Química Analítica

Fase 3 – Métodos instrumentales

Estudiante: Adriana Sabogal

Código:52269806.
Estudiante
Código:
Angélica Yurani Sierra González
Código: 1.004.089.074
Estudiante
Código:
Estudiante
Código:

Grupo: 21

Tutora: Sindy Johana Escobar

UNAD - Universidad Nacional Abierta Distancia

Ibagué – Tolima
28 de Noviembre de 2019

P á g i n a 1 | 19
Contenido
1. Introducción .............................................................................. 3
2. Objetivos ................................................................................... 4
3. Procedimiento para la determinación de Pb en leche ................. 5
Plantea el procedimiento de la preparación de muestra para análisis. ....... 5
Propone una posible alternativa de solución al problema identificado a
través de métodos instrumentales........................................................ 6
Define las relaciones matemáticas para identificar y determinar el analítico
de la problemática identificada. ........................................................... 7
4. Ejercicios Individuales ............................................................. 14
Estudiante 1 .................................................................................... 14
Estudiante 2 .................................................................................... 15
Angélica Yurani Sierra González ......................................................... 16
Estudiante 4 .................................................................................... 17
Estudiante 5 .................................................................................... 18
5. Referencias bibliográficas ........................................................ 19

P á g i n a 2 | 19
 1. Introducción
Los métodos instrumentales son métodos analíticos que se basan en la medida
de las propiedades físicas de los analitos (conductividad, potencial de
electrodo, absorción o emisión de luz, relación carga/masa, fluorescencia,…)
para:
 La determinación cuantitativa o cualitativa de los analitos: métodos no
separativos.
 La separación de varios analitos: métodos separativos.
Los sistemas instrumentales aplicados al análisis y control químicos son
ampliamente aceptados como métodos que ahorran tiempo, requieren menos
separaciones químicas y son seguros y sensibles. La ventaja que tienen sobre
los métodos de análisis “por vía húmeda” deriva directamente del hecho de
que determinan la composición química por medio de la medición de las
propiedades físicas. Como resultado, los aparatos y los procedimientos de
interés son comunes tanto a lo que tradicionalmente se denomina análisis
como a las investigaciones químicas.
Los métodos instrumentales se diferencian de los métodos analíticos clásicos
principalmente en que no se requiere que haya reacción química y que son
métodos relativos. Es decir, se requiere realizar un calibrado para relacionar
la señal medida con la propiedad que se quiere obtener y esta relación sólo se
puede aplicar a las condiciones en la que se ha determinado.
Sólo es necesario recordar el gran número de propiedades físicas de las
sustancias: índice de refracción, color, susceptibilidad magnética,
conductividad térmica, grado de acidez y muchas otras; para percibir la
magnitud del campo de la medición instrumental. Algunas propiedades son
específicas y permitirán una identificación y determinación cuantitativa directa
de una sustancia. Otras, tales como la conductividad eléctrica y el índice de
refracción, no son específicas. Sin embargo las propiedades no especificas
pueden usarse también para verificar la identidad de una sustancia cuando se
conocen otras características (la identidad y pureza de los líquidos orgánicos
puede confirmarse determinando el índice de refracción).

P á g i n a 3 | 19
2. Objetivos
 Aprender los principios básicos de espectrofotometría UV-Vis, ley de
Lamber Beer, cualificación y cuantificación de analitos de una muestra
problema a través de espectroscopia UV-Vis, curvas de calibración.
 Entender los principios básicos de análisis elemental, cualificación y
cuantificación de analitos de una muestra problema a través de
absorción atómica.
 Aplicar los principios básicos de espectroscopia FTIR, cualificación y
cuantificación de analitos de una muestra problema a través de
espectroscopia FTIR.
 Comprender los principios básicos de cromatografía, cromatografía en
fase líquida, cromatografía en fase gaseosa, cromatografía por exclusión
por tamaño.

