangkan dengan menjentikkan piring atas wastafel. Tetes yang tersisa dapat dihapus oleh menepuk piring pada handuk
kertas atau dengan aspirasi. Jangan biarkan sumur mengering setiap saat.

2. Pemblokiran

Pipet 200 μL memblokir bu ï¬ € er (5% b / v susu kering non-lemak dalam PBS buffer) per baik untuk memblokir situs sisa protein mengikat. Atau,
saya,·

BSA atau BlockACE dapat digunakan untuk menggantikan susu kering non-lemak.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1-2 jam (s) pada suhu 37 ° C (atau suhu 4 ° C semalam).

Hapus solusi memblokir dan mencuci piring 2X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti
saya,·

yang dijelaskan dalam langkah coating.

3. Persiapan Reagen

saya,·
Siapkan untuk solusi standar diencerkan seperti yang ditunjukkan pada hal.9.

4. Inkubasi Antibodi Primer

Serial
saya,· mencairkan antibodi primer pilihan dengan memblokir bu ï¬ € er. Pengenceran optimal harus ditentukan oleh uji
titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
Pipet 100 μL masing-masing antibodi per sumur diencerkan. Ulangi dalam rangkap dua atau rangkap tiga untuk akurasi. Kontrol negatif
saya,·

harus spesies dan isotype-cocok serta imunoglobulin non-spesifik diencerkan dalam PBS penyangga.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1 jam pada suhu 37 ° C (atau 2 jam pada suhu kamar). kali inkubasi ini
saya,·

harus cukup untuk menerima sinyal yang kuat. Namun, jika sinyal lemah diamati, melakukan inkubasi semalam pada suhu 4 ° C untuk
sinyal yang lebih kuat.

Hapus solusi antibodi diencerkan dan mencuci sumur 3X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti
saya,·

yang dijelaskan dalam langkah coating.

5. Secondary Antibodi Inkubasi

Serial
saya,· encer antibodi sekunder terkonjugasi dengan memblokir bu ï¬ € er segera sebelum digunakan. Pengenceran
optimal harus ditentukan oleh uji titrasi sesuai dengan produsen antibodi.

12
 saya,·
Pipet 100 μL larutan antibodi sekunder diencerkan untuk masing-masing dengan baik.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 2 jam pada suhu kamar.
saya,·

saya,·
Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

6. Substrat Persiapan

Siapkan larutan substrat segera sebelum digunakan atau membawa substrat pra-dibuat untuk suhu kamar. Kedua enzim banyak
digunakan untuk deteksi sinyal yang kuda lobak peroksidase (HRP) dan alkali fosfatase (AP), dan substrat yang sesuai mereka,
menghentikan solusi, deteksi absorbansi panjang gelombang dan warna dikembangkan adalah sebagai berikut:

Enzim substrat * stop Solution Absorbansi (nm) Warna Dikembangkan

HRP TMB 2M H 2 BEGITU 4 450 Kuning
AP pNPP 0.75m NaOH 405 Kuning
* TMB: 3,3â € ™, 5,5â € ™ -tetramethylbenzidine; pNPP: p-nitrofenil-fosfat

catatan:

saya,·
TMB substrat harus disimpan di suhu 37 ° C selama 30 menit sebelum digunakan.

saya,·
Hidrogen peroksida juga dapat bertindak sebagai substrat untuk HRP.

Natrium azida adalah inhibitor dari HRP. Apakah tidak termasuk azida dalam buffer atau solusi mencuci jika conjugate HRP-label digunakan untuk
saya,·

deteksi.

7. Signal Deteksi

Pipet
saya,· 90 μL solusi substrat ke sumur dengan kontrol dan solusi standar.
Menetaskan pelat di 37 ° C dalam gelap. Jika TMB digunakan, nuansa biru akan diamati dalam sumur dengan solusi yang paling terkonsentrasi.
saya,·

sumur lain mungkin tidak menunjukkan warna yang jelas.

Warna harus dikembangkan di sumur positif setelah 15 menit. Setelah pembangunan warna yang cukup, pipet 100 μL dari stop solution
saya,·

untuk sumur (jika perlu).

saya,·
Baca absorbansi (OD: Optical Density) masing-masing dengan baik dengan pembaca piring.

8. Analisis Data

Siapkan kurva standar menggunakan data yang dihasilkan dari solusi standar diencerkan. Gunakan absorbansi pada sumbu Y (linear) dan
saya,·

konsentrasi pada sumbu X (skala log).

Menafsirkan
saya,· konsentrasi sampel dari kurva standar.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

13
langsung ELISA

Ini adalah protokol umum di mana antigen coating dan memblokir mungkin tidak diperlukan jika sumur dari produsen telah
pra-teradsorpsi dengan antigen.

1. Antigen Coating

Encerkan dimurnikan antigen ke ï¬ nal konsentrasi 1-10 μg / ml di bikarbonat / karbonat antigen-lapisan bu ï¬ € er (100 mM NaHCO 3 dalam
saya,·

air deionisasi; pH disesuaikan dengan 9,6).

saya,·
Pipet 100 μL antigen diencerkan untuk masing-masing baik dari piring microtiter.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram pada suhu 4 ° C semalam (atau 37 C selama 30 menit).

