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TOXICOLOGIA AMBIENTAL
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ÍNDICE
ÍNDICE GENERAL
PÁG
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PRÁCTICA No. 1
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
I. TEMA
Preparación de soluciones para administración de animales de experimentación o posología.
III. INTRODUCCIÓN
1.1. Soluciones
La solución o disolución es la mezcla homogénea de dos o más sustancias. Las más comunes, y a
las que nos referiremos en lo sucesivo, son las disoluciones diluidas consistentes en un componente
mayoritario líquido, que es el solvente o disolvente, y un componente minoritario, por lo común sólido
o líquido (aunque también puede ser gaseoso), que es el soluto. De especial relevancia son las
disoluciones acuosas, esto es aquellas en las que el disolvente es agua. La composición de una
solución viene dada por la cantidad de soluto disuelto en una cantidad dada de disolución o de
disolvente. Tal relación, o concentración, se puede expresar de varias formas:
• % w/w (peso/peso). Expresa la cantidad de soluto en unidades de peso por 100 unidades de peso
de disolución. El peso se expresa en gramos
• Peso de soluto por unidad de volumen de disolución. Aquí se expresa el peso de soluto contenido
en un volumen de la mezcla. La forma más corriente es la expresión de gramos/litro (g/L)
• Molares (Molaridad). Solución molar (M) es aquella que contiene 1 mol de soluto en un litro de
disolución. Un mol de una sustancia es igual a su peso molecular (PM; más adecuadamente y
menos conocido como masa molecular relativa, Mr) en gramos y se obtiene sumando los pesos
atómicos (PA; menos conocido como masa atómica relativa, A r) de los átomos que lo forman.
Las unidades de medición de molaridad son moles/litro (mol/L)
• Normales (Normalidad). Solución normal (N) es aquella que contiene un equivalente gramo de
soluto en 1 litro de solución. La normalidad es similar a la molaridad, excepto que la
concentración se basa en pesos equivalente en vez de pesos moleculares. El equivalente de un
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compuesto es igual al peso molecular dividido entre la valencia (Peso Equivalente = Peso
Molecular/Valencia)
• Fracción Molar de Soluto. Definida como el número total de moles de la sustancia disuelta entre el
número total de moles de la disolución (Xsoluto = Nº moles soluto/Nº moles totales). Esta
expresión tiene especial interés en relación a la Ley de Henry
Nota: La ley de Henry dice que, a temperatura constante, la solubilidad de un gas en un líquido es
directamente proporcional a la presión parcial de dicho gas (pgas) sobre la solución (Xgas = k pgas).
• Osmolalidad. Número total de partículas de soluto osmóticamente activas o miliósmoles por unidad
de peso en kilogramos de agua (miliósmoles/Kg agua). En las soluciones diluidas del cuerpo
humano sano, la osmolalidad y la osmolaridad son esencialmente iguales. El aumento de la
osmolalidad produce un incremento de la presión osmótica
• Osmolariad. También conocida como Tonicidad se define como el número total de partículas de
soluto por unidad de volumen de solución, y en los sistemas biológicos se define como unidades
de miliósmoles/l de agua.
Las soluciones presentan una serie de propiedades que prácticamente dependen sólo de la
concentración del soluto y no de su naturaleza química. Son las denominadas propiedades
coligativas, entre las que se encuentran las siguientes: presión de vapor, puntos de congelación y
ebullición, y presión osmótica.
Dosis se define como la cantidad de compuesto de prueba que debe administrarse a un animal de
experimentación por kilogramo de peso para producir un efecto deseado. Por lo tanto los efectos
tóxicos dependerán de la concentración de xenobiótico en el organismo, debido a que la dosificación
mantiene una relación directa entre la cantidad de compuesto administrado y el peso corporal del
animal.
1.2. Diluciones
Consiste en obtener una solución inferior partiendo de una más concentrada. En laboratorio
clínico se suelen expresar las soluciones como una parte de solución original y otra que
determina el volumen total de solución final incluido el disolvente.
1.2.1. Diluciones en serie
En laboratorio se utilizan técnicas semicuantitativas denominadas titulaciones, de gran utilidad en
pruebas serológicas si se quiere determinar el volumen de un anticuerpo en una muestra clínica.
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Una dilución en serie constituye una sucesión de diluciones en las que van siendo
subsecuentemente menos concentradas que su anterior. En un sistema de n diluciones en serie, la
concentración de soluto en cada dilución sucesiva es de 1/n de la anterior. Generalmente se
efectúan al doble, es decir, que cada dilución tiene la mitad de concentración que su antecesor.
IV. METODOLOGÍA
DESARROLLO EXPERIMENTAL
PROBLEMAS
2. ¿Qué volumen de la solución anterior deberás tomar para preparar 100 ml de una disolución de
concentración 0.01 M?
3. ¿Cuántos gramos de reactivo deberás pesar para preparar 500 mL de una solución 5% (W/V) de
NaCl?
6. Una etiqueta en una botella de ácido clorhídrico grado analítico dice 37 % p/p - d= 1,19 g/ml. Se
trata de una solución muy concentrada. Cuánto de ella necesitaríamos para preparar una
solución 0.1 N (normal)?
8. ¿Qué % en volumen de alcohol tiene una botella de cerveza de 875 mL con 8 mL de alcohol?
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9. En el comercio se encuentran ampolletas de clorhidrato de adrenalina cuya concentración es de
1 mg por ml. ¿Cuál es el porcentaje de dicha solución?
10. Requieres preparar un litro de hidróxido de sodio 0.1 N ¿Cuántos gramos de hidróxido de sodio
necesitas para prepararla?
12. Para determinar una curva dosis respuesta a la adrenalina se requiere preparar las siguientes
soluciones: 300, 100, 30, 10, 3, 1, 0.3, 0.1, 0.03 y 0.01 g en 2 ml; si el medicamento tiene una
presentación en solución; la cual contiene 100 mg de clorhidrato de adrenalina en 100 ml.