P á g i n a 4 | 19
 3. Procedimiento para la determinación de Pb en leche
Plantea el procedimiento de la preparación de muestra para análisis.
El Pb es determinado en la solución de la muestra mediante
Espectrofotometría Absorción Atómica por Horno de Grafito.
1. Se emplea una lámpara de Cátodo Hueco de Pb como fuente y una
lámpara de Deuterio como corrector de fondo.
2. Pesar aproximadamente 1,0 g de muestra (leche líquida) por duplicado.
3. En tubos de polipropileno de fondo cónico de 50 mL de capacidad con
tapa rosca resistente a 110ºC.
4. Bajo campana de extracción de gases adicionar lentamente 5 mL de
HNO3 del (65 - 70%) (Para análisis de trazas) y ajustar la tapa
herméticamente.
5. Preparar simultáneamente un blanco de reactivos.
6. Realizar digestión en el equipo de microondas: Digestión en sistema
cerrado.
7. Seleccionar el método en el sistema de hondo microondas Marca CEM
Modelo MARS-5 de acuerdo a la programación establecida previamente.
8. En este caso el Método es denominado: T Animal 30 Tubos; la
programación establecida:

9. De acuerdo al número de muestras seleccionar el programa de

digestión.
10. Correr un blanco de reactivos y muestras fortificadas por cada serie de
digestión.
11. Digerir la muestra en el microondas hasta la aparición de color
traslucido.
12. Dejar enfriar por 30 minutos como mínimo.
13. Una vez digerida la muestra transferir cuantitativamente el contenido
a un balón de 50 mL; mediante enjuagues sucesivos con agua tipo I
completar a volumen con agua tipo I. Tapar cuidadosamente y
homogenizar.
14. La muestra se puede guardar a temperatura ambiente sino se a analizar
inmediatamente en el término de una semana o si el análisis no va a ser

P á g i n a 5 | 19
 dentro de la semana siguiente se puede guardar en la nevera por
aproximadamente dos meses.
15. Utilizando una micropipeta, dispensar 1,5 mL de cada una de las
soluciones de calibración y de las muestras en las copas del
automuestreador del horno de grafito.
16. Preparar una solución del modificador de matriz de nitrato de magnesio
de manera que el equipo con una cantidad de 50 µg en 5 µL. Realizar una
dilución de 1:5
17. Ubicar cada en cada uno de las copas del automuestreador del horno
de grafito, de acuerdo al método seleccionado (Plomo en Leche 2014); el
blanco, el diluyente, el modificador de matriz, estándar maestro.
18. Determinación del contenido de Pb.
19. Seleccionar el método para la determinación de Pb, Plomo en Leche
2014.
20. Programar las muestras a analizar y poner el equipo a punto de acuerdo
con las instrucciones del fabricante y buenas prácticas de laboratorio

Propone una posible alternativa de solución al problema identificado a través

de métodos instrumentales.

P á g i n a 6 | 19
Calibración y lectura de la muestra
1. Se corre un blanco de reactivos para ajustar el cero; se calibra con las
soluciones estándar y la concentración de las muestras se establece
mediante interpolación automática en µg/L.
2. La calibración y la lectura de las muestra se realiza siguiendo el Anexo
II. Guía operativa del espectrofotómetro de absorción Atómica Thermo
Elemental Solaar iCE 3400
Define las relaciones matemáticas para identificar y determinar el analítico
de la problemática identificada.
El contenido de Pb en la muestra se obtiene mediante la siguiente ecuación:
Contenido de Pb
(µg/kg) = (Lec. x 0,050)/P
Lec. = Lectura del equipo en µg/L de Pb
P = Peso de la muestra en g

Propuesta ADRIANA SABOGAL

1. ESQUEMATIZA EL PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE LA

MUESTRA DE LECHE.

Método seleccionado:

El método Instrumental que se utilizará para la determinación de plomo en la leche

es la espectrometría de absorción Atómica que consiste en la medida de la absorbancia de una

radiación electromagnética a una longitud de onda característica del elemento a medir. Es

necesario para la medida que el elemento se encuentre en su forma atómica. Para ello se realiza

una excitación con una llama de Acetileno/Aire o Acetileno/N2O. La Espectrofotometría es una

de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección específica de moléculas. Se

P á g i n a 7 | 19
caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza

(contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas).

