BIOLOGIE CELULARA Si Moleculara SEDCOM LIBRIS 2011 1-1

Carmen Elena Constantin Tudor Laurentiu
COTRUTZ COTRUTZ PETREU BADESCU

n colaborare cu
i
Monica Neamfu Cezar RaduI
onescu
Biologie Celularil
ti Molecularil
Editura SEDCOM LIBRIS

lati, 2011
Editor: Petru RADU
Redactor: Alina HUCAI _
Tehnoredactare i concep,ia copertei: Lauren1iu BADESCU
Realizarea tehnica a copertei: loana Irina ZAUS
Descrierea CIP a Bibliotecii Nationale a Romaniei
Biologie celulara i moleculara I Carmen Elena Cotrutz,

Constantin Cotrutz, Tudor Petreu. .... - lai: Sedcom Libris, 2011
Bibliogr.
1.S.B.N.: 978-973-670-419-2
I. Cotrutz, Carmen Elena
II. Cotrutz, Constantin
Ill. Petreu. Tudor
576.3
577.2
Editura SEDCOM LIBRIS este acreditata de Consiliul National

al Cercetarii tiintifice din nvatamantul Superior (C.N.c:s.l.S.) -
reacreditare 2010 (cod C.N.C.S.I.S. - 179). www.cncsis.ro
Copyright © 2011 SEDCOM LIBRIS

Toate drepturile asupra prezentei edi\ii sunt rezervate Editurii Sedcom
Libris, lai. Reproducerea paf\iala sau integrala a textelor, prin orice mijloc,
precum i a graficii copertei, fara acordul scris al Editurii Sedcom Libris, este
interzisa i se va pedepsi conform legislatiei fn vigoare.
Adresa: $os. Moara de Foe nr. 4, cod 700527, lai. Romania

Contact:
Tel.: +40.232.242.877; 234.582; 0742.76.97.72; fax: 0232.233.080
www.editurasedcomlibris.ro; e-mail: editurasedcomlibris@yahoo.com
Cuprins
Prefata, ......................................................................................................... 11
1. lntroducerein biologia celulara §i moleculara ................................. 13
1.1. Originea universului ......................................................................... 15
1.2. Evolutia Terrei 9i apari\ia vietii......................................................... 19
1.2.1. Varstele Terrei .................................................................................. 19
Terra Tn eonul Hadean, aparitia primelor forme organice de viata ............. 20
Eonul Arhean §i prima linie celulara .......................................................... 24
Eonul Proterozoic ...................................................................................... 26
Eonul Fanerozoic ...................................................................................... 27
1.2.2. Concepte i modele experimentale privind aparitia vietii
pe Terra ................................................................................................. 27
1.2.2.1. Concepte .......................................................................................... 28
1.2.2.2. Modele experimentale, modele actuale ........................................ 30
1.2.3. Ce ne spune Religia despre originea vietii? .................................... 41
2. De la citologie la biologia celulara §i moleculara ...................... 45
2.1. Scurt istoric privind descoperirea celulei ........................................47
2.1.1. Teoria celulara ................................................................................. 49
2.1.2. Teoria evolutionista .......................................................................... 51
2.1.3. Legile ereditatii ................................................................................. 53
2.2. Citologia............................................................................................. 53
2.3. Aparitia 9i dezvoltarea biologiei celulare 9 i moleculare ................ 56
3. Organizarea generala a celulelor ................................................. 63
3.1. Proprietatile comune ale celulelor ................................................... 66
3.2. Celulele procariote 9i eucariote .................................................... 67
3.2.1. Forma, dimensiunile i numarul celulelor eucariote ....................... 69
3.2.2. Organizarea morfologica generala a celulelor ................................ 72
3.2.3. Organizarea chimica a celulei ......................................................... 76
3.2.3.1. Compozi\ia moleculara a materiei vii ........................................... 76
3.2.3.2. Apa Tn sistemele biologice............................................................ 79
3.2.3.3. Substan\ele minerale ................................................................... 82
3.2.3.4. Moleculele organice ......................................................................... 84
4. nveli§ul celular ............................................................................ 99
4.1. Membrana celulara (Plasmalema) ................................................ 101
4.1.1. Definirea conceptului de membrana .............................................. 101
4.1.2. Evolutia conceptului de membrana celulara.
Modele de organizare a membranei celulare ......................................... 102
Modele structurale ....................................................................................... 103
4. 1.3. Structura moleculara a membranei ................................................107
4.1.3.1. Lipidele membranare ................................................................. 108
4.1.3.2. Proteinele membranare ................................................................. 116
4.1.3.3. Carbohidra\ii ................................................................................... 121
4.1.4. Functiile membranei celulare..........................................................123
4.2. Glicocalixul. ..................................................................................... 124
Biologie celulara i moleculara
5. Functiile plasmalemei .............................................................129
5.1. Proteine membranare implicatei n schimbul de molecule
i ioni. ............................................................................................... 131
5.1.1. Clasificarea transportului membranar ........................................... 132
5.1.2. Transportul ATP-independent. ........................................................ 135
5.1.2.1. Difuzia simpla prin bistratul lipidic................................................ 135
5.1.2.2. Difuzia simpla prin proteine - ionoforii ....................................... 139
5.1.2.3. Difuzia facilitata de proteine canal ............................................... 140
5.1.2.4. Difuzia facilitata de proteine carau ............................................. 143
5.1.2.5. Aquaporinele................................................................................. 143
5.1.3. Transportul ATP-dependent (activ) ............................................... 149
5.1.3.1. Mecanismul de pompare ionica (transportul activ primar)........... 150
5.1.3.2. Mecanismul de pompare moleculara (transportul activ
secundar) ................................................................................................... 157
5.1.3.3. Translocarea de grup ................................................................... 160
5.1.4. Transportul prin vezicule ...............................................................161
5.1.4.1. Endocitoza.................................................................................... 162
5.1.4.2. Exocitoza ...................................................................................... 169
5.1.4.3. Transcitoza ................................................................................... 170
5.2 Semnalizarea celulara................................................................... 172
5.2.1. Date generale privind semnalizarea celulara ................................172
5.2.2. Modalitati de semnalizare (comunicare) intercelulara
i tipuri de molecule-semnal endogene. Tipuri de reactii de raspuns .... 173
5.2.3. Receptorii: definitie, clasificare......................................................177
5.2.4. Semnalizarea prin hormoni polipeptidici ....................................... 185
5.2.4.1. Calea adenilatciclazei ................................................................... 185
5.2.4.2. Calea fosfolipazei cp ................................................................... 191
5.2.5. Semnalizarea prin molecule-semnal lipofile - hormoni steroizi. .. 194
6. Citoscheletul................................................................................ 199
6.1. Generalitati. Functiile citoscheletului ........................................... 201
6.2. Microfilamentele de actina ........................................................... 202
6.3. Miozinele....................................................................................... 208
6.4. lnteractiunea actina - miozina i fundamentarea moleculara
a motilitatii celulare .............................................................................. 211
6.5. Microtubii. Centrii de organizare ai microtubilor .......................... 214
6.6. Filamentele intermediare.............................................................. 219
7. Specializarile plasmalemei.......................................................... 223
7.1. Specializarile temporare ............................................................... 225
7.2. Specializari permanente .............................................................. 225
7.2.1. ............................................................................... Micro
vilii i stereocilii .......................................................................... 226
Microvilii. .................................................................................................... 226
Stereocilii ................................................................................................... 229
7.2.2. ............................................................................... Cilii
vibratili.......................................................................................... 229
7.3. Specializarile plasmalemei polului bazal ..................................... 234
6
Cuprins
8. Zonele de cuplaj celular §i matricea extracelulara .................. 237

8.1. Clasificarea func1ionala a jonc{iunilor ............................................ 239
8.2. Jonctiunile stranse ......................................................................... 240
8.3. Jonctiunile de ancorare .................................................................. 245
8.3.1'. Jonctiuni cu situsuri de fixare pentru actina ...................................245
8.3.2. Jonc\iuni cu situsuri de fixare pentru filamentele intermediare......249
8.4. Jonctiuni de comunicare (de tip GAP i sinapse chimice) .......... 251
8.5. Matricea extracelulara .................................................................... 254
8.5.1. ................................................................................. Date
generale i functii ............................................................................254
8.5.2. ................................................................................. Com
ponentele matricei extracelulare ....................................................255
8.5.3. ................................................................................. Mem
brana bazala ...................................................................................258
9. Nucleul .........................................................................................263
9.1. Generalitati privind nucleul Tn interfaza ........................................ 265
9.2. Structura nucleului interfazic ...................................................... 266
9.2.1. ................................................................................. fnve
liul nuclear - structura i func\ii ................................................. 266
9.2.2. ................................................................................. Cro
matina nucleara ..............................................................................270
9.2.3. ................................................................................. Nucl
eolii ..................................................................................................272
10. Sinteza §i secretia celulara .................................................. 275
10.1. Date generale privind caile sintezei i secretiei celulare.......... 277
10.2. Biosinteza proteinelor .................................................................. 280
10.2.1. ............................................................................... Gen
eralita\i privind biosinteza proteinelor...........................................280
10.2.2. Etapele biosintezei proteice i evenimente moleculare
implicate ....................................................................................................287
10.2.2.1. Etapa I - activarea presintetica a precursorilor ........................ 289
10.2.2.2. Etapa 11 - lni\ierea .................................................................... 292
10.2.2.3. Etapa Ill - Elongarea ............................................................. 295
10.2.2.4. Etapa IV - Terminalizarea ........................................................ 299
10.3. Reticulul endoplasmatic (RE) ................................................... 302
10.3.1. ............................................................................... Ultra
structura i structura moleculara .................................................. 302
10.3.2. ............................................................................... Func
tiile reticulului endoplasmatic ........................................................ 304
10.3.2.1. Functii specifice RER ................................................................... 304
10.3.2.2. Func\ii specifice REN ................................................................... 311
10.3.2.3. Functii comune RER §i REN ....................................................... 311
10.4. Complexul Golgi (CG) ................................................................. 312
10.4.1. ............................................................................... Stru
ctura, ultrastructura i compozi\ie moleculara ............................. 313
10.4.2. ............................................................................... Func
\iile CG .......................................................................................... 316
11. Mitocondri ile .......................................................................................323
11.1. Morfologia mitocondriilori n microscopia fotonica ........................ 325
11.2. Ultrastructura mitocondriilor ........................................................ 326
11.3. Structura moleculara a mitocondriilor ....................................... 327
11.4. Sinteza ATP sau modelul chemiosmotic (Peter Mitchell) ......... 340
11.5. Citopatiile mitocondriale .............................................................. 342
6
12. Lizozomii .................................................................................... 345

12.1. .................................................................................. Gene
ralitati 9i structura morfologica ................................................... 347
12.2. ............................................................................. Struct
ura moleculara .............................................................................. 349
12.3. ............................................................................. Bioge
neza lizozomilor............................................................................. 350
12.4. ............................................................................. Clasifi
care i;,i functii.................................................................................. 352
12.5. ............................................................................. Uzoz
omii fn patologie ............................................................................ 354
13. Peroxizomii ................................................................................ 361
13.1. Generalitati. Caracteristici morfologice
9i structura moleculara......................................................................... 363
13.2. .................................................................................. Bioge
neza peroxizomilor ..................................................................... 364
13.3. Functiile peroxizomilor ................................................................ 366
13.4. Date de patologie peroxizomala ................................................ 367
14. Ciclul celular........................................................................... 371
14.1. .................................................................................. Gene
ralita1i, definitie, etape ................................................................ 373
14.2. .................................................................................. Orolo
giul de control al ciclului celular ................................................. 374
14.3.lnterfaza ...................................................................................... 378
14.4.Diviziunea celulara...................................................................... 383
14.4.1. ............................................................................. Mitoz
a somatica (ecuationala) ............................................................ 383
14.4.2. ............................................................................. Mitoz
a reductionala - meioza ........................................................... 390
15. Senescenta celulara .....................................................................399
15.1. .................................................................................. Gene
ralitati privind senescenta...........................................................401
15.2.Cauzele senescentei celulare. Diferite tipuri de senescenta ... 401
15.3. Caracteristici morfologice 9i moleculare ale celulelor
senescente ............................................................................................... 407
16. Apoptoza .................................................................................... 413
16.1.Date generale privind moartea celulara programata.
Seurt istoric .......................................................................................... 415
16.2. .................................................................................. Circu
mstante de aparitie ale apoptozei ..............................................418
16.3. .................................................................................. Comp
onentele moleculare ale apoptozei ............................................420
16.3.1. ............................................................................. Tanat
ogenele............................................................................................ 420
16.3.2. ............................................................................. Genel
e supravietuirii............................................................................. 420
16.3.3. ............................................................................. lnduct
ori sau inhibitori ai apoptozei ...................................................... 421
16.4. .................................................................................. Meca
nismele moleculare ale apoptozei .............................................423
Caile de activare ale apoptozei .............................................................. 425
RegIarea mecanismelor apoptozei ......................................................... 426
16.5. Caracteristici morfologice 9i moleculare
ale celulelor apoptotice ........................................................................ 428
Caracteristici morfologice ....................................................................... 428
Caracteristici moleculare ........................................................................ 429
Apoptoza i;;i senescenta celulara ........................................................... 431
17. Celula tumorala ...................................................................... 435
8
PREFAT• A
$tiintele biomedicale contemporane sunt dominate de apor-
tul conceptual i metodologia uneia dintre cele mai noi i moderne
ramuri, biologia celulara §i moleculara. Datorita progreselor spec-
taculoase realizate pana 1n prezent 1n 1ntelegerea mecanismelor
celulare i moleculare, cu largi implicatii medicale, teoretice i apli-
cative, biologia celulara i moleculara a 1nceput sa-i ocupe locul
binemeritat 1n curricula facultatilor cu profil medical i biologic.
Disciplina 1n continua dezvoltare, cu un profund caracter in-
tegrativ i interdisciplinar, este rezultatul unei ndelungate evolutii
1nregistrate 1n studiul celulei atat sub aspect morfologic, functional,
cat i molecular. Ea studiaza structurile functionale i fenomenele
biologice generale, comune tuturor celulelor, celula ideala, unitate
elementara a lumii vii, rezultatul unei 1ndelungate evolutii, cu o or-
dine interna complexa, ce 1i confera capacitatea de cretere, dez-
voltare, reproducere, organizare dinamica aflata 1n relatii de echili-
bru cu mediul 1nconjurator.
Biologia celulara i moleculara s-a conturat ca o disciplina
noua !?i de sine statatoare, mai cu seama 1n ultimii 35 ani, ca ur-
mare a progreselor spectaculoase 1nregistrate 1n studiul celulelor
pe plan metodologic i conceptual !?i 1n urma fuziunii dintre cito-
logie, biochimia celulara, biofizica celulara, fiziologia celulara i
genetica moleculara.
Domeniu esential atat pentru clinicianul zilelor noastre, cat
!?i pentru studentul la medicina, biologia celulara !?i moleculara se
preda 1n facultatile de medicina din 1ntreaga lume, 1n diferite mo-
duri, dar 1n marea majoritate a cazurilor, numarul de ore nu per-
mite prezentarea tuturor informatiilor. De cele mai multe ori, se re-
curge la prezentarea selectiva a acestora, pentru restul indicandu-
se o bibliografie (uneori, destul de greu de procurat fn acest do-
meniu) care 1nsumeaza un numar important de pagini. lata de ce
suntem frecvent 1ntrebati de studentii notri ,,care sunt subiectele
ce trebuie neaparat parcurse din bibliografia indicata? care sunt
mai importante pentru formarea noastra ca viitori practicieni?". Ei
ne sugereaza de fapt ca 1n conditiile actualei curricule medicale,
nu dispun de timp suficient pentru a parcurge nici macar o parte
din bibliografia indicata.
lata de ce, volumul de fata reprezinta 1ncercarea noastra de
a raspunde acestor 1ntrebari i de a oferi studentilor un material
Biologie celulara 9i moleculara
accesibil, cu elementele de biologie celulara 9i moleculara de care

consideram ca va avea nevoie un viitor practician al unei medicini
moderne. Am Tncercat sa subliniem relevanta pentru practica me-
dicala a no{iunilor prezentate prin inserarea la unele capitole a
unor date sumare de patologie celulara 9i moleculara.
O alta Tntrebare frecventa a studentilor la medicina este ,,de
ce trebuie sa Tnvatam despre celule?".
Primul raspuns, eel mai la Tndemana. de altfel. pentru ei
este: pentru a putea face fata cu succes la obiecte precum his-
tologie, biochimie, biofizica, fiziologie, imunologie 9i alter cursuri
din programa facultatilor de medicina, este nevoie de o baza so-
Iida de cuno9tinte de biologie celulara 9i moleculara.
Un raspuns mai profund 9i poate putin mai idealist poate fi
gasit Tn observatia facuta de Virchow Tn urma cu mai bine de 150
ani. Rudolph Virchow, om de 9tiinta german, afirma Tn 1850 ca
,,toate aspectele patologice se datoreaza perturbarii functionarii
normale a celulelor". Pentru un viitor medic, care va lupta Tn per-
manenta cu boala, afirmatia lui Virchow sugereaza ca arena Tn ca-
re se vor desfa9ura aceste adevarate ,,batalii" este localizata la ni-
vel celular. Astazi, majoritatea tratamentelor clinics moderns im-
plica nu numai Tndepartarea chirurgicala a celulelor ,,bolnave", dar
9i modularea mecanismelor moleculare intracelulare sau a comu-
nicarii intercelulare.
Volumul de fata vine dupa 25 de ani de la aparitia primei
editii a cursului litografiat, reprezentand o necesitate impusa de
dezvoltarea impetuoasa a cuno9tintelor Tn acest domeniu 9i reu-
ne9te cunotinte de baza.
Modul de abordare a materialului prezentat tine seama de
noile cunotinte, ipoteze 9i conceptii privind interpretarea structurii
9i functiei celulei Tn termeni moleculari, deoarece, aa dupa cum
afirma G. Palade, ,,biologia celulara a devenit astazi biologie celu-
lara i moleculara".
Textul este completat de o iconografie care, partial, a fost
selectata din colectia personala, Prof. dr. Constantin Cotrutz, date
din articole ce contin rezultatele cercetarilor Tn domeniu i tratate
de specialitate.
Elaborarea acestei lucrari care a necesitat o lunga perioada
de ,,gestatie" (de trei ori mai mult decat pentru un elefant 9i de
cinci ori mai mult decat pentru o balena) este rodul unei munci Tn
10
Prefata
echipa - echipa de la disciplina de biologie celulara §i moleculara

formata §i ndrumata, pana nu demult, de maestrul nostru §i fon-
datorul acestei discipline la U.M.F. la§i, Prof. univ. Dr. Constantin
Cotrutz, care ne-a lasat mult mai bogati n standarde intelectuale
§i profesionale, ne-a deschis U§a unei lumi a elitelor §i ne-a invitat
sa muncim.
Astfel, fiecare capitol a constituit subiectul multor dezbateri
ncat, n final, pot spune ca volumul de fata este rezultatul unei re-
i
dactari colective. Cu toate acestea, trebuie sa subliniez contributia
deosebita, atat pentru continutul §tiintific, cat §i pentru partea de
tehnoredactare, a domnului §ef de Jucrari, dr. ·Tudor Petreu§ §i a
domnului asistent universitar, dr. Laurentiu Badescu, carora tin sa
' '
le multumesc §i pe aceasta cale.
Sper ca cititorii sa fie fascinati de diversitatea, complexi-
tatea §i precizia mecanismelor celulare descrise. Cum am putea
oare ramane indiferentii n fata preciziei, ingeniozitatii §i inteligentei
de care fac dovada celulele?
De asemenea, doresc ca cititorii, studenti n medicina, bio-
logie §i bioinginerie, carora Ii se adreseaza,i n primul rand, volu-
mul, parcurgandu-1, sa aiba sentimentul reconfortant de a nu fi
sosit prea tarziui n cursa catre cunoa§terea celulei: ramani nca
numeroase domenii de explorat §i numeroase mistere de elucidat.
Totodata tin sa multumesc anticipat tuturor celor care vor
avea amabilitatea de a ne comunica observatiile lor, contribuind
astfel lai
mbunatatirea unei viitoare editii, deoarece, a§a cum spu-
nea scriitorul chinez Tai f ung (sec. Xi ii): ,,daca ar fi sa a§tept per-
fecfiunea cartea nu ar fi niciodata terminata".
Prof. univ. dr. Carmen Elena COTRUTZ
11
Introducere
in biologia celulara fi moleculara
,,... Nu §tiu cum ma vede lumea,

dar eu rnsumi ma vad doar ca
pe un copif care se joaca pe
malul marii, rncercand sa ga-
seasca din cand 'in cand cate O
pietricica mal neteda sau o scoi-
ca mai frumoasa decat celelalte,
rn timp ce imensul ocean al ade-
varului se afla nedescoperit rn
rntregime, rnaintea Jui..."
(Sir Isaac Newton)

ldeea unuiinceput pentru tot ce exista are conotatii reli-
gioase §i §tiintifice importante. Tntrebarea obsesiva a oricar i civi-
lizatii ,,Care ne sunt originile?" este una esentiala pentru specia
umana, pentru ca, daca nu §tim de unde provenim, nu §tim nici
cine suntem.
Vorbind despre apari\ia vietii, trebuie precizat,i n primul
rand, locul unde s-a produs: mediu acvatic, pamant, aer, undeva
n Univers. Tn aceasta situatie, se nasc unelei
i ntrebari: cum, de ce
'
9i cand a aparut Universul? Cat de mare este? Este infinit sau are
limite §i, n acest ultim caz, ce forma are?
Figura 1: Reprezentarea fenomenu/ui Big Bang §i a consecinfei sale,

expansiunea Universului
Astazi, oamenii de §tiinta au dovezi ca Universul a avut un

nceput. Teoria Big Bang-ului sau a marii explozii cosmice (fig. 1)
i
poate fi consideratai
nceputul creatiei, dar ce anume a provocat
momentul creatiei ramaneinca un mister.
'
Termenul de Bing Bang a fost introdus, pentru prima oara,
i literatura de specialitate de catre astronomul
n i cosmologul bri-
tanic Fred Hoyle, dar nu ca o convingere tiintifica, ci sub forma
unui termen derogatoriu, utilizati n timpul unor emisiuni radioi n care
luain deradere lucrarile fizicianului rus George Gamow. De fapt,
Fred Hoyle era un sustinator fervent al teoriei ,,echilibrului",
conform careia Universul era etern, farai nceput i fara sfarit.
Teoria Big Bang-ului este, astfel, initiata de o descoperire
ntamplatoare a lui Albert Einstein: teoria relativitatii extinse a avut
i
ca i consecintai ntelegerea faptului ca Universul se aflai n continua
expansiune, avand, aadar, uni nceput. Einstein a refuzat
nsa acceptarea unui Univers dinamic.
i
Preotul catolic, astronomul i fizicianul belgian George Le-
ma tre a propus,i n 1920, teoria atomului primitiv, plecand de la
ideea ca daca Universul se aflai n plin proces de expansiune,
atunci, la un moment dat, a fost un punct infinitezimal. Lemaitre a
studiat teoriile lui Einsteinin anii '20 i a propus o teorie revoluti-
onara, sustinand ca Universul nu este static, ci n plina expansiune.
Teoria a fost confirmatai n 1925 de astronomul american
Edwin Hubble, eel care a ,,redimensionat" conceptul de Univers,
de la dimensiunile Caii Lactee la un gigant cu miliarde de galaxii i
cu un diametru de miliarde de ani lumina.
Tn 1929, Hubble a demonstrat ca majoritatea galaxiilor se
ndeparteaza de noi, precum i unele de altele,i
i n consecinta,
Universul aflandu-sei n plina expansiune. Deoarece nu exista
dovada tiintifica a unui nceput exploziv al Universului, au aparut
teorii complementare, cum a fost teoria ,,echilibrului" postulata de
Fred Hoyle. Teoria sa a fost conceputa ca parte componenta a
teoriei originii elementelor precum azotul, carbonul sau alte o suta
de elemente din tabelul periodic. La temperaturi extreme, atomii
de hidrogen fuzioneaza pentru a forma heliu, iar atomii de heliu
fuzioneaza pentru a forma atomi mai grei.
Fred Hoyle credea ca formarea noilor elemente prin procesul
de nucleosinteza ar fi avut loci n interiorul extrem de fierbinte al unor
stele. Nucleosinteza a ramas singura parte veridica a acestei teorii,
fiind inclusa, ulterior, n completarea teoriei Big Bang-ului.
Hoyle avea un adversar puternici n persoana fizicianului rus
George Gamow, un sustinator al teoriei atomului primitiv al lui Le-
maitre. Gamow a sugerat ca heliul, hidrogenul i alte elemente au
16
lntroducerei
n biologia celulara i moleculara
fost generatei n primele minute de foe ale Universului. Colabo-

rarea cu studentul Ralph Alpher a determinat generarea ecuatiilor
referitoare la caldura aleatorie detectabila a creatiei. George Ga-
mow i studentul sau au adusi n discutie o problema simpla: daca
Big Bang-ui avea, initial, temperaturi atat de ridicate, atunci, unda
de oc, ecoul acestui Big Bang, nu s-ar fi racit pana acum. A adar,
energia restanta ar putea fi masurata.
Dupa 20 de ani, aceasta radiatie reziduala de fond a fost
intuita de Robert Dicke, Dave Wilkinson i Peter Roll, de la Uni-
versitatea Princeton. Dei au construit un deca-radiometru, nu au
reuit sa obtina rezultate palpabile. Aceste rezultate au fost desco-
perite, fara legatura cu experimentele referitoare la Big Bang, de
catre Bob Wilson i Arno Penzias, n Holmdel, New Jersey, cu aju-
torul uriaului radiotelescop Bell.
Puse cap la cap, datele au descoperit ceea ce intuisera
predecesorii, Gamow, Alpher i Lemaitre: Universul nu este etern,
el are uni nceput i un sfarit. Teoria Big Bang-ului a fost com-
pletata cu teoria nucleosintezei (Hoyle), dar este departe de a fi
perfecta. Ea nu explica uniformitatea temperaturilori n Univers.
Lai
nceputul anilor '80, Alan Guth a venit cu ideea ca Uni-
versul provine dintr-un volum foarte mic, s-a extins cu o viteza
superluminica i a conservat temperatura initiala - teoria inflatiei.
fn primele momente ale creatiei, se crede ca'natura era domin'ata
de patru forte care includeau gravitatia i ele.9tromagnetismul i
care erau combinatei ntr-o singura superforta. In timpul Big Bang-
lui, aceasta superforta s-ar fi divizat n cele patru forte cunoscute.
lnsa,inainte deimpartire, atunci cand Universul era incredibil de
mic, legile fizicii, dupa Einstein, inclusiv aceea conform careia vi-
teza luminii este cea maximala, nu se aplicaui nca. Probabii ca,in
acel moment, s-ai ntamplat ceva care a facut ca Universul sa se
extinda cu viteza superluminica. Atat de repede,i ncat a blocat,i
n
interior, toata uniformitatea,i
n momentuli n care Universul era
nca mic.
i
Nu tim exact cand a avut loc fenomenul de inflatie. Gel mai
probabil, a avut loc atunci cand gravitatia s-a desprins de celelalte
trei forte, dar la acel moment, celelalte trei forte formaui nca o
structura unitara. Aceasta hiper-expansiune, daca a avut loc, a
blocat o uniformitate interna a temperaturii.
17
Biologie celulara !?i moleculara
Este posibil ca punerea 1n functiune a ,,Acceleratorului de

particule" conceput !?i construit recent (2008) de oameni de tiinta
din 1ntreaga lume sa ofere raspunsuri credibile 1naceasta problema.
Actualmente, avem un model al evenimentelor care au ur-
mat 1ndeaproape Big Bang-ului. La mai putin de o miliardime de
secunda dupa Big Bang, apare o himera sferica infinit mai mica
decat dimensiunile unui atom. Acesta este Universul, inimaginabil
de mic !?i inimaginabil de fierbinte.i n aceasta sfera clocotitoare,
cele patru forte cunoscute 1n natura: gravita{ia, electromagne-
tismul, alaturi de fortele nucleare tari !?i slabe se combina 1ntr-o
superforta. Gravita{ia s-a separat subit de aceasta superforta, pe
masura expansiunii Universului.
n timp ce Universul s-a extins, el s-a !?i racit, emitand un
i
front energetic, care a alimentat inflatia Universului, a!?a cum a
sugerat Alan Guth. lnflatia a blocat uniformitatea Universului, a!?a
cum a aratat satelitul WMAP, lansat de NASA, 1n 2003. Cand- Uni-
versul avea mai putin de o secunda varsta, superforta s-a separat
1n fortele naturale cunoscute.
'
Cam la trei minute dupa Big Bang, temperatura Universului
scazuse la circa 540 milioane grade Celsius, o temperatura destul
de scazuta pentru a permite formarea nucleilor atomici. Initial, s-a
format hidrogenul. Unii atomi de hidrogen au fuzionat pentru a
forma heliul, a!?a cum propusesera Gamow !?i Alpher.
Cu 380.000 de ani mai tarziu, lumina a strabatut din 1ntu-
neric. Frontul de radia{ii regasit de Penzias i Wilson aparuse 1n
acel moment. La un miliard de ani dupa Big Bang, au 1nceput sa
se formeze stelele. Au produs elementele mai grele, precum azo-
tul, oxigenul sau carbonul, a!?a cum a prezis Hoyle. Cam dupa no-
ua miliarde de ani, materia !?i gravita{ia s-au combinat pentru a
forma o stea tipica, perfecta. Presiunea a produs caldura 1nmiezul
acesteia, iar caldura a determinat fuziunea termonucleara !?i s-a
nascut o stea. Efluxul stelar a eliminat gazele reziduale, 1n urma
ramanand un disc de praf circumstelar care s-a putut agrega, for-
mand planete !?i luni.
Unul dintre aceste ghemuri de praf stelar, dupa lungi peri-
oade de bombardament cu reziduuri solare, a ajuns la o tempe-
ratura suficienta pentru a permite bioxidului de carbon !?i apei sa
formeze atmosfera. Apa lichida s-a acumulat la suprafata planetei.
n adancuri, misterioase reactii chimice au dat na!?tere vietii.
i
18
lntroducere Tn biologia celulara i moleculara
La 13,7 miliarde de ani dupa Big Bang, Universul nostru are

acum un diametru de 156 miliarde de ani lumina. Cerul e plin de
stele, Sistemul nostru Solar are aproximativ opt planete. A treia
planeta de la Soare este plina de forme de viata carbonice. Unele
dintre acestea realizeaza ca reprezinta puncte infinitezimale Tn
marea schema organizatorica a Universului.
Estimarea tiintifica acceptata a varstei Terrei este de 4,55
miliarde ani. Cele mai vechi roci sedimentare cunoscute, care re-
prezinta formatiuni hadeene regasite Tn insula Akilia (Groenlanda
de Vest) nu au Tnsa mai mult de 3.85 miliarde de ani. Cei mai vechi
stromatoliti fosilizati (agregate bacteriene formate din cianobacterii
- organisme fotosintetice) au o varsta de 3,5 miliarde de ani. Se
pare ca marele bombardament asteroidic asupra Lunii terestre (Tn
urma cu 3,9 miliarde ani), evidentiat de misiunile Apollo) a afectat
Tntregul sistem solar intern (Mercur, Venus, Terra, Marte), sterili-
zand suprafata Terrei, inclusiv sistemele hidrotermale submarine,
unde se regasesc astazi organismele extremofile.
Daca via(a a aparut pe Terra, acest eveniment a avut loc
rntr-o perioada de circa un miliard de ani de la formarea planetei,
rntre 4,55 - 3,5 miliarde de ani varsta terestra (eel mai probabil, Tn
intervalul 3,9 - 3,5 miliarde ani Tn urma).
1.2.1. '7ARSTELE TERREi

