1.
INTRODUCCIÓN:  Baterías para pruebas bioquímicas conformadas por
Existen varias familias y géneros de interés médico
pertenecientes al grupo de los bacilos gramnegativos.
Entre ellos esta la familia Enterobacteriaceae a la cual
pertenecen varios géneros que son comensales del
intestino del hombre y otros animales de sangre caliente
y que producen infecciones en otros sitios del organismo.
Algunos géneros son patógenos intestinales como
Salmonella, Shigella y Yersinia. Todos son bacilos
aerobios o anaerobios facultativos que fermentan la
glucosa, son oxidasa negativos y crecen en medios
usuales o en medios selectivos para gérmenes
gramnegativos.
El hecho de que la mayoría de estas bacterias sean
capaces de reproducirse tan rápidamente indica que
poseen una maquinaria metabólica muy activa. Esta
actividad metabólica puede ser medida en el laboratorio
por diferentes métodos permitiendo la caracterización de
las especies; algunas de estas pruebas metabólicas son
técnicas rápidas y evalúan la presencia de una enzima
preformada, otras pruebas sirven para medir reacciones
enzimáticas especificas o características bioquímicas
determinantes del género o de la especie de estos
microorganismos de mucha importancia medica.
Para diferenciar las enterobacterias se utilizan numerosas
pruebas que utilizan la capacidad de las bacterias de
utilizar diferentes sustratos y existe una variedad de
medios de cultivo diferenciales para la identificación de
las especies que pueden manejarse de diferente manera:
una serie de medios de cultivo diferenciales repartidos
en tubo y cuyos resultados pueden ser analizados en
tablas especializadas para la identificación
correspondiente.
 Baterías de estos mismos medios repartidos en paneles
comerciales miniaturizados que dan excelentes
posibilidades de identificación a un costo mayor que los
anteriores, pero a un nivel muy alto de seguridad; entre
ellos cabe mencionar las marcas API, Cristal,
Enterotubo, Micro-ID. Estos paneles pueden ser
procesados manualmente o analizados en equipos que
efectúan la inoculación, la incubación y la lectura de
manera automatizada, con la evaluación por parte de
una computadora que realiza la identificación
correspondiente.
1.2 OBJETIVOS:
 Determinar las propiedades fermentativas de las
enterobacterias en medios diferenciales que contienen
diferentes azúcares, con la ayuda de un indicador de
pH
 Determinar la habilidad o inhabilidad de una especie
para hidrolizar una fuente de carbono agregada al
medio de cultivo, como el Citrato
 Determinar la producción de la enzima Ureasa por
algunos géneros bacterianos
 Determinar la producción de Sulfuro de hidrógeno,
Indol y otras sustancias en medios diferenciales
 Determinar la motilidad de algunos gérmenes en
medios semisólidos preparados para este fin.
 Conocer la forma de utilizar las tablas de clasificación
de las bacterias de acuerdo a sus reacciones
bioquímicas.
1.3 MATERIALES:
 Cajas de Petri con cultivo puro de bacilos
gramnegativos de diferentes géneros y especies, en
Agar Tripticasa de soya
 Cajas con medios selectivos como Agar EMB, Agar
MacConkey, Agar Hektoen , Agar XLD y Agar Sangre
 Tubos con Agar TSI, Agar Citrato de Simons, Agar Urea
y Medio de SIM.
