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Tutora:
Juliana Rivera
Grupo:
203022_3
Estudio de caso A:
Estudio de caso A:
El añublo del arroz es una de las enfermedades más limitantes en la producción de arroz. Investigadores
del sector agrario son llamados a proponer un método de edición genómica para la obtención de una
variedad de arroz (Oryza sativa L. japonica) resistente al ataque por Magnaporthe oryzae. Los
investigadores sugieren abordar el problema mediante la interrupción del gen OsSEC3A a través de la
tecnología CRISPR / Cas9, mediante la estrategia de transformación de protoplastos con vectores binarios
de expresión Cas9 / gRNA.
Las plantas de arroz OsSEC3A mutantes mostraron signos de inmunidad mejorada, incluido un mayor
contenido de ácido salicílico, una regulación positiva de los genes relacionados con la respuesta de
defensa y una mayor resistencia de la enfermedad contra M. oryzae (Ma et al., 2018).
Explique:
R/:
Secuencia PAM para lograr la interrupción del gen OsSEC3A utilizado por los investigadores
Actividad objetivo del gen. Cas9 tiene 50-NGG-30 PAM secuencia (barras azules) y Cpf1
tiene una secuencia 50-TTTV-30 PAM (barras verdes).
R/:
R/:
1. Defensas mejoradas, como se muestra por niveles de transcripción regulados por aumento
de genes relacionados con la síntesis de patogénesis y ácido salicílico.
2. Aumento de los niveles de Sali ácido cíclico y mayor resistencia al patógeno fúngico
Magnaporthe oryzae.
Si pueden favorecer la producción de arroz, porque resisten al estallido del arroz, a través del
extremo C y unido a los lípidos de fosfatidilinositol, particularmente fosfato de fosfatidilinositol-
3, a través de su extremo N-terminal.
9. Mencione 3 razones, por las que la tecnología CRISPR/Cas9 fue preferida por los
investigadores con respecto a las tecnologías de recombinación genética y mutagénesis
convencional. Estas razones deben tener soporte documental científico. Para ello, refiérase a
la base de datos Science Direct desde la página de la biblioteca de la UNAD (enlace para
ingresar al recurso de la biblioteca: https://stadium.unad.edu.co/) y al buscador académico
(enlace para ingresar al buscador: https://scholar.google.es/) y garantice la selección de 3
documentos relacionados con CRISPR/Cas9 y sus ventajas competitivas. Lea y extraiga las
3 razones para usted, más importantes. Por favor tenga adherencia a las normas APA para
las citaciones correspondientes.
R/
A.- Porque esta tecnología requiere menos conocimientos y medios financieros y tiene una mayor
tasa de éxito en la modificación génica en comparación con las otras nucleasas disponibles. La
aplicación de la edición CRISPR / Cas9 se ha convertido en una herramienta poderosa para la
mejora futura de los rasgos agronómicos en los cultivos ( Mohanta et al., 2017 ).
B.- La herramienta CRISPR / Cas9 fue diseñada para interferir con diferentes secuencias
codificantes y no codificantes del virus de Kokhran de enrollamiento de la hoja de algodón
(CLCuKoV), MeMV y diferentes cepas severas y leves de TYLCV. El trabajo reveló que cuando
el complejo sgRNA / Cas9 editó sitios en las regiones de codificación de todos los virus, se
generaron variantes de virus capaces de replicarse y moverse para escapar de la maquinaria
CRISPR / Cas9. Por el contrario, no se detectaron variantes novedosas en plantas de N.
benthamiana que llevaran sgRNA que abordaran las secuencias IR. Aunque la maquinaria NHEJ
reparó las roturas de doble cadena causadas por la proteína Cas9, las variantes reparadas con IR
generaron genomas de virus incapaces de replicarse, proporcionando así una mejor interferencia
general con el ciclo de vida viral.
C.- Porque En el sistema CRISPR / Cas9, un ARN de guía única (sgRNA) puede unirse a Cas9 y
dirigirse a secuencias de ADN específicas
Esta herramienta de ingeniería genética se basa en el sistema inmune procariota, que proporciona
resistencia a elementos genéticos tales como plásmidos o fagos, y confiere una forma de
inmunidad adquirida. Las bacterias sintetizan las llamadas secuencias CRISPR o de RNA guía,
que se acoplan al DNA del virus, y permiten que la enzima Cas lo inactive y lo elimine.
