UNIVERSITATEA POLITEHNICA DIN BUCUREŞTI

FACULTATEA DE INGINERIE MEDICALĂ

Biomateriale şi Dispozitive Medicale

Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de

grafenă și oxidului de grafenă funcționalizat

Student/ă: Oana BUCUR

Grupa: 1442

Profesori Coordonatori: Prof. Dr. Ing. Alina BĂDĂNOIU

2018
 Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de grafenă și oxidului de grafenă funcționalizat

Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de grafenă și oxidului de

grafenă funcționalizat

Materialele pe bază de grafen au devenit instrumente bionanotehnologice foarte

populare în ultimii ani. Materialele din familia de grafen au fost recunoscute ca demne
de atenție datorită proprietăților lor antimicrobiene. Funcționalizarea suprafeței de
grafen (sau mai degrabă a oxidului de grafen) creează posibilitățile de a obține agenți
antimicrobieni eficienți. O atenție deosebită este acordată materialelor pe bază de oxid
de grafen, în care componentele selectate modifică în mod semnificativ activitatea
biologică a acestei structuri de carbon.
Multidrug rezistent (MDR) agenti patogeni sunt o problema semnificativa in
infectii la nivel mondial. În 2009, Societatea Bolilor Infecțioase din America a
evidențiat agenții patogeni "ESKAPE". În acest grup au fost incluși șase dintre agenții
patogeni, cei mai frecvent întâlniți în spitale și cei mai greu de tratat: două bacterii
gram-pozitive (G +: Enterococcus faecium și Staphylococcus aureus) și patru specii
gram negative (G -: Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas
aeruginosa și Enterobacter spp.). Rezistența multiplă la agenții patogeni este una dintre
problemele majore din domeniul terapeutic. Grupul MDR de agenți patogeni (care nu
au legătură cu "ESKAPE" și infecțiile nosocomiale) nu poate fi tratat cu antimicrobiene
tipice. Acești agenți patogeni sunt rezistenți la majoritatea antibioticelor cunoscute și
utilizate (de exemplu, Escherichia coli ca MDR la carbapenem și cefalosporine).
Utilizarea excesivă a antibioticelor cauzează creșterea rezistenței a bacteriilor și
ciupercilor. Prin urmare, există o nevoie puternică de a găsi modalități alternative de
ucidere a agenților patogeni.
Din fericire, datorită dezvoltării nanobiotehnologiei și a materialelor bioactive
noi, putem pune în practică tot mai multe idei și soluții. Una dintre noile posibilități din
domeniul cercetării care au apărut în ultimii ani se bazează pe materialele familiei de
grafen care se găsesc în diagnostic, terapeutică sau industrie, cum ar fi:
1. factorii anti antibacterieni,
2. agenți de bioimagistică și terapie fototermică,
3. materiale pentru ingineria tisulară și
4. biosenzori.

2
 Oana BUCUR

Grafenul este un monostrat de atomi de carbon hibridizați 2D sp2 sub forma

unei fâșii de fagure de miere cu lungimea legăturii C-C de 0,142 nm.
Rapoartele privind activitatea biologică a GO și a altor materiale din familia
grafenului sunt încă limitate. Prin urmare, proprietățile lor sunt studiate în mod
continuu pentru a înțelege activitatea și pentru a asigura dezvoltarea de bio-aplicații
sigure.
Cercetările efectuate asupra peliculelor de grafen monostrat pe Cu (conductor)
și Ge (semiconductori) au arătat în mod surprinzător că aceste structuri pot inhiba
creșterea E. coli și S. aureus), în timp ce proliferarea ambelor bacterii nu poate fi
restricționată semnificativ prin un film de grafen pe SiO2 (izolator). Morfologia
celulelor după contactul direct cu peliculele de grafen pe Cu și Ge a confirmat în
continuare că a apărut o deteriorare a membranei, în timp ce distrugerea membranei nu
a fost indusă de grafen cu SiO2 (Figura 1). Autorii au concluzionat că activitatea
antibacteriană a grafenului nu provoacă distrugeri mediate (sau leziuni mecanice prin
marginile ascuțite), ci prin interacțiunea de transfer de electroni de la membrana
microbiană la grafen. Un comportament similar a fost observat și în alte alotropuri de
carbon - fullerene.