Los espectros de absorción se miden mediante un instrumento denominado espectrómetro,

constan de una fuente de luz “blanca” caracterizada por un espectro de emisión continuo en un

intervalo amplio de longitudes de onda y de un monocromador que actúa como filtro óptico

transmitiendo un haz de luz de longitud de onda fija λ e intensidad I0. Este haz de luz penetra en

la cubeta de análisis donde se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz mide la intensidad

del haz a la salida La intensidad del haz de luz se va atenuando a medida que atraviesa la cubeta

debido a la absorción de las moléculas de la muestra. El ritmo de absorción depende de la

intensidad inicial de luz y de la concentración de moléculas. De esta manera, cuando un haz de luz

de intensidad I recorre una distancia dL en una muestra con una concentración de moléculas [B],

se produce una atenuación de intensidad dI dada por:

dI = − k ⋅[B]⋅I⋅ dL

La constante k se denomina coeficiente de absortividad molar. La expresión anterior se puede integrar

de la siguiente forma:

lo cual da lugar a la ley de Beer-Lambert 1 para la absorción que relaciona la intensidad a la salida e la
muestra If , con la intensidad inicial I0, la concentración de moléculas y la distancia recorrida por la luz
en la muestra, L:

El espectrofotómetro, en lugar de la intensidad, mide la absorbancia A que se define por:

P á g i n a 8 | 19
La utilización de la absorbancia al realizar los espectros tiene la ventaja de ser directamente
proporcional a la concentración de moléculas en la muestra.

MATERIALES:
 pipetas y matraces aforados
 la balanza de precisión.

 PROCEDIMEINTO:

Para determinar el contenido en plomo en una muestra de leche contaminada, se toma 1.0 mL de
la leche y se diluye a un volumen final de 5.0 mL, se realiza la medida por espectroscopia de
absorción atómica y se obtiene una señal de absorbancia de 0.293 a 283.3 nm.

 PLANTEA EL MÉTODO DE ANÁLISIS PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL

ANALITO EN LA PROBLEMÁTICA IDENTIFICADA.

Se utilizara el espectrofotómetro de absorción atómica el cual permite cuantificar el analito e la

muestra problemas.

 DEFINE LAS RELACIONES MATEMÁTICAS PARA IDENTIFICAR Y

DETERMINAR EL ANALÍTICO DE LA PROBLEMÁTICA IDENTIFICADA
EJEMPLO MATEMATICO BAJO SUPUESTO

P á g i n a 9 | 19
 Para determinar el contenido en plomo en una muestra de leche contaminada, se toma 1.0 mL

de la leche y se diluye a un volumen final de 5.0 mL, se realiza la medida por espectroscopia de

absorción atómica y se obtiene una señal de absorbancia de 0.293 a 283.3 nm. Una segunda

muestra de leche de 1.0 mL es fortificada con 1.00 µL de un estándar de plomo de 1860 ppb y

diluido posteriormente a un volumen final de 5.0 mL. Se realiza la medida de esta nueva muestra

y se obtiene una señal de absorbancia de 0.436 a la misma longitud de onda. Determinar la

concentración de plomo en la muestra original de leche.

Se trata de un caso de fortificación de muestra problema, similar a la adición estándar pero

utilizando solo un patrón de calibrado. Se puede establecer la siguiente proporcionalidad, en ppb,

para las disoluciones de medida:

1 ∗ 10−3 ∗ 1860
𝐶𝑃𝑏 + 0,436
5 = = 0,7623 𝑝𝑝𝑏
𝐶 0,293

Como la leche está 5 veces diluida (1 mL leche a un volumen de 5 mL en la disolución de

medida):

CPb en la leche contaminada = 5xCPb en la disolución de medida = 3.81 ppb.

PASO 3. DISEÑO DE UNA POSIBLE ALTERNATIVA PARA LA SOLUCIÓN DEL

PROBLEMA ANALÍTICO

Estudiante N° 1

Para la determinación del contenido de hierro en harina por el método

de espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de
absorbancia para las soluciones estándar:

P á g i n a 10 | 19
 Estándar Concentración Absorbancia
(ppm)

1 2 0,115

2 4 0,223

3 6 0,345

4 8 0,457

5 10 0,534

6 12 0,589

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la

concentración.

-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal

que le permita determinar la ecuación correspondiente.

A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración en una muestra para lo cual se tomó 2 g de
harina y luego de tratarla adecuadamente se llevó a un volumen de 100
mL. La lectura de absorbancia de esta solución fue de 0,250. Determine
la concentración de fósforo en la muestra de harina.

Haga un cuadro comparativo de las ventajas y desventajas de los

métodos de absorción atómica y emisión atómica.