Lepaskan larutan pelapis dan mencuci piring 3X dengan 200 μL PBS (Phosphate Buffered Saline) penyangga (10 mM Na 2 HPO 4 dan 1,8
saya,·

mM NaH 2 PO 4 dalam air deionisasi dengan 0,2% Tween 20; pH Disesuaikan dengan 7,4) dengan selama 5 menit setiap kali. Solusi coating
/ cuci bisa dihilangkan dengan menjentikkan piring atas wastafel. Tetes yang tersisa dapat dihapus oleh menepuk piring pada handuk
kertas atau dengan aspirasi. Jangan biarkan sumur mengering setiap saat.

2. Pemblokiran

Pipet 200 μL memblokir bu ï¬ € er (5% b / v susu kering non-lemak dalam PBS buffer) per baik untuk memblokir situs sisa protein mengikat. Atau,
saya,·

BSA atau BlockACE dapat digunakan untuk menggantikan susu kering non-lemak.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1-2 jam (s) pada suhu 37 ° C (atau suhu 4 ° C semalam).

Hapus solusi memblokir dan mencuci piring 2X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti yang
saya,·

dijelaskan dalam langkah coating.

3. Persiapan Reagen

saya,·
Siapkan untuk solusi standar diencerkan seperti yang ditunjukkan pada hal.9.

4. Inkubasi Antibodi Primer

Serial
saya,· encer antibodi primer terkonjugasi dengan memblokir bu ï¬ € er segera sebelum digunakan. Pengenceran optimal
harus ditentukan oleh uji titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
saya,·
Pipet 100 μL larutan antibodi sekunder diencerkan untuk masing-masing dengan baik.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 2 jam pada suhu kamar.
saya,·

saya,·
Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

5. Persiapan Substrat

Siapkan larutan substrat segera sebelum digunakan atau membawa substrat pra-dibuat untuk suhu kamar. Kedua enzim banyak
digunakan untuk deteksi sinyal yang kuda lobak peroksidase (HRP) dan alkali fosfatase (AP), dan substrat yang sesuai mereka,
menghentikan solusi, deteksi absorbansi panjang gelombang dan warna dikembangkan adalah sebagai berikut:

14
 Enzim substrat * stop Solution Absorbansi (nm) Warna Dikembangkan
HRP TMB 2M H 2 BEGITU 4 450 Kuning
AP pNPP 0.75m NaOH 405 Kuning
* TMB: 3,3â € ™, 5,5â € ™ -tetramethylbenzidine; pNPP: p-nitrofenil-fosfat

catatan:

saya,·TMB substrat harus disimpan di suhu 37 ° C selama 30 menit sebelum digunakan.

saya,·Hidrogen peroksida juga dapat bertindak sebagai substrat untuk HRP.

saya,· Natrium azida adalah inhibitor dari HRP. Jangan termasuk azida dalam buffer atau solusi mencuci jika HRPlabeled konjugat digunakan

untuk deteksi.

6. Signal Deteksi

Pipet
saya,· 90 μL solusi substrat ke sumur dengan kontrol dan solusi standar.
Menetaskan pelat di 37 ° C dalam gelap. Jika TMB digunakan, nuansa biru akan diamati dalam sumur dengan solusi yang paling terkonsentrasi.
saya,·

sumur lain mungkin tidak menunjukkan warna yang jelas.

Warna harus dikembangkan di sumur positif setelah 15 menit. Setelah pembangunan warna yang cukup, pipet 100 μL berhenti solusi
saya,·

untuk sumur (jika perlu).

saya,·
Baca absorbansi (OD: Optical Density) masing-masing dengan baik dengan pembaca piring.

7. Analisis Data

Siapkan kurva standar menggunakan data yang dihasilkan dari solusi standar diencerkan. Gunakan absorbansi pada sumbu Y (linear) dan
saya,·

konsentrasi pada sumbu X (skala log).

Menafsirkan
saya,· konsentrasi sampel dari kurva standar.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

15
kompetitif ELISA

Ini adalah protokol umum di mana antigen coating dan memblokir mungkin tidak diperlukan jika sumur dari produsen telah
pra-teradsorpsi dengan antigen.

1. Antigen Coating

Encerkan dimurnikan antigen ke ï¬ nal konsentrasi 20 μg / ml di bikarbonat / karbonat antigen-lapisan bu ï¬ € er (100 mM NaHCO 3 dalam
saya,·

air deionisasi; pH disesuaikan dengan 9,6).

saya,·
Pipet 100 μL antigen diencerkan untuk masing-masing baik dari piring microtiter.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram pada suhu 4 ° C semalam (atau 37 ° C selama 30 menit).

Lepaskan larutan pelapis dan mencuci piring 3X dengan 200 μL PBS (Phosphate Buffered Saline) penyangga (10 mM Na 2 HPO 4 dan 1,8
saya,·

mM NaH 2 PO 4 dalam air deionisasi dengan 0,2% Tween 20; pH Disesuaikan dengan 7,4) dengan selama 5 menit setiap kali. Solusi coating /
cuci bisa dihilangkan dengan menjentikkan piring atas wastafel. Tetes yang tersisa dapat dihapus oleh menepuk piring pada handuk kertas
atau dengan aspirasi. Jangan biarkan sumur mengering setiap saat.

2. Pemblokiran

saya,·
Pipet 200 μL memblokir bu ï¬ € er (5% b / v susu kering non-lemak dalam PBS buffer) per baik untuk memblokir situs proteinbinding residual. Atau, BSA

atau BlockACE dapat digunakan untuk menggantikan susu kering non-lemak.

saya,·
Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1-2 jam (s) pada suhu 37 ° C (atau suhu 4 ° C semalam).