Seara temporala care definete diferitele varste ale Terrei
cuprinde trepte taxonomice ilustrate Tn tabelul 1. Unitatea tempo-
rala maximala este super-eonul, alcatuit din eoni, subdivizati Tn
ere, perioade, epoci i varste.
19
Tabet 1: Sistemul geocrono/ogic

Perioade de timp Explicatii
Tn numar de patru (Hadean, Arhean, Pro-
EON terozoic 9i Fanerozoic), jumatate de mili-
ard de ani fiecare
l n numar de 12 (cateva sute de milioane
ERA
de ani fiecare)
PERIOADA, Zeci de milioane de ani fiecare
EPOCA
VARSTA Milioane de ani
Actualmente, ne regasim 1n eonul Fanerozoic, era Ceno-

zoica, perioada Cuaternara, epoca Holocen, varsta Atlantica.
TERRAiN EONUL HADEAN, APARITIA PRIMELOR FORME

ORGANICE DE VIATA
•
lstoria Terrei este strans legata de cea a Sistemului Solar,
care s-a format dintr-un nor interstelar de gaze 9i praf, numit nebu-
loasa solara, care se rotea 1n jurul centrului galactic al Caii Lactee.
Nebuloasa Solara era formata din hidrogen 9i heliu (restante Tn
urma Big Bang-ului) 9i Tmbogatita cu elemente grele, rezultate din
supernove (explozii stelare majore). Tn urma cu 4,6 miliarde ani,
nebuloasa solara a 1nceput sa se contracte, posibil din cauza unei
unde de lac provenita de la o supernova apropiata. Aceasta unda
de 9oc ar fi produs rotatia nebuloasei care a obtinut un moment
cinetic. Pe masura accelerarii nebuloasei, rota,ia, gravita,ia 9i
inertia au determinat aplatizarea acesteia, cu formarea unui disc
protoplanetar, orientat perpendicular pe axul rotatiei. Majoritatea
masei s-a concentrat 1n centru 9i a 1nceput sa sufere un proces de
Tncalzire, care 1nsa nu era uniforma, ci prezenta mici perturbatii
care au putut da na9tere protoplanetelor, care continuau sa se
roteasca 1njurul centrului ini,ial. Centrul discului a continuat sa se
1ncalzeasca atat de mult, Tncat a favorizat reactiile de fuziune
'
nucleara, cu transformarea hidrogenului Tn heliu 9i cu aparitia sfe-
rei solare. Reziduurile nebuloasei care au scapat gravitatiei solare
s-au Tndreptat spre discurile protoplanetare, devenite, Tntre timp,
protoplanete, a caror masa a crescut.
20
lntroducerei
La 150 milioane de km de Soare, o astfel de aglomerare a

format ceea ce este astazi Terra. Formarea Pamantului a mai du-
rat 10 - 20 milioane de ani, perioadai n care masa a crescut. Van- tul
solar al stelei nou formate a maturat resturile de materie care nu
s-au agregat la noile planete ale sistemului n formare. lmpactul
nou-formatei planete cu resturile nebuloasei (unele cu diametre de
peste 500 km) a produs un fenomen dei ncalzire intensa, iar Terra
ai
nceput sa se ,,coaca" dinspre interior. Elementele siderofile (Au,
Co, Fe, Ir, Mn, Mo, Ni, Os, Pd, Pt, Re, Rh, Ru), metale tranzi-
tionale de mare densitate, dar, n special, fierul i nichelul s-au to-
pit i s-au scufundat spre miez, producand caldura asemenea unui
furnal imens. Formarea miezului terestru, cunoscuta ca i ,,Marea
catastrofa a fierului", a avut loci n primii 40 milioane de ani de
existenta ai planetei noastre i ne-a influentat definitiv viitorul.
Aceasta deoarece s-au separat o scoarta primitiva i un miez me-
talic, care a determinat structura stratificata a Terrei, precum i
constituirea campului magnetic terestru.
Atmosfera terestra era formata dintr-un nor de silica (dioxid
de siliciu), care a condensat, ulterior, dand natere rocilor solide
de la suprafata.in absenta campului magnetic, Terra ar fi un pu-
stiu lipsit de atmosfera i de viata. Campul magnetic terestru rea-
lizeaza devierea vantului solar i ne conserva atmosfera. Dar chiar
i n prezenta unui camp magnetic, violenta i haosul au continuat
sa domine planeta Pamant. Deasupra miezului de fier, scoarta de
roci se topea formand vulcani care au erupt la suprafata, aruncand
gaze i lava.
La aproximativ 50 de milioane de ani de la formarea Terrei,
coliziunile cu alte corpuri cereti au continuat. Una dintre aceste
coliziuni avea sa influenteze definitiv soarta planetei. Un obiect de
dimensiunea planetei Marte a lovit Terra, care avea deja 80% din
dimensiunea actuala. lmpactul exploziv a topit scoarta ambelor
planete, iar cele doua au fuzionat, formand o Terra mai mare, care
avea acum o axai nclinata la 23,5 grade. 0 parte dintre reziduurile
topite care nu s-au amestecat s-au reunit pentru a forma Luna,
care are o varsta de aproximativ 4,527 miliarde de ani i o den-
sitate similara scoartei terestre (fara miez metalic). Prezenta Lunii
(generatoare, actualmente, de maree) i nclinarea axei terestre
(responsabila de prezenta actuala a anotimpurilor) sunt doua eve-
nimente crucialein favorizarea aparitiei vietii pe Terra.
21
Dupa impactul gigantic care a creat Luna, Terra s-a racit re-
lativ repede, iar Tn circa 150 milioane de ani, a aparut o scoarta
solida de compozitie bazaltica. Structura interna a pamantului cu-
prinde un nucleu (Fe i Ni, la interior), mantaua (zona de tranzitie)
i scoarta. Tn timpul eonului Arhean (3 miliarde de anii n urma),
mantaua terestra avea o temperatura de circa 1.600°C, iar volumul
de material topit era mult mai mare decat azi.
O a doua atmosfera avea sa se formeze, pe baza vaporilor
care strabateau scoar1a terestra i a altor gaze eliberate din vul-
cani. Acetia recicleaza materialul provenit din rocile topite la ni-
velul mantalei terestre, inclusiv apa. Dar apa nu este un element
preexistent. Originea ei pare a fi n cometele cu miez Tnghetat i Tn
asteroizii care provin din centura externa situatai ntre Marte i
Jupiter (i nu din centura Kuiper, Tn afara Sistemului Solar). Se
pare, Tnsa, ca cea mai mare parte a apei pe Terra provine din im-
pactul protoplanetelor mici, obiecte cosmice comparabile cu lunile
Tnghetate ale planetelor externe (numite, de asemenea, ,,giganti
gazo i" - Jupiter, Saturn, Uranus, Neptun). lmpactul acestor pro-
toplanete au Tmbogatit planetele interne (Mercur, Venus, Terra,
Marte) cu apa, bioxid de carbon, metan, amoniac, azot !,?i alte sub-
stante volatile.
'
Pe masura racirii planetei, din emanatiile vulcanice gazoase
i vapori, s-au format nori, au aparut ploile care au dus la formarea
oceanelor. Formarea oceanelor a Tnceput cu aproximativ 4,2 mili-
arde de ani Tn urma. Morse !,?i MacKenzie au sugerat ca oceanele
ar fi putut sa apara cam la 200 de milioane de ani de la formarea
Terrei, Tn plin eon Hadean, chiar i la temperaturi de circa 230°C
(Tntr-un mediu reducator !,?i la un pH care a crescut repede de la
5,8 spre pH-ul neutru de 7), datorita unei presiuni crescute a C02.
Cu toate acestea, Tn eonul Hadean, mediul nu era propice evo-
lutiei vietii, datorita impacturilor repetate cu asteroizii de mari di-
mensiuni care puteau vaporiza oceanele Tn cateva luni de la im-
pact. Vaporii degajati (apa !,?i roca) au format nori la mare alti-
tudine, nori care Tnve'leau complet planeta. Tn circa 3000 de ani de
la impact, ploile au redus patura de nori i au restaurat oceanele.
Apar primele macromolecule organice i primele forme de via{a.
Rezumatul eonului Hadean se regase!_?te Tn tabelul 2.
22
lntroducerei
n biologia celulara !?i moleculara
Tabel 2: Eonul Hadean (mai mutt de 3, 8 miliarde ani rn urma)

In urma cu Evenimente
Terra se formeaza prin aglomerarea resturilor
4,6 miliarde ani
nebuloasei solare, orbitand n iurul Soarelui.
Coliziunea cu planeta ipotetica Theia, cu
producerea de fragmente care au intrat n
coalescenta pentru a forma Luna;i ncli-
4,5 miliarde ani narea axei terestre cu 23,5 grade. Atractia
gravitationala a Lunii stabilizeaza axa de
rotatie, favorizand aparitia condi\iilor priel-
nice pentru aparitia vietii.
Suprafata Terrei se race!?te !?i formeaza o
scoarta solida. Se formeaza oceanele !?i a
doua atmosfera. Hidrocarburile aromatice
policiclice (PAH) !?i produ!?ii cu Fe-S au re-
4, 1 miliarde ani
prezentat, probabil, precursori ai polime-
rilor formati din baze azotate (lumea ARN
- acid ribonucleic). Apar primele macro-
molecule orQanice.
Apar primele forme de viata, posibil pe ba-
za moleculelor autoreplicative de ARN.
Replicarea ARN presupune energie, spa-
tiu !?i ,,caramizi" ale vietii - aminoacizi, glu-
cide, lipide. Moleculele mici se autoselec-
4,5 - 3,5 teazai n functie de capacitatea de a par-
miliarde ani ticipa la procesele replicative (selectie na-
turala - darwinism la nivel molecular). Mo-
leculele de AON preiau rolul de replicator;
se dezvolta genoame arhaice care sunt
protejate de protomembrane autoasamblate.
Formarea protocelulelor.
Ultimul Mare Bombardament cu Asteroizi.
Planetele interne sunt lovite de asteroizi. Unii
3,9 miliarde ani microbi supravietuiesci n izvoarele hidroter-
male subterane. Posibil ca elementele vievi
sa fi fost aduse de impactul cu un meteor.
De la Hadean Apar celule similare procariotelor. Sunt or-
la Arhean Qanisme chemoautotrofe - utilizeaza C02
23
In urma cu Evenimente
3,9 - 2,5 ca sursa de carbon i oxideaza materiale
miliarde ani anorganice pentru a extrage energie. Ulte-
rior, procariotele dezvolta glicoliza, elibe-
rand energia din glucoza i stocand-o 1n
ATP. Procesul este valabil i astazi, Tn toa-
te celulele.
EONUL ARHEAN $1 PRIMA LINIE CELULARA

La Tnceputul eonului Arhean, Terra era deja acoperita de
oceane. Noua atmosfera continea C02, azot i cantitati mici din
alte gaze. Cum Tn acea perioada, Soarele emitea numai 70% din
energia actuala, acumularile masive de gaze cu efect de sera (bi-
oxid de carbon, metan) au Tmpiedicat Tnghetarea apei (ipoteza Sa-
gan-Mullen, 1972). Activitatea vulcanica era intensa, iar Tn absenta
stratului de ozon, radiatiile ultraviolete dominau atmosfera.
Eonii Hadean i Arhean sunt definiti de disparitia primei
scoarte terestre fie prin fenomene de convectie la nivelul mantalei,
fie ca urmare a ultimului mare bombardament cu asteroizi. Prima
crusta era una bazaltica, similara celei oceanice din zilele noastre.
Primele segmente mai mari de scoarta continentala, rezultata din
diferentierea unor componente uoare au aparut la finele eonului
Hadean (4 miliarde de ani Tn urma). Ramaitele acestor continente
mici se numesc cratoni i reprezinta punctul de plecare pentru
continentele actuale.
Este posibil ca, din cauza formarii i distrugerii repetate a
oceanelor, prin impacturile repetate cu asteroizi de mari dimen-
siuni (Tn eonul Hadean), viata sa ti aparut i sa ti disparut de mai
multe ori.
n chimia energetica a Terrei primitive, o specie moleculara
i
a obtinut capacitatea de a se auto-copia - un replicator (mai exact,
a sustinut reactiile chimice care au produs fenomenul de copiere,
adica au catalizat propria replicare). Replicarea nu a fast mereu
perfecta, aparand variante ale moleculei initiale, iar selectia s-a
realizat prin aplicarea selectiei naturale (evolutionism, Charles
Darwin) la nivel molecular.
Natura chimica a primului replicator biologic nu este cu-
noscuta, avand 1n vedere raspandirea replicatorului actual, mo-
24
lntroducerei
n biologia celulara i;,i moleculara
lecula de AON. S-au propus multe modele de replicatori, care au

inclus proteine, acizi nucleici, fosfolipide, cristale i;,i chiar sisteme
cuantice, dar niciunul nu este confirmat la ora actuala. Conceptul
oarecum acceptat astazi sustine ca energia extrem de importanta
rezultata din eruptiile vulcanice, fulgere sau radiatii ultraviolete ar fi
putut cataliza reac\ii chimice de generare a unor compui;,i com-
pleci;,i plecand de la compui;,i simpli (metan, amoniac, hidrogen,
apa).
Tntre compu!jii nou sintetizati, s-au regasit structuri organice
simple, baze nucleotidice i;,i aminoacizi, recunoscute ca fiind ele-
mentele de baza ale lumii vii. Pe masura acumularii i;,i concentrarii
acestei ,,supe organice", moleculele nou formate aui nceput sa
interac\ioneze. Este posibil ca argilele sa fi reprezentat un suport
pentru dezvoltarea unor molecule mai complexe. Unele molecule
erau capabile de a cataliza (accelera) reac\ii chimice variate.
Reactiile au continuat panai n momentuli n care s-a selectat i;,i
stabilizat un replicator. Primul replicator stabil se pare ca a fost
reprezentat de moleculele de ARN, alaturi de alte molecule care
au catalizat reac\iile de autoreplicare. ARN are capacitatea de a
stoca informatia genetica i,i n acelai;,i timp, de a cataliza reactii
de replicare.
Ulterior, AON a preluat rolul de stocare al ARN, iar protein-
enzimele au preluat rolul catalitic, lasand ARN-ului rolul de transfer
al informatiei genetice, de sinteza a proteinelor i de reglare a
acestor procese. Apoi, au aparut membranele celulare formate
dintr-un bistrat fosfolipidic, tot prin autoasamblarea unor specii li-
pidice. Este posibil ca dezvoltarea protocelulelor sa fi avut loc la
nivelul izvoarelor hidrotermale submarine sau chiari n rocile pro-
funde din scoarta terestra. Se crede ca numai un singur tip de linie
celulara a supravietuit, mai ales ca arborele filogenetic cunoscut
sugereaza un ancestor comun, numit astazi - celula ancestrala.
Celula ancestrala, precursorul comun al tuturor formelor de
viata celulara din prezent, a existati n eonul Arhean, cu circa 3,5
miliarde de ani n urma. Era, probabil, o celula procariota, fara nucleu
sau organite intracelulare cu membrana proprie, dar care con\inea
ribozomi i;,i era acoperita de o protomembrana. Tabelul 3 ilustreaza
evolutia evenimentelor legate de formele vii din eonul Arhean.
25
Tabet 3: Eonul Arhean (3,8 - 2,5 miliarde de ani rn urma)

In urma cu: Evenimente
Existenta celulei ancestrale, divizarea Tn
arheobacterii i bacterii. Bacteriile dezvolta
primul sistem primitiv de fotosinteza care
3,8 miliarde ani nu produce oxigen. Aceste organisme ge-
nereaza ATP, prin utilizarea unui gradient
de protoni, mecanism existent astazi la ni-
veiul mitocondriilor.
Evolueaza cianobacteriile fotosintetice, ca-
re utilizeaza apa ca agent reducator (donor
de electroni), generand oxigen ca produs
de reactie. Initial, oxigenul a oxidat fierul
din oceane, producand minereuri de fier.
Concentratia de oxigen atmosferic crete i
3 miliarde ani
devine toxic pentru majoritatea speciilor
bacteriene. Luna este Tnca foarte apropiata
de Terra, generand valuri mareice de 300 m
Tnaltime. Terra este strabatuta de uragane
violente. Toate aceste ,,catastrofe" stimu-
leaza procesele evolutive.
EONUL PROTEROZOIC
Eonul Proterozoic, cu o durata extinsa Tntre 2,5 miliarde de
ani pana la 543 milioane de ani Tn urma, este caracterizat de
extinderea cratonilor i formarea continentelor. Oxigenul a aparut
Tn atmosfera, iar procariotele au evoluat spre eucariote §i forme
multicelulare. Se remarca prezenta unor ere glaciare, precum Cri-
ogenianul care au dus speciile existente aproape de extinctie. Du-
pa Criogenian, formele de viata au evoluat §i proliferat rapid, fauna
din Ediacaran reprezentand preludiul exploziei biologice din Cam-
brian. Evenimentele din eonul Proterozoic sunt subliniate Tn tabelul 4.
26
lntroducerei
Tabel 4: Eonul Proterozoic (2,5 miliarde - 542 milioane de ani rn urma)

In urm cu: Evenimente
Apar celulele eucariote, ce contin organite
cu membrana proprie i diferite functii. Deri-
1,85 miliarde ani
va probabil, din procariote care se fagoci-
teaza reciproc.
Apare reproducerea sexuata, ceea ce acce-
1,2 miliarde ani lereaza viteza evolutiei. Evolutia organisme-
lor multicelulare formeaza colonii cu o com-
plexitate limitata.
850 - 630 Criogenian, glaciatie globala, biodiversitatea
milioane ani se reduce.
Fauna din perioada Ediacaran este prima
formata din organisme multicelulare com-
plexe. Apar multe tipuri de animale, rezi-
580 - 543 duuri fosilei
n timpul ,,exploziei" biologice din
milioane ani Cambrian. Cea mai mare parte a oxigenului
acumulati n atmosfera formeaza stratul de
ozon, care blocheaza radiatiile'
ultraviolete,
ceea ce permite colonizarea uscatului.
560 milioane ani Apar primii fungi.
EONUL FANEROZOIC
Acest eon seintinde de la 543 milioane de ani n urma pana i n
prezent i este caracterizat de prezenta formelor de viata multi-
celulara care lasa urme fosile. Eonul Fanerozoic este mpartit n trei
ere (Paleozoic, Mezozoic i Cenozoic) separate de extinctii n masa.
1.2.2.
CONCEPTE $1 MODELE EXPERIMENTALE
PRIVIND APARfflA VIETII PE TERRA
Progresele tiintifice remarcabile din ultimii 80 de ani fac

posibila explicarea - argumentata pana la un punct - aparitiei pri-
mei structuri viabile - celula ancestrala -, precum i evolutia ace-
27
steia 1n timp, pana la impresionanta varietate de forme care popu-

leaza astazi planeta Pamant.
Actualmente, exista doua curente referitoare la originea vie-
tii pe Terra. Un curent sugereaza ca viata provine din spatiul extra-
terestru (teoria panspermieij , 1n timp ce altii sustin ca a aparut, 1n
mod spontan, pe Pamant, din materia nevie ( teoria generafiei
spontane - abiogeneza). Cu toate acestea, ambele curente recu-
nosc mecanisme initiale comune.
1.2.2.1. CONCEPTE
1.2.2. 1.1. Abiogeneza sau teoria generafiei spontane
Pana 1n secolul XIX, oamenii considerau ca formele vii
provin prin generare spontana, plecand de la materia nevie.I n
plus, teoria generatiei spontane se completa cu teoria hetero-
genezei, conform careia formele de viata provin din alte forme
complementare (de exemplu - albinele provin din flori). Notiunea
clasica de abiogeneza, cunoscuta, 1n prezent, ca teoria generafiei
spontane, sustinea ca organismele vii, complexe, provin din ma-
teria organica aflata 1n putrefactie (observatiile lui Aristotel).
n secolul XVII, Robert Hooke (1665) sau Anton van Leeu-
I
wenhoek publicau primele desene cu imagine ale unor microor-
ganisme, observate la un microscop, probabil, protozoare i bac-
terii. Prima dovada credibila 1mpotriva generatiei spontane a fost
adusa de Francesco Redi (1668) care a demonstrat ca larvele nu
apar 1n carnea protejata de depunerea oualor de catre mute. Te-
oria generatiei spontane disparea i aparea teoria biogenezei,
conform careia orice forma de viata provenea dintr-una preexis-
tenta. n 1768, abatele Lazarro Spllanzani demonstra ca microbii
prezenti 1n aer puteau fi distrui prin fierbere, iar 1n 1861, Louis
Pasteur demonstra ca bacteriile sau fungii nu apar spontan pe
medii de cultura sterile. Astfel, la mijlocul secolului XIX, teoria cla-
sica a generatiei spontane era complet abandonata.
n 1924, teoria generatiei spontane a fost reluata i teore-
I
tizata magistral de savatul rus Alexandr Oparin, care a sugerat, 1n
cartea sa The Origin of Life, ca oxigenul atmosferic 1mpiedica sin-
teza unor structuri elementare ale vietii, iar ,,generarea spontana a
vietii'' nu este posibila 1n conditiile actuale. Oparin a introdus con-
28
ceptul de ,,supa primordiala" care s-ar putea forma din molecule

organice, Tntr-o atmosfera saraca Tn oxigen, sub actiunea radia-
tiilor solare. Moleculele organice, sustinea el, s-ar conglomera Tn
coacervate care pot crete prin fuziune i se pot reproduce prin
fisiune; aceste structuri ar avea un metabolism primitiv Tn care
factorii care sustin integritatea coacervatului rezista, iar cei care nu
participa sunt eliminati. DEX subliniaza ca un coacervat este o
formatiune speciala gelatinoasa macromoleculara, Tn stare coloi-
dala, nascuta din amestecul solutiilor de albuminoide Tn compui
organici asemanatori, reprezentand prima faza de organizare a
materiei vii (din latinul coacervatus = ,,gramadi.t"). n aceeai peri-
oada, savantul britanic JBS Haldane sugera ca oceanele terestre
prebiotice au format o supa diluata i fierbinte 1n care s-ar fi putut
forma compu ii organici. lpoteza a fast numita biopoeza i repre-
zinta procesul de formare a materiei vii din molecule nevii auto-
replicative.
1.2.2.1.2. Panspermia sau originea cosmica a viefii

Panspermia (1nsamantarea omniprezenta) reprezinta o ipo-
teza asupra aparitiei vietii pe Pamant, conform careia formele de
viata din Univers se pot raspandi prin intermediul meteoritilor,
asteroizilor sau planetoizilor. Panspermia propune ideea ca unele
forme simple de viata pot supravietui 1n spatiul extraterestru, 1n
resturile unor coliziuni planetare. Unele specii bacteriene pot cala-
tori 1n spatiul interplanetar, 1n stare dormanta, revenind la activitate
atunci cand conditiile externe o permit. Practic, panspermia nu se
refera la originea extraterestra a vietii, ci la modul ei de raspandire.
Prima atestare documentara a acestui termen dateaza din
secolul V 1.e.n. i apartine filosofului grec pre-socratic, Anaxa-
goras. Dupa circa 2000 de ani, 1n secolul XIX e.n., problematica a
fast reluata de Louis Pasteur care nu era de acord cu teoria gene-
ratiei spontane.i n continuare, fizicienii Kelvin (Marea Britanie) 9i
Helmholtz (Germania) au sustinut originea cosmica a vietii. Chi-
mistul suedez Svante Arrhenius, laureat al premiului Nobel Tn
1900, a presupus ca sporii bacterieni pot fi deplasati prin spatiu
sub ,,presiunea" luminii. Dupa 1970, sustinatorii panspermiei sunt
Fred Hoyle (cunoscut pentru introducerea termenului de Big Bang
i pentru teoria echilibrului Universului) i Chandra Wickrama-
29
singhe (directorul Centrului de Astrobiologie din Cardiff, Scotia);

acetia au sustinut ca exista forme de viata care continua sa pa-
trundain atmosfera terestra, putand fi responsabile pentru izbuc-
niri epidemice, patologii infectioase noi, precum i pentru aportul
de material genetic necesar procesului de macroevolutie.
Mecanisme posibile pentru realizarea Panspermiei

