CONSTRUCCIÓN DE BPFD’s CUANTIFICADOS POR BALANCES DE

MATERIALES
Chávez Meléndez, Susan Elizabeth; Vilca Quispe, Julissa; Ingeniería Biotecnológica,
Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas. Campus
Universidad Católica de Santa María. Arequipa, PERÚ

RESUMEN

El examen de las operaciones requiere de un balance de masa, que se obtiene después de

observar, medir, registrar datos y realizar el análisis de muestras de residuos en forma metódica
y exhaustiva, para prevenir o reducir la generación de desechos, se debe examinar cada
operación en el contexto global del proceso, a fin de identificar su origen y cantidad, los
problemas operativos inherentes y las posibles soluciones y mejoras. En el trabajo del que da
cuenta este artículo se obtuvo el ácido cítrico a partir de ácido oxálico y ácido cítrico empleando
Aspergillus niger, en este caso se usó las perlas de vidrio. Se fermentó el Aspergillus niger
separando la biomasa insoluble, al agregar el hidróxido de calcio se obtuvo el oxalato de calcio
(sólido) y citrato (líquido). Añadiendo el H2SO4 5N el citrato se obtuvo de la reacción acido cítrico
y sulfato de calcio, recuperando el Ácido Cítrico. Se ajustó el pH.

Palabras claves: Aspergillus niger, fermentación, ácido cítrico, balance, estequiometria.

ABSTRACT

The examination of the operations requires a mass balance, which is obtained after observing,
measuring, recording data and performing the analysis of waste samples in a methodical and
exhaustive manner. To prevent or reduce the generation of waste, each operation should be
examined in the overall context of the process, in order to identify its origin and quantity, the
inherent operational problems and possible solutions and improvements. In the work reported
in this article, citric acid from oxalic acid and citric acid using Aspergillus niger, in this case glass
beads were used. Aspergillus niger was fermented by separating the insoluble biomass, by
adding calcium hydroxide, calcium oxalate (solid) and citrate (liquid) were obtained. Adding the
H2SO4 5N citrate was obtained from the reaction citric acid and calcium sulfate, recovering the
Citric Acid. The pH was adjusted.

Keywords: Aspergillus niger, fermentation, citric acid, balance, stoichiometry

conservando el mismo nivel de detalle en

1. INTRODUCCIÓN
El primer paso en la diagramación, es
determinar los límites del proceso que se
analizará. Luego se deben de establecer los
productos que salen del proceso y los
insumos que entran. Resulta muy
importante no tratar de detallar demasiado
todo el diagrama; mezclar actividades
detalladas con actividades resumidas,
normalmente conduce a confusiones. Una
vez que se tiene un diagrama con un nivel
de detalle uniforme, cada uno de los
cuadros de actividad puede ser considerado
un proceso; los diagramas de dichos
cuadros constituyen el siguiente nivel de

1
detalle. De esta forma se puede ir construyó un BPFD cuantificado usando
penetrando en el detalle hasta donde balance de materia.
resulte conveniente.

El ácido cítrico ha sido conocido como una 2. METODOLOGÍA

sustancia natural de las plantas desde
finales del siglo XIX, y desde 1893 los 2.1. Materiales
científicos saben que es producido por
hongos filamentosos (1). el ácido cítrico se  Ácido cítrico
ha posicionado como el mayor ácido  Ácido oxálico
orgánico producido por fermentación con  Óxido de calcio
Aspergillus niger, a la vez que es  Ácido sulfúrico 5N
ampliamente usado en la industria de  Ácido clorhídrico 0.1N
alimentos, bebidas, farmacéutica, química  Hidróxido de sodio 0.1N.
entre otras (2).  2 Beakers de 250ml y 100ml
 2 Buretas de 25ml
Los microorganismos capaces de producir y  Lunas de reloj
acumular ácido cítrico son las especies de  Papel filtro rápido
los géneros Aspergillus, Citromyces,  Perlas de vidrio
Penicillium, Monilia, Candida y Pichia,  Baguetas
aunque para la producción comercial sólo  Espátulas
se utilizan mutantes de Aspergillus niger.  Balanza analítica
Comparados con las cepas de Penicillium,  Estufa
los Aspergillus producen más ácido por  pHmetro,
unidad de tiempo, debido a que presentan  Termo – agitador magnético
baja actividad de las enzimas isocitrato  Equipo de filtración a vacío
deshidrogenasa y aconitasa hidratasa, y una  Trompa de vacío
alta actividad de citrato sintetasa (4).

