1.

OBJETIVOS

1.1 Objetivo general

Ejecutar un recuento bacteriano.

1.2 Objetivos específicos

 Determinar el número total de colonias de microorganismos presentes en
la muestra por la técnica de diluciones en serie.
 Utilizar adecuadamente el microscopio y la cámara de recuento de
Neubauer.
 2. MARCO TEORICO

Recuento directo.
Se hace directamente a una porción de la muestra en una cámara construida para tal
fin (cámara de recuento), se observa directamente los microorganismos y se cuenta
con su abundancia, este método no reconoce que microorganismos sean viables o no
viables y se puedan reproducir.
Cada tipo de recuento de microorganismos viables es potencialmente útil para fines
específicos. Los recuentos de bacterias viables se basan en el numero de colonias
que se desarrollan en placas de agar que han sido previamente inoculadas con
cantidades conocidas de alimento diluido y incubadas en condiciones ambientales
predeterminadas. Tales recuentos se denominan en casos con evidente error,
recuentos totales en placa, cuando en realidad únicamente pueden contarse aquellas
bacterias que pueden crecer en condiciones ambientales elegidas; pues se pueden
cambiar las condiciones ambientales, las de incubación, la composición del medio
favoreciendo así el crecimiento de uno u otro microorganismo. (ICMSF,2000)

 Resultados inmediatos, no requieren incubación

 Cuantificaciones más altas de número de microorganismos
 Permite otras estimaciones, además de densidad. Estimación de biomasa y
actividad

 NO discrimina entre microorganismos vivos y muertos

 Dificultad para diferenciar detritus o partículas de microorganismos
 Adhesión de los microorganismos a partículas de diferentes tamaños y
composición química
 Imposibilidad de utilizar las muestras para estudios posteriores

Cámara de recuento.
Las cámaras de recuento se utilizan para determinar el número de partículas por
unidad de volumen de un líquido. Las partículas leucocitos, eritrocitos, trombocitos,
bacterias, esporas, polen etc. se cuentan visualmente con un microscopio.

Diluciones en serie.
Una dilución seriada es sencillamente una serie de diluciones simples que
amplifican el factor de dilución rápidamente, comenzando con una pequeña cantidad
inicial de muestra, como en este caso seria la cantidad inicial de leche.
Se lleva a cabo colocando una cantidad de solución concentrada a una determinada
cantidad de solvente que dependerá de la relación soluto/solvente requerida y se
realiza este mismo procedimiento sucesivas veces.
3. MATERIALES Y METODOS
3.1 MATERIALES:

 pipeta
 Tubos de ensayo
 Balanza
 Matraz
 Pipetas
 Cámara de Neubauer
 Agujas

EQUIPOS:

 Calentador y Agitador
 Mechero bunsen
 Autoclave
 Cabina de flujo
 microscopio
 Incubadora
 micropipeta

REACTIVOS:

 Caldo nutritivo
 Leche de vaca
3.2 METODOS:
Técnica de diluciones en serie:
Se preparo el Caldo Nutritivo, mediante una relación matemática se
determinó que necesitaríamos 2.34 gr del medio de cultivo para 180 ml de
agua destilada, se calentó a 50°C y se homogenizo, previamente en un
matraz. Se separo en 9 tubos de ensayo con 10 ml cada uno y los 90 restante
en el matraz y se los llevo al Autoclave para su esterilización a 121°C y 15
minutos.
Luego de los 15 minutos se llevo a la cabina de flujo ya esterilizada y a una
temperatura de 45°C – 52°C, se toma 1ml de la muestra que es la leche de
vaca y se coloca en 1 tubo de ensayo y se aplica la dilución en serie de ese
tubo de ensayo que será el 10-1 se toma 1ml y se coloca en el siguiente tubo
de ensayo que será el 10-2 y se siguió el procedimiento hasta llegar al utimo
tubo 10-6, Y en el matraz que se tiene los 90ml del Caldo se le coloco 1 ml
de la leche de vaca.
Recuento:
Luego de llevar a la incubadora a 26°C y esperar 24 horas, con una
micropipeta se le coloca las agujas ya esterilizadas en la autoclave se tomó
10 microlitro que seria 0.01 ml y se colocó en la cámara de recuento de
Neubabuer y se procedió a observar en el microscopio y se realizó el conteo.

4. RESULTADOS

Diluciones Leche de vaca (UFC)

10^-1 Incontable
10^-2 73
10^-3 34
10^-4 12
10^-5 7
10^-6 2
10^-7 -
10^-8 -
10^-9 -
10^-10 -

Se pudo realizar la técnica y contabilizar de cada muestra los microorganismos

presente en algunas diluciones, otras se dejaron en blanco por lo que no se
podía contabilizar ya que algunas fueron contaminadas.
5. ANALISIS DE RESULTADOS

Se pudo observar en el microscopio las unidades formadoras de colonias mas no

que microorganismos estaban presentes en la muestra.

muestra 10-1 de leche de vaca

Se pudo observar muchas colonias de
microorganismo, lo que da a ver que las poblaciones
en esta muestra fueron más abundantes.

muestra 10-2 de leche de vaca

se observo que en esta muestra disminuyo el número

de poblaciones y se pudo contar

muestra 10-3 de leche de vaca

hubo menos población que la muestra anterior.

muestra 10-4 de leche de vaca

 la poblacion desminuyo aun mas.

muestra 10-5 de leche de vaca

disminuyo.

muestra 10-6 de leche de vaca

En esta ya fue mínimo el crecimiento de la población

de colonias de microorganismos

6. CONCLUCIONES.
 Se pudo contabilizar las diluciones de las muestras de la leche de
vaca.
 Se demostró el conteo de las colonias presentes en la muestra ya
que no se pudo identificar que microorganismos estaban presentes
en las diluciones.
 Se realizo la técnica de dilución en serie dando resultados la
contabilidad de la población de microorganismos presente en las
muestras que se pudieron contar y no se contaminaron.
 7. BIBLIOGRAFIA

Toro, D. R. (2005). Manual para la introducción al laboratorio de microbiología.

Universidad de Caldas.

Mariscal, P. C. A., Ibáñez, R. A., & Gutiérrez, M. F. D. (2013). Características

Microbiológicas de Leche Cruda de Vaca en Mercados de Abasto de Trinidad
Bolivia. Revista Científica Agrociencias Amazonía, 1, 18.

Alonso Nore, L. X., & Poveda Sánchez, J. A. (2008). Estudio comparativo en técnicas
de recuento rápido en el mercado y placas petrifilmTM 3MTM para el análisis de
alimentos (Bachelor's thesis, Facultad de Ciencias).