 Asas rectas y redondas
 Reactivo de Kovac`s
1.4 PROCEDIMIENTO:
Cada grupo realizará una siembra de cada uno de los
cultivos recibidos de la siguiente manera:
Caja # 1
 Tocar una colonia con el asa redonda y realizar una
siembra por agotamiento en medio Agar EMB
 Tocar otra colonia con el asa recta y realizar una
siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de
Simons, Agar urea y medio SIM (todos con la misma
colonia y según las indicaciones de la profesora)
Caja # 2
 Tocar una colonia con el asa redonda y realizar una
siembra por agotamiento en medio Agar MacConkey
 Tocar otra colonia con el asa recta y realizar una
siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de
Simons, Agar urea y medio SIM (todos con la misma
colonia y según las indicaciones de la profesora)
Caja # 3
 Tocar una colonia con el asa redonda y realizar una
siembra por agotamiento en medio Agar Hektoen
 Tocar otra colonia con el asa recta y realizar una
siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de
Simons, Agar urea y medio SIM (todos con la misma
colonia y según las indicaciones de la profesora)
Caja # 4
 Tocar una colonia con el asa redonda y realizar una
siembra por agotamiento en medio Agar XLD
 Tocar otra colonia con el asa recta y realizar una
siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de
Simons, Agar urea y medio SIM (todos con la misma
colonia y según las indicaciones de la profesora)
Caja # 5
 Tocar una colonia con el asa redonda y realizar una
siembra por agotamiento en medio Agar Sangre
 Tocar otra colonia con el asa recta y realizar una
siembra en profundidad y superficie en TSI, Citrato de
 Simons, Agar urea y medio SIM (todos con la misma
colonia y según las indicaciones de la profesora)
Marcar todas las cajas convenientemente e incubar a
37oC durante 18-24 horas
Aspecto de las colonias en los diferentes medios
selectivos y diferenciales
AGAR EMB:
- Colonias moradas con brillo metálico: bacilos
gramnegativos fermentadores de lactosa (lactosa +)
como Escherichia coli
- Colonias moradas sin brillo metálico: bacilos
gramnegativos fermentadores de lactosa (lactosa +)
diferentes de Escherichia coli
AGAR MACCONKEY
- Colonias moradas o rosadas: bacilos gramnegativos
fermentadores de lactosa (lactosa +)
- Colonias transparentes o incoloras: bacilos
gramnegativos no fermentadores de lactosa
(lactosa -)
- Colonias mucoides: bacilos gramnegativos
poseedores de cápsula
AGAR HEKTOEN
- Colonias grandes amarillas o naranja: bacilos
gramnegativos fermentadores de lactosa (lactosa +)
- Colonias verdes, verde-azul o azules: bacilos
gramnegativos no fermentadores de lactosa (lactosa -)
- Colonias con centro negro: bacilos gramnegativos no
fermentadores de lactosa y productores de H2S como
Salmonella y Proteus
AGAR XLD (XILOSA-LISINA-DESOXICOLATO)
- Colonias grandes amarillas: bacilos gramnegativos
fermentadores de lactosa (lactosa +)
- Colonias rojas: bacilos gramnegativos no
fermentadores de lactosa (lactosa -)
- Colonias con centro negro: bacilos gramnegativos no
fermentadores de lactosa y productores de H2S como
Salmonella y Proteus
AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO (TSI)
- Aparición de color amarillo en el fondo del tubo:
fermentación de glucosa (glucosa+)
- Aparición de color amarillo en la parte superior del agar
: fermentación de lactosa (lactosa +). Estas reacciones
se manifiestan por un cambio de color debido a que el
indicador Rojo de Fenol vira a amarillo cuando el pH se
acidifica por la fermentación de los azúcares.
- Aparición de color negro: producción de H2S que se
manifiesta cuando el tiosulfato es reducido por algunos
gérmenes a ácido sulfhídrico el cual reacciona con la
sal férrica produciendo sulfuro de hierro de color negro.
- Ruptura del agar o formación de burbujas: producción
de gas
AGAR CITRATO DE SIMMONS
- Aparición de color azul: utilización del carbón contenido
en el citrato de sodio para el crecimiento de las
bacterias (citrato +). Al crecer las bacterias alcalinizan
 el medio haciendo virar el indicador Azul de Bromotimol
de color verde a azul
- No hay crecimiento ni cambio de color: la bacteria no
utiliza el citrato como fuente de carbono (citrato -)

AGAR UREA
- Aparición de color fucsia: la bacteria produce ureasa
(ureasa+) que desdobla la urea produciendo amoniaco,
el cual alcaliniza el medio y vira el indicador Rojo de
Fenol de incoloro a color fucsia
- No hay cambio de color: no hay producción de ureasa
(ureasa -)

MEDIO DE SIM
- Enturbamiento del medio: hay motilidad de la bacteria
(motilidad+)
- El medio continua transparente: la bacteria es inmóvil
(motilidad -)
- Aparición de color negro: hay producción de H2S que
se manifiesta cuando el tiosulfato es reducido por
algunos gérmenes a ácido sulfhídrico el cual reacciona
con la sal férrica produciendo sulfuro de hierro de color
negro.
- Aparición de un anillo púrpura o rojizo al agregar unas
gotas del reactivo de Kovac`s sobre la superficie del
medio: formación de Indol que se manifiesta cuando el
triptófano es utilizado por los gérmenes que tienen la
enzima triptofanasa, capaz de desdoblar el triptófano y
liberar indol, que se evidencia mediante el reactivo de
Kovac´s (Paradimetil-Amino-Benzaldehido)