See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/321221577

ISOLASI DAN PEMISAHAN SENYAWA ALKALOID DARI BUAH MAHKOTA

DEWA (Phaleria macrocarpa Boerl.) DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR

Article · September 2017

DOI: 10.25099/stkbs.010209175

CITATIONS READS

0 4,806

3 authors, including:

Sari Defi Okzelia

STIKES Bani Saleh, Bekasi, Indonesia
1 PUBLICATION   0 CITATIONS   

SEE PROFILE

All content following this page was uploaded by Sari Defi Okzelia on 26 January 2018.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 P-ISSN 2549-9629
E-ISSN 2549-9866

Tersedia online di http://jnh.stikesbanisaleh.ac.id

Submisi: 15-06-2017
Review: 04-07-2017
Accepted : 07-08-2017
Publish :30-09-2017

ISOLASI DAN PEMISAHAN SENYAWA ALKALOID

DARI BUAH MAHKOTA DEWA (Phaleria macrocarpa Boerl.)
DENGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR
Sari Defi Okzelia*, Diana Hendrati, Nurdjanah Iljas
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Bani Saleh
*e-mail : dffy_radcliffe@yahoo.com.

ABSTRACT
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a modern separation method that could be used for
separating, purifying and determining the composition of chemical compound. Alkaloid is one of secondary
metabolite compounds which has function as natural medicine. Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Boerl.) is
usually used by the native as traditional medicine. This research aimed to isolate and separate alkaloid compounds
from fruit of Mahkota Dewa using HPLC method. Fruit of Mahkota Dewa was cut into small pieces, dried, then
macerated with methanol. Concentrated methanol extract was acidified with hydrochloric acid to pH 2-3 then
extracted with dichloromethane-water (1:3). Acidic water fraction then basified and extracted again with
dichloromethane-water (1:3). Each of fractions was always tested with Dragendorff reagent and thin layer
chromatography to prove the existence of alkaloid. Separation using HPLC was done for basic dichloromethane
fraction using C18 (RP-18e) column, isocratic elution with mobile phase 10% acetonitrile and 90% sodium
dihydrogen phosphate in water (pH 3) for 20 minutes. Alkaloids in basic dichloromethane fraction were found six
components. Conventional column chromatography was prepared in order to get purer components , using silica
gel G60 and 2.5% gradien of chloroform-methanol as eluent. Fraction 3 of 41 fractions, which assumed containing
standard alkaloid, was fractioned by conventional column chromatography again using ODS and methanol-water
(7:3) as eluent. Separation by HPLC was done again for fraction 2 and 3 of 20 fractions. The results showed that
alkaloid in Mahkota Dewa could be separated using HPLC and obtained two components in fraction 2 and fraction
3 with good resolution but according to the retention time, those alkaloids are not the standard alkaloid used
(atropin).

Keywords : Alkaloid, mahkota dewa, liquid chromatography

ABSTRAK
Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan metode pemisahan modern yang dapat digunakan untuk
pemisahan, pemurnian dan penentuan kadar senyawa. Alkaloid merupakan senyawa metabolit sekunder yang
berfungsi sebagai bahan obat alami. Tumbuhan mahkota dewa (Phaleria macrocarpa Boerl.) banyak digunakan
sebagai obat tradisional oleh masyarakat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memisahkan senyawa
alkaloid yang terdapat dalam buah mahkota dewa dengan metode KCKT. Buah mahkota dewa dipotong kecil-kecil,
dikeringkan, lalu dimaserasi dengan metanol. Ekstrak metanol pekat diasamkan dengan asam klorida 1% sampai pH
2-3 kemudian diekstraksi dengan diklorometana-air (1:3). Fraksi air yang telah diasamkan tersebut dibasakan
dengan amonium hidroksida sampai pH 9-10 kemudian diekstraksi lagi dengan diklorometana-air (1:3). Masing-
masing fraksi selalu diuji kualitatif dengan pereaksi Dragendorff untuk mengetahui keberadaan alkaloidnya juga
dengan kromatografi lapis tipis. Terhadap fraksi diklorometana basa dilakukan pemisahan dengan KCKT
menggunakan kolom C18 (RP-18e) dan dielusi secara isokratis menggunakan fase gerak 10% asetonitril dan 90%
larutan kalium dihidrogen fosfat 0,05 M dalam air (pH 3) selama 20 menit. Senyawa alkaloid yang terkandung
dalam fraksi diklorometana basa pekat diperoleh enam komponen. Untuk lebih memurnikan alkaloid dilakukan
fraksinasi dengan kromatografi kolom klasik menggunakan silika gel G60 dan eluen kloroform-metanol bergradien
2,5%. Fraksi 3 (dari 41 fraksi) yang diduga merupakan senyawa alkaloid standar difraksinasi lagi menggunakan
ODS dengan eluen metanol-air (7:3). Terhadap fraksi 2 dan 3 (dari 20 fraksi) dilakukan kembali pemisahan dengan
KCKT. Dari hasil penelitian didapatkan bahwa senyawa alkaloid dalam buah mahkota dewa dapat dipisahkan