Fig 1 - Studiile SEM privind creșterea E. coli și S. aureus pe pelicule de grafen depuse pe Cu,
Ge sau SiO2. Imaginile sunt prezentate la mărire mică și mare. Săgețile albe la mărire mare corespund
suprafețelor dreptunghiulare la mărire mică. Deteriorarea membranei este observată pentru celulele
însămânțate pe grafenul Cu și grafenul Ge. Retipărită de la Li și colab. [46] cu permisiunea Group
Publishing Group.

3
 Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de grafenă și oxidului de grafenă funcționalizat

Proprietățile antimicrobiene sunt legate de forma, mărimea și funcționalitatea

oxigenată a foilor pe bază de grafen, dar activitatea acestora poate fi puternic
modificată prin funcționalizarea cu grupuri, molecule, polimeri sau nanoparticule
adecvate. Prezența grupurilor reactive pe suprafața GO (sau GrO) facilitează
funcționalizarea cu, de ex. (1) antibiotice, (2) chimioterapeutice, (3) imunoglobuline,
(4) metale (nanometale), cum ar fi argintul și aurul și (5) alte organice sau anorganice
compuși.
În special, nanocompozitele formate din materiale pe bază de grafen și particule
de metal promit agenți antibacterieni eficienți cu acțiune sinergică care pot fi utilizați
într-o gamă foarte largă atât a practicii clinice, cât și a cercetărilor, precum și a
aplicațiilor tehnice legate în mod obișnuit de purificarea apei.
Cele mai frecvente nanomateriale bacteriostatice sunt compușii cu argint (ioni și
/ sau NP) care pot fi încorporați într-un material de carbon. Argintul prezintă activități
antibacteriene, antifungice, antiprotozoane și antivirale și este cunoscut pentru
activitatea sa biologică de-a lungul vârstelor (ca sare de argint AgNO3 și sulfadiazină
de argint). Efectul său oligodinamic și mecanismul de acțiune pe mai multe niveluri
cauzează un risc mic de dezvoltare a rezistenței. Mecanismul de activitate Ag +
a fost
explicat, dar activitatea antibacteriană a nanoparticulelor de argint (Ag NPs) provoacă
încă controverse. Acționarea Ag depinde de mărimea, forma și agregarea particulelor,
probabil, principalele motive ale efectului antibacterian sunt următoarele: (1) contactul
direct al Ag NP cu o celulă patogenă și interacțiunea cu pereții celulari și membranele;
(2) penetrarea celulelor și interacțiunea cu compușii interni care determină efectul
citotoxicității; 3) genotoxicitate și (4) generarea ROS (în ceea ce privește prezența altor
molecule, de exemplu TiO2).
În timp ce Ag NPs în sistemul Ag-rGO au o activitate antibacteriană puternică
evidentă, rGO a fost revendicat de Xu și colab. să fie în principal responsabili pentru
adeziunea celulelor bacteriene la acest nanomaterial (de exemplu, ca urmare a
legăturilor de hidrogen dintre lipopolizaharide și grupuri de oxigen). Astfel, purtătorul
rGO facilitează accesul celulelor de argint la bacterii și previne agregarea dintre
particulele Ag. Acest proces a fost numit un proces de capturare-ucidere. Îmbunătățirea
activității poate fi obținută odată cu alte componente introduse în structură (figura 2c).
Acesta este cazul când se utilizează chitosan / Ag / GO nanohybrid deoarece
proprietățile de adsorbție a chitosanului maximizează interacțiunea cu celulele.