¿Cuáles son los cálculos para obtener dichas concentraciones de adrenalina?
14. De acuerdo a un protocolo experimental para realizar una curva dosis-respuesta de plaguicida
“X” en ratones adultos de aproximadamente 40 g de peso, se administrarán 5 grupos
experimentales de 5 animales con 3/4, 1/2, 1/3, 1/4 y 1/8 de la DL50. La DL 50 del plaguicida “X”
empleado es de 65 mg/kg y se tiene un reactivo con 98% de pureza y una densidad de
1.8mg/ml. Considera que cada ratón debe administrarse con 200 l de solución (plaguicida X en
aceite de cacahuate).
a) ¿Qué volumen de solución en aceite de cacahuate deberá prepararse para administrar
cada grupo de animales?
b) ¿Qué volumen deberá tomar del plaguicida “X”?
c) ¿En qué volumen de aceite de cacahuate deberá disolver el plaguicida “X”?
15. ¿Cuántos litros de solución de CaCl2 0.500 mol/L pueden obtenerse a partir de 15 g deCaCl2?
(Respuesta: 0,270 L)
16. Un frasco ámpula contiene una solución formada por 0.75 g de un medicamento “X” y 10 ml de
disolvente. ¿Qué volumen de esta solución es necesario administrar a un ratón de 35 g para que
éste reciba una dosis de 250 mg/kg del compuesto a probar?
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17. Se dispone de una solución de alcohol en agua al 80 %. ¿Qué volumen de esta solución se
necesita para preparar 1000 ml de solución de alcohol al 25 %?
18. La inyección subcutánea de atropina (0.2 mg/kg en ratas adultas) puede ser conveniente para
controlar la salivación y las secreciones respiratorias. Se administra 30 min antes de la
administración de anestesias inhalantes tales como el éter. Se necesita administrar esta dosis a
4 animales de los siguientes pesos: 250, 300, 132 y 200 g. Si la presentación es de 1 mg/ml.
¿Qué dilución harías para poder administrar la dosis adecuada a cada una de las ratas sabiendo
que el volumen total con el que se puede administrar una rata esta alrededor de los 0.5 ml?
19. Completa los datos faltantes en la siguiente tabla para soluciones de H2SO4.
20. Un anticonceptivo X diseñado para ser administrado en mujeres, requiere ser probado
previamente en ratas para evaluar los efectos adversos del estradiol. La dosis de fármaco que
deberá administrarse es de 32.5 mg/kg de peso.
La presentación del medicamento es la siguiente:
Acetofénido de dihidroxiprogesterona 75 mg
Enantato de estradiol 5 mg
Vehículo c.b.p 1 ml
a) ¿Qué dosis deberá administrarse a ratas que pesan: 280, 312.5, 276.9 y 300 g?
b) ¿Qué dilución harías para administrar a cada rata un volumen menor o igual a 0.4 ml?
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PRACTICA No. 2
I. TEMA
Manejo adecuado de productos químicos de uso en actividades de laboratorio de investigación
toxicológica
III. INTRODUCCIÓN
El riesgo que supone el manejo de sustancias químicas viene determinado por la exposición a las
mismas y por el peligro que éstas representan. Para poder protegernos adecuadamente nosotros
mismos y el medio ambiente, debemos poner en práctica medidas preventivas que tengan en cuenta
ambos factores para asegurar su correcta y segura manipulación, el adecuado almacenamiento y su
correcta eliminación.
1.1. - LA EXPOSICIÓN
Las características de la exposición incluyen fundamentalmente la duración del periodo de contacto,
junto con la intensidad (concentración) y las circunstancias de la misma. En el Anexo 1 se incluyen
las “normas generales de seguridad en el laboratorio”, cuyo fin primordial consiste en tratar de evitar
la exposición a sustancias empleadas en el laboratorio.
Con relación a las vías potenciales de entrada de los compuestos al organismo, destacan:
- Vía digestiva: suele producirse por aspiración al pipetear, por conservar un producto en un envase
de alimentos, o por comer o fumar con las manos contaminadas.
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de peligrosidad que deben aplicarse a cada sustancia. Ello incluye, por lo tanto, indicaciones para el
correcto etiquetado de los mismos, para que cualquier persona pueda conocer de forma rápida
cuales son los riesgos asociados a su uso.
Según la Norma oficial Mexicana NOM-114-STPS-1994 en concordancia con el sistema
Internacional HMIS (Hazardous Materials Identification System) los reactivos o materiales peligrosos
se clasifican por colores y grados según su peligrosidad, y esto debe estar especificado en la
etiqueta del producto para su correcto manejo y almacenamiento.
Existen 4 colores:
Azul: Riesgos a la salud
Rojo: Riesgo de Inflamabilidad
Amarillo: Riesgo de reactividad
Blanco: Cuidados especiales
Las etiquetas de los productos fitosanitarios, químicos y reactivos contienen una valiosa información
toxicológica que a menudo no es tenida en cuenta. Podrían evitarse en gran medida los peligros
para la salud y el medio ambiente siguiendo las recomendaciones que dichas etiquetas contienen.
La sistemática empleada por dichos reglamentos para la caracterización e indicación de la
peligrosidad, sea de sustancias o de preparados considerados como tales, se basa en la obligatoria
inclusión en la etiqueta del envase de uno o dos símbolos o pictogramas de peligrosidad, según
corresponda, acompañado de los números y textos de las indicaciones sobre los riesgos específicos
(frases R) y las frases de seguridad o consejos de prudencia (frases S), relativos a la manipulación
de productos peligrosos.
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1.4. - LOS PICTOGRAMAS O SÍMBOLOS DE PELIGROSIDAD
A continuación se detallan las distintas categorías de peligro en las que se engloban las sustancias o
preparados peligrosos según sus propiedades físico químicas y toxicológicas y sus efectos sobre la
salud humana o el medio ambiente.