Mecanismele propuse sunt, deocamdata, ipotetice ii
n
curs de evaluare. Panspermia poate fi de interstelara (intre sis-
teme solare diferite) sau interplanetara (intre planetele aceluia i
sistem solar). 0 varianta a panspermiei este cea dirijata, care pre-
supune ca viata pe Pamant a fast adusa de civilizatii extraterestre,
avansate tehnic, care au utilizat rachete pentru acest transport. 0
noua ipoteza, a inginerului Thomas Dehel (2006), sustine ca plas-
moizii (structuri coerente formate din plasma i camp magnetic)
pot produce levitatia sporilor prin intermediul componentei mag-
netice, la o viteza suficienta pentru a strabate spatiul interstelar i
pentru a ajunge la nivelul altor sisteme. Transferul interplanetar al
materiei este bine documentat tiintific,i n special pentru meteoritii
martieni regasiti pe Terra. Sondele spatiale pot reprezenta mo-
dalitati de colonizare microbiana a spatiului extraterestru. Misiunea
,,Stardust" elaborata de NASAi n 2004 a demonstrat prezenta gli-
cinei n reziduurile din coada cometei Wild 2.
1.2.2.2. MODELE EXPERIMENTALE, MODELE ACTUALE
1.2.2.2. 1. Condifii preexistente

Terra era acoperita de oceanele aparutei n eonul Hadean.
Conditiile dificile din acest eon,i n care impacturile cu asteroizii
erau spatiate de intervale variabile de timp, au sugerat ca abio-
geneza ar fi putut avea loc cu 4 - 4,2 miliarde de ani n urma, la
nivelul izvoarelor hidrotermale submarine sau cu 3,7 - 4 miliarde
de ani n urma, la suprafata Pamantului.
Unii cercetatori sugereaza ca viata a i
nceput n conditiile unor
temperaturi scazute. Chimistul britanic Leslie Orgel a demonstrat ca
sinteza purinelor este facilitata de temperaturile scazute, prin efectul
de concentrare a precursorilor, precum acidul cianhidric.
30
lntroducerei
Stanley Miller (celebru pentru realizarea experimentului de

obtinere a aminoacizilor dintr-un amestec gazos,i n condi1ii spe-
ciale) i colaboratorii au demonstrat ca unele baze azotate (ade-
nina i guanina) necesita temperaturi scazute pentru sinteza,i n
timp ce pentru sinteza citozinei i a uracilului, necesita temperaturi
aproape de cea de fierbere a apei. Miller a sugerat necesitatea
unor conditii similare cu glaciatiile combinate cu impactul cu me-
teoritii. Mai mult, grupul sau de cercetare a obtinut aminoacizi
diferiti i 11 tipuri de baze nucleotidicei ntr-un amestec congelat
de amoniac i HCN pastrat n congelatori ntre 1972 i 1997.
Lazcano 9i Miller (1994) au demonstrat ca viteza evolutiei
vietii este determinata de viteza de recirculare a apei la nivelul
izvoarelor hidrotermale subacvatice de medie adancime. Ei au
estimat ca dezvoltarea unei cianobacterii cu 7.000 de gene, ple-
cand de la un genom de 100.000 perechi de baze, ar dura circa
9apte milioane de ani.
1.2.2.2.2. Modele actuale

Nu exista un model unic referitor la aparitia vietii pe Pamant
9 i nici unul al trecerii de la molecule organice la celula primitiva
(eveniment la limitai ntre eonii Hadean 9i Arhean). Pornind de la
modelul Oparin - Haldane, al supei primitive, prebiotice, au rezul-
tat mai multe descoperiri sau ipoteze noi, pe care le enumeram
mai jos,in ordinea apari\iei cronologice:
• modelul atmosferic terestru include conditii redu-
catoare 9i o compozitie cu volume ridicate de metan
(CH4), amoniac (NH3), apa (H20), hidrogen sulfurat
(H2S), bioxid de carbon (c02), monoxid de carbon
(CO) 9i fosfat (P043-); oxigenul molecular (02) i
ozonul (03) sunt specii moleculare rare sau absente;
•intr-o atmosfera reducatoare, activitatea electrica
poate cataliza reactiile de producere a moleculelor
mici (monomeri), precum aminoacizii; demonstratia a
fost realizata de experimentul Miller - Urey, conceput
de Stanley L. Miller 9i Harold C. Urey, n 1953;
• fosfolipidele cu dimensiuni relativ apropiate pot for-
ma spontan bistraturi lipidice, componente funda-
mentale ale membranelor celulare;
31
Biologie celulara !;,i moleculara
O modelul replicatorului - la Tnceput, au fast

acizii nucleici, deoarece:
polimerizarea aleatorie a nucleotidelor
pentru a farma molecule de ARN a dus
la aparitia riboenzimelor autoreplicative;
select,ia naturala a farmelor riboenzi-
melor care au catalizat farmarea lega-
turilor peptidice; oligopeptidele s-au aso-
ciat cu moleculele ARN, ameliorand ca-
pacitatea catalitica a acestora; este po-
sibil ca astfel sa fi aparut primul ribozom;
sinteza proteinelor a Tnlocuit riboenzi-
mele; proteinele devin biopolimerii do-
minanti, Tn timp ce acizii nucleici preiau
functia de stocare a infarmatiei genetice.
Pana Tn anul 2010, nu s-a realizat Tnca sinteza unei pro-
tocelule din componente considerate elemente fundamentale ale
vietii. Pentru a explica originea vietii, actualmente, este necesar sa
explicam trei etape:
• originea monomerilor biologici;
• originea polimerilor biologici;
• procesul evolutiv de la molecule la celule.
1.2.2.2.3. De la prima molecula la celula ancestrala

FORMAREA MONOMERILOR - ORIGINEA MOLECULE-
LOR ORGANICE
Pe Pamantul primitiv, exista doua surse posibile pentru
moleculele organice:
• sursa terestra - sinteze organice catalizate de im-
pacturi sau alimentate de alte surse de energie (ra-
diatii ultraviolete sau descarcari electrice);
• sursa extraterestra - vezi panspermia descrisa mai
SUS, cap 2.2.1.2.
Teoria supei prebiotice: experimentul lui Miller fi va-

riantele sale
Teoria supei primordiale (Oparin, Haldane) a fast restransa
la patru principii:
32
lntroducere
i
n biologia celulara !?i moleculara
• atmosfera Pamantului primitiv era una reducatoare;

• aceasta atmosfera, expusa unor variate surse de
energie, a generat compu!?i organici simpli (monomeri);
• monomerii s-au acumulati ntr-o supa, concentrandu-se i n
unele regiuni preferen\iale (tarmuri, izvoare hidroter-
male submarine);
• prin transformari ulterioare, n supa monomerica s-au
format structuri polimerice.
n 1953, Stanley Miller i Harold Urey au demonstrat experi-
i
mental,i
ntr-un laborator din Chicago, formarea spontana a celui
mai simplu aminoacid - glicina, element constitutiv al proteinelor.
l'RODUSl! D!lOLVATl
!
N APA
Figura 2: Simularea sinteze/or abiotice (Miller - Urey)
33
Biologie celulara §ii moleculara
Experimentul Miller - Urey (fig. 2) a simulat, n laborator, con-

ditiile de pe Pamantul primitiv, pentru a confirma teoria lui Oparin. fn
experiment, s-au utilizat apa, metan, amoniac §ii hidrogen, doua
baloane sterile §ii conducts de sticla pentru conectare.
Balonul inferior contine apa, iar eel superior este umplut cu
un amestec gazos (metan, amoniac §ii hidrogen) i supus unor
descarcari electrics generate de o pereche de electrozi (care
simulau fulgerele, frecventei n atmosfera primitiva), timp de o
saptamana, furnizand energia necesara sintezei moleculelor orga-
nics pe seama celor patru constituenti initiali. Apa continutai n ba-
lonul inferior estei ncalzita pana la fierbere, pentru a permite cir-
culatia sa sub forma de vaporii n aparat i recuperarea produilor
formatiin balonul de reactie. Produii de reactie recuperati n va-
porii de apa se condenseazai n faza apoasa. Analiza biochimica a
lichidului de condensare a relevat prezenta de a-aminoacizi ca
glicina, alanina, acidul glutamic, aspartic, precum i unii acizi or-
ganici simpli: acidul formic, acetic, propionic, lactic i succinic. Re-
actiile din amestecul lui Miller produc acid cianhidric (HCN) alaturi
de formaledehida (CH20) i alti compu i intermediari:
C02 --+ CO + [OJ (oxigen atomic)

CH4 + 2[0] --+ CH20 + H20
CO + NH3 --+ HCN + H20
CH4 + NH3 --+ HCN + 3H2
fn solutie apoasa, formaldehida, amoniacul i acidul cian-

hidric reactioneazain cadrul sintezei de tip Strecker, generand
aminoacizi i alte biomolecule:
CH20 + HCN + NH3 --+ NH2-CH2-CN + H20

NH2-CH2-CN + 2H20 --+ NH3 + NH2-CH2-COOH (glicina)
Ulterior, apa i formaldehida pot reactiona printr-o reactie

de tip Butlerov pentru a produce zaharuri precum riboza.
Utilizand forme diferite de energie sau radiatii ca lumina vi-
zibila, radia\iile ultraviolets, X sau y, descarcari electrics, ultrasu-
nete etc., s-a reuit ca din amestecul de gaze simple (metan, amo-
niac, vapori de apa, oxid de carbon, dioxid de carbon, hidrogen), sa
34
lntroducerei
se obtina cateva sute de compui organici diferiti, incluzand re-

prezentanti ai tuturor tipurilor de molecule din celula vie.
Tn acela i an (1953), J. D. Watson i F. Crick au demonstrat
ca baza chimica a vietii este reprezentata de acizii ribonucleicii n
care suprematia o avea dublul helix al ADN-ului.
Tn perioada 1959 - 1962, biochimistul Catalan Joan Oro, de
la Departamentul de Chimie al Universitatii Houston, a demonstrat
posibilitatea sintezei adeninei (baza purinica din structura acizilor
nucleici), prin incalzirea solutiilor apoase de acid cianhidric;
formarea fiecarei molecule de adenina necesita cinci molecule de
HCN. Pentru sinteza bazelor pirimidinice (citozina, uracil), s-au
folosit sinteze abioticei
n gheata eutectica.
Tn 1958, biochimistul aiiierican Arthur Kornberg a realizat
prima sinteza a unei molecule de AON.
Alte experimente, mai recente, au reluat modelul Miller. To-
tui. Jeffrey Bada, de la lnstitutul Oceanografic Scripps, La Jolla
California, SUA, a constatat ca modelele atmosferei primitive care
ar contine cantitati importante de C02 i N2 ar produce nitriti care
ar anihila aminoaizii pe masura formarii lor. Tn acelai timp, Pa-
mantul primitiv ar fi continut cantitati importante de Fe i carbonati
minerali, capabili de a neutraliza efectele nitritilor. Ai;;adar, chiar
daca atmosfera ar fi fost mai bogatai n C02 i N2, cantitatile de
aminoacizi sintetizate ar fi fost importante.
Aceste experimente demonstreaza ca bazele azotate pu-
teau fi tot atat de uor sintetizate pe Pamantul originar ca i ami-
noacizii. Tmperecherea specificai ntre nucleotidele complementare a
jucat un rol primordial n aparitia primelor forme de viata.
FORMAREA POLIMERILOR - CONSTRUIREA MACRO-

MOLECULELOR
Moleculele organice simple ca acizii aminati sau nucleo-
tidele se pot asocia formand polimeri de talie mare; un acid aminat
se poate lega la un altul printr-o legatura peptidica, iar doua nu-
cleotide se pot asocia printr-o punte fosfodiester. Repetarea aces-
tor reactii conduce la formarea de polipeptide sau polinucleotide.
Primii polimeri s-au putut forma fie prini ncalzirea compu ilor or-
ganici deshidratati (aminoacizi) i supui descarcarilor electrice
sau prin activitatea catalitica a unor mari concentratii de polifosfati
anorganici; n acest caz, polimerizarea se face aleatoriu (fig. 3).
35
Biologie celulara l?i moleculara
S. W. Fox l?i colaboratorii (1960) au obtinut polipeptide nu-

mite microsfere proteinoide, formate prini ncalzirea amestecurilor
de acizi aminati, la temperaturii
ntre 130° - 180°C timp de cateva
ore sau prini
ncalzirea lor cu polifosfati, la 50° - 60°C, timp mai
ndelungat.
i
Figura 3: Polimerizarea spontana, a/eatorie, a nucleotide/or
S. Akahori a emis o alta ipoteza, sugerand ca primele po-

lipeptide ar fi aparut prin polimerizarea unitatilor monomerice, al-
tele decat acizii aminati ca, de exemplu, aminoacetonitrilul care se
formeaza Ul?Or din amoniac, formaldehida l?i cianura de hidrogen.
Deoarece legaturile peptidice sunt termodinamic instabilei n solutii
apoase (supa prebiotica), o proteinoida nou aparuta devine foarte
susceptibila la scindare hidrolitica. Tn timp, proteinoidele au suferit
36
lntroducere Tn biologia celulara l?i moleculara
modificari evolutive pana la o secventa de aminoacizi capabila sa

supravietuiasca mai mult.
Tn' anumite conditii, polinucleotidele pot deveni capabile sa-9i
dirijeze propria lor sinteza prin mecanismul de matritare comple-
mentara (fig. 4). De exemplu, un polimer campus dintr-un singur
nucleotid (acid poliuridilic sau poli U) poate servi ca matrita pentru
sinteza unui al doilea polimer campus dintr-un alt nucleotid (acid
poliadenilic sau poli A).
• Figura 4: Legatura preferenfiala dintre C-G §i A-U prin legaturi chimice slabe.
/mperecherea face ca polinuc/eotidul sa acfioneze ca matr1apentru sinteza altuia
S-a constatat ca farmarea polimerilor nu necesita prezenta

enzimelor. A. Bard l?i J . Lawless au demonstrat experimental ca
unele argile continand catalizatori minerali sunt Tn stare sa pro-
duca aminoacizi din atmosfera primitiva; alte argile, bogate Tn ni-
chel, actioneaza asupra acizilor aminati ca nil?te ,,magnef , absor-
bindu-i l?i realizand, astfel, sinteza unor proteinoizi. Experimente
asemanatoare s-au realizat prin sinteza ,,uscata" a unor acizi nu-
cleici, utilizand argile bogate Tn zinc.
Polipeptidele sau proteinele l?i polinucleotidele, sub cele do-
ua forme: acizii ribonucleici (ARN) 9i acizii dezoxiribonucleici (AON),
reprezinta constituentii cei mai importan ai tuturor formelor de viata.
Un pas Tnainte a fast facut, Tn 1958, de A. Kornberg care a
realizat prima sinteza a unei molecule de acid nucleic. Experienta
a fast refacuta, Tn 1962, de K. Schramm, dar Tn prezenta unor es-
teri polifasforici, l?i de C. Ponnamperuma, Tn 1965, cu iradieri la o
temperatura de 150°C. S-au obtinut acizi nucleici 9i lanturi de nu-
cleotide 9i, Tn cele din urma, AMP-ul, molecula din grupul com-
pu9ilor macroergici, reprezentand ,,acumulatorul" universal de ener-
gie Tn sistemele biologice.
37
Tn 1960, Carl R. Woese de la Universitatea Illinois, Francis
Crick de la Centrul de Cercetari medicale din Londra 9i Leslie E.
Orgel de la Salk lnstitut din San Diego au sugerat ca ARN-ul a fast
primul acid nucleic sintetizat, care a catalizat toate reactiile nece-
sare pentru un precursor al ultimului stramo9 comun al vietii, pen-
tru a supravietui 9i a se replica. Pana de curand, se credea ca
numai proteinele specializate catalizeaza toate reactiile din celule.
Tn 1983, Thomas C. Cech de la Universitatea Colorado 9i
Sidney Altman de la Universitatea Yale, independent unul de altul,
au descoperit primele riboenzime; primele identificate pot face
pu\in mai mult decat sa taie 9i sa lege ARN-ul preexistent. Faptul
ca acestea s-au comportat ca enzime conduce la ideea ca ARN-ul
ancestral ar fi putut avea actiune catalitica. Mai mult decat atat,
tehnicile ingenioase dezvoltate de Thomas C. Cech 9i Jack W.
Szostak, de la Massachusetts General Hospital, au modificat ribo-
enzimele aparutei n mod natural, acesteai ndeplinind una dintre
cele mai importante subreactii ale replicarii ARN-ului, cum ar fi
legarea nucleotidelor sau oligonucleotidelor. Mai recent, Szostak a
descoperit probe ca o molecula de ARN produsa de chimia prebi-
otica ar fi putut cataliza replicarea ARN-ului pe Pamantul primitiv.
O alta etapa importantai ncepei
n momentuli n care o mo-
lecula de ARN a devenit capabila sa dirijeze sinteza unui polipep-
tid; aceasta a permis aparitia ribozomilor prin cuplarea mai multor
tipuri de ARN cu aproximativ 50 de tipuri diferite de proteine.
Tntr-un stadiu ulterior al procesului evolutiv, ADN-ul a luat
locul ARN-ului, devenind principalul material ereditar.
ATP-ul a fast considerat drept singurul campus chimic
furnizor de energiei n celula vie. Multi cercetatori au sugerat ca
molecule mult mai simple, ca pirofasfatul (PPi), ar puteai nlocui
ATP-ul n unele reactii biochimice; datorita stabilitatii ridicate a PPi
9 i structurii faarte simple, comparativ cu ATP-ul, posibila lor pre-
zenta pe Pamantul primitiv deschide noi perspective pentrui n{ele-
gerea proceselor energetice primare. Fosfarul a putut participa la
reactiile chimice primare sub farma unui mineral cu reactivitate
scazuta - apatita. Aceasta a fast gasita sub forma de fluoroapatita
Cas(P04)3F (halofosfat de Ca)i n depozitele de sedimentare,
precum 9 i n rocile vulcanice.
38
lntroducerei
n biologia celulara l?i moleculara
I ultima jumatate de secol, au fost comunicate o serie de

n
constatari cu privire la procesele de fosforilare ,,prebiotica", prin
mecanisme care necesita:
• catalizai n prezenta apatitei;
• procese de concentrare, retinere l?i volatilizarein so-
lutie saui
n faza heterogena, cu sau fara agenti pre-
biotici de condensare.
Chiar l?i cea mai mica celula care a existat vreodata a ne-
cesitat o fosforilare ciclica, indusa de energia cuantica sau chi-
mica, pentru ca protocelula sa fie amorsata. Acest proces presu-
pune existenta unei membrane functionale care sa separe ma§ina
biologica primitiva de mediul nconjurator, §i a semiconductorilor
(proteine) - acceptori §i donatori de electroni ncorporati.
Conform acestui model, transformarea compu§ilor anor-
ganici, organici, elemento-organici sau a amestecurilor acestorai n
macromolecule, utilizand drept sursa energetica plasma rece,
demonstreaza ca fenomenele de absorbtie joaca un rol esential 1n
toate procesele care conduc la sinteza polimerilor; procesele de
policondensare se intensifica la temperaturi scazute. La adapostul
temperaturilor scazute, produ§ii primari se concentreaza l?i permit
sinteza protobiopolimerilor; mai ntai, se sintetizeaza polimeri de
toate speciile §i apoi apar monomerii ca produ§i de degradare a
polimerilor.
Teoria Wachtershauser
n 1980, chimistul german Gunter Wachtershauser a emis
I
teoria ,,lumii de Fe-S". El a postulat existenta unor cai alternative de
sinteza a ,,caramizilor vietii", la suprafata mineralelor care contin FeS.
Spre deosebire de experimentul Miller - Urey, care depin-
dea de surse externe de energie (fulgere simulate sau iradiere
UV), sistemul experimental Wachtershauser contine o sursa de
energie inclusa - sulfuri de fier (pirita). Energia eliberata prin re-
actii redox din aceste sulfuri metalice nu este disponibila doar pen-
tru formarea monomerilor organici, ci §i pentru asamblarea oligo-
merilor §i polimerilor. Astfel de sisteme pot evolua ca entitati meta-
bolic active, autoreplicative §i autocatalitice,i nca dinaintea for-
melor de viata cunoscute i
n prezent.
39
Teoria plajei radioactive

Zachary Adam de la Universitatea Washington, Seattle
sustine ca valurile mareice uriae (300 m), determinate de o po-
zitie mult mai apropiata a Luniii n istoria evolutiei Terrei, a con-
centrat resturi de uraniu i alte elemente radioactivei n punctul de
maxim mareic pe plajele primordiale, unde au participat la gene-
rarea ,,caramizilor vietii". Nisipurile radioactive emit suficienta ener-
gie pentru a genera molecule organice (aminoacizi, zaharuri) ple-
cand de la o solutie de acetonitrili n apa. Monazitele radioactive
(fosfati de lantanide, n pamanturile rare) elibereaza fosfati solubili
n straturile dintre nisip i prundi, ceea cei
i i face accesibili din
punct de vedere biologic. Aminoacizii, zaharurile i fosfatii solubili
pot fi produi simultan, iar actinidele radioactive pot forma com-
plexe organo-metalice care participa la cataliza unor reactii.
PROCESUL EVOLUTIV DE LA MOLECULE (MONOMER!,

POLIMERI) LA CELULE
Nu exista un concept unitar pentru a raspunde lai ntrebarea
,,Cum se formeaza o protocelula pornind de la molecule organice
simple?". Unele grupuri sustin primatul genelor (teoria lumii ARN),
iar altii sustini
ntaietatea aparitiei cailor metabolice. Se pare ca
modelele hibride var avea sustinerea cea mai importanta.
Modelul ,,genelor'' - lumea ARN a fast ilustrat mai sus.
Modelul ,,metabolic" a respins ideea autoreplicarii unei gene
fara aparare i a postulat aparitia unui metabolism primitiv care
putea conferi un mediu propice replicarii ulterioare a ARN. Prima
idee de acest tip apartine lui Oparin (1924) care a introdus no-
tiunea de vezicule primitive autoreplicative. Variantele moderne
din anii 1980 - 1990 sunt reprezentate de Teoria Wachtershauser
i de Lumea tioesterilor, postulata de Chrstian de Duve (laureat al
Premiului Nobel pentru medicinai n 1974, descoperitorul peroxi-
zomilor). ldeea principala era aceea a aparitiei unor cicluri biochi-
mice capabile de autoorganizare, dar dovezile tiintifice lipsesc.
Astfel, a ramas ideea posibilitatii evolutiei unor cai metabolice des-
chise (calea AcCoA) la suprafata piritelor sau a altar minerale.
fntr-o perioada foarte surta istoricete, dar foarte densa
faptic, s-au acumulat cunotinte, s-a dobandit experienta i s-au
limpezit mprejurari din trecutul foartei ndepartat al Terrei care au
putut conduce la aparitia vietii.
40
lntroducerei
Cu tot optimismul oamenilor de tiinta, potrivit caruia ne

gasim astazi, mai aproape decat oricand, de telul suprem i nobil
al cunoaterii umane - producerea celulei viii n laborator,i
ncheie
aceasta sumara trecerei n revista a datelor privind aparitia primei
forme de viata cu un citat din cunoscuta monografie a lui Jean
Rostan, La vie, aparutai n 1962: ,,Nu tim absolut nimic despre
conditiilei
n care domneau pe globul nostru acum doua miliarde de
ani, despre stareain care se gasea materia etc. Poate ca atunci
naterea vietii era cu mult mai probabila decat ami ndrazni sa ne
nchipuim extrapoland i
i n trecut datele prezentului. Poate ca
materia poseda proprietatile azi disparute, legate de o anumita
stare a cosmosului, corespunzand unui anumit stadiu de expan-
siune a universului. n orice caz, toate frumoasele noastre rationa-
mente i calcule risca sa treaca pe alaturi de esential."
1.2.3. CE NE SPUNE RELIGIA DESPRE ORIGINEA

VIETU?
Toate datelei n aceasta problema sunt cuprinsei n primul

capitol al Vechiului Testament - Geneza; trebuie sa precizam, de_
asemenea, ca aceasta abordeaza originea vietii din punctul de
vedere al omului de pe pamant.
Nu vom intrai n amanunte in ceea ce privete facerea
Lumii. Pe scurt, n cele ase zile ale Genezei, prin interventia fortei
divine (Dumnezeu), a aparut alternanta lumina/intuneric (zi/ noap-
te), s-a despartit cerul de pamant, s-a facut separarea dintre pa-
mant i ape, a aparut vegetatia, soarele, luna i stelele, au fast
create animalele acvatice i pasarile, apoi, animalele terestre i.
ntr-un final, omul.
i
Aparei nsai
ntrebarea: de unde tia/tiau scriitorul/scriitorii
Genezei aceste lucruri? De unde a aflat Moise cele scrisei n Ge-
neza? Logic vorbind, relatarea despre creatie trebuie sa fi provenit
dintr-o sursa care dispunea de o cunoatere deplina a eveni-
mentelor.
Ar fi logic sa credem ca autorul Genezei ar fi putut consemna
evenimentele de mai sus fara a fi cunoscut de undeva faptele?
41
Reamintim ca Tn 1859, Darwin a elaborat teoria evolutio-
nista care preciza ca speciile actuale sunt rezultatul unor tran-
formari Tndelungate, precizand ca selec{ia dirijeaza evolutia. In
acest context, ni se pare interesant sa semnalam observatia lui
George Poinar care, comentand descoperirea unei mute fosili-
zate de aproximativ cateva milioane de ani, declara ca anatomia
acestei insecte este uimitor de asemanatoare cu cea a mutelor
care exista astazi. Aceste probe arheologice fac ca relatarile de-
spre creatie, consemnate Tn Geneza, i teoria evolutionista a lui
Darwin sa intre Tn contradictie; Tnseamna ca una dintre cele doua
teze este exacta (adevarata), iar cealalta, falsa.
Zoologul Harold Coffin concluzioneaza ca marile forme de
viata sunt rezultatul unui proces brusc de creatie.
Multi sceptici afirma ca Biblia nu putea fi scrisa 1n epoca
respectiva, deoarece scrisul nu era Tnca cunoscut. La ora actuala,
exista dovezi teologice care atesta ca scrierea era cunoscuta cu
mult 1nainte de epoca lui Moise. De exemplu, existenta regelui
Sargon nu era cunoscuta decat din Biblie (!SAIA - 20:1); la Khos-
vabad, sapaturile arheologice au secs la iveala vestigiile palatului lui
Sargon, inclusiv inscripi care vorbesc despre domnia acestui rege.
Un alt exemplu: existenta lui Pilat era cunoscuta numai din
paginile Evangheliei; sapaturile arheologice facute Tn 1961, la rui-
nele teatrului din Caesareea, au scos la iveala, pe un perete, ur-
matoarea inscriptie: ,,Caesariensibus Tiberium Pontius Pilatus
Praefectus lndaeae" care reprezinta dovada epigrafica contem-
porana lui Pilat, omul care a ordonat crucificarea lui Hristos.
Tot ceea ce putem face astazi este sa studiem istoria ideilor
cu privire la originea Universului i a vietii, sa ne informam cu
privire la ultimele descoperiri 7n domeniu, sa alegem i sa credem
una dintre acele idei pe care o considerau mai corect explicata i
mai Tn armonie cu structura noastra spirituala.
Ne 7ntrebam 7nsa i daca diversitatea formelor de viata
existente pe pamant este o simpla Tntamplare. Raspunsul nostru
este NU - pamantul poarta pecetea unei creatii rationale. lncon-
testolul, cea mai evoluata fiinta aflata pe planeta Pamant, este
OMUL i de el depinde pastrarea armoniei lumii vii.
n Oratio de Hominis Dignitate, Pico della Mirandola Tl de-
i
termina pe Demiurg sa se adreseze astfel primului zamislit dintre
oameni: ,,Te-am aezat Tn mijlocul lumii ca sa poti privi mai uor Tn
42
jurul tau, sa vezi tot, sa patrunzi tot. Te-am creat ca o fiinta, nici
cereasca, nici pamanteasca, nici muritoare, nici nemuritoare ca sa
fii tu Tnsuti liberul tau plasmuitor i biruitorul tau; tu poti coborT
pana la a deveni animal i po{i sa te Tnalti pana la a renate ca o
fiinta divina. Numai tu poti crete i Tnflori dupa propria ta voie - tu
singur porti Tn tine samburele unei vieti universale."
43
Celula reprezinta un sistem cu uni nalt grad de organizare l?i
cu oi nalta specializare l?i specificitate. Aceste atributei i permit sa
reactioneze la varia\iile mediului ca ,,un tot", pastrandu-l?i integritatea.
Studiul celulei a fost posibil din momentul aparitiei primului
aparat optic de marit, deoarece dimensiunile acesteia sunt sub
limita de perceptie a ochiului uman.i n acest sens, meritul revine
fratilor Hans l?i Zacharis Jansen care,i n 1590, au avut ideea mon-
tarii unor lentile (fabricatei n Egiptul i China antica)i ntr-un tub,
construind astfel primul aparat optic de marit. Datorita acestei
magnifice descoperiri care, lai nceput, a avut o cu alta destinatie
(navigatie, astronomie), a fost posibila constatarea conform careia
o singura celula poate structuraliza un organism de sine statator
sau ca ea poate fi una dintre numeroasele celule care sunt gru-
pate l?i diferentiatei
n tesuturi l?i organe (metazoare).
Figura 5: - Microscopul utilizat de R. Hooke (A)