4
 Oana BUCUR

În studiile lui de Faria et al., dispersia GO nu a arătat nicio activitate

antibacteriană împotriva P. aeruginosa în intervalul de concentrație investigat. Pe de
altă parte, sistemul Ag / GO a prezentat o activitate biocidă ridicată cu o concentrație
minimă de inhibare (MIC) cuprinsă între 2,5 și 5,0 μg / ml. Am demonstrat o activitate
antibacteriană excelentă a Ag / rGrO împotriva S. aureus, E. coli și K. pneumoniae cu
valori ale MIC în intervalul 4-16 μg / mL. RGrO pură a fost inactivă la concentrația
testată de 512 pg / ml. În mod similar, GO pură a fost inactivă împotriva C. albicans dar
încărcată cu NPs de argint a prezentat proprietăți antifungice (îmbunătățită și în
comparație cu Ag NPs). Autorii au indicat o concentrație ROS ușor mai ridicată în
mediu după incubare cu Ag / GO decât cu GO. Mai mult decât atât, diferența de acțiune
în funcție de forma materialului Ag / carbon a fost indicată (vezi figura 2b), care arată
că nanoscrollurile de carbon (CNSs) prezintă activitate antimicotică îmbunătățită și
prelungită datorită eliberării lente a ionilor de argint.
A fost raportată și activitatea anti-biofilm a foilor GO cu Ag NP spre celulele
bacteriene aderente pe suprafețele din oțel inoxidabil. Deteriorarea bacteriilor cauzate
de contactul direct al bacteriilor cu metalul (de exemplu Cu) este unul din mecanismele
eficiente în inactivarea bacteriană.

5
 Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de grafenă și oxidului de grafenă funcționalizat

Fig 2 - diferite valori ale concentrației inhibitorii minime (MIC) a diferitelor materiale bazate pe grafene
pentru bacteriile și ciupercile selectate. (a) Activitatea antibacteriană a GrO, GrO cu nanoparticule de
argint (Ag) și GrO cu complex de ftalocianină de zirconiu (ZrPc) după o iradiere cu infraroșu aproape de
5 minute (Gerasymchuk et al. (b) Activitatea antifungică a plăcilor GO, plăcile GO cu Ag și nanoscrolls
de carbon (CNSs) cu Ag împotriva Candida albicans și Candida tropical Li și colab. Inserția prezintă
zona de inhibare a (b-1) GO, (b-2) Ag / GO și (b-3) Ag / CNS la C. tropicală estimată prin testul de
difuzie pe disc după 24 de ore de incubare; bara de bare este de 5 mm. (c) Activitatea GO, chitosan / GO,
Ag / GO și chitosan / Ag / GO împotriva Staphylococcus aureus UCLA 8076 rezistent la meticilină.

Pentru a îmbunătăți solubilitatea în apă și activitatea antibacteriană pe termen

lung a rGO, a fost modificată cu NP-uri pol-l-lizină și cupru. În acest caz, măsurătorile
concentrațiilor de ioni K +, Ca2 +, Mg2 + și Cu2 + în fluidul extracelular celular tratat
au indicat că activitatea antibacteriană a acestui material se poate baza pe tulburările
concetrațiilor ion ale lichidului intracelular al bacteriilor.
Un studiu cuprinzător privind GO cu diferite NP metalice sau semimetale a fost
prezentat de Richtera et al. Experimentul a demonstrat cea mai mare actiune a
materialului dopat de Se impotriva S. aureus si, ulterior, a activitatii scazute a Ag, AgP,
Zn, Cu siMn. Un astfel de comportament a fost observat pentru MRSA (ambele sunt
bacterii G +), iar efectul a crescut cu creșterea concentrațiilor compuse. Pe de altă parte,
efectul acelorași compozite asupra bacteriilor E. coli a fost observat numai la cea mai
mare concentrație aplicată, ceea ce a confirmat diferența de răspuns între tulpinile
Gram-pozitive și Gram-negative.
rGO decorat cu particule de Fe3O4 (200-250 nm în diametru) a demonstrat, de
asemenea, proprietăți antibacteriene înalte. Aproape 99,6% din celule au fost viabile
atunci când au fost tratate cu Fe3O4 NPs, în timp ce doar 3% au supraviețuit celulelor
în prezența compozitului. Eliberarea testului de stres oxidativ ROS a fost considerată ca
un mecanism de activitate. În plus, sa demonstrat că materialul este o bună membrană

6
 Oana BUCUR

pentru îndepărtarea ionilor de Pbmetal și a coloranților organici dintr-o soluție apoasă.

