UPSTREAM The upstream portion of the process involves aerobic fermentation of the

Schizochytrium organism, a heterotrophic microalgae species chosen specifically for its high yield of
DHA triglyceride and its high selectivity for DHA as opposed to other omega-3 fatty acids. In the
laboratory, a batch begins when 1 mL of inoculum containing a concentration of 2*106 cells/ mL
(5.66*1010 cells/ft3). The cells are incubated for 48 hours in a U-SF-50X Erlenmeyer flask atop
orbital shakers. After attaining sufficient cell concentration, the contents of the flasks are transferred
via standard transfer methods to the 7.5L U-SF-40X New Brunswick BioFlo 110 fermentor. The
fermentation period in the BioFlo 110 is 48 hours before transfer via pressure differential to a U-SF-
30X pre-seed fermentor, a vessel of volume 4.414 ft3. After the 48 hour incubation period, the
contents of this vessel are transferred to the final pre-seed fermentor, the U-SF-20X pre-seed
fermentor. The U-SF-20X pre-seed fermentor has 88.29 ft3 worth of vessel volume and is the first
series of fermentors to be process-scale and not laboratory-scale. Temperature and pH are
maintained at 77ºF and 6.8 pH throughout the process via ammonium acetate and sodium chloride
salts that are present in the media broth. The broth also contains a carbon source of glycerol and a
nitrogen source of corn steep solids. Air is fed in at a rate of 1 vvm. Air is pressurized via the U-CP-
50X air compression systems, as pressure differential is the mechanism by which broth is transferred
between fermentation vessels. The reason that pressure differential is used is that pumps present an
issue with sterility. The concentration of Schizochytrium at the end of the each incubation stage is
1.12*1012 cells/ft3 (Chi et. al.)

UPSTREAM

Como primer aparte del proceso se realiza una fermentación aeróbica de la microalga
Schizochytrium, que es una especie de microalga heterótrofas elegidas específicamente por su alto
rendimiento de triglicéridos de DHA y su alta selectividad para DHA en comparación con otros ácidos
grasos omega-3. En el laboratorio, un lote comienza cuando 1 ml de inóculo que contiene una
concentración de 2 x 106 células/ml (5,66 * 1010 células/pie3).

Las células se incuban durante 48 horas en un matraz Erlenmeyer sobre agitadores orbitales.
Después de alcanzar una concentración celular suficiente, los contenidos de los matraces se
transfieren mediante métodos de transferencia estándar al fermentador de 7,5 litros. El período de
fermentación es de 48 horas antes de la transferencia a través del diferencial de presión a un
fermentador pre-siembra, en un recipiente de volumen 4,414 pies3. Después del período de
incubación de 48 horas, los contenidos de este recipiente se transfieren al fermentador de pre-
siembra final. El fermentador de pre-siembra tiene un volumen de 88,29 ft3 y es la primera serie de
fermentadores a escala de proceso y no de laboratorio.

La temperatura y el pH se mantienen a 77ºF y a un pH de 6.8 durante todo el proceso a través de

acetato de amonio y sales de cloruro de sodio que están presentes en el caldo del medio. El caldo
también contiene una fuente de carbono de glicerol y una fuente de nitrógeno de sólidos empinados
de maíz. El aire se alimenta a una velocidad de 1 volumen de aire por volumen de líquido (vvm). El
aire se presuriza a través de los sistemas de compresión de aire, ya que la presión diferencial es el
mecanismo por el cual el caldo se transfiere entre los recipientes de fermentación. La razón por la
que se usa el diferencial de presión es que las bombas presentan un problema con la esterilidad. La
concentración de Schizochytrium al final de cada etapa de incubación es de 1.12*1012 células/ft3

DOWNSTREAM

Las células de los fermentadores se bombean al tanque agitado. El tanque de compensación es la

parte clave de la transición del proceso ascendente del proceso por lotes al proceso posterior
continuo. El tanque de compensación permite que la corriente descendente fluya continuamente
mientras bombea, lo que necesita del tanque que se vacía en unidades escalonadas de la corriente
ascendente. La mezcla de células con medio y agua luego se bombea a la centrífuga de disco. La
centrífuga de discos separa la mayoría del medio y el agua para crear una suspensión de células
intactas. El medio y el agua separados utilizando la centrífuga se bombean como residuos a tratar. La
suspensión de células intactas se bombea a un secador por pulverización. El secador por aspersión
tiene aire caliente que lo sopla para evaporar la humedad restante de las células. Cualquier
humedad disminuirá la eficiencia y se realizara el paso de extracción con solvente de hexano. Las
células secas se transportan a través de la cinta transportadora. Esta cinta transportadora es
enfriada simultáneamente por una camisa con agua de refrigeración corriendo a través de ella. Las
celdas que salen del secador por pulverización están extremadamente calientes y deben enfriarse
antes de mezclarlas con el solvente. Las células secas y frías se descargan en un tanque de
almacenamiento mixto lleno de hexano.

El hexano se carga inicialmente en el tanque de almacenamiento de almacenamiento y luego se

bombea al tanque de mezcla. Después de mezclarse bien con hexano, el hexano y la mezcla de
células se bombean al molino de bolas. La trituración mecánica del molino de cuentas junto con el
remojo en hexano solvente permite el 90% de trituración de las células. La mezcla de células,
biomasa de células trituradas, aceite y hexano se bombea para ser reciclada nuevamente a la
biomasa original y tanque de mezcla de hexano. La corriente de reciclaje permite que las células
tengan unas pocas corridas a través del molino de bolas para optimizar que la gran mayoría de las
células se aplasten y se extraiga el aceite.

Después de que pasen lo suficiente por el molino, la mezcla de biomasa triturada, aceite y hexano se
bombea a una centrífuga. La centrífuga separa la mayoría de la biomasa de los residuos. La mezcla
de residuos de biomasa y hexano se vierte luego a una tolva y se transporta a una estación de
empaque para la eliminación de desechos especiales mediante incineración, La mezcla de extracto
crudo y hexano se bombea al evaporador instantáneo. El evaporador instantáneo calienta la mezcla
para evaporar el hexano, al cual el hexano gaseoso luego pasa a través del condensador. El hexano
condensado se bombea al tanque de almacenamiento de hexano para reutilizarlo en el proceso.

La mayoría del hexano se evapora en el evaporador flash; El resto se evapora en el evaporador de

película limpia. El evaporador de película limpia funciona a muy bajo vacío y evapora el resto del
hexano para comprimirse a través de una bomba de vacío y finalmente condensarse en el
condensador. Este hexano también será bombeado al tanque de almacenamiento de hexano para
ser reutilizado también.

El extracto crudo enfriado ingresa a la primera columna de Scheibel. La columna de Scheibel también
tiene una solución de hidróxido de sodio al 20%. La solución de hidróxido de sodio al 50% se diluye
con agua a una solución de hidróxido de sodio al 20% en el tanque de mezcla. La solución de
hidróxido de sodio diluido se bombea a la columna Scheibel. La base de hidróxido de sodio reacciona
con el aceite crudo en una reacción de saponificación. Las columnas Scheibel son equipos eficientes,
y los triglicéridos EPA / DHA están completamente saponificados por el hidróxido de sodio. Para
llevar la reacción a su finalización, el hidróxido de sodio se alimentó en exceso con un 10% al
triglicérido EPA / DHA.