§i imaginea observata la o putere de marire de 30x (BJ
Cu un astfel de aparat, perfectionat de Kepler, Tn 1611,

numit mai tarziu microscop (gr. micros = ,,mic"; scopein = ,,a ve-
dea"), Robert Hooke, Tn lucrarea sa, Micrografia sau unele descrieri
fiziologice ale ce/or mai mici corpuri cu ajutorul sticlelor maritoare,
cu observarea §i analizarea for, comunicata 1n 1665, la Royal
Society din Londra, semnaleaza existenta, pe sectiunile de pluta, a
unor camarute bine delimitate pe care le denumete ,,celule".
Olandezul Antony Van Leeuwenhoek (1632 - 1723) perfec-
tioneaza microscopul, reuind sa-i creasca puterea de marire, i
face cateva observatii senzationale la vremea respectiva: Tm-
preuna cu studentul L. Ham, descrie celulele germinale masculine
pe care Duverney, Tn 1873, le va denumi spermatozoizi, unii mi-
crobi, eritrocitele nucleate de pete, fiind primul care consemnea-
za o oarecare structuralizare interna a celulelor, semnaland, toto-
data, prezenta nucleului.
Figura 6: Leeuwenhoek §i microscopul sau perfecfionat
Studiul celulei progreseaza mult datorita perfectionarilor

aduse microscopului fotonic i a tehnicilor de prelucrare a probelor
biologice, dintre care amintim: descoperirea i utilizarea conden-
satorului (R. Koch), imersia acromata cu apa (Amici - 1850)
48
De la citologie la biologia celulara l?i moleculara
imersia acromatica cu ulei de cedru (0. Abbe - 1880), utilizarea

_ microtomului (Rauvier), utilizarea colorantilor textili etc.
Acumularea observatiilor obtinute de cercetatori au permis
elaborarea, Tn secolul al XIX-lea, a trei teorii fundamentale privind
lumea vie:
teoria celulara;
teoria evolutionista;
teoria ereditatii.
Dorim, de asemenea, sa facem precizarea ca unele re-
zultate publicate sau comunicate au fast contestate, deoarece cer-
cetatorii nu au tinut cont de cele patru reguli ale. cercetarii l?tiintifice
enuntate de Descartes Tn cartea sa, Discours de la methode, pu-
blicata Tn 1637:
a. nu accepta niciodata cu adevarat ceva ce nu poate fi vazut
cu claritate ca fiind adevarat;
b. Tmparte dificultatile Tn cat mai multe parti posibile;
c. cauta, mai Tntai, solutiile problemelor simple l?i treci apoi,
pas cu pas, la cele dificile;
d. verifica toate concluziile, pentru a fi sigur ca nu ai omis nimic.
2.1.1. TEORIA CELULARA

Legata direct de aparitia citologiei l?i a biologiei celulare a
fast elaborarea teoriei celulare, una dintre cele mai importante te-
orii dintre toate generalizarile biologice.
Naturalistul Lorenz Oken (1779 - 1851) a fast primul care a
formulat aceasta teorie. Tn lucrarea sa, Genera(ia, publicata Tn
1805, preciza ca: ,,toate organismele se nasc din celule l?i sunt for-
mate din celule".
Meritul stabilirii Tntr-o forma definitiva a teoriei celulare apar-
tine botanistului Mathias Jacob Schleiden (1804 - 1882), profesor
la Universitatea din Jena §ii zoologului Theodor Schwann (1810 -
1882), profesor la Universitatea din Liege. Tn 1838, Schleiden pu-
blica lucrarea Asupra fitogenezei, Tn care consemneaza ca: ,,plan-
tele sunt agregate de indivizi separati, independenti §ii distincti
care sunt celulele Tnsele". El concluzioneaza ca: ,,fiecare celula are
o dubla existenta, una proprie care corespunde dezvoltarii sale §ii
49
una ocazionala decurgand din faptul ca face parte din planta. Pro-
cesele vitale care au loci n celula individuala formeaza baza pri-
mara 9i fundamentala a fiziologiei vegetale 9i a fiziologiei n general".
Tn monografia sa Cercetari de microscopie asupra concor-
danfei dintre structura plantelor §i animalelor, aparutai n 1839, Th.
Schwann extinde 9i fundamenteaza teoria celulara. Din lecturarea
acestor lucrari, se pot desprinde trei concluzii:
a. corpul plantelor 9i animalelor este format din celule;
b. celulele au o viata individuala proprie;
c. viata individuala a celulelor este dependenta de viatai ntre-
gului organism.
R. Virchow fundamenteaza teoria celularai n patologie. Po-
trivit teoriei celulare, la nivelul organismului,i n general, 9i al celu-
lelor, n special, au loc doua procese:
plastice care se realizeaza prin combinarea moleculelor ca-
re edifica corpul celulelor;
metabolice care constaui n transformari chimice ce au loc
fiei
n organitele celulare, fiei
n citoblastemul care lei
nconjoara
(hialoplasma), anticipand, cu peste 150 de ani, de-
rularea reactiilor biochimice complexe care se realizeazai n
' .
unitatile morfo-functionale ale lumii vii.
Aplicand teoria celulara la embriologie, R. Virchow 9i Kolli-
ker,in 1852, precizeaza ca embrionul ia na9tere prin unirea sper-
matozoidului cu ovulul 9i se dezvolta progresiv prin diviziuni repe-
tate ale celulei ou sau zigotului. Aceasta constatare demoleaza
definitiv teoria preformista aparutai nca din antichitate 9i sustinuta
de Jan Schwammerdan (1637 - 1685) §ii fundamentala teoretic de
Albrecht von Haller (1708 - 1777). Aceasta sustinea existenta,i n
gameti, a unor fiinte preformate - homunculu§ii care, printr-un sim-
plu fenomen de cre§itere, vor evolua spre un organism adult. Tntre
preformi§iti, au aparut dispute, unii sustinand ca embrionii pre-
formati s-ar gasi n ovul (ovi9ti), altii ca s-ar gasi n spermatozoid
(animaculi9ti) continand un homunculus.
Tn 1773, abatele Lazzaro Spallanzani (1729 - 1799), pro-
fesor la Universitatea din Pavia, demoleaza, pe cale experimen-
tala, teoria preformista. El a filtrat lichidul spermatic de broasca, iar
reziduul (spermatozoizii) I-a pusi n contact cu ouale acestei specii,
constatand aparitia de noi fiinte; lichidul spermatic nu are actiune
fecundanta.
50
De la citologie la biologia celulara §ii moleculara
Figura 7: Spallanzani §i desenul reprezentand fiinta miniaturala

din spermatozoid (Hartsoeker)
O alta lovitura data preformismului a fost data de biologul

rus K. E. Wolff (1735 - 1794). Tn lucrarea sa, Theoria genera-
tiones, aparuta 1n 1766, Wolff fundamenteaza teoria epigenetica;
urmarind dezvoltarea embrionului de gaina, aratand ca nu exista
ceva preformat i ca din vezicule mici (celule) care se asociaza §ii
formeaza membrane, se constituie, cu timpul, organele.
2.1.2. TEORIA EVOLUTIONISTl

•
Aceasta teorie 1ncearca sa explice originea i diversitatea
deconcertanta a lumii vii.
Tn 1809, apare cartea lui Lemark, Phi/osophie zoologique,
1n care se precizeaza ca evolutia este rezultatul adaptarii directe la
49
mediu i al transmiterii caracterelor dobandite, adevar ignorat, de-

oarece,in biologie, domnea fixismul lui Cuvier.
Bazele conceptiei referitoare la evolutia istorica a speciilor
au fost puse de Charles Darwin (1809 - 1882) 9 i descrisei n lu-
crarile sale: Originea speciilor (1859) 9i Originea omului §i selectia
sexuala (1871). n Originea speciilor, Darwin a specificat faptul ca
speciile actuale sunt rezultatul unor transformarii ndelungate care
au aparut ca o consecinta a variatiilor ,,definite" (raspunsul orga-
nismului la anumite condi1ii de mediu) 9i ,,nedefinite" (intampla-
toare, care reprezinta materialul supus selectiei naturale), preci-
zand ca selectia este cea care dirijeaza evolutia.
Evolutia nu este, nsa, un progres. Populatiile se adapteaza
la condi1iile mediului care,i n anumite condi1ii, reprezinta un suc-
cesi
n evolutie, dari nsa atunci cand conditiile se schimbai n sens
' '
negativ, asist am la disparitia speciei (dispar itia dinozaurilor).
n zilele noastre, prin ,,teorie", ntelegem O banuiala care nu a
i
fasti
nca verificata.in viziunea oameni,lor de 9tiinta, o astfel de ba-
nuiala se nume9te ,,ipoteza", iar o teorie ia na9tere prin metode
9tiinfice.
Pierre P. Grasse, n cartea sa Evolution of Living Organisms
(Academic Press, N.Y. - 1977), afirma ca: ,,Prin uzul 9i abuzul unor
postulate ascunse, al unor i ndraznete 9 i adesea neintemeiate
extrapolari, s-a creat o pseudo- 9tiinta. Ea prinde radacini n chiar n
miezul biologiei, facand sa rataceasca numero 9i biochimi 9ti 9i
biologi ce credi n mod sincer ca acuratetea conceptelor fundamen-
tale a fost demonstrata, ceea ce este departe de realitate."
Profesorul de biochimie, Michel Behe,i n cartea sa, Cutia
neagra a Jui Darwin, publicatai n 1996, arata ca uimitoarele 9i recen-
tele descoperiri ale biochimiei nu sei mpaca cu niciun fel de dar-
winism.
Biofizicianul Lee Spetner, specializati n codul genetic,i n
cartea sa, Nu rntamplator (1997), a demonstrat ca numai mutatiile
ntamplatoare nu vor produce niciodata schimbarile pretinse de
i
evolutioni 9ti.
Este interesant de semnalat observatia lui George Poinar
care, comentand descoperirea unei mu9te fosilizate de apro-
ximativ 40 milioane de ani, declara ca anatomia interna a acestei
insecte este uimitor de asemanatoare cu cea a mu9telor care tra-
iesc astazi. n aceste roci vechi, au aparut brusc specii complexe,
52
De la citologie la biologia ceiulara i moleculara
fara a se fi descoperit, Tn timp, forme de tranzitie. Acela i lucru

este constatat i Tn regnul vegetal.
2.· .1.3. LEGILE EREDITATII

' '
. ' .
Biologul ceh Gregor Mendel (1822 - 1884), considerat, pe

drept cuvant, parintele i creatorul geneticii, utilizand metoda hibri-
darii experimentale, reuete sa explice procesele fundamentale
ale ereditatii. Pe baza acestor rezultate, elaboreaza, Tn cartea sa
'
Experimente asupra hibrizilor vegetali (1866), teoria factorilor ere-
ditari, dupa care fiecare caracteristica a unui organism este deter-
minata de o particula materiala numita factor ereditar (gena), afla-
ta Tn nucleii gametilor; aceasta se transmite de la o generatie la
alta, iar fiecare individ este un mozaic de caractere paterne i ma-
terne. Mendel specifica ca factorii ereditari sunt independen\i unul
de altul, fiecare dintre acetia guvernand o anumita caracteristica
observabila i care se transmite de la parinti la urmai ca unitati
separate. Concluzia este ca organismul este un mozaic de factori
ereditari distincti i independenti.
Legile mendeleene au fast ignorate de contemporani, dar
au fast redescoperite abia Tn 1990 de Hugo de Vries, C. Correns i
E. Von Tschemak. La sfaritul secolului trecut, L. Cuenot i W. Ba-
teson au aratat ca principiile stabilite de Mendel, la vegetale, se
regasesc i Tn cazul animalelor.
Prin aparitia teoriilor descrise mai sus, biologia a depait fa-

za descriptiva, trecand Tntr-o etapa superioara, explicativa, punand
bazele citologiei (gr. citos = ,,camaruta"; logos = ,,vorbire").
Citologia, ramura a tiin\elor biologice care studiaza morfo-
logia i functiile celulei, devine o tiinta independenta odata cu
publicarea lucrarii lui Oscar Hertwing, Celule §i fesuturi (1892),
care face o sinteza a fenomenelor biologice Tn concordanta cu ca-
racterele morfologice. Tot el observa la ariciul de mare ca fecun-
53
darea se realizeaza prin unirea nucleului spermatozoidului cu eel

al ovului (amfimixie).
Bazele citofiziologiei au fost puse de M. Verworn Tn tratatul
sau, Fiziologie genera/a (1897).
n prima jumatate a secolului al XX-lea, apar noi perfec-
I
tionari ale microscopului fotonic i noi metodologii de lucru la care
i-au adus contributia o multitudine de cercetatori romani i straini
din diverse domenii de activitate (morfologi, fizicieni, biochimiti,
microbiologi etc.).
n 1924, Lacassagne i colaboratorii pun la punct prima
I
metoda de autoradiografie pentru localizarea poloniului radioactiv
Tn probele biologice. Lebedeeff, Tn 1930, construiete primul mi-
croscop interferential, iar fizicianul F. Zernicke construiete, Tn
1932, microscopul cu contrast de faza; aceste doua descoperiri au
facut posibila studierea celulelor Tn stare vie. n 1941, Coons uti-
lizeaza anticorpi cuplati cu fluorocromi, pentru detectarea antige-
nelor celulare, iar Tn 1952, Nomarski introduce sistemul de con-
trast diferential pentru microscopul fotonic. Trebuie amintita aici
punerea la punct a unor tehnici de citochimie, histochimie i histo-
enzimologie, prin care s-au evidentiat unele molecule din structura
celulei (acizi nucleici, proteine, glucide, lipide) i se localizeaza ac-
tivitatile enzimatice din celula.
Microscopia de fluorescenta poate evidentia prezenta sero-
toninei (fluorescenta primara din celulele APUD) sau observarea
citoscheletului (fluorescenta indusa). De asemenea, prin aceasta
metoda, se detecteaza acizii nucleici (ARN-ul - fluorescenta roie,
ADN-ul - fluorescenta verde-galbena). Cea mai importanta apli-
catie a acestei metode este imunofluorescenta prin care se pot
localiza antigenele celulare.
Microscopia Tn contrast de faza permite studiul celulelor Tn
stare vie, permitand vizualizarea endocitozei, micarea cililor i fla-
gelilor, diviziunea celulara etc.
Microscopia cu interferenta diferentiala este utila pentru va-
loarea proprietatilor suprafetei celulare i a altor structuri biologice.
Microscopia Tn lumina polarizata este utila pentru studiul
structurilor a caror compozitie chimica macromoleculara are un as-
pect linear (fibre de colagen, fibre musculare striate etc.).
n ceea ce privete contributiile romaneti Tn dezvoltarea
I
citologiei, mentionam ca prima catedra independenta de citologie,
54
De la citologie la biologia celulara i moleculara
histologie i tehnica microscopica s-a Tnfiintat, Tn 1879, la Facul-

tatea de Medicina din Bucureti, fiind una dintre primele de acest
gen din Europa, slujita cu competenta de profesorii M. Petrini-
Galati, Al. Obredja, I. Bruckner, $t. Besnea, Ion T. Niculescu.
Pe plan international, se afirma Gh. Marinescu (1863 -
1938) care publica, la Paris, monografia Celula nervoasa, Tn 1909,
Victor Babe (1854 - 1926), coautor al primului tratat de micro-
biologie din lume, publicat, Tn 1909, tot la Paris, i descoperitorul
corpusculilor Babe-Neavi, Tn neuronii bolnavilor de turbare. Ion
Cantacuzino (1863 - 1934) aduce contributii valoroase Tn dome-
niul imunologiei comparate, microbiologiei i medicinii experimen-
tale, descoperind factorul stimulator al secretiei celulare Tn lichi-
dele biologice diferite.
La coala de citofiziologie de la Facultatea de $tiinte natu-
rale din Bucureti, reprezentata de Dimitrie Voinov, Th. Dornescu
i I. Steopoe s-au remarcat prin numeroase descoperiri Tn dome-
niul citologiei, Tn special cele referitoare la complexul Golgi.
$coala de citologie a Facultatii de Medicina din Cluj este re-
prezentata de I. Scriban i I. Dragoi, care au efectuat cercetari de-
osebit de valoroase privind rolul presiunii osmotice asupra divi-
ziunii celulare i asupra ovocitelor de mamifere.
La Facultatea de Medicina din lai, prima disciplina de cito-
logie se Tnfiinteaza Tn 1890, fiind preluata de profesorul Emil Pu-
cariu, discipoi' i colaborator al profesorului V. Babe. Ti urmeaza,
Tn 1930, profesorul Al. Tupa, considerat, pe drept cuvant, un ,,vir-
tuos" Tn tehnicile fine de histologie i, Tn special, de histologie ner-
voasa i de citologie. Numele sau este legat de descoperirea unor
tehnici de citologie, unele dintre acestea fiind i astazi citate i
recomandate de tratatele de specialitate. Prin disparitia profeso-
rului Al. Tupa, conducerea disciplinei a fost preluata de Academi-
cianul Vasile D. Marza care s-a remarcat prin studii de histochimie.
La dezvoltarea citologiei i-au adus contributia profesorii
Maria Sibi, Al. Datcu, Leonid Ababei de la disciplina de Biochimie,
Francisc Reiner i Gr. T. Popa de la Anatomie, academicianul I.
Haulica de la Fiziologie, $erban Bratianu i Lorica Gavrilita de la
Morfopatologie, Eugenia i Mihai Duca de la Microbiologie.
55
Biologia celulara 9i moleculara, ca ramura bine conturata a

9 tiintelor biologice, a luat na9tere prin convergenta informatiilor fur-
nizate de citologie (morfologie, biochimie, biofizica, fiziologie, ge-
netica moleculara, imunologie, farmacologie, microbiologie 9i viru-
sologie etc.), la care se adauga marile descoperiri facute de fizi-
cieni, la sfar 9itul secolului trecut 9ii nceputul secolului al XX-lea
care au pus bazele construirii microscoapelor electronice (W.C.
Rontgen - 1895, K.F. Braun - 1897, J.J. Thomson - 1897, Louis
de Broglie - 1924). Aceste noi microscoape utilizeaza ca sursa
luminoasai n loc de baterii, fascicule de electroni, obtinandu-se
imagini ale unor structuri cu dimensiuni de ordinul A. Prototipul pri-
mului microscop realizati n Laboratorul de Fizica de la Tehnische
Hohschule din Berlin,i n perioada 1928 - 1934, de o echipa de
cercetatori condusa de Max Knoll; prototipul a fast patentat de
firma Siemens. K. Porter, Claude 9i Fullman examineaza, la acest
aparat, celule din culturi dupa fixarea 9 i colorarea cu tetraoxid de
osmiu, iar Palade, Porter 9i Siostrand pun la punct,i n 1952, me-
tode de fixare 9i obtinerea de sectiuni fine, permitand, pentru pri-
ma oarc't studierea numeroaselor structuri intracelulare. Porter 9i
Blum construiesc primul ultramicrotom cu expansiune mecanica.
n 1956, Glaubert introduce ca material de includere ra9ina epo-
i
xidica, araldita, iar cinci ani mai tarziu, n 1961, Luft prezinta o alta
ra9 ina de includere, eponul. n 1963, Sabatini, Beusch 9 i Barrnett
introduc glutaraldehida ca agent fixatorin microscopia electronica.
Firma Cambridge Instruments construie 9te,i n 1965, primul
microscop electronic cu baleiaj (SEM). La ora actuala,i n diferite
laboratoare, se aflain explorare multe tipuri de microscoape elec-
tronice care, dupa tipul de constructie 9i destinatia lor, sei mpart n
mai multe grupe: T.E.M. - de transmisie, S.E.M. - de baleiaj -
scanning, S.T.E.M. - de transmisie 9i baleiaj, T.E.A.M. - de trans-
misie cu aberatie corectata, P.E.M. - de emisie fotonica, E.P.I. -
'
56
cu epifluorescenta (fluorescenta prin raze reflectate i nu lumina

transmisa), F.I.M. -i n camp ionic. O varietate de T.E.M. este mi-
croscopul electronic cu voltaji nalt cu care se pot studia celulelei n
stare vie.
Progresul biologiei celulare i moleculare se datoreaza des-
coperirii i utilizarii unor tehnologii avansate, din care amintim:
a. Fractionarea celulara controlata a tesuturilor i celulelor ca-
re permite separarea diverselor tipuri de celule i a diferitilor
compu!}i,in vederea analizelor chimice.
b. i
n 1926, Svedberg construie!}te prima centrifuga analitica
pe care,i n 1938, Benrens o utilizeaza p.entru a izola nucleii
din citoplasma hepatocitelor, iar Claude, Brachet, Hage-
boom etc. pun la punct,i ntre 1940 - 1950, tehnici de frac-
tionare a organitelor celulare.i n 1953, De Duve izoleaza li-
zozomii, iar Novikoff, peroxizomii.
c. Tehnica culturii de celule a fast pusa la punct de Harrisoni n
1907, !}i perfectionata de Carrel, n 1913. Aceasta permite
studiul caracterelor morfologice !}i functionale ale celulelor
separate de organism !}i sustrase de sub influenta siste-
mului nerves 9 i humeral. Ea ofera informatii de o deosebita
valoarein domenii ca microbiologia !}i virusologia, fiziologia,
farmacologia, embriologia experimentala, patologie etc.
d. Difractia cu raze X a fost utilizatai n biologie, dupa desco-
perirea lor, de catre Roentgen,i n 1895. Utilizarea acestei
metode fizice a dus astazi la utilizarea pe scara tot mai lar-
ga a analizei cristalografice cu raze X. Ea permite vizua-
lizarea tridimensionala a macromoleculelor proteice 9 i a
acizilor nucleici, facand posibila analiza detaliata a tuturor
elementelor spa\iale existente la nivel subcelular. Dintre
descoperirile majore facute de utilizarea metodei cristalo-
grafice cu raze X, mentionam: determinarea distantei inter-
atomice de catre Patterson,i n 1935; Pauling 9i Coreyin
1951 propun structura unei conformatii helicoidale pentru
un lant de L-aminoacizi - a-helix 9i structura foitei , care
vor fi regasite mai tarziui
n structura multor proteine. Bazati
pe imaginile de difractie cu raze X, obtinute de Franklin 9i
Wilkins, Watson 9i Crick,i n 1953, propun modelul n dubla
elice a ADN-ului. n 1976, Kim, Rich !}i Klug au descris struc-
tura tridimensionala a ARN-ului de transfer.
57
e. Cromatografia a fost introdusa, pentru prima oara, n ana-
liza chimica, de catre botanistul Mihail Tvet,i n 1903,i n
cadrul studiului compozitiei unor coloranti vegetali; trecand
produii clorofilici printr-o coloana umpluta cu carbonat de
calciu fin divizat i supunand coloana unor percolari repe-
tate cu eter de petrol, au obtinut zone distincte, diferit colo-
rate, corespunzatoare constituentilor acestor produse. Tn
1946, Stein 9i Moore stabilesc, pentru prima oara, com-
pozitia, n acizi aminati, a unei proteine, utilizand initial cro-
matografia pe coloana de amidon 9i dezvoltand ulterior cro-
matografia pe ra9ini schimbatoare de ioni.
f. Electroforeza, una dintre cele mai utilizate tehnici de bio-
logie celulara i moleculara din ultimele decenii, a adus
contributii majore la dezvoltarea bazei informationale atat
pentru nivele macromoleculare mari (proteine, acizi nu-
cleici), cat 9i pentru cele de dimensiuni mai reduse (acizi
aminati 9i nucleotide). Tn 1883, Faraday descrie legile fun-
damentale privind trecerea curentului electric prin solutii io-
nice, iar n 1933, Tiselius introduce electroforeza pentru se-
pararea proteinelor din solutii. Tn 1955, Smithies utilizeaza
geluri de amidon pentru separarea proteinelor serice. Ray-
mond,i n 1959, introduce gelurile de poliacrilamida, supe-
rioare celor de amidon, pentru separarea proteinelor, iar ca-
tiva ani mai tarziu, ameliorarea sistemelor tampon de catre
Ornstein 9i Davis au permis separari dei nalta rezolutie.
n ultimele decenii ale secolului al XX-lea, au fost create noi
i
tehnologii de biologie celulara 9i moleculara cum sunt marcarea
moleculelor celulare cu izotopi radioactivi i anticorpi, tehnologia
ADN-ului recombinat, secventionarea ADN-ului, hibridarea acizilor
nucleici, clonarea ADN-ului.
Departe de a fi complet, tabloul progreselor tehnicilor de
investigare a microcosmosului celular, precum 9i numarul mare de
premii Nobel acordate cercetatorilor din acest domeniu, ilustreaza
dinamismul biologiei celulare i moleculare. Dezvoltarea viitoare a
acesteia este nelimitata, putand afirma cu toata convingerea ca
astazi cunoa9tem doar varful unui iceberg a carui parte pe care nu
o vedem este infinita i din care vom explora, cu siguranta, din ce
n ce mai multi
i n scopulimbunatatirii starii de sanatate, a vie{ii
speciilor i a conditiilor umane pe Terra.
58
De la citologie la biologia celulara §i moleculara
Nu putemi ncheia acest capitol fara sa precizam numele a

patru romani, cercetatori cu renume internationali n domeniul bio-
logiei celulare i moleculare: George Emil Palade, Nicolae Simi-
onescu, sotia sa, Maya Simionescu, i Gheorghe Benga.
Unul dintre fondatorii biologiei celulare i moleculare i mo-
leculare a fost profesorul G. E. Palade (1912 - 2008), nascut la
lai. unde ii ncepe i studiile. Absolvent al Facultatii de Medicina
a Universitatii din Bucureti i are ca parinti spirituali pe profesorii
Gr. T. Popa i Fr. Reiner, foti ieeni i ambii anatomiti.
n 1946,i
i mpreuna cu sotia sa, Irina, fiica inginerului Nicolae
Malaxa, pleacai n America. Ajuns la destinatie, declara: ,,am de-
barcat pe pamant american cu mintea doldora de planuri i spe-
rante asemenea a milioanelor de oameni care de-a lungul anilor
i-au simtit inima cuprinsa de bucurie la vederea Statuii Libertatii".
n acelai an, G.E. Palade, la invitatia lui Albert Claude,i
i ncepe sa
lucrezein cadrul Departamentului de Patologie al lnstitutului Ro-
chefeller pentru Cercetari Medicale, activitate care a durat 27 de ani.
n 1974, G. E. Palade primete Premiul Nobel pentru Me-
i
dicina §i Fiziologie, mpreuna cu Albert Claude i Christian de Du-
ve, pentru descoperirile facute i n perioada Rochefeller, privind
organizarea structurala i functionala a celulei (descoperirea
ribozomilor sau a corpusculului lui Palade i rolul lor n biosinteza
proteica, ultrastructura mitocondriei, secretia celulara, reciclarea
membranelor, fixatorul Palade etc.).
n 1966, G. E. Palade revinei
i n Romania ca membru al
Academiei Nationale de $tiinta a S.U.A., pentru a negocia oi n-
telegere de schimburi tiintifice cu Academia Romana. Acesta a
fost un moment-cheie pentru biologia celulara romaneasca de mai
tarziu, deoarece eel invitat a fost reputatul om de tiinta - Aca-
demicianul Nicolae Simionescu, urmat, la scurt timp, de sotia sa,
Academicianul Maya Simionescu care,i n 1978, au fondat coala
romaneasca de biologie celulara i moleculara. Ei s-au reintorsi n
tara dupa oi ndelungata absenta, cu hotararea de ai nfiinta un in-
stitut de biologie celulara i moleculara, dupa modelul labora-
toarelori
n care au lucrati n S.U.A. i au reuit. Asemenea marilor
constructori ai tiintei medicale romaneti, au introdus n anul uni-
versitar 1978/1979, studiul biologiei celulare i molecularei n facul-
tatile cu profil biologic.
59
Prestigiosul institut de Biologie i Patologie Celulara din Bu-

