UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

Calidad, Pertinencia y Calidez

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUIMICAS
Y DE LA SALUD
INGENIERÍA EN ALIMENTOS

PORTAFOLIO DE MICROBIOLOGÍA
DE LOS ALIEMNTOS
Nombre: Danny Wilson Ordoñez Niebla
Docente: Dr. Segundo García
Fecha: 21/11/2018
Curso: 4𝑡𝑜 Semestre “A”
Asignatura: IA.4.05

DIARIO # 07
Tema:
BARRERA DE DEFENSA MICROBIANAS
Objetivo:
Aplicar las técnicas microscópicas para la observación por inmersión de los
microrganismo

Resumen:
TINCIONES
Se denomina tinción al proceso y el resultado de teñir (otorgar un color a una cosa).

Es importante destacar que el acto y la consecuencia de teñir también se conocen

como tintura. De este modo, mientras que en el lenguaje coloquial suele emplearse la idea
de tintura, en el campo de la química y de la medicina se prefiere el término tinción.

En este sentido, se llama tinción a una técnica que se emplea en los laboratorios con el
objetivo de optimizar la visión de aquello que se observa a través de un microscopio. La
tinción, de este modo, consiste en aplicar un colorante a una sustancia o un tejido para
que resulte más simple detectarlo y analizarlo.
Una de las tinciones más conocidas es la tinción de Gram, desarrollada por Christian
Gram, que permite visualizar bacterias en las muestras clínicas. Las bacterias que
reaccionan tornándose de color morado se denominan bacterias Gram positivas, mientras
que aquellas que se vuelven rosadas se definen como bacterias Gram negativas.

Técnica

1. Preparar una extensión delgada y uniforme sobre el portaobjetos y dejar secar sin
calentar. En el caso de las muestras obtenidas con gasas o algodones por
frotamiento hay que hacer girar la muestra, apretando firmemente en una pequeña
zona del portaobjetos. Si se trata de líquidos como orina o cefalorraquídeos se
coloca una gota en el centro del portaobjetos y se deja secar sin extender
2. Pasar el portaobjetos sobre un mechero de bunsen hasta que este seco o dejar secar
por medio del aire.
3. Cubrir el portaobjetos con solución de cristal violeta. Dejar teñir durante 30-60
segundos.
4. Inclinar el portaobjetos para lavarlo con agua destilada y colocar el lugol. Dejar
en reposo durante 30-60 segundos.
5. La decoloración constituye el paso más crítico de la técnica. Inclinar el portaobjeto
para decantar la solución de yoduro, y lavarlo con acetona-alcohol, manteniéndolo
en un ángulo de más de 15 grados, hasta que la solución deje colorearse de azul.
No hay que intentar decolorar las zonas más gruesas de la extensión, ya que de
esta forma se decoloran excesivamente las zonas menos gruesas, que son
precisamente las que podrán ser estudiadas en el microscopio.
6. Lavar inmediatamente el portaobjetos con agua fría corriente para eliminar el
alcohol-acetona, y detener así la decoloración.
7. Cubrir el portaobjetos con safranina; dejar 15-30 segundos y lavar con agua
corriente.
8. Secar con un paño la parte inferior del portaobjetos para eliminar los restos del
colorante; dejar secar al aire.
9. Observación en el microscopio con una gota de aceite de inmersión.
Como actúan cada colorante en la tinción de Gram
CRISTAL VIOLETA: colorante primario o básico, que se une a la pared celular
bacteriana. (Color azul o violeta).
LUGOL: solución de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la adhesión
del cristal violeta a la pared celular.
ALCOHOL ACETONA: decolorante
SAFRANINA: colorante secundario, que imparte una coloración de contraste o
contracolor (color rojo o rosado).