JNH, Vol 1 No 2 September 2017 80

dengan KCKT sehingga dihasilkan dua komponen pada fraksi 2 dan fraksi 3. Akan tetapi berdasarkan waktu retensi
yang diperoleh, senyawa alkaloid tersebut bukan merupakan senyawa alkaloid standar (atropin).

Kata kunci : Alkaloid, mahkota dewa, kromatografi cair

PENDAHULUAN

Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Cair Kinerja Tinggi (KCKT) belum

Boerl.) merupakan tanaman tropis yang
berasal dari Papua yang banyak digunakan
sebagai bahan obat. Sejak zaman dahulu,
masyarakat Indonesia banyak yang
memanfaatkan tanaman mahkota dewa
untuk mengobati berbagai macam penyakit
mulai dari penyakit ringan sampai penyakit
berat. Akhir-akhir ini, mahkota dewa telah
menjadi populer dan banyak dijual secara
komersial di toko obat, apotek dan rumah
sakit. Mahkota dewa bahkan telah menjadi
tanaman primadona sebagai obat serbaguna
(Harmanto, 2002).
Menurut Gotawa dkk. (1999) di dalam
kulit buah mahkota dewa terkandung
senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid,
saponin dan flavonoid sementara dalam
daunnya terkandung alkaloid, saponin serta
polifenol. Menurut Lisdawati dkk. (2007)
daging buah mahkota dewa mengandung
senyawa lignan yang juga termasuk ke
dalam golongan senyawa polifenol. Selain
itu menurut Simanjuntak (2008) juga
diperoleh senyawa golongan asam lemak,
steroid, benzofenon glikosida dan
karbohidrat dalam buah mahkota dewa.
Keberadaan alkaloid dalam buah mahkota
dewa merupakan salah satu alasan penting
tanaman tersebut dapat mengobati berbagai
macam penyakit. Berdasarkan
penelitianyang dilakukan oleh Ramadani
(2010), alkaloid dalam buah mahkota dewa
dapat dipisahkan dengan metode
kromatografi kolom dan kromatografi lapis
tipis, serta didapatkan kadar alkaloid total
yang ditetapkan dengan metode
spektroskopi UV-Vis dalam buah mahkota
dewa adalah sekitar 0,0037%. Penelitian
dengan menggunakan metode Kromatografi
dilakukan.
Tanaman mahkota dewa (Phaleria
macrocarpa Boerl.) termasuk dalam famili
Thymelaeaceae. P. macrocarpa Boerl. atau
P. papuana Warb. var Wichnannii (Val.)
Backmemiliki beberapa sebutan lain. Di
daerah Sumateradikenal dengan nama
simalakama. Di Jawa Tengah dikenal juga
dengan nama makuto dewo, makuto rujo,
dan makuto ratu. Di Banten dikenal sebagai
raja obat, mahkota raja dan mahkota ratu
sedangkan di Jawa Barat dikenal dengan
nama mahkota dewa (Ramadani, 2010).
Penelitian ilmiah menyatakan bahwa
mahkota dewa memiliki banyak efek
farmakologi. Daun dan buah mahkota dewa
diketahui mengandung alkaloid, saponin,
flavonoid, dan polifenol yang memiliki efek
farmakologi yaitu antihistamin, antioksidan,
efek sitotoksik, dan antiradang. Daging dan
kulit buah bisa digunakan sebagai obat
rematik, asam urat, kanker, diabetes, dan
tekanan darah tinggi. (Harmanto, 2002).
Gambar 1. Bagan alir prosedur isolasi dan pemisahan alkaloid