cureti (I.B.P.C.), membru, din 1990, al retelei globaie U.N.E.S.C.O.
pentru biologie celulara i moleculara, este condus, Tn prezent, de
academicianul Maya Simionescu.
Din nefericire, Academicianul Nicolae Simionescu s-a stins
din viata Tnainte de vreme, cand Tnsa viziunea sa optimista i forta
lui de lucru erau pe punctul sa marcheze Tnceputul unei noi ere
pentru cercetarea tiintifica din Romania.
Un alt cercetator de renume Tn domeniul biologiei celulare
i moleculare din Romania este profesorul Gheorghe Benga, fon-
datorul acestei discipline la Universitatea de Medicina i Farmacie
din Cluj-Napoca. Printre contributiile sale tiintifice prioritare pe
plan international, se numara: caracterizarea membranelor subce-
lulare hepatice umane, a interactiunilor moleculare dintre compo-
nentele biomembranelor, a mecanismelor moleculare ale transpor-
tului apei prin membranele biologice - descoperirea proteinelor
canal pentru apa (aquaporine) n membrana hematiei umane,
n 1985, precum i aplicatii medicale (epilepsie, distrofii muscu-
i
lare), cercetari Tn bolile genetice (diagnosticul aminoacidopatiilor,
primul studiu exhaustiv asupra tipului de mutatii Tn gena fibrozei
chistice la populatia din Romania) etc. Cu toate acestea, Tn 2003,
Premiul Nobel pentru chimie a fost atribuit Prof. Peter Agre i co-
laboratorilor sai, pentru descoperirea aquaporinelor, dei Prof. Dr.
Gheorghe Benga a fost eel care a aratat, pentru prima oara, exis-
tenta acestor canale proteice de apa.
G. E. Palade, Tntr-o prezentare la Conferinta internationala
,,Romania i Romanii Tn $tiinta Contemporana", din 1994, amintea
ca ,,indiferent de realizarile diasporei, cercetatorii care au venit sau
au ramas Tn Romania i au lucrat cu sau fara ajutorul guvernului
Romaniei, cum e cazul dr. Gheorghe Benga i al altora, merita o
apreciere deosebita. Ei au mentinut viu spiritul cercetarii biome-
dicale Tn Romania".
60
Bibliografie selectiva
Alberts, B. (2008). Molecular biology of the cell (5th ed.). New York:
Garland Science.
Allen, T. D. (2008). Introduction to electron microscopy for biologists (151
ed.). Amsterdam; Boston: Elsevier: Academic.
Breck, A. D. & Yourgrau, W. (1972). Biology, history, and natural phi-
losophy. New York: Plenum Press.
Chandar, N. & ViselIi, S. (2010). Cell and molecular biology. Phila-
delphia: Wollters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health.
Cobb, A. B. (2011). Cell theory. New York: Chelsea House.
Correia, J. J. & Detrich, H. W. (2008). Biophysical tools for biologists.
London: Academic.
Danielli, J. F. (1983). Aspects of cell regulation. New York: Academic Press.
Darnell, J. E. (2011). RNA: life's indispensable molecule. New York:
Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Dollemore, D. & National Institute on Aging (2002). Aging under the
microscope: a biological quest. Bethesda, Md.: National Institutes
of Health, National Institute on Aging, Office of Communications
and Public Liaison.
EI-Metwally, T. H. (2010). Basics of medical molecular biology. Hau-
ppauge, N.Y.: Nova Science.
Goldman, R. D., Swedlow, J. & Spector, D. L. (2010). Live cell imaging:
a laboratory manual (2nd ed.). Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold
Spring Harbor Laboratory Press.
Goldman, S. L. (2007). Great scientific ideas that changed the world.
The great courses. Chantilly, VA: Teaching Co.
Hodge, R. (2009). Genetic engineering: manipulating the mechanisms of
life. New York: Facts on File.
Kuo, J. (2007). Electron microscopy : methods and protocols (2nd ed.).
Totowa, N.J.: Humana Press.
Lackie, J. M. & Blackshaw, S. E. (2007). The dictionary of cell and mo-
lecular biology (4th ed.). Amsterdam; Boston: Academic Press.
Locy, W. A. (1908). Biology and its makers. New York: H. Holt and
Company.
Mullins, C. (2005). The biogenesis of cellular organelles. Georgetown,
Tex. New York, N.Y.: Landes Bioscience/Eurekah.com; Kluwer
Academic/Plenum.
Voice of America (Organization). (1964). History of science. Washington.
Zworykin, V. K. (1945). Electron optics and the electron microscope.
New York, London: J. Wiley & Sons Chapman & Hall.
61
Organizarea generali
a celulelor
Cosmosul, rn general, Terra, m

special, sunt alcatuite din doua lumi
diametral opuse: una - vie §i a/ta -
nevie. Un adevar important rt con-
stituie faptul ca organismele, mai
corect spus, celu/ele, sunt formate
din molecule nevii care se supun
tuturor !egi/or fizice §i chimice
caracteristice acestei stari.
Unu/ dintre rolurile biologiei celulare
§i molecu!are contemporane este
ace/a de a determina modul ln care
interacfioneaza grupele de molecule
nevii din structura organismelor, care
se supun principiilor fizice §i chimice
obi§nuite, dar care interacfioneaza
conform altui grup de principii - lo-
gica moleculara a /umii vii.
Datorita acestor interactiuni, moleculele nevii constituie,
mentin lii perpetueaza starea vie.
Principalele proprietati ale materiei vii sunt urmatoarele:
a. gradul 1nalt de complexitate lii organizare;
b. fiecare componenta a unui organism viu are o functie spe-
cifica;
c. au capacitatea de a capta lii transforma energia din mediul
lor, utilizand-o pentru formarea materiei prime, a structurii
lor complexe lii mentinerea acestora;
d. capacitatea lor de multiplicare, proprietate care poate fi
privita ca o adevarata chintesenta a starii vii.
La organismele vegetale lii animale, de la cele mai simple
la cele mai complexe, materia vie este organizata 1n structuri bine
delimitate numite ce/ule, fiecare dintre acestea constituind o uni-
tate morfo-functionala autonoma, capabila sa se reproduca.
Oricat de mica ar fi aceasta, de origine vegetala sau ani-
mala, celula reprezinta un microcosmos de o mare complexitate,
1n care moleculele constituente se aranjeaza 1ntr-o comparti-
mentare func{ionala care, 1n mare, este identica 1n toate tipurile
celulare. Celula reprezinta un sistem cu un 1nalt grad de orga-
nizare lii cu o 1nalta specializare.
Unele organisme sunt formate dintr-o singura celula. Aces-
tea se numesc unice/ulare §i fac parte din 1ncrengatura proto-
zoare; au o viata individuala proprie, influentata de conditiile me-
diului 1n care 1§i desfa§oara activitatea (de exemplu: diferite tipuri
de bacterii, algele albastre verzi, amoeba etc.). Existenta proto-
zoarelor, unele dintre ele (bacteriile) cu o organizare interna foarte
simpla, constituie un argument 1n plus 1n favoarea ideii ca toate
organismele vii actuale deriva dintr-o singura celula primitiva -
celula ancestrala, aparuta acum cateva miliarde de ani.
Alte organisme sunt constituite din grupe de celule cu functii
diferite, unite 1ntre ele prin sisteme complexe de comunicatii; aces-
tea formeaza 1ncrengatura metazoarelor, au o viata autonoma, de-
pendenta 1nsa de activitatea tuturor grupelor luate 1nansamblul lor.
Celula reprezinta un sistem cu organizare complexa l?i cu o

1nalta specificitate. Aceste atribute 1ipermit sa reactioneze la variatiile
mediului ca ,,un tot", pastrandu- i, 1nacelai timp, integritatea.
Metazoarele, 1n general, cele superioare,i n special, sunt
formate dintr-o multitudine de tipuri celulare diferite, corespunzand
unei mari diversitati de structura l?i de posibilitati metabolice.
O celula vegetala, o bacterie, o amoeba i un hepatocit pre-
zinta mari diferentei ntre structura 9i modul lor de viata. Cu toate
acestea,i ntre diferitele tipuri de celule, exista analogii mult mai
profunde decat diferentele dintre ele.
Proprietatile esentiale comune tuturor tipurilor celulare sunt
urmatoarele:
a. toate celuleleinmagazineaza informatiilein genele ADN-ului;
b. codul genetic utilizat de genele tuturor celulelor, cu rare
exceptii, este acelai;
c. toate tipurile celulare decodifica informatia din genele ADN-
ului printr-un sistem format de ARN, care traduce aceasta
informatie;
d. toate celulele sintetizeaza proteinele cu ajutorul unei struc-
turi numite ribozom;
e. proteinele controleaza structura i functia tuturor celulelor;
f. toate celulele au nevoie de energie pentru a conserva inte-
gritatea i mediul lor intern i pentru a permite sinteza com-
plexa a diferitilor constituenti;
g. creterea i multiplicarea celulara;
h. toate celulele sunt separate de mediul nconjurator printr-o
plasmalema de natura lipo-proteica.
66
Organizarea generala a celulelor
Bacteriile sunt organisms unicelulare, reprezentand cele

mai pu\in dezvoltate forme de viata actuals; acestea sunt celule
primitive cu o structura relativ simpla, asemanatoare primelor ce-
lule aparute pe Terra acum 3,5 miliarde de ani; nu poseda Tnveli§i
nuclear, iar cromatina (ADN-ul), banca informatiei genetice §ii fac-
torul determinant al biosintezelor celulare, se dispune sub forma
unor bulgari de forme §ii dimensiuni variate, numiti nucleoizi sau
echivalenti nucleari. Aceste organisme poarta numele de pro-
cariote (Chatten - 1925) §ii din aceasta categorie, fac parte doua
grupe importante: arhebacteriile §ii eubacteriile, care sunt cele mai
numeroase.
Dintre arhebacterii, fac parte: bacterii anaerobe care traiesc
Tn mediu acid fierbinte (bacterii sulfuroase), bacterii care traiesci n
medii foarte concentrate de sodiu (Halobacterium halobium), bac-
terii anaerobe care reduc C02 Tn CH4 (bacterii metanogene). Din
grupa eubacteriilor, fac parte: bacteriile gram pozitive (bacillus
subtilis), bacteria verde fotosinteca (anaeroba), cianobacteria (al-
ga albastru - verde), bacteria purpurie fotosintetica (E. colij §ii bac-
teria gram negativa nefotosintetica.
Celulele procariote au un timp de generatie (ciclu celular)
mult mai scurt decat eucariotele. Cea mai mare parte din ele au un
perete extracelular rigid format din polizaharide; unele bacterii nu-
mite mycoplasme nu prezinta acest Tnveli§i celulozic. Existenta pe-
retelui rigid confera acestor bacterii forme cilindrice, sferice sau
spiralate. Sub peretele celular, se gase§lte plasmalema de natura
lipoproteica, care trimite Tn interior ni§lte invaginari care formeaza o
structura caracteristica numita mezozom.
Restul vietuitoarelor animale sau vegetale, care constituie
un grup de organisme foarte variate, sunt formate din celule care
Tn interfaza (perioada de timp dintre doua diviziuni succesive), au
un nucleu bine individualizat §ii se numesc eucariote. Din aceasta
grupa, fac parte: levurile, amoeba (organisme unicelulare - proto-
6
7
zoare); celelalte grupe formeaza organisme pluricelulare (vegetale

sau animale), metazoarele.
Procariotele difera de eucariote prin urmatoarele elemente
(tabelul 5).
Tabet 5: Diferenfele de organizare dintre procariote §i eucariote

Nr.
STRUCTURI PROCARIOTE EUCARIOTE
crt.
1. Organisme archae i eubacterii protiste, fungi,
plante i animale
2. Dimensiuni 1 - 10 mm 10 - 100 mm
3. Metabolism anaerob sau aerob aerob
4. Organizar unicelulare unicelulare i pluricelulare
e celulara (cu celule diferentiate)
5. Nucleul i - nu exista nucleu; - exista nucleu limitat
nveliul
i - exista un echivalent de o dubla membrana.
nuclear nuclear sau
6. ADN i nucleoid.
- o singura molecula - ADN combinat cu proteine
cromozomi circulara de ADN histone, formandi n timpul
necombinat repre- diviziunii un numar variabil de
zentand singurul cromozomii n raport de specie,
cromozom, avand cuprinzand 1,5x107-1,5x1011
750.000 pana la 5x106 perechi de baze.
perechi de baze.
7. ARN i ARN i proteinele - ARN sintetizat i procesat
proteine sunt sintetizatei
n i nucleu i mitocondrii;
n
acelai compartiment. - proteinele sintetizate Tn
citoplasma i mitocondrii.
8. Membrana - perete celular rigid - membrana
con\inand pepti- plasmatica lipo-
doglicani cu acid N- proteica;
acetil-muramic; - la plante, celulele sunt
- membrana plas- delimitate de un perete rigid
matica lipo- compus din fibrile celulozice
proteica; avandi n matrice
- nu au i alte polizaharide;
endomem brane. - prezinta
endomembrane (organite
membranare).
68
Nr.
STRUCTURI PROCARIOTE EUCARIOTE
crt.
9. Citoplasma - nu contine citoschelet; - au citoschelet format
- nu prezinta din filamente proteice fnalt
curenti organizate, implicate
citoplasmatici; i motilitatea celulara;
n
- nu au mitocondrii; - celulele animale !}i vegetale
enzimele lan\ului au mitocondrii !}i cloroplaste,
respirator se gasesc reprezentand uzina de putere;
pe fata interna a - ribozomi SOS.
membranei plasmatice;
10. Multiplicare - ribozomi ?OS.
amitoza mitoza somatica/
reductiot1ala (meioza)
11. Endo !}i absente prezente
exocitoza
Din punct de vedere evolutiv, procariotele sunt considerate

stramo ii eucariotelor.
In ciuda diferentelor semnalate mai sus, 1ntre procariote i
eucariote, exista, totui, unele asemanari 1n organizarea i functio-
narea lor moleculara:
folosesc acelai cod genetic;
au un mecanism similar de sinteza proteica.
Virusurile, dei au proprietati comune cu organismele vii ca:
autoreproducerea, ereditatea i mutatia, sunt dependente de ce-
lulele-gazda i sunt considerati paraziti.
Prionii sunt particule proteice, nu contin acizi nucleici, se re-
produc printr-un mecanism necunoscut 1n interiorul celulelor pe
care le paraziteaza; constituie agentii patogeni ai infectiilor lente.
3.2.1.
FORMA, DIMENSll.JNILE $1 NUMARUL CE·
LULELOR EUCARIOTE
Celulele eucariote sunt formate dintr-o cantitate variabila de

citoplasma care contine unul sau mai multi nuclei i organite mem-
branare i nemembranare, toate acestea fiind separate de mediul
1nconjurator printr-o membrana plasmatica.
Celulele unui metazoar variaza ca forma i structura i sunt
diferentiate dupa functia lor specifica. Cu alte cuvinte, specia-
6
9
lizarile functionale determina aparitia unor caractere morfologice
distincte, ceea ce nu Tmpiedica ca toate celulele sa aiba un model
comun de organizare.
Corpul omenesc este alcatuit din aproximativ 2.000 miliarde
de celule cu forme, dimensiuni i functii variate; acestea Ti desfa-
l?Oara activitatea Tn cadrul tesuturilor formate dintr-un ansamblu de
celule asemanatoare morfologic l?i care Tndeplinesc aceleai func-
{ii. La randul lor, tesuturile intra Tn alcatuirea organelor, formate din
celule cu forme i func{ii diferite.
Forma celulelor
Forma celulelor este destul de heterogena, datorita func-
tiilor i rapoartelor diferite dintre ele, precum i caracterelor fizico-
chimice ale mediului Tn care Ti desfaoara activitatea.
Din acest punct de vedere, Tntr-un organism pluricelular exista:
- Celule cu forma variabila. Acestea fac parte din grupul
de celule care Ti desfaoara activitatea Tn mediul lichid (celulele
sangvine), medii Tn care au o forma sferica; parasind vasul prin
fenomenul de diapedeza i trecand Tn tesuturi (Tntr-un mediu cu
structura fizica-chimica diferita), leucocitele polimorfonucleare sau
granulocitele (Tn special, cele neutrofile) Ti modifica forma, capa-
tand un contur neregulat, prin emiterea de pseudopode (sau celu-
lele hematopotice cand parasesc sinusoidele medulare pentru a
intra Tn sangele periferic sau celulele fagocitare care emit expan-
siuni lameliforme). Un alt exemplu 11 constituie epiteliul vezicii uri-
nare care se aplatizeaza 1n momentul 1n care aceasta se destinde
prin acumularea de urina.
- Celulele cu forma fixa reprezinta majoritatea celulelor
organismului uman. Forma lor variaza Tn functie de tipul celulelor,
a functiilor specifice i a influentelor mecanice la care sunt supuse
de elementele vecine. Din acest punct de vedere, se descriu:
celulele sferice: ovulul, celula grasa sau adipocitul;
celulele poliedrice: cubice i prismatice care intra Tn alca-
tuirea epiteliilor de acoperire (epiteliul tiroidian, al canalelor
excretoare ale glandelor salivare, epiteliul mucoasei gastro-
intestinale, nefrocitele tubilor contorti etc.);
celulele pavimentoase care iau parte la formarea seroa-
selor (mezoteliile), a endoteliului capilar etc.;
70
celulele fuziforme care au partea centrala mai 1ngrrn,ata, iar

cele doua extremitati, efilate (celula musculara neteda);
celulele cu prelungiri prezinta un corp celular (pericarionul
celulei nervoase) care are un numar variabil de prelungiri -
celula nervoasa, osteocitul.
Numarul celulelor determina talia individului.I n acest
sens, un nou-nascut 1n greutate de 3 kg este format din aproxi-
mativ 1012 celule, pe cand la un adult, numarul lor ajunge la o
valoare de 1015.
Organismul uman adult este format din cateva milioane de
miliarde de celule; numarul celulelor sangvine, cele mai nume-
roase din corpul uman, este estimat la multe zeci de mii de mili-
arde, a hepatocitelor i neuronilor - la aproximativ 100 miliarde, iar
a nevrogliilor, la 1.000 miliarde. n mod normal, mecanismele de
aparare i control mentin constante aceste valori, prin media deti-
nuta din raportul divizi ne - moarte celulara. n cazul bolilor proii-
ferative (tumori maligne), numarul lor crete, deoarece celulele
maligne se divid continuu.
Dimensiunile celulelor variaza 1n raport de tipul celular.
Celulele granulare din scoarta cerebelului, capul spermatozoidului
i limfocitele sunt celule mici, 5 - 10 µm. Marea majoritate a ce-
lulelor unui organism (hepatocitele, enterocitele, celulele muscu-
lare netede din peretH vasculari etc.), au dimensiuni medii, cu-
prinse 1ntre 10 - 30 µm. Motoneuronii din scoarta cerebrala (80 -
120 µm), ovocitul uman matur (200 µm), fibra musculara neteda
din uterul gravid (500 µm) i fibra musculara striata (12 cm) sunt
cele mai mari celule ale organismului uman.
Dimensiunile celulelor nu sunt dependente de talia indi-
vidului; dimensiuni considerabile ating protistele, multe dintre ele
ajungand sa fie vizibile cu ochiul liber (unii infuzori, foraminifere
etc.). Celulele ortopterelor i ale batracienilor sunt mai mari decat
ale mamiferelor, iar oul de strut, de 10 cm, este cea mai mare
celula. Conditiile mediului, starea fiziologica, ca i varsta organis-
mului pot modifica talia celulelor.
Volumul celular este relativ constant pentru acelai tip de
celule i este independent de talia organismului (oarece, om, ele-
fant). El este cuprins 1ntre 200 µ3 i 15.000 µ3. n raport de varsta,
celulele tinere avand un grad de hidratare sporit, sunt mai volumi-
noase decat cele mature.
71
Tntr-un tesut, celulele Ti mentin volumul constant, iar, Tn ca-

zul Tn care el crete, datorita amplificarii activitatii i schimbarii ra-
portului nucleo-citoplasmatic, echilibrul se restabilete printr-o divi-
ziune celulara.
3.2.2. 0RGANIZAREA MORFOLOGICA GENE·

RALA A CELULELOR
Planul general de structurare a unei celule animale cuprin-
de urmatoarele componente:
a. membrana celulara, membrana plasmatica sau plasmalema
care separa continutul celular de mediul Tnconjurator;
b. continutul celular sau protoplasma formata din nucleu i
citoplasma; la randul sau, citoplasma se prezinta sub doua
forme:
hialoplasma, citoplasma nestructurata sau citozolul;
morfoplasma sau citoplasma structurata care formea-
za un ansamblu de structuri numite organite celulare
aflate Tn citozol.
c. organitele celulare se clasifica Tn membranare (sistemul de
endomembrane) i nemembranare.
Membrana celulara
Membrana celulara reprezinta frontiera dintre teritoriul celular
i extracelular; ea confera individualitatea celulei, regleaza schim-
burile dintre celula i mediul extracelular i asigura interactiunile cu
alte celule. Aderenta la fata sa externa, se gasete glicolema, o
structura fibrilara polizaharidica. Pe fata interna a plasmalemei, se
insera microfilamentele de actina care intervin Tn motilitatea celulara.
Plasmalema Ti poate mari mult suprafata, prin emiterea
unor prelungiri filiforme, numite microvi/i (entorocite) care confera
celulei functia resorbtiva sau invaginari ale acesteia Tn citoplasma,
formand labirintul bazal (nefrocitele tubilor contorti distali), teritoriu
prin care se realizeaza un transport activ intens.
La nivelul celulelor vegetale, plasmalema este dublata la
exterior de un perete celulozic rigid care Tmpiedica distrugerea lor,
datorita diferentelor mari de presiune osmotica ale celor doua me-
72
dii (presiunea osmotica a compartimentului celular este mai mare

decat cea a mediului extracelular).
Nucleul
Nucleul, banca de date a celulelor eucariote, este centrul
de comanda l?i control al celulelor; el este sediul memoriei gene-
tice, necesare atat 'fn procesul diferentierii celulare, cat l?i i'n desfa-
l?urarea normala a proceselor biologice, a autoreplicarii l?i trans-
criptiei ADN-ului.
Din punct de vedere morfologic, nucleul este format din:
- lnveliJul nuclear este o structura lipo-.proteica complexa,
format dintr-o dubla membrana (interna l?i externa) care delimi-
teaza un spatiu intermembranar sau cisterna perinucleara, care, i'n
interfaza, separa continutul nuclear de citoplasma, cu rol 'fn con-
trolul schimburilor dintre cele doua compartimente.
Tnvelil?ul nuclear este 'fntrerupt, din loc i'n loc, de structuri
transcisternale - porii nucleari, la nivelul carora, membrana nucleara
externa se continua cu cea interna. Membrana nucleara externa se
continua, i'n unele zone, cu membranele reticulului endoplasmatic
granular.
- Cromatina ocupa spatiul nuclear 1n interfaza; 'fn mitoza,
ea se transforma 'fn cromozomi (cromatina l?i cromozomii sunt do-
ua forme de organizare a aceluial?i material genetic - ADN-ul).
Din punct de vedere morfo-functional, cromatina 1mbraca
doua forme:
- fin granulara, uniform dispersata 'fn nucleu, slab bazofila -
eucromatina - care exprima o activitate metabolica intensa;
- condensata sub forma de bulgari de diferite marimi
(cromocentre), intens bazofila - heterocromatina.
- Nucleolul este un organit nuclear corpuscular, respon-
sabil de sinteza acidului ribonucleic ribozomal (ARNr); este pre-
zent 'fn nucleii tuturor celulelor eucariote l?i numai i'n interfaza. Nu-
marul lor depinde de gradul de ploidie (nucleii celulelor somatice-
diploide vor contine doi nucleoli).
Citoplasma
Citoplasma prin morfoplasma formeaza organitele celulare
membranare l?i nemembranare. Organitele membranare formeaza
sistemul endomembranar care reprezinta o necesitate pentru ce-
73
lula eucariota. Tn fiecare compartiment reprezentat de un anume

organit, se deruleaza reactii biochimice specifice acestuia, gene-
rate de enzimele continute i mentinute acolo, datorita membranei
organitului respectiv care nu permite difuzia acestora.
Organitele celulare
Reticulul endoplasmatic, cu cele doua forme: rugos (REG)
i neted (REN), formeaza un sistem endomembranar implicat Tn
fenomenul de sinteza i secretie celulara.
Reticulul endoplasmatic rugos se caracterizeaza prin pre-
zenta ribozomilor ataati la fata externa a membranelor sale, avand
rol principal Tn sinteza proteinelor de structura i de export. Reticulul
endoplasmatic neted, lipsit de ribozomi, este specializat Tn metabo-
lismul lipidic, iar 1n hepatocit, intervine 1nprocesele de detoxificare.
Porii din inveliul nuclear inveli nuclear
Reticul endoplasmatic Reticul
Elcmcnte
citoscheletale
poliribosomi
pinocitoza Picatura Lizosom

lipidica
Figura 8: Diagrama unei ce/u/e animate

(model de reconstructie pe baza date/or de microscopie e/ectronica)
74
Complexul Golgi, situat perinuclear, este organitul celular

