Universidad Politécnica del Valle de Toluca

Ingeniería en Biotecnología

Bioquímica

“Cuantificación de proteína por el método de Biuret”

Elaborado por:

González Quintero Sandra

Guadarrama Sánchez Blanca Esmeralda

Pato Bata Carlos Enrique

Grupo: IBT3MA

Docente:

Almoloya de Juárez, Estado de México, a 21de octubre de 2019.

Introducción

El principio de Biuret se basa en que los puentes peptídicos de la proteína forman

un complejo purpura con los iones de cobre bajo condiciones alcalinas, la
intensidad del complejo purpura es medido colorimétricamente a 520-560 nm.
Albúmina sérica es una de las proteínas más importante del plasma de la sangre.
Las concentraciones bajas de esta sustancia se presentan en las personas que
padecen de malnutrición, inflamación y enfermedades graves del hígado y el riñón.

La Albumina sérica se encarga de transportar sustancias de naturaleza química

muy diversa, como ácidos grasos, aminoácidos, esteroides, metales (como el calcio), y
numerosos fármacos, facilitando la transferencia de muchas de ellas desde
la circulación sanguínea a órganos como el hígado, el riñón, el intestino y el cerebro.
Por este motivo existen receptores de superficie para seroalbúmina en
las células de estos órganos. Su principal función es regular la presión
coloidosmótica de la sangre, y presenta una gran afinidad por pequeñas moléculas
hidrofóbicas cargadas negativamente.

Objetivo

Determinar la cantidad de proteína de la muestra problema por el método de

Biuret

Material

Reactivo de Biuret Puntas para micropipeta

Termómetro Tupos de 10 ml hach
Solución de cloruro de sodio 0.9% Albumina sérica
Micropipeta de 1 ml Colorímetro hach
Baño maría Parrilla de calentamiento
Gradilla Jeringa 10 ml
Procedimiento

1. Preparar una solución estándar de albumina sérica, 100 mg de albumina en

10ml de solución de cloruro de sodio para una concentración final de 10
mg/ml.
2. Etiqueta los tubos de acuerdo a su concentración y pipetea
cuidadosamente los reactivos de acuerdo a la siguiente tabla.
Tubo 0 1 3 5 7 9
Solución 0 0.1ml 0.3ml 0.5ml 0.7ml 0.9ml
estándar de
albumina
Solución de 1ml 0.9ml 0.7ml 0.5ml 0.3ml 0.1ml
cloruro de
sodio 0.9%
Reactivo de 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Biuret

3. Mezclar en el vortex por unos segundos.

4. Incuba los tubos a 37°C por 20 minutos. Posteriormente deja enfriar antes
de leer en el colorímetro
5. Lea en el colorímetro a una absorbancia de 520 nm contra un reactivo
blanco.
6. Calcule la concentración de proteína de las muestras problemas a partir de
la ecuación de la pendiente obtenida de la curva estándar de la solución de
albumina.
Resultados

Al finalizar la práctica y obtener los 6 tubos requeridos se mide las absorbancia de

cada uno en el colorímetro.

El primer tubo rotulado por el número 0 que contenía 1 ml de solución salina y 2 ml

del reactivo de Biuret era nuestra muestra cero, no contenía albumina por lo tanto
no tenía proteínas que cuantificar.

El segundo tubo rotulado por el número 1 contenía una cantidad mínima de

albumina y una máxima cantidad de solución salina, por lo cual su absorbancia de
era de 0.173 nm.

El tercer tubo rotulado con el número 3 aumento a 3 ml de albumina y

disminuyendo la cantidad de solución salina, esto ocasionó el aumento de la
absorbancia a 0.304.

El cuarto tubo rotulado con el número 5 contenía la misma cantidad de albumina y

de solución salina provocando un aumento absorbancia a 0.485nm.

El quinto tubo contenía mas albumina que solución salina esto provoco un
aumento considerable a 0.579nm.

Y el ultimo tubo contenía una mínima cantidad de solución salina y una máxima de
albumina ocasionando que fuera el tubo con mayor absorbancia.

Conforme la cantidad de albumina era mayor que la cantidad de solución salina la

absorbancia aumentaba al igual que su color, el tubo era completamente
transparente y conforme aumentaban las dosis de albumina el líquido que
contenía cada tubo iba incrementando el color violeta de la solución de Biurt.
Conclusión

El objetivo de esta práctica se logró determinando la cantidad de proteína de la

muestra problema por el método de Biuret.

Se comprobó que la reacción de Biuret en la caseína es la proteína de la leche, y

toda proteína precipita en una coloración violeta cuando se hace reaccionar con el
reactivo de Biuret.

Se evidenció el carácter proteico de la caseína porque en la reacción de Biuret

solo reaccionan proteínas y péptidos, y no aminoácidos.

La determinación de proteínas por el método de Biuret es una de las técnicas más

sencillas que posee pocas interferencias, una de ellas que se podría decir que es
la más importante es la presencia del ion amonio el cual altera el desarrollo del
color, algunos pigentos absorben a la misma longitud de onda y algunos
carbohidratos y lípidos son capaces de formar complejos con el ion coordinado.

Cuestionario

1. ¿Qué es un enlace peptídico?

Es un enlace entre el grupo amino y un aminoácido y el grupo carboxilo de
otro aminoácido

2. ¿Qué en una curva de calibración de proteínas y para que se usa?

 Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de
una sustancia (por ejemplo, la albumina sérica bovina) que se utiliza para
determinar la cantidad de esta sustancia (proteínas) presente en una
muestra incógnita. En muchas determinaciones se cumple una relación
proporcional entre la magnitud o intensidad de color que da una reacción y
la cantidad del reactivo que la provoca.

3. ¿Cuál es el principio del método de Biuret?

Indica la presencia de proteínas péptidos cortos y otros compuestos con
dos o mas enlaces peptídicos de sustancias de composición desconocida.
La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta,
debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones CU 2+
y los pares de electrones no compartidos de nitrógeno que forma parte de
los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 520 nm.

4. Dibuje el complejo formado entre el reactivo de Biuret y los enlaces

peptídicos:

5. ¿Qué otros métodos existen para cuantificar proteínas?

 Método de Lowry
•Combina la reacción del Biuret con la
reducción del reactivo de FOLIN-CIOCALTEAU
por los grupos aromáticos de residuos de
tirosina, triptófano, cistina cisteína e histidina.
• Origina compuesto azul intenso
• Mide a 750nm
 Método del ácido bicinconínico BCA
• Se basa en que las proteínas reducen los iones
cúpricos del reactivo BCA a iones cuprosos en
medio básico.
• Cambio de color del verde (BCA) al morado.
proteína + Cu+2 Cu+1
Cu +1 + BCA BCA-Cu+1
 Método de Bradford
• Se basa en la unión del reactivo Comassie-
blue G250 a las proteínas en medio ácido
• Reconoce los aa arginina, fenilalanina,
triptófano y prolina
• Origina color azul intenso A=595nm