UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE
ING.AGROINDUSTRIAL

EVALUACIÓN CUALITATIVA DE PIGMENTOS

FOTOSINTÉTICOS POR CROMATOGRAFÍA EN
PAPEL

Curso: Biología General

Docente: Priscilla Alexandra Seijas Bernabé
Jackelyn Alegría Zumaeta
Alumno: José Carlos Castillo Otiniano
Ciclo: “II”
Fecha: 13/11/2019
 RESUMEN
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a

(verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo

anaranjado) en diferentes proporciones.

Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes

apolares, lo que permite su separación cuando una solución de las mismas desciende por

a través de una columna de cromatografía verticalmente sobre una película de un

disolvente orgánico, ya que las más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues

acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste desciende. Las menos solubles

avanzarán menos en la columna.

Aparecerán, por tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o más, dependiendo

del material utilizado) que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica según

la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor,

dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución.

En la práctica se extrajo la clorofila, haciendo uso de una solución alcohólica y pequeños

trozos de hojas de espinaca, que fueron triturados (aplastados), para posteriormente filtrar

la solución, hasta que las hojas pierdan esa tonalidad verde que posee. Una vez extraídos

los pigmentos fotosintéticos, se procedió a realizar una cromatografía de adsorción para

separar las distintas clorofilas que componen dichos pigmentos fotosintéticos que

componen las coloraciones de las hojas de las plantas observándose que estas se iban

corriendo por la columna dependiendo de la afinidad que tuvieran por el disolvente.

 INTRODUCCIÓN

La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y que

absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis. La clorofila absorbe principalmente luz

violeta roja y azul y refleja luz verde.

La abundancia de clorofila en hojas y su ocasional presencia en otros tejidos vegetales es

la causa de que esas partes de las plantas aparezcan verdes, pero en algunas hojas la

clorofila es enmascarada por otros pigmentos. La extracción y reconocimiento de estos

pigmentos es interesante para estudio y conocimiento de sus propiedades.

Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas químicas

que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El color de un

pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de

la reflexión de otras. Constituyen el sustrato fisicoquímico donde se asienta el proceso

fotosintético. (Manrique Leon, 2003)

OBJETIVOS:

General: Extraer y separar diferentes pigmentos vegetales

Específicos:

-Escoger el material adecuado para extraer clorofilas

-Aplicar experimentalmente la extracción por solventes

-Empacar y desarrollar una columna de fraccionamiento

-Indicar los diferentes pigmentos fotosintéticos en la columna de acuerdo a su

polaridad.
 MATERIALES Y REACTIVOS PARA LA REALIZACION DE LOS

EXPERIMENTOS

-5 Vasos de precipitación de 600 Ml

-5 matraces

-10 tubos de ensayo

-4 placas petri

-4 embudos de vidrio

-1 mortero de porcelana con mortero

-1 papel filtro

-1 tubo capilar

-5 pipetas

-Reglas

-Clips

REACTIVOS

-Agua destilada

-Alcohol

-Acetona

MATERIAL BIOLÓGICO

-Hojas de espinaca
 DESARROLLO DEL EXPERIMENTO

1.- Preparamos 50 ml de una mezcla de alcohol de 96ª

2.- Cortar las hojas de espinaca en trozos pequeños y a continuación pesar en la balanza

de precisión hasta conseguir un total de 100 miligramos de muestra.

3.- Triturar en un mortero de porcelana hojas de espinaca, una vez obtenida una pasta

verde, añadir 4 ml de alcohol, esto es con el propósito de disolver los pigmentos

contenidos en las hojas de espinaca.

Fig.1 Espinaca en solución alcohólica

4.- La disolución obtenida se filtra y se recoge en un matraz de 25 ml. Se vuelve a

adicionar alcohol a las hojas en el mortero. Continuar la trituración, filtrar de nuevo y

recoger el líquido en el mismo vaso de precipitación. Esta operación se repite tres o cuatro

veces hasta observar que las hojas han perdido por completo su color verde, quedando

amarillas o pardas. Se enrasa la disolución del vaso de precipitación hasta 25 ml con la

disolución.
5.- Filtrar con un embudo y papel filtro y recoger el filtrado en una caja de petri.

Fig. 2, 3 Filtrado de la solución alcohólica

6.- Cortar una tira de papel filtro de 1 X 10 cm, marcar con un lápiz una línea a un

centímetro de distancia de cada borde. En uno de los extremos, enganchará un clip para

poder sostener el papel en un tubo de ensaye.

7.- Con el tubo capilar tome una muestra de la disolución, conteniendo los pigmentos de

la mezcla que se macero en el mortero de porcelana.

8.- Coloque una gota de esta muestra en el centro del papel filtro, en la línea contraria de

donde se encuentra el clip, deje secar y repita la operación 3 o 4 veces más.

Fig. 4 Muestra de la disolución Fig.5 Papel filtro en la disolución preparada

9.- Prepare un diluyente (mezcla de Acetona).

10.- En un tubo de ensayo coloque un poco de diluyente, meta la tira de papel filtro con

los pigmentos hacia abajo, cuidando de que no los rebase el nivel del diluyente y enganche

el clip al tubo de ensayo.

11.- Coloque el tubo sobre la gradilla, espere a que corra el cronograma (los pigmentos

se separen) y retire el papel filtro cuando los pigmentos estén a 0.5 cm de la línea marcada

del extremo que tiene el clip.

Fig. 6 Solución de acetona

Finalmente:

.Calculamos el valor de Rf para cada pigmento, según la fórmula:

Rf = distancia de corrida de pigmento/distancia de corrida del solvente

CLOROFILA (B) 0.4/6.7 = 0.059

CLOROFILA (A) 1.6/6.7 = 0.238

XANTOFILA 2.2/6.7 = 0.328

CONCLUSIONES:

Se obtuvieron los pigmentos fotosintéticos de la clorofila, que son los que le dan color a

las hojas de las plantas ya que la fotosíntesis es un proceso que permite a los vegetales

obtener la materia y la energía que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se

lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jóvenes de pigmentos,

capaces de captar la energía lumínica.

Gracias a esta práctica, se logró observar cómo cambian las tonalidades de estos

pigmentos fotosintéticos que componen a las plantas y se3 encuentran en los cloroplastos

de la célula vegetal y les dan color al reflejar o transmitir la luz visible, además de que

son los que constituyen el sustrato fisicoquímico de la fotosíntesis.

Bibliografía
biologicas, E. d. (s.f.). Cromatografia en papel. Trujillo.

Manrique Leon, E. (2003). Los pigmentos fotosinteticos. España.