Se ha considerado oportuno acompañar a cada una de las categorías de peligro de los símbolos de
peligrosidad y de las abreviaturas que las representan. En algunos casos (cuando se trata de
sustancias clasificadas como inflamables, sensibilizantes, o peligrosas para el medio ambiente) no
existe una abreviatura específica sino que sólo aparece la frase o frases de riesgo que la definen.
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Según la Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-1993 los residuos peligrosos se clasifican
según el código CRETIB (corrosivo, reactivo, explosivo, tóxico, inflamable y biológico-infeccioso).
- MUTAGÉNICOS: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden producir
alteraciones en el material genético de las células. Categorías igual que en los carcinogénicos.
- ALERGENOS: Sustancias químicas que al contacto con la piel y las mucosas o su entrada en el
organismo, provocan una reacción anormal del sistema de defensa inmunológico.
Debe tenerse en cuenta que aunque muchas sustancias o preparados no requieran indicación de
peligrosidad, no por ello deben considerarse inocuas, sobre todo si se tiene en cuenta su capacidad
de reacción con otros productos. Por todo ello, es recomendable que al manipular cualquier producto
químico, se tomen las debidas precauciones, tanto en los considerados como peligrosos, como en
los no considerados como tales.
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- Peligrosidad para la fauna terrestre: Después del término "terrestre" pueden aparecer las letras
A, B, C.
- Peligrosidad para la fauna acuícola: Después del término "acuícola " pueden aparecer las letras
A, B, C.
- Peligrosidad apícola: Después del término "apícola" pueden aparecer una o más de las letras A,
B, C, D.
En todos los casos la peligrosidad de un producto aumenta según la serie: A, B, C, D.
Es importante prestar especial atención en el caso de sólidos y líquidos volátiles ya que una de las
vías de intoxicación más común en los laboratorios es la inhalatoria.
Debe tenerse en cuenta además la posibilidad de que dos productos inocuos, mezclados dejen de
serlo, o de que en ocasiones un producto aumente la toxicidad de otro.
Hay sustancias cuyo efecto es acumulativo, por lo que exposiciones prolongadas a bajas dosis
pueden ser muy peligrosas. Hay que asegurarse de que los recipientes que contienen este tipo de
productos estén bien cerrados.
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1.10. - ELIMINACIÓN DE RESIDUOS
Debido al peligro que suponen los residuos químicos para la salud y preservación del medio
ambiente, se hace necesaria una adecuada eliminación de los mismos. Como norma general, los
residuos se acumularán en recipientes que convenientemente etiquetados para ser dispuestos como
ordena la ley, atendiendo a sus características químicas y toxicidad. Es importante recordar que los
recipientes que los contienen también están clasificados como residuos. La información específica
sobre un compuesto puede encontrarse en catálogos o solicitarse a las firmas que lo producen.
Desde el punto de vista práctico, los residuos pueden clasificarse como:
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Residuos tóxicos y peligrosos:…(continuación)
- Metales y disoluciones de metales
- Disolventes orgánicos clorados
- Disolventes orgánicos no clorados
- Mercurio y sus derivados
- Otros compuestos no clasificados
Referencias:
- Bello J, López de Cerain A, Ezpeleta O, Jiménez A, Pérez C, Alvarez L (2000) Toxicología. Guía de
Practicas, Newbook, Navarra
- Cameán AM, Moreno IM, López-Artíguez M, Repetto G y Repetto M (2000) Preparación y
realización de un programa de prácticas experimentales para asignaturas del Área de Toxicología:
motivación positiva en el aprendizaje teórico-práctico de Toxicología. Instituto de Ciencias de la
Educación, Universidad de Sevilla.
- Repetto M (2001) Evolución, Estado Actual, Retos y Tendencias de la Toxicología al Iniciar el
Milenio. CDROM. Area de Toxicología. Universidad de Sevilla. Sevilla
ANEXOS
Hábitos personales
• Avisar si se padece alguna alergia.
• Llevar recogidos los cabellos.
• Es imprescindible el uso de la bata, manteniéndola abrochada.
• No fumar, comer, beber ni aplicarse cosméticos, ni guardar alimentos ni bebidas en el laboratorio.
• Es conveniente el uso de gafas protectoras.
• Emplear guantes, mascarillas y bata desechable cuando se manipulen productos muy peligrosos, o
cuando se prevea la posibilidad de exposición (polvos finos, aerosoles).
• No colocar objetos personales en mesas de trabajo.
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Realización de los experimentos
• Trabaja siempre sobre la mesa de trabajo o en campana según se requiera.
•Nunca adiciones agua sobre ácido, lo correcto es adicionar ácido sobre agua.
• No toques con las manos ni degustes los productos químicos.
•Al experimentar el olor de productos químicos, nunca coloques el producto o el frasco directamente
en la nariz y evitar inhalar los productos químicos, sus polvos, vapores o aerosoles. Utilizar la vitrina
de gases cuando sea necesario.
• No pipetees con la boca.
•Cuando estés manipulando frascos o tubos de ensayo, nunca dirijas la abertura en tu dirección o en
la dirección de otras personas.
•Presta atención cuando tengas que realizar procesos de calentamiento.
• Ten cuidado para no quemarte al utilizar nitrógeno o CO2líquidos, las válvulas del gas deben ser
abiertas lentamente con las manos y nunca ser forzadas con martillos u otras herramientas, ni las
dejes con presión cuando el cilindro de gas o la línea en tu mesa de trabajo no estén siendo usados.
• Ponmucha atención en cuanto a la presencia de llamas abiertas u otras posibles fuentes de
ignición.
• Utiliza encendedores piezoeléctricos largos; no emplees cerillos ni encendedores de bolsillo. No
dejes los mecheros encendidos sino se están utilizando.
