La actividad se logró a medir gracias al DNS, ya que este compuesto de color amarillo

tiene la propiedad de unirse al producto de reacción glucosa lo que hace que se

forme Ácido 3-amino-5-nitro salicílico que en su turno es de un color rojizoy tiene la
propiedad de absorber a 540nm
Respecto a las proteínas el método Biuret, uantificar proteínas mediante la formación
de un complejo con el cobre y el nitrógeno del enlace peptídico de la cadena de
aminoácidos que conforma a las proteínas, lo que causa que sea susceptible a medición a
540nm
CUESTIONARIO1.
¿A partir de que otra fuente se puede extraer la invertasa?Obtención de la enzima
invertasa a partir de:
-Hongos:oJarabe de Fructosa, existe la presencia de Aspergillus nÍgerIB56 un
microorganismo capaz de producir invertasa en un tiempo de 48h de incubación (Ávila y
González, 2019).
Levadura, conocida como Candida utilis, presenta la invertasa glicosilada de alto peso
molecular en la pared celular, puesto a que tiene alto nivel de secreción de proteínas y
además es capaz de acumular rápidamente la biomasa, como fuentes de mono y
disacáridos (sacarosa, xilosa y maltosa)

2. ¿Qué ocurre si no se eliminan todas las partículas del extracto en la medición de la

absorbancia tanto para azucares reductores como para cuantificar proteínas?Las
partículas deben ser diluidas de manera correcta dado que si no se elimina pueden
dispersar la potencia de haz de luz al atravesar la solución (UNLP., s.f), puesto a que si
existe presencia de cantidades demasiadas grandes o demasiadas pequeñas pueden
originar desviaciones de la ley de Beer. Además,el equipo utilizado es muy sensible si
existe cantidades trazas, y presencia de impurezas puede originar a errores inevitables al
momento de la lectura (Velásquez, 2014). 5.

la diálisis separa moléculas en solución por sus diferentes índices de difusión

a través de una membrana semipermeable, en este caso se utilizó papel celofán
como un previo tratamiento, haciendo de este método mucho más preciso al momento
de separar los contaminantes de la invertasa teniendo en cuenta que la media del valor
según Rodríguez (2013) es de 1.5 de factor de purificación.

La actividad enzimática en teoría debe ser similar entre las distintas pruebas ya que se
define como las moles de sustrato convertidas por unidad de tiempo, lo cual es constante
en todas las corridas del experimento por lo que solo debería haber pequeñas
diferencias debidas principalmente por errores en los métodos de medición tales
como el espectrofotométrico que es sensible a perturbaciones que afectan en
diferente magnitud a los datos obtenidos (Harris & Keshwani, 2009).

la actividad enzimática es directamente proporcional a la concentración de la enzima. Lo

cual se comprueba al analizar la actividad de la β-amilasa a diferentes concentraciones,
si se comparan estos valores obtenidos con cada dilución se observa que las soluciones
más diluidas presentan menor concentración y actividad, lo que hace que las curvas
elaboradas
CUESTIONARIOa)¿Qué ocurre si para la estimación de la actividad de una enzima
las diluciones empleadas están fuera del rango de linealidad concentración de enzima vs
velocidad de reacción?Se puede definir como rango de linealidad al intervalo de
concentraciones dentro del cual podemos medir una muestra problema con un elevado
nivel de incertidumbre. Por lo tanto, si las diluciones empleadas no están acorde al
rango adecuado va a existir un rango de error muy elevado en el cálculo tanto de la
velocidad de reacción como la concentración de enzima(Benderet al., 2012).
b)¿Qué método más sensible para cuantificar proteínas se podría utilizar en lugar del
método de Buiret? Incluya el fundamento del método.Método de Bradford:Se basa en la
unión de un colorante, Comassie Blue G-a las proteínas. El colorante, en solución ácida,
existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para
formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el
colorante libre. Este método es sensible (1-15 μg), simple, rápido, barato y pocas
sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los
detergentes y las soluciones básicas(Lozanoet al., 2005).c)¿Por qué desorbe la enzima del
soporte comercial para utilizarla en forma líquida y no directamente a partir del polvo que
la contiene?La necesidad de un cofactor es importante para activar la enzima con la que
se va a trabajar, estos cofactores pueden sufrir transformaciones químicasnecesarias
ya sea oxidación o reducción para llevar a cabo lacatálisis enzimática(Benderet al.,
2012).De este modo la enzima queda intacta pudiendo llevar a cabo la catálisis
de nuevas reacciones simplemente reemplazando el cofactor modificado por otro
nuevo o devolviendo el cofactor a su estado inicial. A los cofactores que se unen
fuertemente a la enzima se les conoce como grupos prostéticos.Entonces no se desorbe la
enzima a partir del polvo que la contiene mediante una sacarificación previa por el
método enzimático es decir una hidrolisis enzimática(Lozanoet al., 2005).

Cuando la concentración del sustrato es suficientemente altala velocidad no

aumentará aun cuando aumente la concentración del sustrato, según (Plou, 2016)debido
a que todos los sitios estarán ocupados dado que la enzima está a una concentración finitay
por ende el número de centros activos, dando como resultado unaenzima saturada.
Por esta razón, las medidas de actividad enzimática solo son válidas en los primeros
tramos(Battaner, 2014).