En cuanto a la producción de ácido cítrico,

Grewal y Kalra (3) afirman que el pH inicial
requerido depende de la fuente de carbono
utilizada, y Ruijter y sus colegas (5)
mencionan que los hongos filamentosos
Aspergillus niger acumulan altas
concentraciones de ácido cítrico a partir de
hexosas o disacáridos cuando es cultivado
bajo condiciones particulares.
En este trabajo se realizó la fermentación
con Aspergillus niger para obtener ácido
cítrico mediante operaciones como las
separación, mezclado y filtrado. Por lo
tanto, se determinó experimentalmente la
composición de los elementos de un
downstream biotecnológico para la
obtención de ácido cítrico, ejecutó balances
estequiométricos para la determinación del
flujo de materiales en un downstream y
2.2. Parte Experimental
2.2.1. Obtención del efluente
simulado del up – stream.
Se utilizó una muestra simulada del efluente
acuoso de biorreacción de fermentación del
Aspergillus niger cuyos componentes
principales serán: a) biomasa simulada de
Aspergillus niger (modeladas por perlas de
vidrio); b) ácido cítrico y c) ácido oxálico en
proporciones conocidas. (5g de ácido
cítrico, 1g de ácido oxálico 38g biomasa y
30g de agua).
2.2.2. Determinación de la
composición en peso de la
biomasa insoluble en la
muestra MSAN.

2

Se pesó la muestra MSAN y destarar el peso
del envase que la contiene. Separar la
biomasa por filtración utilizando el equipo
de vacío, pesar las perlas de vidrio
obtenidas y determinó el peso de biomasa
separada de muestra MSAN. Pesar la
muestra filtrada en un beaker de 250ml y
rotularla como MSAN – 1.
2.2.5. Obtención del ácido cítrico.
Se evaporó la muestra MSAN – 3 hasta la
quinta parte del volumen y pasar su
contenido a una luna de reloj previamente
tarada y colocarla en la estufa a 50°C hasta
su cristalización.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Tabla 1. Datos obtenidos del fermentado.

2.2.3. Separación del ácido oxálico
como oxalato de calcio Peso
Obtención del Molecular
Se determinó por balance estequiométrico Fermentado (g) (g/mol)
la cantidad necesaria de CaO para precipitar Biomasa 38 182
el ácido oxálico como oxalato de calcio Agua 30 90
(OXCA) y mantener en solución el citrato Ácido Oxálico 1 48
monocálcico (CMCA) formado. Pesar la Ácido Cítrico 5 74
cantidad de CaO calculada por balance y 74
añadirla al beaker que contiene la MSAN – 1 Fuente: Elaboración propia.
(sin biomasa) y permitir la reacción
3.1. Determinar la composición en
completa con agitación permanente a 75°C
peso de la biomasa insoluble en la
a un pH 5 conseguido con la adición de
MSAN, MSAN-1.
goteo controlado de HCl 0.1N hasta que se
observe un precipitado estable ligeramente
amarillo. Separar el oxalato de calcio por Tabla 2. Determinación de la Biomasa
filtración a vacío a 75°C y secar en la estufa insoluble.
a 50°C. Obtener la solución filtrada en un
beaker de 250ml y rotularla como MSAN – Obtención del Fermentado (g)
2.
Biomasa 38 0.51351351
Agua 30 0.40540541 30 0.83333333
2.2.4. Conversión del citrato
Ácido Oxálico 1 0.01351351 1 0.02777778
monocálcico a ácido cítrico
libre. Ácido Cítrico 5 0.06756757 5 0.13888889
74 1 36 1
Se colocó la muestra MSAN – 2 en el Fuente: Elaboración propia.
termoagitador a 80°C y agregar goteo 3.2. Determinar estequiométrica del
controlado de NAOH 0,1N hasta un pH Ca(OH)2
cercano a 7. Determinó por balance
estequiométrico el volumen de H2SO4 5N 3.2.1. Separación del ácido oxálico
requerido para obtener un precipitado de como oxalato de calcio
SO4Ca y la regeneración del ácido cítrico
libre soluble. Separó por filtración a vacío el
AO + Ca(OH)2 CaO + 2H2O
precipitado a 80°C y secó en la estufa a 50°C.
AcC + 3Ca(OH)2 Ca3C2 + 6H2O
Pesar la solución filtrada en un beaker de
100ml y rotularla como MSAN – 3.