Hapus solusi memblokir dan mencuci piring 2X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti yang
saya,·

dijelaskan dalam langkah coating.

3. Persiapan Reagen

saya,·
Siapkan untuk solusi standar diencerkan seperti yang ditunjukkan pada hal.9.

4. Contoh (Antigen) Inkubasi

Serial
saya,· encer sampel dengan memblokir bu ï¬ € er segera sebelum digunakan. Pengenceran optimal harus ditentukan oleh
uji titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
saya,·
Pipet 100 μL sampel diencerkan untuk masing-masing dengan baik.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 2 jam pada suhu kamar.
saya,·

Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring
saya,·

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

5. Inkubasi Antibodi Primer

Serial
saya,· mencairkan antibodi primer pilihan dengan memblokir bu ï¬ € er. Pengenceran optimal harus ditentukan oleh uji
titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
Pipet 100 μL masing-masing antibodi per sumur diencerkan. Ulangi dalam rangkap dua atau rangkap tiga untuk akurasi. Kontrol negatif
saya,·

harus spesies dan isotype-cocok serta imunoglobulin non-spesifik diencerkan dalam PBS penyangga.

16
 Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 1 jam pada suhu 37 ° C (atau 2 jam pada suhu kamar). kali inkubasi ini
saya,·

harus cukup untuk menerima sinyal yang kuat. Namun, jika sinyal lemah diamati, melakukan inkubasi semalam pada suhu 4 ° C untuk
sinyal yang lebih kuat.

Hapus solusi antibodi diencerkan dan mencuci sumur 3X dengan 200 μL PBS selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring seperti
saya,·

yang dijelaskan dalam langkah coating.

6. Secondary Antibodi Inkubasi

Serial
saya,· encer antibodi sekunder terkonjugasi dengan memblokir bu ï¬ € er segera sebelum digunakan. Pengenceran
optimal harus ditentukan oleh uji titrasi sesuai dengan produsen antibodi.
saya,·
Pipet 100 μL larutan antibodi sekunder diencerkan untuk masing-masing dengan baik.

Menutupi piring dengan plastik perekat dan mengeram selama 2 jam pada suhu kamar.
saya,·

saya,·
Menghapus konten dalam sumur dan mencuci mereka 3X dengan 200 μL PBS bu ï¬ € er selama 5 menit setiap kali. Flick piring dan menepuk piring

seperti yang dijelaskan dalam langkah coating.

7. Substrat Persiapan

Siapkan larutan substrat segera sebelum digunakan atau membawa substrat pra-dibuat untuk suhu kamar. Kedua enzim banyak
digunakan untuk deteksi sinyal yang kuda lobak peroksidase (HRP) dan alkali fosfatase (AP), dan substrat yang sesuai mereka,
menghentikan solusi, deteksi absorbansi panjang gelombang dan warna dikembangkan adalah sebagai berikut:

Enzim substrat * stop Solution Absorbansi (nm) Warna Dikembangkan

HRP TMB 2M H 2 BEGITU 4 450 Kuning
AP pNPP 0.75m NaOH 405 Kuning
* TMB: 3,3â € ™, 5,5â € ™ -tetramethylbenzidine; pNPP: p-nitrofenil-fosfat

catatan:

saya,·
TMB substrat harus disimpan di suhu 37 ° C selama 30 menit sebelum digunakan.

saya,·
Hidrogen peroksida juga dapat bertindak sebagai substrat untuk HRP.

Natrium azida adalah inhibitor dari HRP. Apakah tidak termasuk azida dalam buffer atau solusi mencuci jika conjugate HRP-label digunakan untuk
saya,·

deteksi.

8. Signal Deteksi

Pipet
saya,· 90 μL solusi substrat ke sumur dengan kontrol, solusi standar dan sampel diencerkan.
Menetaskan piring di 37C dalam gelap. Jika TMB digunakan, nuansa biru akan diamati dalam sumur dengan solusi yang paling terkonsentrasi.
saya,·

sumur lain mungkin tidak menunjukkan warna yang jelas.

Warna harus dikembangkan di sumur positif setelah 15 menit. Setelah pembangunan warna yang cukup, pipet 100 μL berhenti
saya,·

solusi untuk sumur (jika perlu).

saya,·
Baca absorbansi (OD: Optical Density) masing-masing dengan baik dengan pembaca piring.

17
9. Analisis Data

Siapkan kurva standar menggunakan data yang dihasilkan dari solusi standar diencerkan. Gunakan absorbansi pada sumbu Y (linear) dan
saya,·

konsentrasi pada sumbu X (skala log).

saya,·
Kompetitif ELISA menghasilkan kurva terbalik: Nilai yang lebih tinggi dari antigen dalam sampel menghasilkan jumlah yang lebih kecil dari perubahan

warna.

Menafsirkan
saya,· konsentrasi sampel dari kurva standar.