Este mecanismo biológico se está utilizando para modificar el DNA de todo tipo de células
(procariotas, eucariotas, somáticas y germinales). Se diseñan y sintetizan moléculas CRISPR,
complementarias a las secuencias del genoma que se quieren corregir o eliminar, y se asocian a la
enzima endonucleasa Cas9, responsable de cortar la doble hélix de DNA. De esta forma, el
complejo CRISPR/Cas9 es capaz de reconocer y unirse a una secuencia específica del genoma, y
cortarla. Con ello se consigue eliminar, modificar y sustituir genes, pudiendo añadir material
genético nuevo en esas posiciones concretas.
Las aplicaciones son múltiples, incluyen desde los modelos transgénicos en la investigación
básica, la agricultura y la ganadería, hasta el desarrollo de nuevos fármacos y la posible cura de
enfermedades genéticas.
11. ¿Cuál es el flujo de trabajo que debe aplicarse para emplear la herramienta web
CRISPR-P 2.0? Escriba los 6 pasos.
1 PASO
2 PASO
El ARN, que imita una hebra de la secuencia del ADN del gen objetivo, y una enzima de
restricción conocida como Cas9, que puede cortar el ADN, se introducen en una célula.
3 PASO
Con su secuencia guía, el ARN localiza y se une a su secuencia de ADN pareada. El ARN
también se une a la enzima Cas9, que corta el ADN en la ubicación seleccionada.
4 PASO
La enzima Cas9 corta a través de ambas cadenas de ADN en el lugar deseado dentro del genoma.
Entonces se introduce un cambio.
5 PASO
Se puede agregar una característica nueva eliminando el gen o introduciendo una variación.
Después del cambio los científicos esperan que la célula repare su secuencia de ADN.
6 PASO
Las propias enzimas de las células reparan el corte, pudiendo generarse cambios bien puede
incorporarse un nuevo fragmento de ADN en el sitio de corte y listo queda editado el ADN.
Estudio de caso B:
Científicos de una empresa japonesa, crearon la primera rosa del mundo con pigmento para color
azul. Anteriormente, rosas de coloración azul ya eran producidas a través de cruces selectivos,
pero no eran consideradas azules verdaderas. La técnica utilizada consistió en extraer el gen de la
enzima que produce el pigmento azul de una flor llamada “pensamiento” e incorporarlo al
genoma de la rosa para que produzca el color azul.
1. ¿Cuáles fueron las especies de flores que utilizaron los investigadores para aislar
el gen que participa en la biosíntesis del color azul?.
La nueva flor, bautizada con el nombre de Applause, ha sido desarrollada usando las técnicas de
ingeniería genética de la compañía australiana de biotecnología Florigene Pty Ltd., que añadió a
la flor el gen del pimento azul delphinidin de las petunias.
En el 2004, y tras 20 años de investigaciones, Suntory y los científicos de Florigene anunciaron el
desarrollo de la primera rosa azul verdadera (el 100% de los pigmentos de sus pétalos es azul) en
la que se había insertado el gen responsable de la síntesis de delfinidina procedente de la flor del
pensamiento.
Desde 1990, los científicos de la compañía holandesa Florigene (controlada desde el 2003 por la
empresa japonesa Suntory) han intentado crear el pigmento azul en los pétalos de las rosas
mediante la inclusión de un gen proveniente de la petunia (Petunia × hybrida) en las células de
esas plantas, que produce la enzima indispensable para lograr la síntesis de delfinidina, se incluyó
también mediante transformación un "gen silenciador", cuyo propósito exclusivo es ordenar a la
rosa que deje de fabricar el pigmento rojo, la cianidina.
3. ¿Para desarrollar esta rosa trangénica fue necesario recurrir al Silenciamiento
genético, la recombinación genética o ambos? Explique su respuesta.