care prezinta eel mai nalt grad de polimorfism. El intervinei n sor-
tarea, modificarea i ,,reambalarea" proteinelor sintetizate la nivelul
REG, dirijand veziculele cu acest continut prelucrat catre fata pro-
funda a plasmalemei, n vederea exportului sau spre destinatii intra-
celulare; mai intervine i n procesele de reciclare a membranelor.
Mitocondriile, organite celulare de forma sferica sau bas-
toniforma, sunt formate dintr-o dubla membrana lipoproteica care
delimiteaza doua spatii: camera externa i interna sau matricea
mitocondriala; membrana mitocondriala interna trimitei n interiorul
matricei invaginari digitiforme, numite creste mitocondriale i care
maresc mult suprafata acesteia. Prin continutul enzimatic, mito-
condria reprezinta ,,uzina de putere" a celulei, ea furnizand prin
procesele de fosforilare oxidativa, cea mai mare cantitate de ATP,
molecula macroergica care furnizeaza energia necesara derularii
multor unctii celulare.
In celulele vegetale, se gasesc cloroplastele, echivalentul
mitocondriilor care, ca i acestea, sunt delimitate de doua mem-
brane; prin procese de fotosinteza, ele furnizeaza energia nece-
sara derularii unor functii celulare. Fata de celula vegetala are o
structura suplimentara, numita vacuo/a centrala, care contine apa,
hidrocarbonate, acizi organici, proteine, ioni anorganici i pigmenti;
un mare numar dintre aceti produi sunt deeuri sau materiale de
rezerva acumulate de celulai n cursul vietii.
Lizozomii, organite sferice, !imitate de o membrana care
delimiteaza o matrice omogena, moderat densa la fluxul de elec-
troni, cu un bogat continut enzimatic (hidrolaze). Au rol n digestia
celulara, degradand substantele patrunsei n celula (heterofagie),
organitele uzate (autofagie) i moleculele de export (crinofagie).
Peroxizomii, organite membranare submicroscopice al
caror continut enzimatic intervine n producerea sau descompu-
i
nerea peroxidului de hidrogen (H202), oxidarea acizilor grai etc. n
celulele vegetale, peroxizomii din seminte, numiti glioxizomi, con-
vertesc grasimilei n glucide, iar cei localizatiin celulele frunzelor
realizeaza fotorespiratia, proces prin care plantele capteaza 02 i
elimina C02.
Ribozomii sau corpusculii lui Palade, organite nemembra-
nare formate din ribonucleoproteine, se gasesc fie liberi n cito-
75
plasma, fie atal?ati la membranele reticulului endoplasmatic l?i
intervin Tn sinteza proteica.
Centriolii, organite membranare, sunt implicati Tn motilitate,
organizarea microtubilor i diviziunea celulara.
Structurile citoscheletale, reprezentate de microfilamen-
tele de actina, microtubi, filamente intermediare i microtrabecule,
fac parte din grupa diferentierilor citoplasmatice i au rol major Tn
motilitatea celulara i Tn mentinerea formei celulare i adaptarea
acesteia la necesitatile ei fun'ctionale. Tn citozol, Tn afara organi-
telor celulare, se pot gasi incluziuni celulare.
3.2.3. 0RGANIZAREA CHINIICA A CELULEI
3.2.3.1. COMPOZITIA
•
MOLECULARA A MATERIEi VII
Celula, unitatea morfo-funct,ionala a lumii vii, are Tn struc-
tura sa chimica marea majoritate a elementelor din mediul Tnconju-
rator. Din cele 92 elemente ale sistemului periodic al lui D. I. Men-
deleev, Tn structura chimica a materiei vii, intra un numar de 60,
cele cu ponderea moleculara mica i cu un numar atomic redus.
Elementele grele nu sunt adecvate vietii, datorita insolubilitatii lor
Tn solutii apoase la pH fiziologic. Unele dintre acestea se gasesc
Tn toate tipurile celulare i Tn propoftii mari (oxigenul, hidrogenul,
carbonul), altele intra Tn proportii reduse, neglijabile sau deice, de
pilda, metalele rare, gazele nobile (absenta gazelor nobile din
materia vie se explica prin inertia lor chimica foarte mare).
Din cele 60 de elemente descoperite Tn celule, doar 20 sunt
esentiale pentru viata; acestea se clasificai n trei grupe: elemente
majore (2 - 60%), elemente putin abundente (0,02 - 0,1%) i
oligoelemente (tabelul 6).
Compozitia medie Tn elemente a materiei vii difera de cea a
litosferei, hidrosferei i atmosferei considerate Tn ansamblul lor.
Propoftia diferita se datoreaza faptului ca organismele pre-
iau selectiv din mediu elementele necesare vietii i multiplicarii.
Celula este sediul a numeroase procese chimice care nece-
sita interventia a numeroase molecule i ioni anorganici care inter-
actioneaza de o maniera coordonata.
'
76
Tabel 6: Elementele chimice din materia vie §i unele din funcfiile /or (Gh. Benga)
Nr.
Categoria Elementul Simbol FUNCTII
atomic
Elemente Oxigen 0 8 Intra fn compozitia
majore, Carbon c 6 substantelor organice din celula
abundente Hidroge H 1
(2 - 60%) n Azot N 7
Elemente Intra fn compozitia acizilor nucleici
putin Fosfor p 15 a nucleotidelor, a fosfolipidelor,
abundente a proteinelor; fosfat de Ca fn os
(0,02 - Intra fn compozitia proteinelor;
0,1%) Sulf s 16 ionul (8042-)
Clor Cl 17 Anion maior'extracelular (Cl")
Sodiu Na 11 Cation maior extracelular (Na )
Potasiu K 19 Cation maior intracelular (K )
Fosfat de Ca Tn os
Cationul extracelular (Ca2+)
influenteaza exitabilitatea
Calciu Ca 20 neuromusculara, coagularea
sangelui, activator al enzimelor:
lipaza, fosfataza alcalina,
colinesteraza, ATPaza
Cationul major intracelular (Mg )
influenteaza excitabilitatea
neuromusculara,
Magneziu Mg 12
permeabilitatea
membranelor, activator al
enzimelor:
Oligoele- ATPazele,
Constituentenzimele de fosforilare
al hemoglobinei
Fier Fe 26 si al enzimelor de oxido-reducere
mente
(sub 0,02) Necesar pentru utilizarea Fe
"in hematopoeza; activator
al unor enzime de oxido-
Cupru Cu 29
reducere, asigura transportul 02
la multe animale marine
Intra fn vitamina 812
Cobalt Co 27 Activator al unor enzime
Activeaza sau intra fn structura
unor hormoni (insulina) §i a unor
Mangan Mn 25 enzime: anhidraza carbonica,
carboxipeptidaza
Zinc Zn 30
lod I 53 Constituent al hormonilor tiroidieni
Molibden Mo 42 Cofactor al unor enzime
Intra fn compozitia osului
Fluor F 9 $i a dentinei
Bor B 5 Cofactor al unor enzime la plante
Vanadiu v 23 Cofactor al unor enzime
Siliciu Si 14 Element de constitutie
77
Tn unele situatii, cooperarea moleculelor este posibila dato-

rita cuplajelor intermoleculare frecvente i tranzitorii, ca de exemplu,
cuplarea ligandului cu receptorul, a proteinei G cu adenilatciclaza, a
actinei cu miozina etc. Alteori, moleculele se asambleaza i formea-
za asociatii mai mult sau mai putin stabilei n vederea constituirii
unei entitati structurale; de exemplu, filamentele de miozina sunt
formate prin cuplarea celor trei perechi de miozine, microtubii sunt
formati prin asamblarea moleculelor proteice de tubulina etc.
' Tn acest context, ntelegerea structurii i functionarii celulei
necesita o cunoatere aprofundata a diverselor molecule care co-
opereaza pentru a asigura numeroasele activitati celulare i for-
marea diferitelor sale structuri.
Tabel 7: Repartifia procentua/a a unor e/emente
din rnveli§uri/e terestre §i corpul uman
lnveli1?uri Corp
Nr. Elementul terestre uman
crt. % %
1. Hidrogen (1) 0,95 9,31
2. Carbon (6) 0, 18 19,37
3. Azot (7) 0,03 5,14
4. Oxigen (8) 50,02 62,81
5. Fluor (9) 0,10 0,009
6. Sodiu (11) 2,36 0,26
7. Maqneziu (12) 2,08 0,04
8. Aluminiu (13) 7,30 0,001
9. Siliciu (14) 25,80 < 0,001
10. Fosfor (15) 0, 11 0,64
11. Sulf (16) 0, 11 0,63
12. Cler (17) 0,20 0,18
13. Potasiu (19) 2,28 0,22
14. Calciu (20) 3,22 1,38
15. Magneziu (25) 0,08 0,0001
16. Fier (26) 4,18 0,005
Chiar bacteriile, celule procariote de talie mica, sunt extrem

de complexe pe plan molecular, de exemplu, E. coli con\ine 5.000
- 6.000 de molecule organice diferite (proteine, lipide, glucide,
acizi nucleici, coenzime etc.). Celulele eucariote cuprind un numar
mai ridicat de molecule diferite (pana la aproximativ 10.000i n anu-
mite celule), n functie de complexitatea lor morfo-functionala.
78
Compu!i>ii chimici ai celulei pot fi 1ncadrati 1ntr-un numar

redus de grupe moleculare mari numite biomolecule:
1. Apa;
2. lonii anorganici;
3. Molecule organice (glucide, lipide, proteine, acizi
nucleici).
Tabet 8: Compozifia moleculara a celulei (!. Dicu/escu - 1983)
Nr. Componen\i % din Nr. molecule
crt. areutat la o molecula de ADN
1. Apa 60
e - 90 12 x 107
2. Proteine 7 - 20 7 x 102 - 3 x 103
3. Lipide 1 -3 7 x 103
4. Glucide 1 -2 -
5. ADN 0,4 1
6. ARN 0, 7 4,4 x 10
7. Alte molecule orqanice 0,4 4,0 x 103
8. Saruri minerale 1,5 6,8 x 104
Biomoleculele organismelor vii sunt organizate 1n trepte de

complexitate progresiva. Pe prima treapta, se afla precursorii
foarte simpli, cu ponderea moleculara mica, proveniti din mediu,
ca azotul atmosferic, apa !i>i dioxidul de carbon. Pe urmatoarea
treapta, se afla biomoleculele de baza sau unitatile constituente
formate din diver!i>i precursori: acizi gra!i>i, acizi aminati, monoza-
haride, nucleotide etc. Urmeaza macromoleculele care se formea-
za din unitatile constituente, unite 1ntre ele prin legaturi covalente
(polizaharidele, proteinele, acizii nucleici). Pe o treapta superioara
acesteia, se plaseaza sistemele supramoleculare, rezultate 1n ur-
ma asocierii diferitelor macromolecule (glicolipide, proteoglicani,
lipoproteine etc.). Pe treapta cea mai 1nalta, se gasesc asamblarile
diferitelor complexe !i>i sisteme supramoleculare 1n structuri ce-
lulare: fibra cromatiniana formata din ADN !i>i proteine, mitocondrii,
lizozomi, organitele sintezei i secretiei celulare etc.
3.2.3.2. APA IN SISTEMELE BIOLOGICE

Repartitia apei n organism. Apa sau oxidul de hidrogen
este substanta cu cea mai larga raspandire pe glob (acopera
aproximativ 70% din suprafata planetei). Multi cercetatori o con-
79
sidera matricea vietii atat din punct de vedere istoric (este aproape
80
sigur ca viata a aparut Tn mediul acvatic i a fast cadrul ei primar

de dezvoltare), cat i actual (nu se poate concepe existenta vre-
unei torme de viata fara prezenta apei).
In celula, apa se gasete Tn proportie de 60 - 90%. Aceasta
variabilitate este determinata de specie (exista specii marine al
caror continut Tn apa depaete valoarea de 90%), de varsta in-
dividului, iar la acelai individ, Tn functie de tesutul i organul luat
Tn considerare (tabelul 9).
Tabel 9: Continutul procentual de apa al principa/elor tesuturi §i organe

Nr Tesutul Apa (% din masa)
.
crt.
1. Dentina 10
2. Tesut eses 30
3. Tesut adipes 30
4. Tesut cartilagines 50
5. Ficat 70
6. Tesut nerves (substanta alba) 70
7. Tesut nerves (substanta cenui;;ie) 85
8. Pancreas 75
9. Mui;;chi striat 76
10. lnima, plamani, rinichi, splina 80
ntr-un organism pluricelular, apa este repartizata Tn doua

i
compartimente: intracelular (55% din totalul apei din organism) i
extracelular (45% din total), separate de plasmalema, a carei per-
meabilitate face posibila deplasarea acesteia Tn ambele sensuri.
Apa intracelulara se gasete sub doua forme: apa libera i apa
legata. Apa din organism provine din doua surse: una exogena sau
apa ingerata i alta endogena, rezultata din reactiile metabolice.
Structura apei. ntr-o molecula de apa,' doi atomi de hidro-
gen sunt legati la un atom de oxigen prin legaturi covalente. Prin
analize spectroscopice i raze X, s-a constatat ca unghiul dintre
cei doi atomi de hidrogen i oxigen este de 104,5°. Aranjamentul
electronilor din molecula de apa (doi electroni se afla Tn apropierea
atomului de oxigen, iar restul de opt graviteaza de-a lungul a patru
orbite eliptice) Ti confera acesteia asimetria electrica. Micarea
acestor electroni are loc Tntr-un plan perpendicular pe planul mole-
culei de apa. Atomul de oxigen puternic electrono-negativ, tinde sa
80
atraga electronii mici ai atomilor de hidrogen, lasand nucleul de

hidrogen dezgolit.
Ca urmare, fiecare dintre cei doi atomi are oi ncarcatura
locala partial pozitiva (o+), iar atomul de oxigen, oi ncarcatura lo-
cala partial negativa (o-), prin urmare, apa este un dipol electric.
fri functie de polaritatea lor, moleculele de apa pot forma,
ntre ele sau cu alte molecule polare, legaturi sau punti de hi-
i
drogen, prin fenomenul de atractie electrostatica i
ntre
i
ncarcatura
partial negativa a atomilor de oxigen al unei molecule de apa 9i
ncarcarea partial pozitiva a unui atom de hidrogen al moleculei de
i
apa adiacente. Datorita aranjamentului aproape tetraedric al elec-
tronilori n jurul atomului de oxigen, fiecare molecula de apa este
potential capabila sa formeze punti de hidrogen cu patru molecule
de apa vecine, proprietate care confera marea coeziune interna a
apei lichide. Legaturile de hidrogen sunt relativ slabe comparativ
cu legaturile covalente, dar ele sunt cele mai puternice atunci cand
cele doua grupari care interactioneaza sunt orientatei n sensul
realizarii unei atractii electrostatice maxims.
Legaturile de hidrogen cu importanta biologica se reali-
zeazai ntre:
1. o grupare hidroxil 9i apa;
2. o grupare carboxil 9i apa;
3. doua lan\uri peptidice;
4. i
ntre perechile de baze azotate complementare din struc-
tura bicatenara a ADN-ului.
Studiilei
ncepute, n 1933, de Bernal 9i Fowler i continuate
de alti cercetatori au aratat ca apa 9i gheata reprezinta un an-
samblu de molecule 9i nu de ioni, fiecare molecula de apa fiindi n-
conjurata de alte patru molecule,i n cadrul unei retele cristaline
compacte,i n cazul ghetii 9i, partial distrusa, n apa lichida.
Prin proprietatile sale fizice, ocupa un loc apartei n com-
paratie cu majoritatea lichidelor, prezentand numeroase anomalii
de comportamenti n ceea ce prive9te dinamica proprieta\ilor ei fi-
zice, n func\ie de temperatura 9i presiune. Printre aceste anoma-
lii, mai importante sunt urmatoarele:
1. solidificarea ei are loc cu cre9tere de volum;
2. are densitate maxima la 4°C;
3. caldura specifica a apei variaza neliniar cu temperatura,
avand un minimum la 35°C;
81
4. la creterea presiunii, vascozitatea apei scade initial, pentru

ca apoi sa creasca liniar cu creterea presiunii.
Rolurile apei in sistemele biologice

1. Datorita polaritatii sale, apa constituie solventul universal
atatin lichidul intercelular, cat i n mediul intracelular unde au loc
reactiile chimice specifice materiei vii. Ea constituie un excelent
solvent pentru substantele a caror coeziune este asigurata de
forte electrostatice - sarurile minerale. De exemplu, NaCl se for-
meaza datorita atractiilor electrostatice existentei ntre ionii de Na+
i cei de er. Clorura de sodiu se dizolva rapidi n apa, deoarece
atomii de o- din moleculele de apa sunt atrai de ionii de Na+, iar
atomii de H+ sunt puternic atrai de er.
2. Prin caracterul sau de solvent, apa circulanta este mediul
de transport al substantelor de la o celula la alta, de la un organ la
altul (lichidul intercelular, sange, limfa), i de eliminare a produilor
de catabolismi n afara organismului, prin urina i transpiratie.
3. Apa intracelulara este necesara pentru reactiile de hi-
droliza i apare ca produs final al oxidarilor biologice i al reactiilor
de condensare; la plante, apa este, alaturi de dioxidul de carbon,
un reactant primari n procesul fotosintezei.
4. Datorita conductibilitatii termice i caldurii specifice foarte
mare, apa reprezinta factorul esential de tamponare a variatiilor de
temperaturai n cadrul organismelor, iar la homeoterme, evapo-
rarea apei constituie principala modalitate de degajare a caldurii
rezultata din catabolismi n mediul nconjurator (termoreglare).
5. Alte functii: protectie mecanica a unor sisteme (sistem
nervos) i mediu de flotatie (suspensie) ale unor celule libere (de
exemplu: elementele figurate ale sangelui).
3.2.3.3. SUBSTANTELE MINERALE

'
La organismele animale, substantele minerale se gasesc
sub doua forme:
1. ionii liberi dizolvafiin diferite compartimente celulare
sau lichidele extracelulare.
Din punct de vedere al importantei biologice, ei sei nca-
dreazain urmatoarele trei grupe:
- bioelemente sau elemente de structura: H, 0, N, C;
82
- elements majore metalice: Na, K, Mg, Ca;

- elements majore nemetalice: P, S, CL
Tn functie de sarcinile lor electrics ei se clasifica 1n:
- cationi: K\ Na+, Ca2+, Mg2 +, Fe2+ etc.;
- anioni: Cl", Po/·, N03-, so/·, co/· etc.
2. combinafi cu substante organice
lonii sunt importanti pentru mentinerea presiunii osmotice l?i
a echilibrului acido-bazic, influenteaza activitatea enzimelor l?i a
numeroase procese celulare: permeabilitate, excitabilitate, con-
tractilitate, vascozitate, diviziunea celulara, asocierea unor protei-
ne la AON etc.
lonul de K\ cation monovalent, se gasel?te 1ntr-o cantitate
mai mare intracelular (140 mM) decat 1n mediul extracelular (5 mM),
reprezentand un participant indispensabil Tn metabolismul celular; o
concentratie crescuta de K+ este necesara pentru sinteza proteica,
iar unele enzime, pentru a ajunge la activitatea lor maximala, au
nevoie de K+.
Plasmalema a numeroase tipuri celulare contine o pompa
moleculara care importa K+ din mediul extracelular, exportand,
concomitent, ioni de Na+ (concentratia extracelulara a Na+ este de
145 mM, iar intracelular, este de 5 - 15 mM). Aceasta pompa de
Na+- K+ a carei functionare necesita interventia cationilor bivalenti
de Mg2+, este mai bie reprezentatai n plasm'alemele celulelor e-
citabile (nervoase, musculare).
Pomparea 1n directii opuse creeaza diferente de con-
centratie a acestor ioni de o parte l?i de alta a plasmalemei; acel?ti
gradienti se afla la originea unui potenal electric care se stabile9te
ntre cele doua fete ale membranei celulare
i i permite transmiterea
unui semnal nervos.
Tabet 10: Concentratiile ionice rn cele doua medii la mamifere
Nr. Concentratia intracelulara (mM) Concentratia extracelulara (mM)

loni
crt.
1. Na.,. 5 - 15 145
2. K+ 140 5
3. Mg"+ 30 1 -2
4. Ca"+ 1 - 2 ($;10-7M sub forma libera) 2,5 - 5
5. H+ 4x10-5(10-7,4M-pH 7,4) 4x10-5(10-7,4M-pH 7,4)
6. er 4 110
83
Biologie celulara §i moleculara
Principalii cationi bivalenti din celula sunt Mg2+ §i Ca2\ con-

centratia intracelulara a Ca2 + este de 1 - 2 mM, din care 10-7 M se
gase§te sub forma libera, iar a Mg2 + este de 30 mM. Ei intervin Tn
aproape toate structurile §i functiile celulare. lonii de Ca2 + sunt
implicati Tn motilitatea celulara, prin fixarea lor la proteinele fixa-
toare de calciu (troponina C, calmodulina) §i sunt mesagerii se-
cunzi, necesari Tn aparitia unui raspuns biologic; ionii de Ca2+, de
asemenea, sunt necesari pentru cuplarea unor proteine cu ADN-ul,
jucand un rol esential Tn replierea §i condensarea cromozomilor etc.
lonii de Mg2+ activeaza aproximativ o suta de enzime, con-
vertesc ATP-ul Tn AMP ciclic, intervin Tn polimerizarea microtubilor,
participa la sinteza transportorilor de electroni, au rol n stabilitatea
ribozomilor (dependenta, n mare masura, de concentratia intrace-
lulara de Mg2+).
n organism, raportul Ca2+/Mg2+ reprezinta unul dintre prin-
i
cipalele mijloace de reglare a metabolismelor intracelulare.
Foarte multe enzime contin,i n structura lor, cationi de Ca2 +,
Zn +, Mn +, Fe +, Co + §i Cu + sau necesita prezenta lor pentru a fi
2 2 2 2 2
activate. Sulful, din punct de vedere biologic, detine un rol impor-

tant n fenomenele de detoxificare celulara, prin sulfo-conjugarea
substantelor cu grupari fenolice, iar mucopolizaharidele sulfatate
intervinin procesele de cre§tere, regenerare §i imunitate.
n toate tipurile celulare, anionul fosfatat (P043 ) joaca
i - un rol
extrem de importanti n metabolismul energetic,i n special,i
n sinteza
moleculei macroergice de ATP, fara de care cea mai mare
parte din activitatile celulare consumatoare de energie va fi im-
posibila. De asemenea, fosfatul este un compus esential al unor
proteine, ca acizii nucleici, cu care stabile§te legaturi covalente.
i
n celula, sarcinile pozitive ale cationilor mono- §i bivalenti
sunti ntotdeauna compensate de un numar egal de sarcini ne-
gative; aceste sarcini antagoniste sunt date,i n mod special, de er,
3
P04 -, HC03-, precum §i de proteine §i alte molecule organice.
3.2.3.4. MOLECULELE ORGANICE

De la elemente chimice la structuri celulare
Substratul proceselor vitale este reprezentat de moleculele
organice,i
n special de proteine; acestea structureaza edificiul ex-
trem de complex al materiei vii.
84
H
Atma cu u, m:bi
Figura 9: Punerea rn comun a e/ectronilor creeaza posibilitatea formarii

unui numar mare de compu§i cova/enfi: a) atomi; b) compu§i covalenfi
Studiul acestor molecule este necesar din eel putin doua

puncte de vedere:i n primul rand, biomoleculele sunt produi ai
selectiei din perioada evolutiei, fiind cele mai potrivite pentru exer-
citarea functiilor biologice, iar prin interactiunile lor specifice, se
realizeaza logica moleculara a lumii vii;i n al doilea rand, marimea
i forma lor determina nu numai specificitatea interactiunilor biolo-
gice, ci i dimensiunile i ultrastructura celulelor.
Moleculele organice care edifica materia vie au la baza
carbonul, oxigenul, hidrogenul i azotul i reprezinta mai mult de
90% din greutatea celulelor uscate etc. De asemenea, au o serie
de proprietati deosebit de importante, comune i individuale.
85
Atomii de baza sunt cele mai U§oare elemente care for-

meaza legaturi covalente puternice, datorita faptului ca taria unei
astfel de legaturi este invers proportionala cu masele atomice ale
atomilor Tntre care se stabile§te legatura. Formarea cu u§urinta a
legaturilor covalente se realizeaza prin punerea Tn comun a elec-
tronilor, creand, astfel, posibilitatea formarii unui mare numar de
compu§i covalenti (fig. 9).
Carbonul, azotul §i oxigenul pun Tn comun una sau doua
perechi de electroni pentru a forma legaturi simple sau duble, ce-
ea ce le confera o extraordinara mobilitate a legaturilor chimice.
De remarcat este faptul ca fiecare dintre ace§ti atomi poate
forma un numar determinat de legaturi covalente, dupa un aran-
jament spatial bine definit (fig. 10).
Figura 10: Tipuri de /egaturi covalente ale carbonului, azotului §i oxigenului
Unul din rolurile cele mai importante ale atomului de carbon

este capacitatea de a se lega Tntre ei prin punerea Tn comun de
electroni (donarea sau acceptarea de patru electroni); aceasta
proprietate conduce la formarea unui octet exterior, format prin le-
gaturi covalente cu alti patru atomi de carbon.i n acest fel, se
explica posibilitatea atomilor de carbon de a forma catene liniare,
ramificate sau structuri ciclice Tntr-o mare varietate de molecule
organice (fig. 11).
Mentionam ca atomii de carbon formeaza legaturi covalente §i
cu oxigenul, hidrogenul, azotul §i sulful, prin care, Tn structura mole-
culelor organice, pot fi introduse numeroase tipuri de grupari func-
tionale cu proprietati fizice §i chimice distincte. Se poate obtine o
mare diversitate de structuri tridimensionale, molecule de marimi §i
forme diferite sau cu o mare varietate de grupari functionale.
8
6
Figura 11: Structurile realizate de atomii de carbon unifi prin legaturi covalente:
a) catena liniara; b) catena ramificata; c) structura ciclica
Toate biomoleculele deriva din precursori foarte simpli, cu

pondere moleculara mica,i n special, C02 H20, proveniti din me-
diul extracelular i azotul atmosferic. Prin diferite etape metabolice
intermediare, celula transforma aceti precursori n compu i orga-
nici cu masa moleculara ceva mai mare, reprezentand biomole-
culele de baza, monomeri sau unitatile constituents (monoza-
haride, acizi grai, aminoacizi i nucleotide). Stabilirea legaturilor
covalenteintre unitatile constituente conduce la formarea macro-
moleculelor cu PM relativ mari. Lipidele, constituenti organici im-
portanti ai celulelor, au o greutate moleculara intermediarai ntre
macromolecule i monomeri (P.M.i ntre 750 - 1.500 D). Datorita
faptului ca unele lipids (fosfolipidele) se asociaza spontan, i n
structuri de tipul unor particule mari (micelii lipidice)i
n mod arbitrar
ca macromoleculele.
La treapta de organizare imediat superioara a materiei vii,
macromoleculele diferitelor clase se asociaza formand sisteme
supramoleculare (lipoproteine, proteoglicani, glicolipide etc.). Aceasta
organizare supramoleculara se realizeaza prin forte slabe, neco-
valente, reprezentate prin: fortele van der Waals, legaturi de hi-
drogen, legaturi ionice i interactiuni hidrofobe.
Fort,ele van der Waals rezulta din fort'ele de atract'ie dintre

atomii diferitelor macromolecule care sunt proportionale cu 1/r (r =
distanta care separa nucleii a doi atomi i care nu trebuie sa depa-
easca 0,1 - 0,2 nm). Pentru legatura ion - ion, panta graficului
energiei potentiale este proportionala cu 1/r, pentru legatura ion -
dipol, cu 1/r3, iar pentru legatura dipol - dipol, cu 1/r7. Acest lucru
dovedete ca aceste forte sunt relativ puternice la distante inter-
87
moleculare foarte mici, devenind nesemnificative cu cre9terea

acestora.
Fort,ele van der Waals se Tntalnesc Tn solut'iile foarte con-
centrate, jucand un rol important Tn procesele biochimice din ce-
lule, 1n special, 1n structurile tranzitorii ale moleculelor din comple-
xele celulare, cum ar fi: Tn sinteza proteinelor, Tn actiunea enzima-
tico-catalitica etc. Daca doi atomi sunt suficient de apropiati, astfel
Tncat orbitele lor electronice externe se intersecteaza, ei se res-
ping violent. Pentru un atom dat, distanta la care forta de repulsie
este egala cu forta de atractie define9te raza van der Waals al
acestui atom. Forta de atractie este maximala atunci cand forta de
repulsie este egala cu forta de atractie, adica Tn cazul Tn care
distanta Tntre atomi este mica.
'
Legaturile prin punfi de hidrogen se formeaza prin fortele
de atractie electrostatice dintre un atom de hidrogen unit printr-o
legatura covalenta la un atom de oxigen sau azot vecin avand o
sarcina electrica slab pozitiva, 9i un atom de oxigen sau azot vecin,
cu o sarcina electrica slab negativa. Dimensiunile puntilor de hi-
drogen pot avea valori de pana la 0,28 nm, iar acest tip de legatura
este u9or de disociat 9i necesita un consum redus de energie.
Formarea puntilor de hidrogen explica agregarile mole-
culare care confera apei proprietati fizice deosebite 9i joaca un rol
important Tn stabilirea structurii spatiale a biopolimerilor, ca Tn ca-
zul moleculei de AON bicatenar sau Tn replierea unui lant poli-
peptidic formand o structura r, (fig. 12).
Figura 12: Stabilirea puntilor de hidrogen rntre doua regiuni