Untuk dilanjutkan pada halaman berikutnya

18
Panduan mengatasi masalah
Panduan berikut berfungsi sebagai checklist untuk kemungkinan penyebab dan solusi sehubungan dengan beberapa masalah yang
paling sering ditemui dari tes ELISA.
1. Lemah atau No Signal
Kemungkinan penyebabnya
1 Memblokir protein
larutan
2 Tangkap antibodi (atau antigen) tidak
tidak mengikat ke piring
3 Masalah dengan standar
4 waktu inkubasi terlalu pendek
5 suhu inkubasi terlalu rendah Pastikan incubations dilakukan pada suhu yang benar
6 jenis sampel tidak kompatibel
7 Kompatibel assay penyangga
8 Sasaran hadir di bawah deteksi
membatasi
10 Salah / tidak mencukupi / Tidak ada
substrat
11 Salah / tidak mencukupi / Tidak ada
antibodi
12 Antibodi disimpan pada suhu 4 ° C selama beberapa
minggu atau mengalami siklus
beku-mencair diulang
Larutan
dalam lapisan Menghilangkan memblokir protein dari solusi pelapisan
Gunakan ELISA piring, tidak piring kultur jaringan
Mencoba waktu coating lagi
Meningkatkan konsentrasi komponen lapisan
Gunakan sampel baru
Periksa bahwa standar yang tepat ditangani
Ikuti produsen pedoman (Jika tetap terjadi masalah, coba inkubasi sampel pada
suhu 4 ° C semalam)
Sebelum melanjutkan, semua reagen, termasuk piring, harus pada suhu kamar atau
seperti yang direkomendasikan oleh produsen
Gunakan sampel yang assay diketahui untuk mendeteksi kontrol positif (Sertakan
kontrol seperti dalam percobaan)
Pastikan penyangga assay kompatibel dengan target yang menarik
Menurunkan faktor pengenceran atau konsentrat sampel
Memeriksa identitas substrat
konsentrasi peningkatan atau jumlah substrat
Ikuti panduan produsen
Memeriksa identitas antibodi
Ulangi assay dengan konsentrasi antibodi yang lebih tinggi untuk menemukan satu yang
optimal untuk eksperimen Anda
Gunakan aliquot segar antibodi yang telah disimpan pada -20Â ° C atau di bawah
19
 13 salah reagen menambahkanPeriksa
/ protokol, memastikan reagen yang benar ditambahkan dalam urutan yang tepat
siap; reagen hilang dan siap untuk konsentrasi yang benar (misalnya TMB untuk antibodi HRP-label)

14 Expired / reagen Terkontaminasi Membuat dan menggunakan segar / reagen yang tidak tercemar

15 Enzyme Inhibitor hadir Hindari natrium azida dalam reaksi HRP

Hindari fosfat dalam reaksi AP

16 penyimpanan yang tidak benar dari komponen kondisi penyimpanan cek ganda pada tingkat kit (Kebanyakan kit perlu
untuk disimpan di suhu 4 ° C)

17 Ultra kuat piring cuci Lembut pipet mencuci penyangga (metode manual)

Pastikan tekanan yang benar (sistem cuci otomatis)

18 Wells kering Menutupi piring menggunakan film penyegelan atau tape untuk semua incubations

19 Wells tergores dengan pipet atau solusi hati-hati Dispense / aspirasi ke dalam dan keluar dari sumur
kiat pipet
20 Plat baca di deteksi yang salah Gunakan direkomendasikan panjang gelombang / filter
panjang gelombang
Pastikan pembaca plat diatur dengan benar untuk jenis substrat yang digunakan

21 pengembangan warna Lambat Siapkan substrat segera sebelum digunakan

Memungkinkan inkubasi lebih lama

Pastikan larutan stok adalah belum berakhir dan tidak tercemar

22 pengakuan Epitope terhambat oleh peptida konjugat protein pembawa besar sebelum lapisan ke piring
adsorpsi ke piring

2. jenuh Signal

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 konsentrasi sampel Tinggi Gunakan pengenceran sampel yang lebih tinggi (Tentukan pengenceran optimal dengan
alat tes titrasi)

2 substrat berlebihan Menurunkan konsentrasi atau jumlah substrat: pedoman produsen Follow
(Substrat disediakan dengan kit ELISA mungkin memerlukan pengenceran
lebih lanjut)

3 warna substrat diubah sebelum substrat Memanfaatkan segera sebelum digunakan

4 Non-spesifik antibodi yang mengikat Coba formulasi yang berbeda di lapisan solusi

20
 Pastikan sumur pra-diproses untuk mencegah non-spesifik mengikat

Gunakan afinitas-dimurnikan antibodi dan sebaiknya satu yang preadsorbed.

Gunakan serum (5-10%) dari spesies yang sama seperti antibodi sekunder (serum
bovine juga dianjurkan)

5 waktu inkubasi terlalu lama Ikuti panduan produsen (Jika tetap terjadi masalah, coba inkubasi sampel
pada suhu 4 ° C semalam)

6 antibodi Kelebihan Ulangi assay dengan konsentrasi antibodi yang lebih rendah untuk menemukan satu yang
optimal untuk eksperimen Anda

7 buffer Terkontaminasi dengan logam Membuat dan menggunakan buffer segar

atau HRP
9 cuci tidak cukup Ikuti panduan produsen

Pada akhir setiap langkah cuci, mengibaskan piring di atas wastafel dan menepuk piring
pada handuk kertas

10 sealer Lempeng tidak digunakan atau digunakan kembali Selama incubations, tutup piring dengan sealer piring.