JNH, Vol 1 No 2 September 2017 81

METODE PENELITIAN
Sampel yang digunakan dalam penelitian
ini adalah buah mahkota dewa yang
berwarna merah marun, berumur sekitar 3
tahun dan tidak cacat yang didapatkan dari
kecamatan Sukajadi, Kota Bandung.
Isolasi alkaloid dilakukan dengan
metode maserasi dan ekstraksi,
kromatografi lapis tipis (KLT) dilakukan
dengan menggunakan plat berlapis silika
gel GF254 dan ODS, kromatografi kolom
dilakukan dengan silika gel G60 dan ODS
di Laboratorium Kimia Analitik Jurusan
Kimia FMIPA Unpad. Pemisahan alkaloid
dengan KCKT dilakukan dengan alat
KCKT Hewlett Packard seri 1100 di
Laboratorium Penelitian Jurusan Kimia
FMIPAkUnpad. Gambar 1 menunjukkan
diagram alir tahapan penelitian.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Pendahuluan
Kloroform amoniakal ditambahkan ke
dalam serbuk buah mahkota dewa. Hal ini
bertujuan untuk membebaskan alkaloid
dari bentuk garamnya kar=na menurut
Cordell (1981), kebanyakan alkaloid di
alam berada dalam bentuk garamnya, yang
terikat dengan asam organik. Dengan
adanya amonia maka alkaloid akan
terbebas dari garamnya membentuk
alkaloid bebas yang kemudian terbawa
oleh kloroform pada fase organik.
Selanjutnya difiltrasi dengan kapas untuk
menghilangkan residu sampel yang
berbentuk serbuk dan untuk mengambil
fase organiknya saja. Ke dalam fase
organik kemudian ditambahkan larutan
asam sulfat 2 N untuk membentuk kembali
garam alkaloid yang larut dalam air. Fase
air asam diuji keberadaan alkaloidnya
dengan pereaksi Dragendorff dan pereaksi
Wagner.
Uji positif dengan pereaksi Dragendorff
dan pereaksi Wagner ditandai dengan
terbentuknya endapan coklat hingga
kuning. Hal ini disebabkan terjadinya
reaksi antara atom nitrogen pada senyawa
alkaloid dengan logam yang terkandung
dalam pereaksi-pereaksi tersebut
membentuk senyawa kompleks. Reaksi
JNH, Vol 1 No 2 September 2017
alkaloid dengan pereaksi Dragendorff
terlihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Reaksi alkaloid dengan pereaksi
Dragendorff
Tabel 1.
Hasil uji kualitatif alkaloid pada buah
mahkota dewa.
Pereaksi Hasil
Dragendorff + (endapan coklat tua)
Wagner + (endapan kuning muda)
Keterangan: (+) mengandung alkaloid
:(-) tidak mengandung alkaloid
Isolasi Alkaloid
Sebanyak 153,7 gram sampel buah
mahkota dewa yang telah kering dan
dihaluskan diekstraksi dengan cara
maserasi dengan menggunakan pelarut
metanol.
Ekstrak metanol dipekatkan dengan alat
rotary evaporatorR-200 Buchi pada suhu
40°C. Pemanasan dilakukan pada suhu
40°C untuk menghindari degradasi
senyawa karena suhu tinggi. Ekstrak pekat
hasil maserasi didapatkan sebanyak 32,30
gram. Ekstrak pekat ini diuji kembali
keberadaanalkaloidnya dengan pereaksi
Dragendorff. Hasil uji menyatakan ekstrak
pekat mengandung alkaoid sebagaimana
dijelaskan pada Tabel 1.
Selanjutnya ke dalam ekstrak pekat
ditambahkan larutan asam klorida 1%
sampai pH 2,68.
Ekstrak dipartisi dengan diklorometana-