3
Ácido Oxálico 3.3. Determinar la cantidad de H2SO4
1𝑚𝑜𝑙
1𝑔∗ = 0.011 𝑚𝑜𝑙
90𝑔
CaCi2 + 3H2SO4 2AcCi + 3CaSO4

Ácido Cítrico 1 mol 3CaSO4 2AcCi

1𝑚𝑜𝑙 0.026 𝑚𝑜𝑙
5𝑔∗ = * 3 = 0.039 mol 0.013 mol 0.026 mol
192𝑔 2
98 𝑔
3(0.013 𝑚𝑜𝑙) ∗ = 3.822 𝑔 𝐻2𝑆𝑂4
74 𝑔 1 𝑚𝑜𝑙
0.05 𝑚𝑜𝑙 ∗ = 3.7 𝑔 𝑑𝑒 𝐶𝑎(𝑂𝐻)2
1 𝑚𝑜𝑙 H2SO4 5N
49 𝑔
5∗ = 245𝑔/𝐿 𝐻2𝑆𝑂4
𝐿
1𝐿 1000 𝑚𝑙
3.822 ∗ ∗
245 𝑔 1𝐿
= 15.6 𝑚𝑙 𝐻2𝑆𝑂4

3.4. Construir un BPFD cuantificado usando balance de materia.

Figura 2. Diagrama de Flujo de procesos.

Fuente: Elaboración propia.

4. CONCLUSIÓN determinación del flujo de materiales en un

Se determinó experimentalmente la
composición de los elementos de un
downstream biotecnológico para la
obtención de ácido cítrico. Se ejecuto los
balances estequiométricos para la
downstream obteniendo 3.7 g de Ca(OH)2 y
15.6 ml de H2SO4.
La separación del ácido cítrico del sustrato
se realiza por precipitación al añadir
hidróxido de calcio. El ácido cítrico es uno

4
de los principales aditivos alimentarios,
usado como conservante, anti-oxidante,
acidulante y saborizante de golosinas, ANEXO
bebidas gaseosas y otros alimentos.  BALANCE DE OPERACIONES
UNITARIAS
Se construyó un diagrama de bloques de
procesos donde se observa cada operación 14.66
Biomasa=50.56 = 0.2899
con sus respectivos parámetros y
cantidades necesarias para la obtención de 5
Ac.Cítrico=50.56 = 0.0988
ácido cítrico.
1.04
Ac.Oxálico=50.56 = 0.0205
5. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA 29.86
Agua=50.56 = 0.5905
1. Ates, S., Dingil, N., Bayraktar, E. y
 DETERMINACION BIOMASA
Mehmetoglu, U. (2002).
“Enhancement of citric acid Sin biomasa
production by immobilized and
5
freely suspended Aspergillus niger Ac.Cítrico: 35.9 = 0.1393
using silicone oil”. Process 1.04
Ac.Oxálico: = 0.0290
35.9
Biochemistry, 38, 433-436.
29.86
2. Crueger, W. y Crueger, A. (1993). Agua: = 0.8317
35.9
Biotecnología: Manual de
microbiología industrial. España:
Editorial Acribia S.A. 68 p.
3. Grewal, H. S. y Kalra, K. L. (1995).
“Fungal production of citric acid”.
Biotechnology Advances, 13(2),
209-234.
4. López, C. A., Zuluaga, A., Herrera,
S. N., Ruiz, A. A. y Medina, V. I.
(2006). “Producción de ácido
cítrico con Aspergillus niger NRRL
2270 a partir de suero de leche”.
Dyna, 150, 39-57.
5. Ruijter, J. G., Panneman, H. y
Visser, J. (1997). “Overexpression
of phosphofructokinase and
pyruvate kinase in citric acid-
producing Aspergillus niger”.
Biochimica et Biophysiva, 1334,
317-326