Gunakan sealer segar setiap kali sealer digunakan dihapus dari piring

11 Plat baca di deteksi yang salah Gunakan direkomendasikan panjang gelombang / filter
panjang gelombang
Pastikan pembaca plat diatur dengan benar untuk jenis substrat yang digunakan

12 waktu Kelebihan sebelum piring membaca Baca piring Anda dalam waktu 30 menit setelah menambahkan substrat (Jika
membaca tidak dilakukan dalam jangka waktu ini, menambahkan solusi berhenti
setelah warna yang cukup dikembangkan dalam piring)

3. Latar Belakang tinggi

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 cuci tidak cukup Ikuti panduan produsen

Pada akhir setiap langkah cuci, mengibaskan piring di atas wastafel dan menepuk piring
pada handuk kertas

2 Tidak efektif / Terkontaminasi Coba konsentrasi protein blocking yang lebih tinggi
penyangga memblokir
Meningkatkan waktu memblokir

21
 Gunakan penyangga segar

3 antibodi Kelebihan Ulangi assay dengan konsentrasi antibodi yang lebih rendah untuk menemukan satu yang
optimal untuk eksperimen Anda

4 Kelebihan substrat konsentrasi penurunan atau jumlah substrat

pedoman produsen Follow (Catatan: substrat yang disediakan dengan kit ELISA mungkin
memerlukan pengenceran lebih lanjut)

5 reaktivitas Lintas (Detection Jalankan kontrol yang tepat

bereaksi antibodi dengan antibodi
coating)

6 Non-antibodi spesifik mengikat Coba formulasi yang berbeda di lapisan solusi

Pastikan sumur pra-diproses untuk mencegah non-spesifik mengikat

Gunakan afinitas-dimurnikan antibodi dan sebaiknya satu yang preadsorbed

Gunakan serum (5-10%) dari spesies yang sama seperti antibodi sekunder (serum
bovine juga dianjurkan)

7 Tween cukup dalam buffer Gunakan PBS yang mengandung 0,05% Tween

8 konsentrasi garam suboptimal di cuci Optimalkan konsentrasi garam konsentrasi tinggi dapat mengurangi interaksi
penyangga non-spesifik

9 suhu inkubasi Optimalkan terlalu tinggi suhu inkubasi untuk pengujian Anda (antibodi
mengikat secara optimal pada suhu yang sangat spesifik)

10 Reagen tidak dicampur dengan baik Seksama mencampur semua reagen dan sampel sebelum pipetting
solusi ke sumur

11 Kosong terkontaminasi dengan kiat pipet perubahan bila beralih di antara kosong dan sampel
sampel

Meletakkan tutup pada pate untuk menghindari pertumpahan antara sumur

12 Contoh terkontaminasi dengan sampel uji dengan substrat saja untuk memeriksa mencemari enzim
enzim

13 Terkontaminasi TMB substrat Gunakan wadah yang bersih untuk memeriksa bahwa substrat di tidak terkontaminasi
(TMB substrat harus jelas dan tidak berwarna sebelum menambahkan ke sumur)

22
 14 inkubasi Substrat dalam cahaya Bawa substrat inkubasi dalam gelap atau mengikuti
rekomendasi dari produsen

15 penguapan yang tidak merata dari solusi Selalu menetaskan dengan tutup di piring
dari sumur selama inkubasi
16 Presipitat dibuat dalam sumur pada Faktor peningkatan pengenceran konsentrasi sampel atau penurunan substrat
Selain substrat

17 Inkubasi waktu terlalu lama Ikuti panduan produsen (Jika tetap terjadi masalah, coba inkubasi sampel
pada suhu 4 ° C semalam)

18 Salah pengenceran kurva standar Periksa teknik pipetting

perhitungan periksa

19 Pelat ditumpuk selama incubations, piring Hindari susun

menyebabkan distribusi temperatur yang tidak
merata

20 kotor atau rusak piring Bersihkan bagian bawah pelat

21 pengembangan warna unstopped Gunakan solusi Menghentikan untuk mencegah over-pembangunan

22 kali Kelebihan sebelum piring membaca Baca piring Anda dalam waktu 30 menit setelah menambahkan substrat (Jika
membaca tidak dilakukan dalam jangka waktu ini, menambahkan solusi berhenti
setelah warna yang cukup dikembangkan dalam piring)

Catatan: Warna terus mengembangkan bahkan setelah menambahkan solusi berhenti

(meskipun pada tingkat yang lebih lambat)

Pengaturan membaca 23 piring Salah Gunakan direkomendasikan panjang gelombang / filter

Pastikan pembaca plat diatur dengan benar untuk jenis substrat yang digunakan

4. rendah Sensitivitas

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 format Assay tidak sensitif Beralih cukup untuk sistem deteksi lebih sensitif (misalnya kolorimetri
untuk chemiluminescence)

Beralih ke jenis alat yang lebih peka (misalnya langsung ELISA sandwich
ELISA)

Meningkatkan waktu inkubasi dan / atau suhu

2 penyimpanan yang tidak tepat dari ELISA kit Menyimpan semua reagen seperti yang direkomendasikan

23
 Catatan: Semua reagen mungkin tidak memiliki kebutuhan penyimpanan yang identik

3 Target tidak cukup Mengurangi pengenceran sampel atau sampel konsentrat

4 substrat tidak aktif Pastikan enzim reporter memiliki aktivitas yang diharapkan

5 Miskin Target adsorpsi ke sumur Kovalen menghubungkan target untuk sumur

6 substrat tidak cukup konsentrasi peningkatan atau jumlah substrat

7 jenis sampel tidak kompatibel Menggunakan sampel yang assay diketahui untuk mendeteksi kontrol positif