air. Hal ini bertujuan untuk menghilangkan
asam-asam organik yang lepas serta
senyawa organik lain yang tidak larut
dalam air, yang akan terdistribusi ke dalam
fase organik (diklorometana) asam. Garam
alkaloid sendiri akan terdistribusi dalam
fase air asam. Fase diklorometana asam
akan berada di bagian bawah karena
diklorometana mempunyai berat jenis
82
yang lebih besar daripada air yaitu
1,318 g/mL (25 °C). Fraksi air asam dan
fraksi diklorometana asam diuji kembali
keberadaan alkaloidnya dengan pereaksi
Dragendorff.Dari hasil uji dapat diketahui
bahwa fraksi air asam mengandung
alkaloid, sedangkanfraksi diklorometana
asam tidak mengandung alkaloid.
Fraksi air asam kemudian dibasakan
dengan penambahan amonium hidroksida
pekat sampai pH 9,88.Fraksi air basa lalu
dipartisi dengan diklorometana agar
alkaloid bebas terekstraksi ke dalam fase
diklorometana basa, sedangkan garam
amonium klorida yang terbentuk akan
terekstraksi ke dalam fase air. Fraksi
diklorometana basa dan fraksi air basa
diuji keberadaan alkaloidnya dengan
pereaksi Dragendorrf.Dari hasil uji
berdasarkan Gambar 3 dapat diketahui
bahwa di dalam fraksi diklorometana basa
mengandung alkaloid, sedangkan di dalam
fraksi air basa tidak mengandung alkaloid.
Fraksi diklorometana basa dipekatkan
sehingga diperoleh ekstrak pekat
diklorometana basa sebanyak 77,3 mg.
Identifikasi Alkaloid dengan KLT
Untuk ekstrak diklorometana pekat
KLT dilakukan dengan menggunakan plat
silika gel GF254 sebagai fase diam dan
klorofom-metanol (9,5:0,5) sebagai fase
gerak, dihasilkan 5 noda. Noda keempat
sama dengan senyawa alkaloid standar
yaitu atropin dengan Rf 0,76. Noda
keempat ini diduga sebagai atropin yang
nantinya akan dijelaskan dengan
pemisahan menggunakan kromatografi cair
kinerja tinggi.
Fraksinasi dengan Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom dilakukan dengan
menggunakan fase diam silika gel G60
yang berukuran 70-230 mesh, sedangkan
fase gerak yang digunakan adalah
klorofom dan metanol dengan elusi
bergradien 2,5% (kromatografi kolom
pertama).
Fraksi hasil kromatografi kolom
ditampung sebanyak 39 fraksi. Fraksi-
fraksi yang diperoleh kemudian
ditunjukkan dengan KLT.
JNH, Vol 1 No 2 September 2017
Dari hasil KLT fraksi-fraksi pada
kromatografi kolom, didapatkan bahwa
target yang diduga atropin terdapat hanya
pada fraksi 3. Untuk menjelaskan dugaan
bahwa pada fraksi 3 terkandung atropin,
selanjutnya fraksi 3 dipisahkan dengan
kromatografi cair kinerja tinggi.
Ekstrak diklorometana basa pekat dan
fraksi 2-5 pada kromatografi kolom
pertama selanjutnya dibuktikan dan
dipisahkan dengan KCKT. Sebelum
dilakukan pemisahan dengan KCKT, fase
gerak yang digunakan harus disaring
terlebih dahulu. Penyaringan ini dilakukan
dengan kertas saring millipore dengan
ukuran pori 0,5 µm, yang bertujuan untuk
memisahkan fase gerak dari partikel-
partikel pengotor dan menghindarkan
tumbuhnya mikroorganisme yang dapat
merusak kolom fase diam.
Noda5
Standar
Atropin