•La destilación de solventes, manipulación de ácidos y compuestos tóxicos y las reacciones que
generen gases tóxicos son operaciones que deben ser realizadas en campanas con buen arrastre.
•Siempre que sea posible, antes de realizar reacciones donde no conozcas totalmente los
resultados, has una reacción en pequeña escala en la campana.
•Al trabajar con reacciones peligrosas (peligro de explosión, generación de material tóxico, etc.) o
cuya peligrosidad desconozcas procede de la siguiente forma:
1. Avisa a tus compañeros del laboratorio
2. Trabaja en una campana con buen arrastre, retirando todo tipo de material inflamable.
Trabaja en un área limpia.
3. Usa protector acrílico.
4. Ten un extintor cerca y listo para ser usado.
• No mezcles reactivos a menos que tengas la seguridad de que puede hacerse.
• No llenes los tubos de ensayo más de dos centímetros por debajo del borde. En las valoraciones
no llenes los recipientes por encima de la mitad de su capacidad.
• Cierra las botellas inmediatamente con su tapón correspondiente.
• Calienta los tubos de ensayo inclinados y utilizando pinzas. No dirijas hacia tí mismo ni hacia los
demás, tubos de ensayo, matraces, etc. que estén calentándose o emitiendo vapores.
• Utilizar gradillas y soportes. No llevar tubos de ensayo ni productos en los bolsillos de la bata.
• Toma los tubos de ensayo con los dedos nunca con la mano.
• No reintegres nunca reactivos a su recipiente de origen para no contaminarlo. No tomes reactivos
en exceso.
• Cuando se quiera hervir líquidos (p. ej. destilación), se deben calentar con plato poroso en su
interior.
• Si se debe calentar algún disolvente orgánico, se empleará manta o placa calefactora, nunca
mechero.
• Trata con delicadeza el material de vidrio, y con cuidado los equipos eléctricos y los gases a
presión o vacío.
• El empleo de material radioactivo exige autorización del manipulador y las instalaciones.
• Si vas a utilizar animales, deberás hacerloprevia capacitación.
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Preparación de soluciones
• Limpia antes la balanza si estuviera sucia, y después de usarla. Usar una brocha o un papel, nunca
soplar.
• Pesar el reactivo sólido sobre papel no absorbente, de aluminio o directamente en un vaso de
precipitados. Disolverlo en vaso de precipitados. Verter la disolución en un matraz aforado y enrasar
con el disolvente.
• Lavar inmediatamente la espátula
• Los ácidos se añaden diluidos y muy lentamente, sobre las bases o el agua. Los agentes oxidantes
se añaden diluidos y muy lentamente, sobre los agentes reductores, y viceversa.
Para terminar
• Al finalizar una reacción u operación, recoge los materiales, reactivos, equipos etc., evitando
acumulaciones innecesarias.
• Asegúrate de la desconexión de aparatos, agua, gases, etc.
• Limpia el lugar de trabajo. Lava con mucha precaución todo el material de vidrio usado, que tendrá
que ser enjuagado con agua destilada.
• Elimina correctamente los residuos producidos. Se recomienda lo siguiente:
- Los residuos de solventes de reacciones y de rotavapores deben ser colocados en
frascos apropiados para ser tratados para descarte. Evita mezclar los solventes, para
esto te sugerimos la siguiente separación: Solventes clorados, Hidrocarburos,
Alcoholes y Cetonas, Éteres y Ésteres, Acetatos y Aldehidos. Siempre que sea posible
indica también los porcentajes aproximados de los componentes, ya que este tipo de
residuo acostumbra ser incinerado por empresas especializadas que exigen una
descripción minuciosa del material que reciben. Verifica primero si es posible recuperar
estos residuos en el laboratorio.
- Los residuos acuosos ácidos o básicos deben ser neutralizados en el caño antes de
descartados, y solo después de esto podrán ser descartados. Para el descarte de
metales pesados, metales alcalinos y de otros residuos, consulta anticipadamente la
bibliografía adecuada.
- El uso de solución sulfocrómica o mezcla crómica para limpieza está siendo prohibido
en la mayoría de laboratorios. En el caso de necesitar usarla nunca la deseches
directamente en la tarja.
-
• Por último, lavar las manos antes de abandonar el laboratorio y quitar la bata
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RIESGOS ESPECIFICOS ATRIBUIDOS A SUSTANCIAS Y PREPARADOS PELIGROSOS
(FRASES R) (Anexo 2a)
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CONSEJOS DE PRUDENCIA RELATIVOS A SUSTANCIAS Y PREPARADOS PELIGROSOS
(FRASES S). (Anexo 2b)
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REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA DE SEGURIDAD EN EL MANEJO DE PRODUCTOS
QUÍMICOS.
Contesta las siguientes preguntas:
¿Cuál es la clave de riesgo que identifica a los compuestos capaces de causar quemaduras?
¿Qué claves identifican a la frase de riesgo siguiente? “Tóxico: riesgo de efectos graves para la
salud en caso deexposición prolongada por inhalación, contacto con la piel e ingestión”
¿En qué contenedor de residuos debe depositarse un frasco con restos de cloroformo?
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¿Cuál es la principal vía de entrada al organismo de contaminantes en el laboratorio?
¿Qué precauciones de manejo deben tomarse para un compuesto etiquetado con el consejo de
seguridad S18?
¿Qué significa ?
¿Puede tirarse por el desagüe un producto cuya etiqueta no tiene pictogramas, frases R ni S?
Justifica tu respuesta.
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PRÁCTICA No. 3
I. TEMA
Manejo de animales en modelos de toxicidad in vivo.