Termasuk kontrol positif dalam percobaan

8 Campur bahan dalam buffer dan Periksa reagen untuk bahan kimia mengganggu, misalnya natrium azida di antibodi
sampel menghambat HRP enzim; EDTA digunakan sebagai antikoagulan untuk koleksi
plasma menghambat reaksi enzimatik

9 Mixing atau mengganti reagen Hindari mencampur komponen dari kit yang berbeda
dari kit yang berbeda
Pengaturan membaca 10 piring Salah Gunakan direkomendasikan panjang gelombang / filter

Pastikan pembaca plat diatur dengan benar untuk jenis substrat yang digunakan

5. Poor Standard Curve

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 larutan standar yang tidak tepat pengenceran Konfirmasi dilakukan dengan benar

Membuat kurva standar baru yang sesuai

2 Standar benar dilarutkan singkat berputar botol sebelum pembukaan

Periksa untuk bahan undissolved setelah membangun kembali

3 Standard terdegradasi Menyimpan dan menangani standar seperti yang direkomendasikan

Siapkan standar tidak lebih dari dua jam sebelum digunakan

4 Yang tidak benar curve fitting Cobalah merencanakan menggunakan skala yang berbeda, misalnya log-log, 5-parameter
kurva logistik fit

5 kesalahan pipetting Gunakan dikalibrasi pipet dan teknik pipetting yang tepat

6 cuci tidak cukup Ikuti panduan produsen

24
 Pada akhir setiap langkah cuci, mengibaskan piring di atas wastafel dan menepuk piring
pada handuk kertas

7 reagen buruk dicampur Benar-benar campuran reagen

8 Miskin / variabel adsorpsi Memperpanjang waktu inkubasi

reagen ke piring
Periksa lapisan penyangga

Gunakan piring yang berbeda sesuai

Periksa homogenitas sampel

9 Piring ditumpuk selama inkubasi piring Terus dipisahkan jika tidak menggunakan berputar piring

10 Kotor atau rusak piring Bersihkan bagian bawah pelat

6. Miskin Meniru data

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 gelembung di sumur Pastikan tidak ada gelembung yang hadir sebelum membaca pelat

2 cuci cukup sumur Hati-hati mencuci sumur

Ikuti protokol dianjurkan

Periksa semua port dari mesin cuci piring yang terhalang

3 Tidak lengkap reagen pencampuran Pastikan semua reagen dicampur secara menyeluruh

4 pipetting tidak konsisten Gunakan pipet dikalibrasi dan teknik pipetting yang tepat

Jika pipet multi-channel yang digunakan, memastikan bahwa semua saluran memberikan
volume yang sama

5 tidak konsisten sampel persiapan atau Pastikan sampel persiapan konsisten dan kondisi penyimpanan sampel yang optimal
penyimpanan (misalnya meminimalkan siklus freeze / thaw)

6 Partikulat dalam sampel Lepaskan partikulat dengan sentrifugasi

7 sealers piring tidak digunakan atau digunakan kembali Selama incubations, tutup piring dengan sealers piring

Gunakan sealer segar setiap kali sealer digunakan dihapus dari piring

kontaminasi 8 Cross-baik Pastikan sealers piring dan tips pipet tidak terkontaminasi dengan reagen

25
 9 efek Ujung (OD lebih tinggi atau lebih rendah Pastikan piring dan reagen disimpan pada suhu kamar sebelum
di sumur perifer daripada di sumur pusat) Pipetting ke sumur kecuali diinstruksikan

Selama inkubasi, segel piring sepenuhnya dengan sealer piring dan menghindari
penumpukan piring

7. Tidak konsisten Assay-to-Assay Hasil

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 cuci cukup sumur Hati-hati mencuci sumur

Ikuti protokol dianjurkan

Periksa semua port dari mesin cuci piring yang terhalang

2 Variasi inkubasi Patuhi suhu inkubasi direkomendasikan

suhu
Hindari inkubasi piring di daerah di mana kondisi lingkungan bervariasi

3 Variasi dalam protokol Patuhi protokol yang sama dari run ke run

4 sealers piring tidak digunakan atau digunakan kembali Selama incubations, tutup piring dengan sealers piring

Gunakan sealer segar setiap kali sealer digunakan dihapus dari piring

5 pengenceran yang salah pengenceran Konfirmasi dilakukan dengan benar untuk solusi standar, dll

Membuat kurva standar baru yang sesuai

6 buffer Terkontaminasi Membuat dan menggunakan buffer segar

7 Piring ditumpuk selama inkubasi piring Terus dipisahkan jika tidak menggunakan berputar piring

8. Lambat Pembangunan Warna

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 Substrat terlalu tua, terkontaminasi atau Membuat dan menggunakan substrat segar pada pH yang benar: mereka harus disiapkan
digunakan pada pH yang salah segera sebelum digunakan

2 Expired / solusi Terkontaminasi Membuat dan menggunakan reagen segar

3 suhu inkubasi yang salah Pastikan piring dan reagen disimpan pada suhu kamar
sebelum Pipetting ke sumur kecuali diinstruksikan

26
 Selama inkubasi, segel piring sepenuhnya dengan sealer piring dan menghindari
penumpukan piring

4 konsentrasi antibodi yang rendah Ulangi assay dengan konsentrasi antibodi yang lebih tinggi untuk menemukan satu yang
optimal untuk eksperimen Anda

5 konsentrasi substrat rendah Tambahkan lebih banyak substrat ke sumur

Membuat substrat tidak lebih dari satu jam sebelum digunakan

Catatan: sensitivitas ELISA khas adalah ~ 0,1 pg / mL dengan nilai yang tepat tergantung
pada antibodi yang digunakan.