Indique 4 propiedades que debe tener una buena fase estacionaria en

cromatografía.

P á g i n a 11 | 19
 1.
CONTENIDO DE HIERRO HARINA
0.7
y = 0.0488x + 0.0357
0.6 R² = 0.9836

0.5
ABSORBANCIA

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 2 4 6 8 10 12 14
CONCENTRACION (PPm)

De la gráfica podemos inferir que a medida que se aumenta la concentración aumenta la

absorbancia de la misma.

2. 𝑦 = 0,0488 𝑥 + 0,0357

0,250
− 0,0357 = 𝑥
0,0488

𝑥 = 5,1 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 ℎ𝑖𝑒𝑟𝑟𝑜 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑢𝑛𝑎 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 0,250.

3. Haga un cuadro comparativo de las ventajas y desventajas de los

métodos de absorción atómica y emisión atómica.

METODO VENTAJAS DESVENTAJAS

ABSORCION ATOMICA  Puede analizar hasta 82  Sólo pueden analizarse las

elementos de forma directa. muestras cuando están en
 Sus límites de detección son disolución
inferiores a la ppm.  Tienen diferentes tipos de
 Tiene una precisión del orden interferencias.
del 1% del coeficiente de  Solo pueden analizar elementos
variación. de uno en uno.
 La preparación de la muestra  No se pueden analizar todos los
suele ser sencilla. elementos del Sistema
Periódico.

P á g i n a 12 | 19
  Tiene relativamente pocas  Por ser una técnica de
interferencias. absorción, sus curvas de
 Su manejo es sencillo. calibrado sólo son lineales en un
 El precio es razonable. corto rango de concentración.
 Existe abundante bibliografía.
EMISION ATOMICA  Menor interferencia entre  Equipo más caro.
elementos consecuencia
directa de sus temperaturas  Mayor coste de operación que la
más elevadas. espectroscopia de absorción
 Se pueden obtener buenos atómica.
espectros para la mayoría de  Menor precisión que la
los elementos con unas espectroscopia de absorción
mismas condiciones de atómica.
excitación, y en consecuencia,
es posible registrar
simultáneamente los
espectros para docenas de
elementos.
 Permiten la determinación de
bajas concentraciones de
elementos que tiende a formar
compuestos refractaorios,
esto es, compuestos que son
muy resistentes a la
descomposición térmica, tales
como B, P, U, Zr Nb.
 Permiten la determinación de
no metales como Cl, Br, I y S.
 Son aplicables en unos
intervalos de concentración
que abarcan varios órdenes de
magnitud.
 Menos tiempo de análisis.

4. Indique 4 propiedades que debe tener una buena fase estacionaria en

cromatografía.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.

b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.

P á g i n a 13 | 19
 c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes

plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse

corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después dejar secar

completamente antes de aplicar la muestra.

d) Pureza de los disolventes.

4. Ejercicios Individuales
Por orden de ingreso al foro, cada estudiante resuelve los siguientes ejercicios
con base en la lectura y análisis de las siguientes referencias que se
encuentran en el entorno de conocimiento y que se asocian a los métodos
instrumentales de espectroscopia UV-Vis, absorción atómica, espectroscopia
FTIR y cromatografía:

Estudiante 1
1a Para la determinación del contenido de hierro en harina por el método
de espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de
absorbancia para las soluciones estándar:

Concentración
Estándar Absorbancia
(ppm)

1 2 0,115

2 4 0,223

3 6 0,345

4 8 0,457

5 10 0,534

P á g i n a 14 | 19
 6 12 0,589

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración.
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal
que le permita determinar la ecuación correspondiente.

1b A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración en una muestra para lo cual se tomó 2 g de
harina y luego de tratarla adecuadamente se llevó a un volumen de
100 mL. La lectura de absorbancia de esta solución fue de 0,250.
Determine la concentración de fósforo en la muestra de harina.

1c Haga un cuadro comparativo de las ventajas y desventajas de los

métodos de absorción atómica y emisión atómica.

1d Indique 4 propiedades que debe tener una buena fase estacionaria en

cromatografía.