Los dos genes responsables de la fabricación del pigmento se introdujeron en la planta a través de
una cepa de Agrobacterium tumefaciens, un microorganismo muy utilizado en biotecnología
vegetal por su capacidad para insertar ADN extraño en el genoma de las plantas.
Es necesario utilizar un gen marcador de selección porque permite a la célula transformada vivir
en presencia de agente selectivo dicho agente añadido al medio de cultivo, mata células no
transformadas. Un buen agente de selección es aquel que puede usarcé en una dosis lo
suficientemente alta como para impedir la viabilidad de las células no transformadas y lo
suficientemente baja como para no dañar las células transgénicas e inhibir la regeneración. Y el
tipo de marcador que se utilizo fue el T – DNA
6. ¿Sería posible que esta rosa transgénica sea obtenida mediante la tecnología
CRISPR/Cas9? Explique el porqué de su respuesta.
Si sería posible ya que es una herramienta de tecnología avanzada y El sistema tiene dos
componentes: una proteína que corta el ADN llamada Cas9 y una molécula de ARN conocida
como el ARN guía. Cuando se unen, forman un complejo que puede identificar y cortar secciones
específicas de ADN. En primer lugar, Cas9 tiene que localizar y unirse a una secuencia común en
el genoma llamada PAM (Motivo Adyacente de Protoespaciador). Una vez CAS9 se une a PAM,
El ARN guía desenrolla parte de la doble hélice del ADN. Por otro lado, Algunos investigadores
están desactivando uno o ambos dominios de corte en Cas9 y fusionando nuevas enzimas a la
proteína. Cas9 se puede usar para transportar esas enzimas. a una secuencia de ADN específica.
desactivando completamente Cas9 de manera que ya no puede cortar el ADN. En su lugar, se
añaden activadores transcripcionales a Cas9 fusionándolos directamente o a través de una cadena
de péptidos. Alternativamente, los activadores pueden ser reclutados al ARN guía. Estos
activadores reclutan la maquinaria de transcripción de la célula, trayendo a la ARN polimerasa y
a otros factores al sitio específico o diana y aumentando la transcripción de ese gen. El mismo
principio se aplica al silenciamiento de genes. Un dominio KRAB fusionado a Cas9 Inactiva la
transcripción reclutando más factores que bloquean físicamente el gen.
Una idea más original para usar CRISPR es unir proteínas fluorescentes al complejo para poder
ver secuencias particulares de ADN al interior de la célula. Esto podría ser útil para otros
requerimientos como visualizar la arquitectura 3D del genoma, o colorear un cromosoma
completo y seguir su posición en el núcleo.
7. ¿Es ético que los investigadores modifiquen genéticamente los organismos?
No es ético teniendo en cuenta que afectan de alguna manera el equilibrio ecológico y la
biodiversidad además de cuestionar que el valor intrínseco de un ser vivo puede quedar afectado
al ser sujeto de modificación genética.
Y son los principios los que ayudan a tomar medidas sobre los principios sobre la racionalidad
del uso de transgénicos y la necesidad de regulaciones que controlen su producción en los países.
Sin embargo, es de resaltar que la modificación de organismos genéticamente es de gran
importancia y tiene sus ventajas y desventajas.
En agricultura por ejemplo la creación de plantas con resistencia a plagas y enfermedades,
reducción en el uso de herbicidas y pesticidas, reducción de costos por menor empleo de
máquinas y equipos para control mecánico de las malezas y para las aplicaciones de herbicidas,
reducción de pérdidas por ataques de insectos, creación de plantas con resistencia a la sequía a
alta o baja temperatura a suelos ácidos o alcalinos y mejoramiento en calidad nutricional o
rendimiento.
Por otra parte, como desventaja si al ser imposible insertar con exactitud un nuevo gen, la
transferencia de genes puede alterar la fina red del ADN de un organismo. Cualquier cambio en el
ADN puede tener efectos inesperados e imposibles de predecir o controlar.
Otro problema que puede surgir tiene que ver con la bioseguridad terroristas podrían aprovechar
publicaciones de secuencias patógenas y liberar organismos altamente patógenos introducidos en
organismos de consumo, existiendo publicaciones de doble intensión ya que hay de por medio
más intereses comerciales que el objetivo de desarrollo sustentable.
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