ale unui /ant polipeptidic cu formarea structurii {3
8
8
Legaturi ionice, foarte slabein solutii apoase, foarte puter-

nicei
n absenta apei (cristalele de clorura de sodiu), se realizeaza
prin atractia electrostaticai
ntre atomii cu sarcini electrice opuse,
conform legii lui Coulomb, dupa care:
3+ .
F (fo$) =
r2 , D
=
D constanta dielectrica (1 pentru vid; 80 pentru apa);
r = distanta dintre cele doua sarcini electrice.
n acest sens, unul dintre cele mai concludente exemplei

i i
constituie formarea legaturilor ionicei ntre grupurile fosfati ncar-
cate negativ din acidul dezoxiribonucleic i gruparile aminoi ncar-
cate pozitiv din acizii aminati: arginina i lizina din structura pro-
teinelor histone.
lnteracfiunile hidrofobe se stabilesci ntre segmentele ne-

polare sau hidrofobe ale macromoleculelor.
Potrivit unor argumente termodinamice, moleculele amfipa-
tice sau regiunile hidrofobe ale unor molecule nu sunt solubilei n
apa. Apropierea acestor molecule sau portiuni de molecule le
permite ramanereai n solutie, diminuand numarul de molecule de
apa carei nconjoara fiecare molecula hidrofoba i constituie origi-
nea acestor interactiuni hidrofobe. n mediul apos, unele lipide (de
exemplu: fosfolipidele) se asociaza spontani ntre ele, pentru a
forma structuri sferice sau ovoidale numite mice/ii,i n care gru-
parile hidrofobe (lanturi de acizi grai) sunt orientate spre interior,
iar gruparile polare sau hidrofile, catre mediul apos.
Micelele iau na§tere datorita proprietatilor moleculelor de
apai
nconjuratoare de a forma maximum posibil de legaturi de hi-
drogen atati ntre ele, cat §i cu gruparile polare sau hidrofile ale
moleculelor amfipatice orientate spre exterior.i ntre structurile hi-
drofobe din micele, nu exista adevarate legaturi stabilite stoechio-
metric, motiv pentru care se utilizeaza termenul de interac(iuni
hidrofobe,in lac de legaturi hidrofobe. Acestea au o capacitate de
orientare mai mica decat legaturile de hidrogen; cu toate acestea,
ele tind sa produca sisteme de mare stabilitate.
89
lnteractiunile hidrofobe se stabilesc nu numai Tntre lipide, ci

i Tntre proteine i lipide - proteine, acestea din urma fiind impli-
cate Tn formarea membranelor biologice.
Tn studiul unei molecule organice, Tn special a unei macro-
molecule, de o mare importanta este cunoaterea ponderii lor ma-
cromoleculare (PM) care este data de suma greutatii tuturor ato-
milor care intra Tn structura lor i se exprima Tn avograme (1,6 x 10-
24 grame). De exemplu, glucoza (C5H1205) are o greutate
moleculara de 180 avograme (6C = 72; 12H = 12; 60 = 96). Pon-
derea moleculara a unei molecule de AON dintr-o celula eucariota
este, Tn general, superioara.
Tn eel mai Tnalt nivel de organizare, diferitele complexe i
sisteme supramoleculare sunt asamblate, la randul lor, formand
organitele celulare (nucleu, mitocondrii, complex Golgi etc.). Se
pare ca Tn aceasta structuralizare, componentele supramoleculare
sunt unite prin legaturi necovalente.
Specificitatea asocierii moleculelor este regizata de anumite
reguli care depind, Tn totalitate, de natua fortelor de atractie puse
Tn joc pentru a forma agregate stabile. In consecinta, pentru a se
asocia prin aceste interactiuni, macromoleculele trebuie sa pre-
zinte, la suprafata lor, regiuni complementare care permit adapta-
rea lor ca de exemplu cuplarea unei enzime cu un substrat (fig.
13), ligand - receptor. Posibilitatea formarii de asociatii stabile de-
pinde de complementaritate i de proprietatile chimice ale macro-
moleculelor.
Figura 13: Cup/area unei enzime cu substratul

prin complementaritate §i legaturi ionice
Natura fortelor care leaga specific macromoleculele Tntre

ele permite Tntelegerea schemei generale, dupa care macromo-
90
leculele sunt asamblatei n structuri celulare. Macromoleculele

sintetizate, prin interactiunile specifice, se asambleaza dupa un
model caracteristic structurilor celulare, procese care se deruleaza
n doua moduri:
i
prin integrarea noilor macromoleculein structurile preexistente;
autoasamblarea diferitilor constituentiin structuri indepen-
dente.
Tn acest sens, plasmalema §i endomembranele se dezvolta
prini
ncorporarea de noi constituenti;i n timp ce ribozomii se for-
meaza de nova, prin asamblarea de macromolecule.
Glucidele sau hidrafii de carbon sunt substante organice

formate din trei atomi: carbon, hidrogen §i oxigen,i n propoftie de
1/2/1.
Tn functie de gradul lor de complexitate, acestea se clasifica
n:
i
- Monozaharide/e sau oze/e, cele mai simple glucide, nehi-
drolizabile, sunt monomerii care edifica glucidele complexe. For-
mula lor generala este (CH20)n,i n care n este un numar variabil
de la 2 la 7 (dioze, trioze ... pentoze, hexoze...), n functie de nu-
marul atomilor de carbon. Sunt substante solide, cristalizate, hi-
drosolubile, datorita numarului mare de grupari oxidril. Toate mo-
nozaharidele contin grupari hidroxil (OH), o grupare cetonica sau
aldehidica.
Din punct de vedere biologic, cele mai importante mono-
zaharide sunt: riboza, pentoza care intra i
n structura acizilor nucleici
(AON §i ARN) §i glucoza, hexoza care ocupa o pozitie crucialai n
metabolismul energetic. O serie de reactii oxidative degradeaza
glucozai
n produ§i finali: C02 §i H2 0, cu degajare de energie:
C5H1206 + 602 -+ 6H20 + energie
Tn cursul acestei degradari, energia §i puterea reducatoare,

esentialein reactiile de biosinteza, sunt stocate sub forma de ATP
§i NADH (etapa a doua a catabolismului).
Tn molecula unei oze,i nlocuirea unei grupari hidroxil cu o
grupare amino, formeaza aminozaharide, mai importante fiind glu-
cozamina, galactozamina §i manozamina care se gasesc n struc-
tura glicoproteinelor, proteoglicanilor §i glicolipidelor.
91
- 0/izaharidele rezulta din legarea a doua pana la maximum

zece monozaharide; dintre acestea, cele mai importante sunt diza-
haridele: zaharoza, maltoza i lactoza. Astfel, din doua molecule
de glucoza, se formeaza maltoza, dintr-o molecula de glucoza i
una de fructoza se formeaza zaharoza, iar o molecula de galac-
toza i una de glucoza dau lactoza.
- Polizaharidele sau glicanii sunt polimeri ai monozahari-
delor care se asociaza prin diferite tipuri de legaturi glicozide pen-
tru a forma lanturi liniare lungi; prin hidroliza chimica sau enzima-
tica, formeaza monozaharide sau derivati ai acestora (glucoza-
mina, galactozamina, acizi uronici, acid N-acetil-neuraminic).
Cel mai important polizaharid de rezerva din regnul animal
este glicogenul, polimer ramificat al glucozei, descoperit,i n 1856,
de Claude Bernard,i n ficat. Acesta aparei n numeroase tipuri de
celule,i
n special,i
n hepatocite i n celulele embrionare, sub for-
ma unor granule cu diametrul de 10 - 40 nm (granulei n rozeta),
avand legate, la suprafata lor, enzimele necesare degradarii lui.
Alaturi de acizii grai, glicogenul reprezinta precursorul piruvatului,
unul dintre furnizorii de combustibil necesar metabolismului oxi-
dativ. Principala rezerva glucidica a lumii vegetale este amidonul
care contine,i n structura, mici cantitati de elemente minerale
(anioni fosfat i cationi de Ca2+, Mg2+, ca't i K\ Na+). Unele tipuri
de celule din regnul vegetal i animal mai contin i polizaharide de
structura: celuloza i chitina. Celuloza este principalul polizaharid
din structura peretelui celulei vegetale, iar chitina se gasete la
nevertebrate, n carapacea insectelor i crustaceelor.
n glicogen, amidon i celuloza, moleculele de glucoza se
I
asociaza unele cu altele, prin intermediul unui atom de oxigen
care asigura puntea de legaturai ntre carbonul 1 al unei molecule i
carbonul 4 al moleculei urmatoare - legatura a (1 - 4).
- Heterozidele sunt molecule complexe, rezultate prin
unirea unor monozaharide la moleculele de proteine i lipide din
structurile celulare, formand glicoproteinele i glicolipidele. Princi-
palele monozaharide din alcatuirea acestora sunt: galactoza, ma-
noza. Acestea reprezinta o importanta sursa de energie, iari n
combinatie cu proteinele, joaca un rol plastic.
92
Lipidele
Lipidele sau grasimile sunt substante ternare reprezentand
esteri ai alcoolilor cu acizi gra9i.
Acestea formeaza o clasa heterogena de compu 9i insolubili
n apa, dar solubilii
i n solventi organici (eter, acetona, cloroform
etc.). Cauza acestei proprietati generale 9i a compu9ilor nruditi
este predominarea lanturilor lungi de hidrocarburi alifatice sau unele
benzenice, structuri nepolare 9i hidrofobe. Tn multe lipide, aceste
lanturi pot fi legate, la o extremitate, de un grup polar, facandu-1
capabil sa lege apa prin punti de hidrogen (lipideJe membranare).
Lipidele sunt biomolecule care se pot combina cu alte bio-
molecule formand glicolipidele (lipide 9i hidrati de carbon) 9i lipo-
proteinele (lipide 9i proteine).
Tn celule, lipidelei ndeplinesc urmatoarele functii biologice
majore:
1. rol energetic, ele reprezentand combustibilul cu cea mai
mare valoare biologica;
2. rol plastic, deoarece, sub forma complexelor lipoproteice,
intrai
n structura tuturor citomembranelor;
3. unele lipide care intra n structura suprafetei celulare (plas-
i
malema) joaca un rol important n imunitatea tisulara 9i
specificitatea de specie; vitaminele 9i hormonii n structura
carora intra lipide, au o importanta activitate biologica (hor-
monii steroizi sunt implicati n transmiterea de informatii 9i
fac parte din grupa mesagerilor chimici de ordinul 1).
Clasificarea lipidelor
Lipidele se clasificai
n doua mari grupe: simple sau ternare
9 i complexe sau conjugate.
a. Lipidele simple includ mai multe grupe, dintre care mai
importante pentru biologia celulara 9i moleculara sunt:
- gliceridele sau grasimile neutre, esteri ai glicerolului 9i aci-
zii gra9i superiori; acestea intrai n alcatuirea tesutului adipos (gra-
simi de rezerva) 9 i constituie o sursa energetica importanta pentru
organism (oxidarea gliceridelor este foartei nceata, dar elibereaza
o mare cantitate de energie cu formarea de C02 9i H20);
- steroidele sunt esteri ai sterolilor (alcooli aromatici) cu
acizii gra9i superiori; eel mai important reprezentant al acestei
93
grupe este colesterolul care se gasetei n structura plasmale-

melor, fiind capabil sa le modifice permeabilitatea i avand, i n
acela i timp, i o actiune antitoxica i antihemolitica;
- ceridele sunt esteri ai alcoolilor monovalenti alifatici cu
greutate moleculara mare, cu acizii grai superiori. Sun' t foarte ras-
panditein lumea vegetala (fructele i frunzele sunt acoperite cu o
patura ceroasa de protectie), iar la animale, acolo unde se gasesc,
au rol de protectie explicat prin rezistenta !or la diveri agenti chimici.
b. Lipidele complexe con{in,i n molecula lor,i n afara de
acizi grai superiori i alcoolii respectivi, i alti componenti chimici
ca: amine, acid fosforic, glucide, sulfati, aminoacizi, baze azotate.
Proteinele
Proteinele sunt componente structurale i func{ionale de
prim ordin ale materiei vii, dei, n unele cazuri, componentele glu-
cidica i lipidica se gasesci n cantitati mai mari; deosebirea esen-
tialaintre proteine i celelalte componente chimice constai n aceea
ca multiplicarea i creterea celulara sunt conditionate de pre-
zenta proteinelor. Termenul de proteina vine de la cuvantul grec
proteno carei nseamna ,,primul sau eel care ocupa primul lac".
Proteinele sunt lanturi de acizi aminati legati prin punti pep-
tidice (asocierea,i n diferite proportii, a 20 aminoacizi diferiti). Ordi-
neain care aceti 20 de aminoacizi sau monomeri pot fi legati prin
astfel de punti da natere unui numar impresionant de combinatii
denumite macromolecule sau polimeri. Acest aranjament deter-
mina nu numai specificitatea, ci i activitatea lor biologica.
Dupa compozitia lor, proteinele se clasificai n simple i
conjugate:
proteinele simple sau holoproteinele dau, prin hidroliza, nu-
mai aminoacizi;
proteinele conjugate sau heteroproteonele dau, prin hidro-
liza, pe langa acizi aminati, i alti compu i organici sau
anorganici; segmentul din proteina conjugata care nu este
acid aminat poarta numele de grupare prostetica care, dupa
natura chimica a acesteia, se clasificai n: nucleoproteine
(contin acizi nucleici), lipoproteine (contin lipide), fosfopro-
teine, metaloproteine i glicoproteine.
Dupa conformatia lor tridimensionala, proteinele se clasifica
n fibrilare
i i globulare.
94
Aminoacidul este un acid organic cu functie mixta: functia

carboxil (-COOH) acida 9i functia amino (-NH2) bazica. Din cauza
prezentei simultane a grupelor acide 9i bazice, acizii aminati au
caracter amfoter, ceea ce le permite combinarea atat cu acizii, cat
i cu bazele.
Condensarea acizilor aminati 1ntr-un lant peptidic se reali-
zeaza prin legatura peptidica dintre gruparea acida a unui amino-
acid cu gruparea bazica a urmatorului acid aminat. Moleculele
non-formate 1 i pastreaza caracterul amfoter, deoarece peptidul
pastreaza, la una dintre extremitati, gruparea acida, iar la cealalta
extremitate, gruparea bazica; radicalii pot fi bazici sau acizi.
Acizii aminati difera Tntre ei numai prin structura radicalului;
astfel, 1n alanina, radicalul are un singur atom de carbon, Tn timp
ce 1n leucina, radicalul are patru atomi de carbon.
Aminoacizii, caramizile care edifica structura fundamentala a
moleculelor proteice, au posibilitatea de a forma un numar aproape
nelimitat de combinatii. Principalii acizi aminati sunt 1n numar de
douazeci, dar numarul lor total este de aproximativ o suta.
Dupa modalitatile de obtinere, aminoacizii se clasifica 1n:
esentiali sau indispensabili, 1n numar de opt, se obtin numai
prin apart exogen (valina, ieucina, triptofanul). Histidina 9i
arginina sunt partial esentiali, organismul 1i poate sintetiza,
dar prea lent pentru a se putea dispensa de apart exogen;
neesentiali - pe care organismul 1i sintetizeaza 1n cantitate
i cu o viteza suficienta pentru satisfacerea necesitatilor
sale (alanina, serina, prolina).
Peptidele sunt proteine rezultate prin condensarea a doi sau
mai multi aminoacizi; legatura care unete acizii aminati 1ntr-o mole-
cula peptidica este o legatura de tip amidic l?i se numel?te legatura
peptidica: - CO - NH - care se formeaza prin eliminarea unei
molecule de apa (hidroxilul gruparii carboxilice a unui aminoacid l?i
hidrogenul gruparii aminice a urmatorului acid aminat).
Dupa numarul aminoacizilor, peptidele pot fi: di, tri, tetra
etc. Peptidele care au un numar mic l?i cunoscut de aminoacizi
constituie grupa oligopeptidelor, iar cele cu un numar mare 9i ne-
cunoscut de acizi aminati formeaza grupa poliptidelor.
95
Tabet 11: Principalii acizi aminafi
Tipul de acid aminat Simbol cu trei litere Simbol cu o litera

Hidrofobi
Glicina Gly G
Alanina Ala A
Valina Val v
Leucina Leu L
lzoleucina lie I
Bazici
Arginin Arg R
a Lizina Lis K
Acizi
Acid glutamic Glu E
Acid aspartic Asr D
Continand amida
Glutamina Gin Q
Asparagina Asr N
Con\inand hidroxil
Threonina Thr T
Serina Se s
Continand sulfina r
Cisteina Cy c
Metionina s M
Aromatici Met
Fenilalanina Phe F
Tirosina Tyr y
Teterociclici
Triptofan Trp w
Prolina Pro p
Histidina His H
Dintre peptidele cu functii biologice importante, amintim: car-

nozina (dipeptid) care se gasete Tn muchii mamiferelor, glutatio-
nul (tripeptid) socotit ca un sistem celular de oxidoreducere prin
transfer de hidrogen i electroni, insulina, oxitocina, vasopresina
(polipetide) care constituie mesageri chimici de ordinul I.
Heteroproteinele sau proteinele conjugate se clasifica Tn
functie de structura gruparii prostetice din molecula Tn:
metaloproteine care, datorita prezentei unui metal (Fe, Cu,
Mn, Zn, Co, Mg etc.), le confera proprietati functionale deo-
sebite. Cele mai cunoscute sunt feroproteinele (hemoglo-
bina), feritina etc.;
96
fosfoproteinele con\in, ca grupare prostetica, acidul ortofos-

foric (cazeina, ovovitelina);
lipoproteinele au, n structura lor, lipide ca lecitina, cefalina,
colesterolul;
mucoproteinele sau glicoproteinele contin ca grupare pro-
tetica un glucid (hormoni gonadotropi hipofizari);
nucleotidele sunt heteroproteine care con\in, ca grupare
prostetica, acizi nucleici; componenta proteica apaftine,i n
general, proteinelor bazice din grupa histonelor i participa
la structuralizarea nucleoproteinelor din nucleu i mitocondrii.
Dupa rolul biologic pe care-Ii ndeplinesci n organism, pro-
teinele se clasifica 1n:
- proteine structurale: colagenul, elastina, proteine membranare;
- proteine de rezerva: ovalbumina din ou;
- proteine contractile: actina, miozina;
- proteine cu actiune hormonala i enzimatica: hormonii hi-
pofizei anterioare, enzime hidrolazice;
- proteine de protectie: anticorpi, imunoglobuline.
Acizii nucleici
Sunt structuri chimice complexe, constituite dintr-un numar
mare de mononucleotide. Sunt reprezentati de AON i ARN i vor
fi descri i n capitolele Nuc/eu/ i Biosinteza proteine/or.
97
Alberts, B. (2009). Essential cell biology (3rd ed.). New York: Garland
Science.
Davey, J. & Lord, M. (2003). Essential cell biology: a practical approach.
Oxford ; New York: Oxford University Press.
Devlin, T. M. (2011). Textbook of biochemistry: with clinical correlations
(ih ed.). Hoboken, NJ: John Wiley & Sons.
Jones, P. (2011). Cell structure, processes, and reproduction. New York:
Chelsea House.
Lehninger, A L. (1975). Biochemistry: the molecular basis of cell
structure and function (2nd ed.). New York: Worth Publishers.
Lippincott Williams & Wilkins. (2007). Straight A's in anatomy &
physiology. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.
Lodish, H. F. (2000). Molecular cell biology (4th ed.). New York: W. H.
Freeman.
Lodish, H. F. (2003). Molecular cell biology (5th ed.). New York: W.H.
Freeman and Company.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (6th ed.). New York: W. H.
Freeman.
Loewy, A G. & Siekevitz, P. (1969). Cell structure and function (2nd ed.).
New York: Holt.
Loewy, A G. & Siekevitz, P. (1991). Cell structure & function: an
integrated approach (3rd ed.). Philadelphia: Saunders College
Pub.
Mader, S. S. (2006). Human biology (9th ed.). Dubuque, IA: McGraw-Hill.
98
A.
lnvelitul celular
Aparifia §i dezvoltarea unui lnveli§
celular §i, Tn special, a plasma-
/emei a reprezentat momentul cru-
cial rn aparifia primei forme de
viafa, celula ancestrala.
Periferia celulara este o structura
morfofuncfionala complexa, for-
mata din plasmalema, glicocalix §i
citoscheletul membranar, e/emen-
te care separa continutul ce/ular
de mediul lnconjurator. lntre cele
trei componente, exista o legatura
foarte stransa.
Din punct de vedere chimic, ln
structura lnveli§ului celular, pon-
derea cea mai importanta o defin
substanfele organice (glucide, lipi-
de, proteine) §i ln cantitate mai mi-
ca, substanfele anorganice.
4.1.1. . DEFINIREA CONCEPTULUI DE MEMBRANA
Existenta catorva tipuri de membrane celulare a fast sem-
nalata la fel de timpuriu ca i conceptul de celula (Schleiden i
Schwann - 1838).
Bowman (1840) i Remak (1852) au fost primii care au
mentionat aceasta structura ca o entitate anatomica. Totui, dato-
rita grosimii mici, situate sub limita puterii de rezolutie a micros-
coapelor fotonice, precum i datorita lipsei unor tehnici speciale
pentru punereai n evidenta a membranelor celulare, existenta
acestora a fast, multa vreme, contestata.
La sfaritul secolului al XIX-lea i nceputul secolului al XX-
lea, au fost aduse primele probe indirecte privind existenta plas-
malemei. Apoi, din 1950, aparitia microscopiei electronice a des-
chis noi perspective de studiu. Aceasta a permis studierea sec-
tiunilor ultrafine prin tesuturi animale la rezolutii mai mici de 50 nm.
A urmat apoi introducerea permanganatului de potasiu ca agent
fixator (J. H. Luft - 1956) i a rainilor epoxidice ca agent de inclu-
dere a materialelor biologice (A M. Glaubert - 1956), ceea ce a
permis studiul electronomicroscopic al citomembranelor, confir-
mand astfel existenta lor (E. S. Ssostrand, J. D. Robertson).
Datele obtinute prin studii de microscopie electronica, di-
fractia cu raze X, ultracentrifugarea diferentiala, analiza biochimica
a membranelor, utilizarea rezonantei magnetice de spin, a crio-
fracturii etc. au permis crearea unui model de membrana extrem
de complex, care impresioneaza atat prin aspectele morfologice
cat mai ales prin cele dinamice.
fn 1976, J. M. Cifuentes a aratat ca plasmalemele reprezinta
,,... un dispozitiv biochimic complex cu expresie morfo-functionala".
Tipuri de membrane celulare
Membrana celulara limitanta (plasmalema)

Exemplu: fnveli§ul celular ce separa mediul intracelular
de eel extracelular
Membrana organitelor celulare
Example: Reticul endoplasmic neted, rugos, complex Golgi, lizozom,
peroxizom, mitocondrie
Membrana nucleara
Exemplu: fnveli§ul nuclear ce se prelunge§te cu reticulul endoplasmic
rugos
Tipuri speciale de membrane
Exemplu: Teaca de mielina
4.1.2.
EVOLUTIA CONCEPTULUI DE MEMBRANA
CELULARA. MODELE DE ORGANIZARE A MEMBRANEI
CELULARE
Este unanim admis astazi faptul ca membranele biologice au

o structura de baza formata dintr-un bistrat lipidic care contine pro-
teine pe fata externa, interna i transmembranar.
Aparitia i dezvoltarea plasmalemei, membrana celulara limi-
tanta, a reprezentat unul dintre momentele-cheie Tn aparitia primei
forme de viata, celula ancestrala. A a cum mentionam, aceasta
reprezinta elementul esential al structurii complexe ce este Tnve-
liul celular, numero i cercetatori lansand, Tnca din secolul trecut,
o serie de ipoteze, sustinute de dovezi experimentale, privind exis-
tenta acestui ,,strat" limitant, distinct, dotat cu proprietati specifice
datorate Tnse i pozitiei sale, considerand-o una dintre structurile
celulare specializate ce limiteaza, cantitativ i calitativ, schimburile
dintre cele doua medii (extra i intracelular) i care Ti desfaoara
activitatea numai Tn cadrul unitatii Tntregului sistem.
Legat de conceptul de membrana biologica, botanistul german
W. Pfeffer afirma n 1890: ,,celula este Tnconjurata de o membrana
limitanta, iar aceasta este o bariera universala exceptand trecerea
apei i a solutiilor".
102
l
nvelil?ul celular
MODELE STRUCTURALE
1. Cea mai timpurie ipoteza a faptului ca membrana plas-
matica contine molecule lipidice a aparut n 1895 l?i i apar-
tine lui Overton. Unul dintre punctele esentiale ale cerce-
tarilor sale a fest l?i descoperirea faptului ca moleculele sub-
stantelor solubilei
n lipide intrai
n celle mult mai Ul?Or decat cele
de substante polare, hidrofile. In urma acestor observatii,
el formuleaza,i n 1902, teoria conform careia plasmalema
este formata dintr-un strat lipidic continuu ce acopera
ntreaga suprafata celulara.
i
Figura 14: Modelul membranar realizat de Overton
n 1925, Goerter i Grendel imagineaza, pentru prima data,

2.I
dispozitia bimoleculara a stratului lipidic. Ei au extras lipidele
din membrana eritrocitara, au calculat aria celulara tota!a l?i
au gasit ca aria minima masurata a lipidelor totale com-
primate pe o depresiune monostratificata este dublul acestei
valori, ceea ce a condus la conceptul de bistrat. Procedeul
folosit nu a reul?it extragerea tuturor lipidelor membranare,
dar acest aspect a fest compensat prin subestimarea ariei
celulare. Pe baza rezultatelor acestor studii, se sugera, pen-
tru prima data, faptul ca bistratul lipidic ar putea fi trasatura
fundamentala a membranelor biologice.
Figura 15: Modelul membranar realizat de Goerter §i Grendel
n 1932, Cole a masurat tensiunea superficiala a mem-