Estudiante 2
2ª Para la determinación del contenido de cromo en un alimento por el
método de espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos
de absorbancia para las soluciones estándar:

Concentración
Estándar Absorbancia
(molar)

1 2,0 0,115

2 4,0 0,227

3 6,0 0,344

4 8,0 0,457

5 10,0 0,533

6 12,0 0,589

P á g i n a 15 | 19
 A partir de los datos de la tabla:
-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración.
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal
que le permita determinar la ecuación correspondiente.

2b A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración en una muestra que luego de tratarla
adecuadamente se llevó a un volumen de 250 mL. La lectura de
absorbancia de esta solución fue de 0,336. Determine la concentración
de cromo en la muestra de harina.

2c Indique cuales son los principios básicos de espectroscopía infrarrojo

y de un ejemplo.

2d ¿Qué propiedades de una mezcla se deben tener en cuenta, para elegir

la clase de cromatografía adecuada para separar los constituyentes?

Angélica Yurani Sierra González

3a La provitamina A se determina como β-caroteno. Para lo cual se hace
una extracción previa, se purifica por cromatografía de columna y el
extracto se diluye a un volumen conocido y se mide a 450 nm. Para
determinar el contenido de esta sustancia en un alimento se preparó
la siguiente curva de calibración:

Concentración
Estándar Absorbancia
(molar)

1 0 0,000

2 0,1 0,130

3 0,2 0,235

4 0,3 0,363

5 0,4 0,476

6 0,5 0,625

P á g i n a 16 | 19
 A partir de los datos de la tabla:
-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración.
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal
que le permita determinar la ecuación correspondiente.

3b A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere

calcular la concentración de provitamina A en una muestra para lo cual
se tomó 10 mL y se llevó a un volumen de 100 mL. La lectura de
absorbancia de esta solución fue de 0,240. Determine la concentración
de provitamina A en la muestra.

3c Indique cuales son los principios básicos de espectroscopía UV-Vis y

de un ejemplo.

3d ¿Qué es el tiempo de retención en cromatografía y en cuál es su

función en la identificación de moléculas?

Estudiante 4
4ª Para determinar la concentración de níquel en un alimento se
construyó la siguiente curva de calibración:

Concentración Porcentaje de
Estándar
(ppm) Tramitancia (%)

1 32 55,2

2 48 39,0

3 60 28,1

4 80 21,0

5 100 15,0

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la
concentración teniendo en cuenta que:

P á g i n a 17 | 19
 A=2-Log T
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal
que le permita determinar la ecuación correspondiente.

4b A partir de la curva anterior, determine la concentración de níquel en

mg en cada 100 g de muestra, si un 1,0 g de una muestra problema,
se disolvió a 100 mL y se midió dando una Tramitancia de 20 %

4c Indique cuales son los principios básicos de espectroscopía de

absorción atómica.

4d ¿Cómo se clasifica la cromatografía de acuerdo al estado de las fases?

Estudiante 5
5a Para determinar la concentración de plomo en una muestra de leche
se construyó la siguiente curva de calibración:

Concentración Porcentaje de
Estándar
(ug/cm3) Tramitancia (%)

1 2,3 85,0

2 4,6 72,0

3 6,9 62,5

4 9,2 54,0

5 11,5 48,5

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la

concentración teniendo en cuenta que:
A=2-Log T
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal
que le permita determinar la ecuación correspondiente.

5b A partir de la curva anterior, determine la concentración de una

muestra de leche con una Tramitancia de 65 %

P á g i n a 18 | 19
5c Indique cuales son los principios básicos de espectroscopía de emisión
atómica.

5d ¿En cromatografía porque en necesario efectuar ensayos preliminares

antes de la separación cromatográfica?

5. Referencias bibliográficas
 Chatwal, G. R., Anand, S. K. (2008). Spectroscopy: atomic and
molecular (pp. 14-75, 176-253). Mumbai: Himalaya Publishing House.

 Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012).

Introducción a la cromatografía líquida de alta resolución (pp. 11-92).
Madrid: Editorial Universidad Autónoma de Madrid.

 Lajunen, L. H. J. (1998). Spectrochemical analysis by atomic absorption

and emission (pp. 1-29). Cambridge: Royal Society of Chemistry.

 Rodríguez, Alonso, Juan José. (2014). Química y análisis químico (pp.

329-357). Murcia: Cano Pina

P á g i n a 19 | 19