III. INTRODUCCIÓN
Los modelos experimentales son herramientas biológicas que han permitidoel estudio de procariotes
(bacterias y otros microorganismos) y eucariotes(animales y vegetales), facilitando el conocimiento
de los procesos de lavida tanto naturales como patológicos, por lo cual, es adecuado conocer
sumanejo, respetando los derechos de los animales de acuerdo a los tratadosde Helsinki.
La investigación en el área biomédica demanda gran cantidad de animalesde laboratorio con
características biológicas específicas y en la oportunidadsolicitada por el investigador. Para lograr el
cumplimiento de esta tarea, el investigador diseña y operamétodos reproductivos acordes con las
necesidades propias de lacomunidad investigadora.
Los resultados de un experimento dependen en gran parte del manejo de los animales, siendo
vital la participación del médico veterinario, al gradoque un mal manejo puede invalidar un
experimento. También esimportante señalar que existen otros factores que pueden alterar
elresultado de un experimento entre ellos destacan la constitución física y elestado inmunológico del
animal, de tal forma que el manejo adecuado delos sujetos de experimentación es la parte medular
de un protocolo experimental pues el resultado depende de factores subjetivos yobjetivos que actúan
en forma diferente en cada sujeto deexperimentación.
Entre los animales más utilizados en una investigación y por ende losmayormente reproducidos en
los bioterios, son el ratón, rata, conejo, hamster, cuyo y chimpancés. Otros animales que se usan en
menor medidacomo modelos experimentales son: gato, perro, peces, tortugas, cerdos,aves en
general, ranas hurones, cabras, ovejas, bovinos, equinos,chinchilla y armadillo.
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firma de este documento significa aseverar que los trabajos han sido previamente autorizados por
comités de ética institucionales y que todo el personal que interviene en el trabajo en relación con los
animales de laboratorio ha aprobado previamente un curso de capacitación en el tema. En México,
la Norma Oficial Mexicana sobre el manejo animal (NOM-062-ZOO-1999) es vigilada por la
Secretaría de Agricultura, Ganadería y DesarrolloRural, así como por los Gobiernos Estatales y del
Distrito Federal.
Las vías de administración de agentes xenobióticos son las rutas de entrada al organismo, las
cuales influyen en la latencia, intensidad y duración del efecto, por esta razón es de suma
importancia conocer las ventajas y desventajas de cada una para poder elegir una vía de
administración adecuada en unasituaciónparticular.
Las diferentes vías de administraciónde un xenobiótico dependen de su composición química y en
algunas ocasiones de objetivo terapéutico o tóxico que se persigue, estas se pueden clasificar en:
Enterales:
Los xenobióticos son introducidos al organismo por los orificios naturales del cuerpo.Referente o
relacionada al intestino o al tracto gastrointestinal (Ej.: oral, sublingual, rectal)
Parenterales:
Los xenobióticos para ser introducidos al organismo, requiere la utilización de una aguja hueca
hipodérmica, se crea un orificio no natural en el cuerpo. Diferente o paralelo al intestino o al tracto
gastrointestinal. (ej.: intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, intraarticular, intravascular,
intrapleural, intravenosa, intraosea, intraarterial, intratecal, intracardiaca, intralinfática, etc.)
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IV. METODOLOGÍA
Observar com atención y posteriormente practicar las vias de administración parenterales mostradas
por lós profesores de la asignatura, siguiendo atentamente lãs instrucciones para el buen manejo de
animales de laboratório.
V. CUESTIONARIO
VI. BIBLIOGRAFÍA
Leader, R. W., and D. Stark. 1987. The importance of animals in biomedical research. Perspect. Biol. Med.
30(4):470-485
NRC (National Research Council). In press. Occupational Health and Safety in the Care and Use of Research
Animals. A report of the Institute of Laboratory Animal Resources Committee on Occupational Safety and
Health in Research Animal Facilities. Washington, D.C.: National Academy Press.
Quezada-Domínguez Abraham, 1997. Introducción al manejo de animales de laboratorio: roedores y
pequen̋as especies. Editoriales de la Universidad Autónoma de Yucatán, Centro de Investigaciones
Regionales “Dr. Hideyo Noguchi”, Universidad de Ciencias Biomédicas . pp: 121 y 123.
http://books.google.com.mx/books?id=S5SdmSLsZL4C&pg=PA121&lpg=PA121&dq=aguja+de+intubaci%C3
%B3n+intragastrica+rata&source=bl&ots=9Zwv9nD27R&sig=AJxY3YBEGS4yQzvLX4WDacbsySs&hl=es&ei=
O6KATqS_MuissQKBo9Ai&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=1&ved=0CCoQ6AEwAA#v=onepage&q
&f=false
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PRÁCTICA No. 4
I. TEMA
Manejo de animales en modelos de toxicidad in vivo.
III. INTRODUCCIÓN
Las expresiones categorías de toxicidad y clasificación de la toxicidad se utilizan a veces en el
ámbito de las actividades de regulación. Las categorías de toxicidad se refieren a una calificación
arbitraria de las dosis o niveles de exposición que causan efectos tóxicos. Se habla así de
“sumamente tóxico”, “muy tóxico”, “moderadamente tóxico”, etc. Lo más frecuente es que estas
expresiones se apliquen a la toxicidad aguda. La clasificación de la toxicidad se refiere a la
agrupación de las sustancias químicas en categorías generales conforme a su efecto tóxico
principal. Se habla así de sustancias alergénicas, neurotóxicas, carcinógenas, etc. Esta clasificación
puede ser útil en el ámbito administrativo como advertencia y como información. La relación dosis-
efecto es la relación entre la dosis y el efecto a nivel individual. Un incremento de la dosis puede
incrementar la intensidad de un efecto o su gravedad. Hay algunos efectos tóxicos, como la muerte o
el cáncer, que no tienen grados, sino que son efectos “de todo o nada”. Sin embargo, los efectos
pueden ser sistémicos que son efectos tóxicos que se producen en diversos órganos y tejidos al
mismo tiempo, aunque siempre hay un órgano que resulta más dañado o alterado que otros y aquí
es donde se habla de un órgano diana o blanco.