Noda 4
Noda2 Noda3
Noda1
Gambar 3. Kromatogram KLT ekstrak
diklorometana basa pekat
dengan fase diam silika gel
G60, fase gerak kloroform dan
metanol (9,5:0,5).
Selain itu udara terlarut dalam fase
gerak juga dihilangkan agar tidak terdapat
puncak udara pada kromatogram yang
mengganggu pemisahan. Udara terlarut
dihilangkan dengan proses sonifikasi
menggunakan alat sonikator. Selain itu
udara terlarut juga dapat dihilangkan
dengan mengalirkan gas inert seperti
helium.
KCKT yang dilakukan untuk pemisahan
alkaloid dilakukan menggunakan kolom
fase terbalik yaitu C18 (RP-18e), fase gerak
10% asetonitril dan 90% kalium
dihidrogen fosfat0,05 M dalam air (pH 3),
laju alir 1,0 mL/menit, suhu kolom 27,5°C
(ambien), detektor UV pada panjang
83
gelombang 210 nm dan volume injeksi 20
µL.
Larutan KH2PO4 0,05 Mdiasamkan
dengan larutan asam fosfat 10% hingga
mencapai pH 3,00. Asam fosfat digunakan
karena merupakan asam lemah dari garam
KH2PO4 sehingga membentuk larutan
buffer yang mempunyai pH stabil.
Pengaturan pH menjadi 3 dilakukan karena
menurut literatur, senyawa alkaloid terelusi
lebih cepat pada pH rendah. Hal ini
disebabkan amina yang terprotonasi
menjadi lebih polar pada pH rendah,
sehingga tidak tertahan dalam kolom C18
(RP-18e) yang nonpolar.
Gambar 4.Kromatogram KCKT senyawa
alkaloid standar (atropin)
dengan fase gerak 10%
asetonitril dan 90% KH2PO4
0,05 M dalam air (pH 3), elusi
isokratis, kolom RP-18e,
volume injeksi 20 µL, laju alir
1,0 mL/menit, detektor UV
pada panjang gelombang 210
nm.
Gambar 5. Kromatogram KCKT ekstrak
diklorometana basa dengan
fase gerak 10% asetonitril dan
90% KH2PO4 0,05 M dalam air
(pH 3), elusi isokratis, kolom
RP-18e, volume injeksi 20 µL,
laju alir 1,0 mL/menit, detektor
UV pada panjang gelombang
210 nm.
JNH, Vol 1 No 2 September 2017
Untuk lebih memurnikan senyawa
alkaloid yang diduga atropin dalam buah
mahkota dewa, dilakukan kembali
fraksinasi dengan kromatografi kolom.
Kromatografi kolom dilakukan untuk
fraksi 3 dengan menggunakan fase diam
ODS dan fase gerak metanol dan air (7:3)
secara isokratis. Kromatografi kolom yang
kedua ini dilakukan dengan kolom fase
terbalik, tidak seperti kromatografi kolom
yang pertama yang menggunakan kolom
fase normal. Hal ini dimaksudkan untuk
mempermudah memisahkan senyawa pada
fraksi 3 yang massanya sudah sangat
sedikit dan juga agar pemisahan dapat
berlangsung lebih baik. Pemilihan fase
gerak dilakukan dengan KLT
menggunakan plat ODS.
Gambar 6.Kromatogram KCKT fraksi 3
hasil kromatografi kolom
pertama dengan fase gerak
10% asetonitril dan 90%
KH2PO4 0,05 M dalam air (pH
3), elusi isokratis, kolom RP-
18e, volume injeksi 20 µL, laju
alir 1,0 mL/menit, detektor UV
pada panjang gelombang 210
nm.
Fraksi-fraksi hasil kromatografi
kolom yang kedua ini selanjutnya
dipisahkan dengan KCKT.
Berdasarkan kromatogram pada
Gambar 5, pemisahan terhadap fraksi
diklorometana basa pekat dengan metode
KCKT menghasilkan 6 komponen