9. Piring Pencitraan Masalah

Kemungkinan penyebabnya Larutan

1 gambar jenuh setelah Gunakan gambar resolusi penuh untuk menganalisis hasil (Jangan menggunakan jpeg atau
perolehan format kompresi lainnya)

2 tempat Blurry di gambar Re-fokus kamera Anda sebelum mengambil gambar baru

3 nilai piksel berulang atau Gunakan ukuran rendah bin, resolusi gambar yang lebih tinggi dan / atau lossless jenis file
bintik-bintik persegi panjang

4 standar datar dalam gambar Mengurangi waktu akuisisi

27
Tanya Jawab

1. protokol ELISA tidak merekomendasikan gemetar selama incubations. Apakah Anda diuji gemetar dan memutuskan untuk tidak
melakukannya atau itu perlu?

Kami menguji protokol kami dengan dan tanpa gemetar selama incubations dan menentukan bahwa tidak ada perbedaan antara dua
pendekatan. Oleh karena itu, kami percaya bahwa gemetar tidak diperlukan.

2. Apakah ELISA Anda kit cocok untuk digunakan dengan lysates jaringan? Jika demikian, apa protokol?

Secara teoritis, kit ELISA kami dapat bekerja dengan lysates jaringan. protokol persiapan kami umum sampel untuk lysates jaringan adalah sebagai berikut:

saya,·Bilas jaringan dengan PBS untuk membuang kelebihan darah.

saya,·Memotong jaringan menjadi 1-2 potong mm.

saya,· Menggunakan homogenizer jaringan, menyeragamkan sampel dalam PBS atau solusi lisat seperti Mammal Tissue Ekstraksi

Protein Reagen (Boster Bio Katalog Nomor AR0101) pada rasio 10 mL larutan lisat untuk 1 g jaringan.

saya,· Centrifuge yang homogenates sekitar 5000 xg selama 5 menit.

saya,· Assay segera atau menyimpan homogenates di -20Â ° C (menghindari siklus beku-mencair berulang).

3. sampel saya mengandung konsentrasi sitokin yang sangat rendah. Berapa konsentrasi minimum yang dapat diukur dengan percaya
diri menggunakan ELISA kit Anda?

konsentrasi sitokin rendah khas untuk banyak sampel biologis. Ketika menentukan konsentrasi minimal yang dapat dipercaya
diukur dengan ELISA, pertimbangkan hal berikut:

saya,· Kurva standar: Sebagai rentang konsentrasi ELISA biasanya 0-1000 pg / mL, titik data pada kurva standar untuk kisaran
ini sesuai dengan 0, 15,6, 31,25, 62,5, 125, 250, 500, dan 1000 pg / mL .
saya,· Uji sensitivitas: Bosterâ € ™ s Picokine ELISA kit biasanya memiliki sensitivitas dilaporkan 10 pg / mL. konsentrasi terdeteksi

di banyak sampel biologis akan jatuh antara titik-titik 0 dan 15,6 pg / mL Data dari kurva standar. Selama nilai terdeteksi
berada di atas sensitivitas statistik dari ELISA, (misalnya, 5 pg / mL atau lebih besar), nilai signifikan secara statistik. Hasil di
bawah batas deteksi ini adalah validitas dipertanyakan.

4. Apakah ELISA Anda kit cocok untuk digunakan dengan homogenat jaringan?

Untuk sebagian besar kasus, ya. Jika ada cukup hadir protein target dalam jaringan bunga, kit ELISA akan bekerja. Juga, jika ada alternatif
pengolahan dikenal protein dalam jaringan tertentu yang menghasilkan protein perubahan reaktivitas untuk kit, kami akan mencatat dalam
datasheet produk kami.

5. Apakah ELISA Anda kit cocok untuk digunakan dengan jenis non-divalidasi sampel?

Untuk menggunakan kit ELISA dengan jenis sampel non-divalidasi, maka perlu melakukan spike dan pemulihan studi untuk menentukan apakah jenis
non-divalidasi sampel akan bekerja dengan kit tertentu. Untuk melakukan ini:

saya,· Membagi sampel ke dalam dua aliquot.

saya,· Dalam salah satu aliquot, Anda harus â € œspike Ina € diketahui jumlahnya standar kit.

saya,·Melakukan serangkaian pengenceran untuk membandingkan berduri untuk sampel unspiked.

Umumnya, sampel dengan pemulihan yang diharapkan dan linearitas antara 80-120% dapat diterima. Metode ini dapat digunakan untuk memvalidasi
semua jenis sampel yang belum dievaluasi sebelumnya oleh Boster.

28
6. Dapatkah saya memperpanjang kurva standar?

Tidak ada yang bisa menjamin keakuratan tes setelah konsentrasi di luar jangkauan tertentu dalam kurva digunakan. Sebuah rentang
tertentu yang dihasilkan untuk memberikan keyakinan statistik untuk akurasi pengujian.