Nanoparticulele de oxid de cobalt susținute pe plăcile rGO sunt un alt exemplu al
acțiunii îmbunătățite a componentelor combinate. În timp ce GO, rGO și Co3O4 au fost
studiate de Alsharaeh et al. nu au avut un efect antibacterian, Co3O4 / rGO a arătat o
activitate ridicată împotriva E. coli. Atât aditivii, cât și oxizii de fier și cobalt sunt
interesanți și datorită proprietăților lor magnetice.

Proprietăți antimicrobiene îmbunătățite prin fotoreactivitate

Pentru a spori activitatea antimicrobiană și efectele terapeutice prin fototerapie

și termoterapie, funcționarea suprafeței materialelor de carbon a fost asigurată cu
succes. În zilele noastre, tratamentul fototermic este un mod foarte promițător de a
asigura condiții aseptice și de a vindeca multe infecții microbiene.
Khan și colab. a sugerat că foile de oxid de grafen iradiate cu lumină apropiată
de infraroșu (NIR) (laser Nd: YAG, λ = 1064 nm) au eficacitate ridicată (S. aureus și P.
aeruginosa) și antifungic (Saccharomyces cerevisiae și Candida utilis) mai mare decât
GO fără iradiere. Mecanismul activității nu a fost explicat, dar încălzirea locală și
reducerea GO au fost menționate ca posibile motive pentru decesul microbilor. Dintre
rezultatele obtinute, vindecarea remarcabila a infectiilor rana este foarte promitatoare,
cand ranile artificiale create pe suprafata dorsala a soarecilor au fost tratate cu iradieri
GO si NIR.
Încălzirea locală sub iradiere NIR poate fi utilizată, de asemenea, pentru
uciderea selectivă a bacteriilor patogene atunci când se prepară rGO funcțional cu
anticorpi. Complexul anticorp-rGO a prezentat puțină toxicitate fără iradiere. Cu toate
acestea, când a fost iradiat cu un laser NIR, el a prezentat proprietăți fototermale
excelente și a ucis în mod specific bacteriile patogene capturate (S. aureus).
Recent, am propus un nou material în care oxidul de grafen redus a fost dopat
cu Ag NPs și un complex de ftalocianină (Pc) de zirconiu (IV). Activitatea Pcs a fost
demonstrată anterior pentru a fi utilă în diagnosticarea și terapia fotodinamică în care
s-a observat formarea oxigenului singlet în timpul expunerii la lumină în regiunea
infraroșie. Testul antibacterian a demonstrat o eficacitate mai mare a sistemelor Ag /
rGrO și Pc / GrO studiate împotriva G-E. coli și P. aeruginosa în comparație cu GrO
(Fig. 2 a). Activitatea tuturor compușilor împotriva G + S. aureus a fost aproape
aceeași. După 5 minute de iradiere cu lumină NIR, efectul antibacterian a crescut

7
 Prorietățile antimicrobiene ale oxidului de grafenă și oxidului de grafenă funcționalizat

semnificativ atât pentru Ag / rGrO, cât și pentru Pc / GrO. S-a observat clar tulpina P.
aeruginosa, unde scăderea de 128 ori a valorii MIC a fost obținută după iradierea Pc /
GrO.

8
 Oana BUCUR

Concluzii

Materialele familiei de grafen sunt cu siguranță foarte atractive ca agenți

antimicrobieni. În ultimii 5 ani, interesul pentru utilizarea lor pentru a reduce numărul
de celule de bacterii în diferite medii a crescut semnificativ. Dintre aceste materiale,
oxidul de grafen este un produs excelent care poate fi modificat sau reticulat cu alte
molecule pentru a spori în continuare proprietățile antimicrobiene.

În medicină, acesta poate fi utilizat cu succes pentru diagnosticare, terapeutică

sau prevenire. Diferitele nanomateriale multifuncționale bazate pe grafene cu
proprietăți antibacteriene pot fi produse ideale utilizate în protecția împotriva poluării
mediului (de exemplu, tratarea apelor uzate), siguranța alimentelor și alte aplicații, în
care controlul microbilor (bacterii, ciuperci și chiar viruși) este esențial. Cu toate
acestea, atunci când se ia în considerare aplicarea in vivo, trebuie să ne amintim despre
posibilele efecte citotoxice care depind de forma grafenului, de compoziția, de timpul
de expunere și de tipul celulelor vii.