Existen otro tipo de efectos denominados agudos y crónicos, los primeros se producen tras una
exposición limitada y poco tiempo después de ésta (de segundos hasta días), y pueden ser
reversibles o irreversibles; mientras que los segundos se generan tras una exposición prolongada
(meses, años, decenios) y/o persisten después de que haya cesado la exposición. La exposición
aguda es una exposición de corta duración, mientras que la exposición crónica es una exposición de
larga duración (a veces toda la vida).
Toxicología del etanol:A excepción del agua, la mayor exposición a cualquier tipo de solventes es
la del etanol. No solo es usado como un solvente, pues también es altamente consumido por un gran
número de personas como uno de los componentes de las bebidas alcohólicas.Es bien absorbidoen
el tracto gastrointestinal. Los pulmones yriñones excretan un 5-10 %; el resto es metabolizado en el
hígado.
El alcohol (etanol) se metaboliza esencialmente por oxidación, transformándose en acetaldehído. En
las situacionesde consumo oral (las más habituales), este proceso metabólico tiene lugar en el
hígado y se hallaprincipalmente mediado por el enzima alcohol deshidrogenada (ADH) (Petersen y
cols., 1983). En un segundopaso, el acetaldehído formado del metabolismo del etanol es
transformado en acetato por medio del enzimaaldehído deshidrogenada (ALDH) que se encuentra
en el hígado.
El etanol puede afectar al sistema nervioso central, provocando estados de euforia, desinhibición,
mareos, somnolencia, confusión, ilusiones (como ver doble o que todo se mueve de forma
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espontánea). Al mismo tiempo, baja los reflejos. Con concentraciones más altas ralentiza los
movimientos, impide la coordinación correcta de los miembros, pérdida temporal de la visión, etc. En
ciertos casos se produce un incremento en la irritabilidad del sujeto intoxicado como también en la
agresividad; en otra cierta cantidad de individuos se ve afectada la zona que controla los impulsos,
volviéndose impulsivamente descontrolados y frenéticos.Estas alteracionesfuncionales usualmente
son reversibles, pero puede producir lesiones en todos los tejidos según sea la dosis ingerida y la
duración de la acción del alcohol. Finalmente, a dosis muy altas conduce al coma y puede provocar
muerte.
La resistencia al alcohol no parece aumentar en las personas adultas, de mayor peso y de menor
altura, mientras que los niños son especialmente vulnerables. Se han comunicado casos de bebés
que murieron por intoxicación debida a la inhalación de vapores de etanol tras haberles aplicado
trapos impregnados de alcohol. La ingesta en niños puede conducir a un retardo mental agravado o
a un subdesarrollo físico y mental. También se han realizado estudios que demuestran que si las
madres ingerían alcohol durante el embarazo, sus hijos podían ser más propensos a tener el
síndrome de alcohólico fetal.
IV. METODOLOGÍA
MATERIALES Y REACTIVOS
Material
2 ratas hembra y 2 ratas macho.
1 ratones hembra y 1 ratones macho
Sonda gástrica.
Jeringas para insulina
Reactivos
Etanol absoluto
Disulfiram tabletas 500mg
Acetaldehido
DESARROLLO EXPERIMENTAL
1. No alimentar a 2 de las ratas 8-10 hrs previas al estudio. Dejar agua ad libitum.
2. Distribuir aleatoriamente a los animales, marcarlos y pesarlos. Anotar el peso de cada uno
en la siguiente tabla.
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alimento Etanol i.m. alimento alimento
Rata X X X X X X X
Hembra
Rata X X X X X X X
Macho
3. Los animales de experimentación serán administrados por la vía indicada con las soluciones
proporcionadas por el profesor y se observarán los signos tóxicos que se presenten,
registrar el tiempo en que se presentan, el número de animales muertos si se presentara el
caso.
4. Después de la administración, anote el inicio de cada uno de los siguientes signos
propuestos e indica la frecuencia con la que se presenta el efecto.
IV. CUESTIONARIO
IV. BIBLIOGRAFÍA
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PRACTICA N° 5
I. TEMA
Toxicodinamia
III. INTRODUCCIÓN
El tetracloruro de carbono es una de las sustancias que causan efectos tóxicos considerables en el
hígado; si bien es claro que la mayoría de las sustancias son metabolizadas a nivel de éste órgano,
que por su constitución está encargado de transformar las sustancias que llegan a él, ya sea de
origen externo o de los tejidos extrahepáticos como producto de su metabolismo; también es cierto
que muchas de estas sustancias tienen afinidad por el hígado, causando serios problemas
patológicos: como es el caso del tetracloruro de carbono.
Los órganos más afectados por la toxicidad del tetracloruro de carbono son el hígado y los riñones.
En experimentos con ratones y ratas se ha demostrado que el tetracloruro de carbono puede inducir
la formación de hepatomas y carcinomas hepatocelulares. Dado que las dosis que inducían tumores
hepáticos eran más altas que las que inducían toxicidad celular, es probable que la capacidad
cancerígena del tetracloruro de carbono sea consecuencia de sus efectos hepatotóxicos. Según los
datos disponibles, se puede considerar que el tetracloruro de carbono no es un compuesto
genotóxico. El CIIC ha clasificado el tetracloruro de carbono como posiblemente cancerígeno para el
ser humano (Grupo 2B): hay pruebas suficientes de que es cancerígeno para animales de
laboratorio, pero no hay pruebas suficientes sobre su efecto en el ser humano.
RIESGO DE INHALACIÓN
Por evaporación de esta sustancia a 20ºC, se puede alcanzar muy rápidamente una concentración
nociva en el aire.