7. Apa yang menyebabkan variabilitas tinggi antara duplikat sampel?

Dua alasan utama untuk variabilitas sampel tinggi dalam pengujian yang pipetting tidak konsisten dan mencuci. Dengan demikian, penting
untuk menyempurnakan teknik ini. Namun, beberapa dari variabilitas ini adalah â € tidak dapat dihindari”ini adalah alasan untuk menghitung
hasil rata-rata dari duplikat sampel. pelakunya lain yang mungkin untuk variabilitas tinggi adalah â € œedge effectâ € di mana sumur terluar
piring lebih rentan terhadap kekeringan karena penguapan. Piring susun juga akan menyebabkan variabilitas karena suhu akan didistribusikan
secara merata di seluruh piring.

8. Apa perbedaan antara sandwich ELISA dan ELISA kompetitif?

Sandwich ELISA biasanya membutuhkan penggunaan pasangan antibodi cocok, di mana masing-masing antibodi spesifik untuk berbeda, bagian
non-overlapping (epitop) dari molekul antigen. Sebuah antibodi pertama (dikenal sebagai capture antibodi) adalah dilapisi dengan sumur. Larutan sampel
kemudian ditambahkan ke sumur. Sebuah antibodi kedua (dikenal sebagai antibodi pendeteksi) berikut langkah ini dalam rangka untuk mengukur
konsentrasi sampel. sinyal output yang lebih tinggi mencerminkan konsentrasi yang lebih tinggi dari target antigen dalam sampel.

Acara utama ELISA kompetitif adalah proses reaksi kompetitif antara antigen sampel dan antigen terikat pada sumur piring
mikrotiter dengan antibodi primer. Pertama, antibodi primer diinkubasi dengan antigen sampel dan antibodyâ yang dihasilkan €
“kompleks antigen ditambahkan ke sumur yang telah dilapisi dengan antigen yang sama. Setelah masa inkubasi, setiap antibodi
terikat dicuci off. Semakin banyak antigen dalam sampel, antibodi lebih utama akan terikat pada antigen sampel. Oleh karena itu,
akan ada jumlah yang lebih kecil dari antibodi primer yang tersedia untuk mengikat antigen dilapisi pada sumur, menghasilkan
penurunan sinyal.

9. Mengapa sumur saya berubah menjadi hijau setelah saya menambahkan stop solution?

Warna hijau adalah hasil dari tidak lengkap pencampuran antara substrat dan stop solution. Setelah menambahkan solusi berhenti, tekan dengan lembut

piring atau menempatkannya pada shaker sampai campuran di sumur berubah menjadi kuning.

10. Mengapa endapan coklat atau oranye-coklat muncul di sumur saya setelah menambahkan solusi berhenti? Bagaimana saya bisa mengatasi

masalah ini?

endapan adalah hasil dari cukup mencuci setelah inkubasi dengan HRP- berlabel antibodi deteksi. Untuk mengatasi masalah ini,
melakukan 30 detik rendam selama setiap langkah mencuci diikuti dengan penghapusan lengkap dari semua cairan di sumur.

11. Jika saya sayang € ™ t menggunakan semua sumur dari piring microtiter untuk saya saat uji ELISA, bagaimana saya bisa melestarikan sumur

yang tidak terpakai untuk penggunaan masa depan?

The microtiter plate typically has removable strips of wells. Unused wells may be removed from the plate, returned to the foil pouch
containing the desiccant pack and stored at 2-8°C for up to one month.

29
Ordering Information

With more than 20 years of experience and trust from 10,000+ scientists, Boster is proud of offering more than
600 PicoKine TM ELISA kits that help accelerate scientific discovery in research areas including immunology ,
neuroscience and cancer . Each of our ELISA kits has sufficient reagents for 96 tests per kit. The table below shows some of the most
commonly used ELISA kits.

Sampl e Types*
Target Species CCS Se P(h) P(e) P(c) U M CL T Cat. No.
Adiponectin Human √ √ √ √ √ √ EK0595
Angiopoietin-2 Mouse √ √ √ √ EK0938
BDNF Human √ √ √ √ √ EK0307
CRP Rat √ √ √ √ EK0978
CTLA4 Mouse √ √ √ EK0717
EGFR Human √ √ √ √ √ EK0327
FGF21 Human √ √ √ √ EK0994
IFN Gamma Human √ √ EK0373
IL-6 Human √ √ √ √ √ EK0410
IL-8 Human √ √ √ √ √ EK0413
IL-10 Human √ √ √ √ √ EK0416
Leptin Mouse √ √ √ √ EK0438
MCP-1 Rat √ √ EK0902
NGF Beta Rat √ √ EK0471
P53 Human √ EK0895
PD-1 Human √ EK0959
TGF Beta 1 Human √ √ √ √ EK0513
TNF Alpha Mouse √ √ √ √ EK0527

* Cell Culture Supernates [CCS], Serum [Se], Plasma: Heparin [P(h)], Plasma: EDTA [P(e)], Plasma: Citrate [P(c)], Urine [U], Milk [M], Cell
Lysate (CL), Tissue (T)

We also offer a variety of ELISA components that can be purchased separately from the kits:
• Lyophilized recombinant standard (1 ng to 100 ng)
• 96-well plate (No antibody pre-coated)
• Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (ABC)
• Buffers (Sample diluent, antibody diluent, ABC diluent, PBS, TBS)
• TMB color developing agent and stop solution
• Biotinylated antibody

Contact Information

Boster Biological Technology

3942 Valley Ave., Suite B, Pleasanton, CA 94566 Phone: (888)
466-3604 Fax: (925) 485-4560

Sales and Customer Service: orders@bosterbio.com

Product and Technical Support: support@bosterbio.com
Business Development: boster@bosterbio.com

30