senyawa alkaloid. Setelah dilakukan
fraksinasi dengan kromatografi kolom
klasik, senyawa alkaloid tersebut menjadi
lebih murni yaitu menghasilkan 4
komponen pada fraksi 3 sesuai Gambar 6.
Fraksinasi dengan kromatografi kolom
84
 yang dilakukan kembali terhadap fraksi 3
dan menghasilkan 2 komponen senyawa
alkaloid sesuai Gambar 7.
Gambar 7. Kromatogram KCKT fraksi 2
hasil kromatografi kolom
kedua dengan fase gerak 10%
asetonitril dan 90% KH2PO4
0,05 M dalam air (pH 3), elusi
isokratis, kolom RP-18e,
volume injeksi 20 µL, laju alir
1,0 mL/menit, detektor UV
pada panjang gelombang 210
nm.
Fraksi-fraksi hasil kromatografi kolom
yang kedua ini selanjutnya dipisahkan
dengan KCKT.
Daftar Pustaka
Cordell, G.A. 1981. Introduction to
Alkaloid A Biogenetic Approach.
John Willey & Sons., Inc. New York.
Djarwis, D. 2004. Teknik Penelitian Kimia
Organik Bahan Alam. Workshop
Peningkatan Sumber Daya Manusia,
Penelitian dan Pengelolaan Sumber
Daya Hutan yang Berkelanjutan.
FMIPA. Universitas Andalas.
Fessenden, R.J. & J.S. Fessenden. 1986.
Organic Chemistry. Third Edition.
Wadsworth. California.
Gotawa, I.B.I., S. Sugiarto, M. Nurhadi, Y.
Widiyastuti, S. Wahyono & I.J.
Prapti. 1999. Inventaris Tanaman
Obat Indonesia. Jilid V. Departemen
Kes. Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan. Jakarta,
hal. 147-148.
JNH, Vol 1 No 2 September 2017
View publication stats
Kesimpulan
Dari hasil penelitian yang telah
dilakukan, dapat disimpulkan beberapa hal
sebagai berikut:
1) Senyawa alkaloid dalam buah mahkota
dewa dapat dipisahkan dengan metode
KCKT, dengan kondisi pemisahan:
Fase gerak : 10% asetonitril dan 90%
larutan KH2PO4 0,05 M
dalam air (pH 3)
Kolom : C18 (RP-18e)
Laju alir : 1,0 mL/menit
Detektor : UV 210 nm
Volume injeksi: 20 µL
2) Jumlah komponen senyawa alkaloid
yang dapat dipisahkan adalah enam
komponen pada ekstrak pekat.
Dilakukan fraksinasi dengan
kromatografi kolom sehingga diperoleh
senyawa alkaloid yang lebih murni
yaitu empat komponen pada fraksi
setelah kromatografi kolom pertama dan
dua komponen pada fraksi setelah
kromatografi kolom kedua.
3) Salah satu senyawa alkaloid yang
terkandung dalam buah mahkota dewa
bukan merupakan senyawa alkaloid
(atropin) yang digunakan sebagai
standar.
Harmanto, N. 2002. Mahkota Dewa : Obat
Pusaka Para Dewa. Agro Media
Pustaka. Jakarta.
Lisdawati, V., S. Wiryowidagdo & L.B.S.
Kardono. 2007. Isolasi dan Elusidasi
Struktur Senyawa lignan dan Asam
Lemak dari Ekstrak Daging Buah
Phaleria macrocarpa. Buletin
penelitian Kesehatan. 35, 115-124.
Ramadani, N. 2010. Analisis dan
Identifikasi Senyawa Alkaloid dalam
Buah Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa (Scheff) Boerl) dengan
Menggunakan Kromatografi Lapis
Tipis dan Kromatografi Kolom.
FMIPA. Universitas Padjadjaran.
Simanjuntak, P. 2008. Identifikasi
Senyawa Kimia dalam Buah
Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa), Thymelaceae. Jurnal
Ilmu Kefarmasian Indonesia. 6, 23-
28.
85