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OBJETIVO:
MATERIALES
Ratas macho sanas con un peso aproximado de 200-250 g. (1 por equipo)
1 tubo de ensaye
1 gradilla para tubos
2 jeringas de 5ml
2 cajas petri
3 pipetas de 1.5 y 10 ml
Gradilla portapipetas
2 sondas gástricas delgadas
2 vasos de precipitados
1 par de guantes
1 balanza
1 cubrebocas
REACTIVOS
2 ml de tatracloruro de carbono
5 ml de aceite vegetal 100% puro
30 ml de solución salina fisiológica
30 ml de agua destilada
EQUIPOS
1 equipo de disección
PROCEDIMIENTO
Durante la práctica
1.- Se extraen muestras de sangre de ambos ejemplares, aproximadamente 3 ml, que servirán para
calcular el tiempo de coagulación. Se emplean tubos de ensaye.
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2.- Luego los ejemplares se sacrifican por decapitación y se obtienen los hígados para
observaciones macroscópicas directas y la comparación respectiva.
Tiempo de Coagulación
1.-Tomar aproximadamente 3 ml de sangre. La sangre deberá extraerse con sumo cuidado, evitando
la estasis. Se empieza a contar el tiempo desde el momento en que la sangre penetra en la jeringa.
2.- Se preparan dos tubos de 11 mm de diámetro interior, previamente enjuagados con solución
salina normal y en cada uno se coloca 1 ml de sangre.
3.- Colóquese los tubos en una gradilla y después de tres minutos inclínese el primer tubo para
observar el estado de fluidez. Esta observación se repite cada 30 seg. El punto final es el momento
en que se forma un coagulo firme.
CUESTIONARIO
1.- Explicar el mecanismo de formación de hígado graso por intoxicación con tetracloruro de carbono
y describir las alteraciones bioquímicas que se presentan.
2.- Describir las características fisicoquímicas del tetracloruro de carbono y de otras dos sustancias
que sean consideradas hepatotóxicas
BIBLIOGRAFIA:
IPCS, 1999: Carbon tetrachloride. Ginebra (Suiza), Organización Mundial de la Salud, Programa
Internacional de Seguridad de las Sustancias Químicas (n.º 208 de la serie de la OMS Criterios de
Salud Ambiental).
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PRACTICA No. 6
1. INTRODUCCIÓN
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática de
toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los efectos fitotóxicos de
compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el
desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento. Como puntos finales para la
evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la
elongación de la radícula y del hipocotilo (Figura 1). Es importante destacar que durante el período
de germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos
fisiológicos en los que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la
supervivencia y el desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad
frente a factores externos adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y procesos
involucrados son generales para la gran mayoría de las semillas, por lo que la respuesta de esta
especie y los datos obtenidos a partir de la aplicación de esta prueba son en gran medida
representativos de los efectos en semillas o plántulas en general. El éxito o aptitud de una plántula
para establecerse en un ambiente determinado es de gran importancia para garantizar la
supervivencia de la especie. La evaluación del desarrollo de la radícula y del hipocotilo, constituyen
indicadores representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de la
planta.
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indicadores subletales muy sensibles para la evaluación de efectos biológicos en vegetales,
aportando información complementaria a la proporcionada al estudiar el efecto en la germinación.
Este ensayo puede ser aplicado para la evaluación de la toxicidad de compuestos puros solubles, de
aguas superficiales (lagos, ríos), aguas subterráneas, aguas para consumo humano, aguas
residuales domésticas e industriales, además de lixiviados de suelos, sedimentos, lodos u otras
matrices sólidas (Bowers et al, 1997; Cheung et al, 1989; Dutka, 1989). A diferencia de otras
pruebas en las que se consideran algas o plantas acuáticas sumergidas como organismo de
diagnóstico, el bioensayo con semillas permite evaluar la fitotoxicidad de muestras coloreadas o con
elevada turbiedad de manera directa y sin necesidad de filtración previa, reduciéndose así las
interferencias debidas al pretratamiento y simplificando el procedimiento de prueba.
2.OBJETIVO
Los alumnos evaluarán los efectos fitotóxicos de una solución que contiene un elemento
contaminante, en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas de
lechuga (Lactuca sativa L.)durante los primeros días de crecimiento.
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*Las semillas de lechuga se adquieren en establecimientos locales, procurando que sean
semillas sin ningún tratamiento (sin fungicidas o plaguicidas), con buen poder germinativo y baja
variabilidad en la elongación de la radícula e hipocotilo.
**El papel de filtro que se seleccione como sustrato de germinación debe tener las siguientes
características: trama amplia y porosa que asegure una buena capacidad de retención de
líquido; resistencia de la fibra del papel para que las radículas crezcan por su superficie sin
atravesarlo, situación que dificultaría la remoción de las plántulas sin dañarlas; ausencia de
residuos tóxicos (por ejemplo, blanqueadores; y que no promueva el desarrollo de hongos (no
asociados a las semillas).
4. METODOLOGÍA
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Figura 2. Esquema general del procedimiento de prueba de toxicidad
con semillas de lechuga Lactuca sativa L.
5. RESULTADOS
El efecto medido en este bioensayo es la inhibición de la elongación de la radícula, hipocotilo y de la
germinación (Figura2). Como resultado final se espera obtener la CE50 o CI50 o % de inhibición. Los
valores serán aceptados si el porcentaje de germinación es superior al 90% en el control negativo.
I. Observar cuidadosamente cada caja y anotar cualquier indicador de fitotoxicidad como
necrosis, pelos poco desarrollados, radículas con crecimiento ensortijado. La necrosis
se manifiesta como manchas de color pardas, blancas o marrones.
II. Utilizando una regla medir la longitud de la radícula y del hipocotilo de casa plántula.
III. La medida de la elongación de la radícula se considera desde el nudo hasta el ápice
radicular.
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Antes de cada medición se recomienda congelar las cajas y descongelarlas conforme se van
midiendo, el objetivo de la congelación y la descongelación es obtener las plántulas menos rígidas.
La medida de elongación del hipocotilo se considera desde el nudo hasta el sitio de inserción de los
dos cotiledones.
6. EXPRESIÓN DE RESULTADOS
Para la expresión de resultados se realizarán los siguientes cálculos:
I. Promedio y desviación estándar de la elongación de la radícula y del hipocotilo de
las plántulas de cada repetición.
II. Porcentaje de inhibición del crecimiento de la radícula y del hipocotilo con el
promedio de elongación para cada dilución respecto del promedio de elongación
del control negativo
III. Porcentaje de inhibición de la germinación
IV. Con los datos anteriores realizar una gráfica dosis-respuesta, colocando en el eje de
las ordenadas el porcentaje de inhibición y en el eje de las abscisas la
concentración.
Bibliografía:
Peña E. Carlos, Dean E. Carter y Ayala-Fierro Felix. 2001. Toxicología Ambiental:
Evaluación de Riesgos y Restauración Ambiental. Distribuido en internet vía Southwest
Hazardous Waste Program website http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/.
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PRACTICA No. 7
INTRODUCCIÓN
Los bioensayos con lombrices son ampliamente reconocidos como prueba para evaluar la toxicidad
de suelos contaminados (Dorn et al., 1998; Wilsonet al., 2002). La lombriz más utilizada en México
ha sido Eisenia en sus especies foetida y andrei, las cuales pertenecen a la familia Lumbricidae.
Estas especies de lombrizson exógenas en México, pero de amplia distribución, fácil manejo y
cultivo (Fragoso, 2002). Su principal característica morfológica es la presencia de segmentos
externos e internos en su cuerpo, son hermafroditas y cuando son adultas se observa una
protuberancia epidérmica denominada clitelo, en el que se forman los capullos en los cuales son
depositados los huevos(Santamaría, 1996).
El presente ensayo se basa en la guía 207 de la OECD para la evaluación de sustancias (OCDE,
1984). La prueba por contacto en papel filtro involucra la exposición de las lombrices a sustancias de
prueba sobre un papel filtro húmedo con la finalidad de identificar el potencial tóxico del compuesto
presente en el suelo. Esta prueba tiene una duración de 48 horas pero puede ampliarse hasta 72
horas.
OBJETIVO
Los alumnos evaluarán los efectos tóxicos de una solución de cromo hexavalente en papel filtro por
contacto con lombriz de tierra (Eisenia andrei) durante 48 horas.
*Las lombrices de tierra (Eisenia foetida) utilizadas en ésta práctica fueron una donación del
proyecto de la Dra. M Olivia Franco Hernández de la UPIBI-IPN
METODOLOGÍA
Para esta prueba se deben lavar los contenedores de vidrio con agua caliente y detergente, se deben
enjuagar y dejar secar. Cortar papel filtro con 4.5 cm de ancho por 7 cm de longitud depositarlo en el frasco.
No debe exceder del borde del frasco.
Las concentraciones a emplear serán tres. Para cadatratamiento o nivel de concentración se preparan 10
replicas. Una lombriz secoloca en cada frasco, depositándola sobre el papel filtro húmedo.Antes de ser
colocadas en los viales, las lombrices son depositadas por treshoras en papel filtro humedecido, con la
finalidad de vaciar sus intestinos;después son lavadas y secadas. Los viales son colocados en forma
horizontalen la oscuridad, a una temperatura de 20 o 22± 2 C, durante un periodo de 48horas. Las lombrices
se consideran muertas cuando no responden a ningún estimulo mecánico. Cualquier síntoma patológico se
reporta.
RESULTADOS
El efecto medido en este bioensayo es la mortalidad y como resultado final se espera obtener la
CL50. Sin embargo, de no obtener dicha respuesta, cualquier cambio en el estado general de las
lombrices deberá ser reportado y concluir sobre los hallazgos de este efecto tóxico.
REPORTE DE LA PRUEBA
En el reporte del ensayo debe incluirse la siguiente información:
Los datos del compuesto que se probó
Las características del organismo de prueba, incluyendo la especie, condicionesde cultivo,
número de lombrices utilizadas por réplica
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Las condiciones de la prueba, así como cualquier variación de las condicionesde la misma.
Los resultados del peso promedio de los organismos al inicio y final dela prueba. Así como
una descripción de cambios físicos o patológicosobservados en los organismos
Los resultados del bioensayo deberán plasmarse en una gráfica en donde se comparen los datos de
todos los equipos que trabajaron con diferentes concentraciones del tóxico y se discutirá acerca de
los resultados y de la utilidad, ventajas y desventajas del bioensayo como prueba toxicológica.
Bibliografía:
Dorn, P. B., T. E. Vipond J. P. Salanitro y H. L. Wisniewksi. 1998. Assessment of the acute toxicity of
crude oils in soil using earthworms, microtox and plants. Chemosphere37(5):845-860.
Fragoso, G. C. 2002. Las lombrices de tierra en México: diversidad, distribución y manejo. II
Simposium Internacional y Reunión Nacional Lombricultura y abonosorgánicos.
Ramírez-Romero Patricia, Mendoza-Cantú Ania, 2008. Ensayos toxicológicos para la evaluación de
sustancias químicas en agua y suelo. La experiencia en México. SEMARNAT. Tercera parte:
ensayos en suelo. Ensayo de toxicidad aguda con la lombriz de tierra Eisenia andrei. Cuevas-Diaz
Maria del Carmen, Ferrera- Cerrato Ronald, Roldan-Martin Adriana, Rodriguez-Vazquez Refugio. pp:
209- 224.
Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). 1984. Earthworm, acute toxicity
tests. Guideline for testing of chemicals N° 207 (consultado en abril de 1984). OCDE, París, 9 pp.
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