3.I
branelor oualor de stea de mare, gasind valori de aproxi-
mativ 0, 1 dyne/cm; Harvey i Shapiro (1932 - 1933) ma-
103
soara tensiunea superficiala la nivelul membranelor celu-

lare fn diferite conditii experimentale, constatand ca exista
largi varia{ii ale valorilor tensiunii superficiale fntre plasma-
lemele diferitelor celule, dar oricum, ele erau foarte scazute
(aprox. 0,2 dyne/cm). Aceste valori scazute erau neconcor-
dante cu ipoteza conform carora membranele celulare erau
alcatuite din pelicule subtiri de molecule lipidice a caror ten-
siune superficiala este mult mai mare.
4. Danielli ti Harvey (1934) au studiat tensiunea superficiala
a unor picaturi lipidice provenind din ouale de scrumbie i
au gasit ca dupa o spalare extensiva, aceasta are valori de
aprox. 9 dyne/cm. Atunci cand au adaugat un extract cito-
plasmatic acestor picaturi lipidice, tensiunea lor superficiala
a scazut, iar agentul responsabil a fost gasit ca fiind o proteina.
De asemenea, Danielli a gasit ca proteinele se disperseaza
la nivelul unei interfete ulei - apa, determinand o scadere
initiala marcata a tensiunii superficiale care se refacea cu
timpul, ajungand fnsa la valori finale mult mai mici de cea
de la interfata ulei - apa.
Avand fn vedere rezultatele acestor experimente, fn 1935,
Danielli Ji Davson au prezentat un model general de struc-
tura a membranei celulare pe care I-au generalizat ulterior
prin teoria ,,pauci-moleculara" care afirma ca toate membra-
nele biologice au un miez ,,lipoid" marginit de monostraturi
de lipide ce au capetele polare fndreptate extern, acoperite
de monostraturile proteice.
Tn modelul original, ei nu indica numarul de monostarturi
lipidice din interiorul membranei, deoarece lipseau datele
privind grosimea membranei celulare; de asemenea, nu se
specifica daca proteinele ce tapeteaza lipidele pe cele doua
fete ale membranei sunt globulare sau extinse sub forma
unui film monomolecular.
5. Tn 1950, Danielli Ji Davson revizuiesc acest model i ti-
nand seama de prezenta permeabilitatii selective, sugereaza
ca, fn plus fata de stratul intern i extern de proteine, exista
pori liniari delimitati de proteine ce strabat bistratul lipidic i
ofera posibilitatea de intrare 9i ie9ire solutiilor polare 9i ionilor.
104
nveli§iul celular
i
Figura 16: Mode/ul J. F. Danie/Ii §i H. Davson
6.i
n 1957, J. D. Robertson propune modelul unitatii structurii
membranelor cu urmatoarele caracteristici:
• toate membranele au ca structura de baza bistratul
lipidic;
• proteine diferite tapeteaza, intern §ii extern, bistratul
lipidic.
7. Perfectionarea tehnicilor de microscopie electronica i de
biologie moleculara au condus, dupa 1960, la revizuirea
acestui model. De exemplu, criofractura a permis cerceta-
torilor vizualizarea particulelor din interiorul hidrofobic al
membranelor, identificandu-se, astfel, proteinele transmem-
branare. De asemenea, cercetarile de biologie moleculara
au demonstrat ca proteinele pot executa mi§icari n planul
membranei. Toate aceste rezultate i-au determinat,i n 1975,
pe Singer ti Nicholson de la Universitatea San Diego,
California, sa propuna modelul membranar n mozaic fluid
care, timp de trei decade, a fost ,,dogma centrala" a biologiei
membranelor. n cazul acestui model atentia este concentrata
mai putin pe aspectul morfologic §ii mai mult pe aspectele
moleculare, functionale §i starea fizica a lipidelor.
Acest model are urmatoarele caracteristici:
• - bistratul lipidic reprezinta structura de baza a membranelor cu

proteine ata§ate intern, extern §i transmembranar;
• - membranele sunt structuri dinamicei n care componentele

sunt mobile §i se pot agrega tranzitoriu pentru diferite interacuni;
105
• - membranele sunt structuri asimetrice, datorita distributiei

asimetrice a moleculelor componente.
Structura morfologica a plasmalemelor nu poate fi inves-
tigata cu ajutorul microscopiei fotonice. Aceasta nu ofera detalii de
structura, deoarece plasmalemele au o grosime foarte mica, si-
tuata sub limita puterii de rezolutie a microscopului optic. Micros-
copul electronic de transmisie,i nsa, prin utilizarea metodelor cla-
sice de prelucrare a materiei vii, furnizeaza foarte multe informatii.
Plasmalema celulelor animale are o structura trilamelara, cu
doua foite periferice dense la fluxul de electroni (osmiofile)i ntre care
se afla patura clara (osmiofoba). n functie de tipul celulelor, gro-
simea ei variazai
ntre 7,5 i 10 nm. Cele trei foite au grosimi aproxi-
mativ egale: cele periferice au 2 nm fiecare, iar cea mijlocie - 3,5 nm.
/: - -",:,·;r:
; .1-;\/:?:
- >\": ,
Figura 17: Structura morfologica trilamelara a membranei celulare

vazuta la microscopul electronic
Exteriorul celu!ei Glicocalix
lnteriorul celulei
Figura 18: Structura schematizata a periferiei celulare
106
nveliul celular
l
4.1.3. STRUCTURA MOLECULARA A MEMBRANEI

Din punct de vedere biochimic, plasmalema este constituita
din trei clase de compu i: lipide, proteine i carbohidrati (glucide).
Proteine Bistrat lipidic
Figura 19: Compozifia biochimica a membrane/or celulare
Lipidele reprezinta elementul principal al plasmalemei, asigu-

rand integritatea structurala a acesteia. Tot ele formeaza i bariera
biochimica ce desparte interiorul celulei de spatiul extracelular.
Proteinele sunt elementele care, alaturi de lipide, confera
plasmalemei structura de mozaic. Unele dintre proteine strabat bi-
stratul lipidic, dintr-o partei
n alta, iar altele raman cantonate doar
pe o suprafata a acestuia.
Proteinele sunt responsabile de majoritatea functiilor mem-
branei celulare. Unele proteine permit trecerea, prin membrana, a
substantelor chimice care altfel nu ar putea patrunde prin bistratul
lipidic pur. Altele primesc semnale din mediul extracelular i ini-
tiaza raspunsuri. Exista proteine care accelereaza diversele reactii
chimice sau chiar care recunosc anumite molecule cu care vini n
contact.I
n recunoaterea moleculelor, nsa, un rol important le re-
vine i carbohidrafilor (glucide). Acetia se gasesc legati fie de
proteine, fie de bistratul lipidic. Majoritatea se afla pe suprafata
externa a membranei, orientati catre mediul extracelular.
107
Proteine
8%
Figura 20: Ponderea compu§ilor de baza ce intra rn structura plasmalemelor
Tn general, este acceptat faptul ca 'fn structura moleculara a

plasmalemei, intra 'fn proportie de 40% - lipide, 52% - proteine l?i
8% - glucide. Totul?i, la o examinare atenta a plasmalemelor di-
verselor tipuri de celule, se observa ca ponderea acestor compul?i
este destul de variata, 'fn raport cu functia celulei respective. Ast-
fel, membrana mitocondriala interna are o concentrat,ie foarte ridi-
cata de proteine 'fn comparatie cu teaca de mielina, al carei rol izo-
lator este eel mai bine 'fndeplinit de un strat uniform de lipide cu o
mare rezistenta electrica.
4.1.3.1. LIPIDELE MEMBRANARE

Lipidele membranelor biologice sunt reprezentate de: fosfo-
lipide (fosfoglicerile i sfingolipide), glicolipide l?i colesterol. Cu
toate ca sunt diferite ca structura, aceste substante au o proprietate
comuna: sunt molecule amfifile sau amfipatice (termen introdus de
HARTLEY, 'fn 1936), fiind constituite din doua grupari:
• hidrofi/a:
- o grupare polara, 'fn cazul fosfolipidelor;
- un reziduu glucidic, 'fn glicolipide;
108
Tnveliul celular
- gruparea OH legata la C3 din primul inel al coleste-

rolului.
• hidrofoba:
- doua lanturi sau cozi de acizi grai n fosfolipide;
- o coada de acid gras i una de sfingozinai n glico-
lipide;
-i
ntreaga molecula formata din patru inele de carbon
n cazul colesterolului.
i
Fosfogliceridele sunt componentele majore, caracteristice

membranelor biologice care aui n structura o grupare glicerol.
Ele sunt formate din:
• un cap hidrofil sau grupare po!ara, orientata catre ex-
teriorul bistratului lipidic. Acesta este alcatuit dintr-un al-
cool (colina, etanolamina, serina sau inozitolul) care se
leaga prin intermediul unei grupari fosfat la glicerol, for-
mand, astfel, esterul fosforic al glicerolului.
Colina Etanolamina Serioi. lnozitol

CH, H H CHOH CHOH
1
CH, N 1 -CH2-CH 2- H N'-CH2-CH2- H N -CH-CH,- C'H,,OH CH-
H
CH3 H COOH CHOHCHOH
• o coada hidrofoba sau grupare nepolara, orientata catre

interiorul bistratului lipidic. Aceasta este formata din do-
ua lanturi de acizi grai a cate 14 - 2,4 atomi de carbon
care se leaga tot la glicerol. De aceea, fosfolipidele se
mai numesc i digliceride, spre deosebire de triglice-
ride, care contin trei acizi grai legati la glicerol.
Acizii grai membranari pot fi:

o satura(i (contin numai legaturi simplei
ntre atomii
de C);
o mononesaturafi (contin o dubla legatura);
o polinesaturafi (contin mai multe duble legaturi).
Fiecare dubla legatura determina o curbura a cozii fos-
n lungimea i saturarea co-
folipidelor. Aceste diferentei
zii sunt importante prin influenta asupra fluiditatii mem-
branelor biologice.
109
yH,
H,C &r CH,
CH,
fH,
o-P?-oe
yH,-
?
Cap 0
·I , ·I
1
0
H-CH,
Regiune polara C=O ' c=o

I I
(hidrofila) CH, CH2
l I
1H2
1H,
11H'
H,
1H'
Coada
1H'
CH, CH,
f I .
Regiune apolara
t·
(hidrofoba}
r
r 1H'
yH,
T\H
CH, CH
I
r
?Hz
CH2
r !
yH,
yH,
r
CH,
Lan\ saturat Lan\ nesaturat
Figura 21: Reprezentare a schematica a unui fosfolipid Figura 22:

membranar. Sunt prezentate, Tn para/el, structura Fosfatidilcolina
simplificata, structura spatiala §i structura biochimica
Fosfolipidul eel mai frecvent Yntalnit este fosfatidilcolina care,

ca 9i restul fosfolipidelor, are o proprietate de autoasamblare carac-
teristica: cand mai multe molecule sunt introduse Yntr-un mediu apos,
ele formeaza un bistrat lipidic, Yn a9a fel Yncat axul lor lung este
perpendicular pe axul bistratului.
Sfingolipidele sunt derivati ai sfingozinei, un aminoalcool
cu un lant hidrocarbonic lung 9i mononesaturat. Sfingozina se
leaga la capatul amino cu un acid gras 9i formeaza o structura ce-
ramidica. La celalalt capat, hidroxil, se gasesc esterificate diverse
grupari ce determina numele sfingolipidelor. Prin esterificarea
fosfocolinei, de exemplu, se formeaza sfingomielina, singurul fos-
folipid membranar ce nu contine glicerol. Prin esterificarea carbo-
110
Tnveli ul celular
hidratilor, se formeaza glicolipide, ce poarta la randul lor, numele

de cerebrozide (carbohidratul este un monozaharid) sau gan-
gliozide (carbohidratul este un oligozaharid).
Figura 23: Madu/ de asamblare a componentelor unui sfingolipid
Glicolipidele sunt molecule lipidice care fac dovada unei

asimetrii frapante i stabile 'fn distributia lor 'fn cadrul membranelor
plasmatice ale celulelor animale: gasim aceste molecule, Tn spe-
cial, 'fn jumatatea externa a dublului strat lipidic. Variaza remar-
cabil de la o specie la alta i chiar Tntre tesuturile aceleiai specii.
Glicolipidele formeaza numai o mica fractiune de lipide
membranare, aproximativ 5% din totalul moleculelor lipidice. Prin-
tre cele mai raspandite glicolipide ale plasmalemei eucariotelor, fi-
gureaza glicolipidele neutre ale caror grupari polare sunt consti-
tuite din 1 - 15 glucide neutre i, uneori, mai multe. Un exemplu Tl
111
constituie galactocerebrozidele, principalul constituent al mielinei,

care au rol de izolator electric.
Cu eel mai Tnalt grad de complexitate, glicolipide sunt gan-
gliozidele care contin unul sau mai multe reziduuri de acid sialic
care le confera o Tncarcare negativa; acestea se gasesc, mai ales,
n plasmalema neuronilor (6%). Pana acum, au fost identificate
i
mai mult de 30 gangliozide diferite. Nu avem decat date vagi de-
spre natura probabila a functiilor lor. De exemplu: gangliozidul
GM1 joaca rol de receptor la suprafata celulei pentru toxina bac-
teriana care provoaca diareea debilitanta din holera. Toxina hole-
rica se fixeaza i nu penetreaza decat celulele care poseda GM1
la suprafata lor (celulele epiteliale intestinale) -, dar func\ia nor-
mala a gangliozidelor nu poate consta Tn a fixa toxinele bacte-
riene, aceasta observa\ie sugerand Tnsa ca ele ar putea servi ca
receptori ai unor semnale normale Tntre celule.
Gangliozidele localizate la nivelul plasmalemei celulelor epi-
teliale, Tn zona apicala, au un rol de protejare a acesteia Tn cazul
unor conditii deosebite: pH scazut, enzime litice etc.
Colesterolul este o molecula mare, de forma discoidala, cu

patru inele de C ce fuzioneaza avand un OH (o grupare hidroxil) la
C3, conferind plasmalemelor un anumit grad de rigiditate.
Colesterolul este puternic hidrofob, motiv pentru care, pen-
tru a forma o structura Tn foite, este necesara glisarea lui printre
fosfolipide (coada nepolara a colesterolului se gasete Tn vecina-
tatea lanturilor de acizi grai ai fosfolipidelor Tn timp ce gruparea
hidroxil se afla Tn contact cu gruparea hidrofila a fosfolipidelor).
Coada nepolara
Figura 24: Colesterolul: structura biochimica, structura spa(iala

§i modul de pozifionare rn raport cu lipidele membranare
112
nveliul celular
i
Colesterolul se gasete dispus, 1n mod relativ omogen, la

nivelul plasmalemei, separand i dispersand cozile de acizi grai:}i.
Datorita acestui fapt, regiunile cele mai adanci ale bistratului lipidic
au o fluiditate crescuta.
Plasmalemele eucariotelor contin cantitati relativ importante
de colesterol, spre deosebire de bacterii i:}i de celulele regnului ve-
getal, de unde acesta lipsei:}te. Acesta are rol 1n reglarea fluiditatii,
1n crei:}terea stabilitatii bistratului lipidic, 1n special, i:}i 1n mentinerea
stabilitatii mecanice a membranelor biologice 1n general. Crei:}te-
rea stabilitatii mecanice a bistratului lipidic al membranelor este
demonstrata de comportamentul liniilor celulare incapabile sa sin-
tetizeze colesterolul. Aceste celule lizeaza rapid daca colesterolul
nu este (introdus) completat 1n mediul de cultura.
Proprietatile lipidelor membranare

1. Autoasamblarea
Dispozitia particulara a lipidelor membranare 1n dublu strat
are consecinte remarcabile asupra structurii i:}i functiei celulare.
Astfel, moleculele de lipide amfifile, introduse 1ntr-un mediu apos,
au tendinta de a se agrega spontan formand:
a. mice/e sferice, 1ncare extremitatile hidrofobe se dis-
pun catre interior;
b. un bistrat, 1ncare cozile hidrofobe sunt dispuse 1n
sandwich 1ntre extremitatile polare hidrofile.
Figura 25: Modul de agregare a lipidelor amfifile

pentru formarea micelelor sferice sau a bistraturilor lipidice
113
Prin urmare, datorita asamblarii lor compacte, membranele

celulare nu au niciodata o margine libera; ele sunt structuri con-
tinui, unitare.
Aadar, lipidele membranare au tendinta de a se asambla
n mod spontan, formand compartimente i
i nchise, cai
n cazul se-
cretiei celulare, de exemplu: cand o vezicula intra-citoplasmatica
se contopete cu membrana celulara deversandu- 9i continutul la
exterior sauin cazul fertilizarii, cand doua membrane celulare se-
parate fuzioneaza, formand un singur tot.
Un aspect particular al acestui mod de asamblare aparei n
cazul eliberarii unor fosfolipide,i ntr-un mediu apos. Acestea for-
meaza spontan o vezicula sferica numita lipozom, al carei perete
are o organizare structurala similara cu 1nveli9ul celular.
Lipozomii au o importanta vitala pentru biologia celulara de-
oarece,in interiorul lor, pot fi introduse proteine membranare pen-
tru a fi studiate 1ntr-un mediu mult simplificat. Mai mult, lipozomii
sunt folositi ca vehicule pentru transportul medicamentelor sau al
moleculelor de AON, n corpul uman.
Figura 26: Structura schematica a unui /ipozom
114
i
nveliul celular
2. Mif carea lipidelor membranare

Bistratul lipidic este un fluid bidimensional, 1n care mole-
culele lipidice sunt capabile sa difuzeze liber. Fixarea markerilor
de spin a demonstrat ca aceste molecule pot executa mai multe
tipuri de mi§>cari:
- difuzia latera/a - moleculele lipidice 1i schimba locul cu
vecinele lor 1n interiorul aceluia§>i monostrat;
este cea mai frecventa i cea mai rapida
(aproximativ 107/sec.);
- mi§ci!Jri de rotatie - foarte rapide 1mprejurul axelor lor;
- mi§cari de bascula - numite ,,flip - flop", adica migrarea
dintr-un monostrat 1n altul; sunt foarte rare.
Fluiditatea membranelor este o conditie esentiala pentru
desfa§>urarea functiilor acestora.
Mi§>care Mi§,care
Difuzie laterala
de de
rotatie bascula
Difuzie laterala
Figura 27: Tipuri/e de mi§cari efectuate de lipide/e membranare
3. Asimetria
Asimetria bistratului lipidic implica distributia asimetrica a
principalelor fosfolipide membranare.
Unele tipuri de lipide se gasesc, 1ntr-o concentratie mai mare,
1ntr-un monostrat decat n celalalt. Glicolipidele, de exemplu, se
gasesc 1ntr-o cantitate mai mare 1n monostratul extern.
De exemplu, 1n plasmalema eritrocitului, fosfatidilcolina i
sfingomielina se gasesc 1n jumatatea externa, iar fosfatidiletano-
lamina i fosfatildilserina, 1n jumatatea interna.
115
Fosfatildilserina este situatai n jumatatea interna i datorita

sarcinii electrice negative creeaza o diferenta dei ncarcare elec-
tricai
ntre cele doua monostraturi - aspect importanti n functiona-
litatea membranei (de exemplu: n transmiterea de informatii prin
hormoni).
Proteinkinaza C se leaga la fata citoplasmatica a plasma-
lemei ca raspuns la semnale extracelulare i are nevoie de pre-
zenta structurilor fosfolipidicei ncarcate negativ pentru a-i desfa-
ura activitatea.
Alt exemplu este reprezentat de fosfatidilinozitol care este
concentrati n monostratul intern. El va fi clivati n doua fragmente de
enzime specifice ce sunt activate de semnale extracelulare.
Ambele fragmente rezultate vor actionai n interiorul celulei ca
mediator difuzabil ce faciliteaza transmiterea semnaluluii n interio-
rul celulei.
Lipidele membranare sunt mai mult decat simple elemente
structurale, ele exercitand efecte importante asupra proprietatilor
biologice ale membranei:
- compozitiai n lipide determina starea fizica a membranei,
iar aceasta influenteaza activitatea unor proteine membranare;
- furnizeaza precursorii pentru o serie de mesageri activi cu
rol n reglarea unor functii celulare;
- flexibilitatea bistratului face ca membranele sa fie structuri
deformabile;
- faciliteaza fuziunea sau mugurirea membranei (in cursul
procesului de secretie celulara,i n fertilizare etc.).
4.1.3.2. PROTEINELE MEMBRANARE

Structura fundamentala a membranelor biologice este asi-
gurata de bistratul lipidic,i
n timp ce functiile acestora sunt deter-
minate,in mare parte, de proteine. Tn esenta, cantitatile i tipurile
de proteine dintr-o membrana reflecta functia sa (membrana mie-
linica contine aproximativ 25% proteine i are rol izolator).
Proteinele sunt molecule de 300 - 500 de ori mai mari
decat lipidele i sunt constituite dintr-oinlantuire de compu i ele-
mentari - acizii aminati. Plicaturarea acestor lanturi formeaza
' '
structuri tridimensionale complexe care sunt respons abile de ma-
rea diversitate a proprietatilor proteinelor.
116
f nveli§ul celular
Proteinele membranare pot fi clasificate dupa doua criterii
majore:
Dupa conformatia tridimensionala, pot fi:
• proteine fibrilare - sunt formate din lanturi polipeptidice
dispuse paralel, Tn lungul unei singure axe, dand natere
la filaments liniare (de exemplu: colagenul, cheratina,
elastina etc.) sau glicoforina A din plasmalema hematiilor.
Locul lor de ancorare Tn bistratul lipidic este mic. De
regula, aceste proteins formeaza receptorii celulari.
• proteine g/obulare - Tn general, transmembranare - sunt
lanturi polipeptidice, pliate compact, de forma sferica
sau globulare. Ocupa o suprafata de ancorare mult mai
mare Tn grosimea bistratului lipidic. De obicei, acestea
sunt proteine canal.
Dupa pozitia lor n plasmalema, se Tmpart Tn:

• proteine transmembranare (intrinsecij - dupa numarul
de traversari ale plasmalemei, acestea sunt:
o unipas (unihelix);
o multipas (multihelix);
• proteine periferice (extrinsecij - acestea sunt ata§ate
plasmalemei la nivelul:
o unui acid gras (sau alta grupare lipidica) din mo-
nostratul intern;
o unui oligozaharid (sau alta grupare fosfolipidca)
din monostratul extern;
o unei alte proteins membranare.
Proteinele transmembranare (intrinseci) strabat, total sau

partial, membrana celulara, o data sau de mai multe ori. Posibi-
litatea de a strabate membrana celulara se datoreaza caracterului
amfipatic al proteinelor membranare. Astfel, regiunea lor hidrofoba
este localizata Tn interiorul membranei (Tn vecinatatea cozilor de
acizi gra§i ale lipidelor membranare), iar regiunea hidrofila se afla
expusa pe cele doua fete ale membranei (in vecinatatea capetelor
polare ale lipidelor).
117
Figura 28: Pozitionarea diferitelor tipuri de proteine membranare

rn raport cu bistratul lipidic
Proteinele transmembranare stabilesc legaturi puternice cu

moleculele dublului strat lipidic, de obicei, de tip covalent. Datorita
caracterului hidrofob al interiorului membranei, aici apar,i nsa, i
punti de hidrogeni ntre legaturile peptidice polare ale proteinelor i
lipidele membranare.
Spre deosebire de proteinele transmembranare, proteinele
periferice nu stabilesc legaturi covalente cu dublul strat lipidic.
Acestea se ataeaza necovalent de grupari polare ale lipidelor sau
de domenii extramembranare ale proteinelor transmembranare.
Toate aceste tipuri de legaturi stabilite de proteinele mem-
branare au rolul de a organiza i stabiliza mozaicul membranar.
Funcfiile proteinelor membranare sunt extrem de variate, ele
determinand proprietatile diverselor endomembrane sau ale plasma-
lemelor:
• unele proteine membranare asigura schimburile pasive
ntre celule
i i mediul nconjurator,in sensul gradientului de
concentratie, fara consum de energie, prin intermediul aa-
numitelor canale ionice (transport pasiv);
• alte proteine au rol de transport activ. Acestea intervini n
mentinerea concentratiilor diferite de ioni n cele doua medii
' '
pe care le separa (intr a- i extracelular) i functioneaza ca
pompe pentru aceti ioni. Ele consuma A.T.P.-ul, carburantul
celular universal, iar energia astfel eliberata permite, de
exemplu, expulzarea Na+ extracelular l?i importarea ionilor
118
Tnveli 9ul ceiular
de K+, mpotriva gradientului de concentratie. Acesta este

transportul activ primar, i care proteina ' respectiva are
functia de pompa ionica. In membrana mitocondriala in-·
terna, exista proteine care functioneaza pe acela9i prin-
cipiu, dari
n sens invers; ele utilizeaza protonii (ionii de H+)
produ9i prin respiratie care puni n functie un mecanism de
sinteza a A.T.P.-ului;
• transmiterea mesajelor (a informatiilor) care se realizeaza
ntre exteriorul 9i interiorul celulei nu implica,i
i n mod obli-
gatoriu, schimbul de molecule sau ioni; ele necesitai nsa
prezenta,i n structura plasmalemelor, ·a unui complex de
proteineinalt specializate. Aceste proteine membranare,
receptorii, recunosc moleculele informationale 9i semna-
leaza celulei fixarea acestora; se declan 9eaza astfel,i n ci-
toplasma celulei-tinta, sinteza unui ,,mesager secund" (AM.P.
ciclic sau fosfoinozitolul) care este responsabil de apari{ia
unui raspuns biologic;
• unele proteine intervini n mentinerea celulelor n contact 9i
asocierea lor n tesuturi, prin intermediul unor zone de cuplaj
celular sau jonctiuni;
• alte proteine, numite enzime membranare,i ndeplinesc un
rol biochimic activ de catalizare a proceselor metabolice
ata9ate plasmalemei.
Tn ciuda importantei proteinelor membranare 9i a nume-
roaselor lucrari pe aceasta tema, studiul lor ramane dificil din mai
multe motive:
oi
n cele mai multe cazuri, sunt proteine rare;
o ele sunt ancoratei ntr-un mediu hidrofob, iar tehnicile bio-
chimice 9i biofizice pentru studiul acestora au fost puse la
punct pe proteine hidrosolubile;
o functia lor este legata de structurain care sunt ancorate.
Sa presupunem ca am identificat o functie asigurata de o
membrana specializata. Cum determinam care proteina asigura
aceasta functie 9i cum se executa ea? Din acest punct de vedere,
progrese importante au fost obtinute prin studiul a doua proteine: o
proteina bacteriana sensibila la lumina, bacteriorodopsina, 9i re-
ceptorul proteic al unui neurotransmitator, acetilcolina. Examinate
n ansamblu, ele sugereaza raspunsuri generale care pot tenta a
i
le transpoza proteinelor membranare mai putin cunoscute.
119
Biologie celulara i rnoleculara
Transport Transport Transmiterea Menfinerea celulelor Cata!iza

pasiv activ mesajelor n contact
l reactiilor chimice
Figura 29: Rolurile proteinelor membranare
Bacteriorodopsina se gasetei n rnernbrana unei bacterii -

Halobacteryum ha/obium care traietei n ape foarte sarate (Marea
Moarta). Functia sa a fast elucidata,i n 1971, de catre Dieter
Oesterhelt i Walter Stoeckenius de la Universitatea California -
San Francisco. Bacteriorodopsina absoarbe fotonii din lurnina ver-
de i utilizeaza energia pentru pornparea de protoni de la interiorul
catre exteriorul bacteriei, citoplasrna devenind rnai putin acida;
aceasta diferenta de pH dintre cele doua rnedii reprezinta sursa de
energie pentru rnulte dintre functiile acestei celule. Este vorba de o
forrna prirnitiva de fotosinteza, rnult rnai sirnpla decat cea desfa-
urata la plante.
Receptorul pentru acetilcolina se gasete localizat, la verte-
brate,i
n rnernbrana celulelor rnusculare,i n teritoriul jonctiunilor
neurornusculare. El recunoate neurornediatorul nurnit acetil-
colina, eliberat de terrninatia nervoasa. Dupa experirnentele de
electrofiziologie conduse de Bernard Katz de la Universitatea din
Londrain 1950, se crede cai n prezenta acetilcolinei, se deschid
canalele ionice care permit patrunderea brusca a ionilor de Na+,
responsabili de excitarea electrica a fibrei rnusculare i, indirect,
de contractia sa.
120
Tnveli ul celuiar
Tn privinta micarilor efectuate de proteinele membranare,

ca 9 i n cazul lipidelor, acestea sufera atat micari de translatiei n
grosimea bistratului lipidic, cat 9i mi9cari de rotatie i asimetrie.
4.1.3.3. CARBOHIDRATII
'
Carbohidratii se mai numesc i componentele minore ale
membrane/or celulare. Ei sei ntalnesc pe suprafata tuturor mem-
branelor plasmatice ale celulelor eucariote. Reprezinta doar 2 -
10% din greutatea componentelor membranare 9i se gasesci ntot-
deauna cuplati cu alte molecule membranare. Carbohidratii se ga-
sesc, de obicei, asociati cu moleculele proteice, majoritatea prote-
inelor membranare fiind glicoproteine. Ei se gasesc legati i de li-
pide, formand glicolipide, dari n proportie mai mica. Tn' general,
dintre moleculele lipidice membranare, numai 10% con{in glucide.
Carbohidratii intrai
n structura plasmalemelor sub forma de
oligozaharide legate de proteinele membranarei n doua moduri:
o in unele cazuri, legatura se formeazai ntre gruparea amino a
unui aminoacid din structura lan{ului polipeptidic (aspa-
ragina) i un oligozaharid mare, format din 12 resturi glu-
cidice, organizatein jurul unui nucleu de manoza;
o i n alte cazuri,insa, legatura se formeazai ntre gruparea hi-
droxil a serinei sau treoninei i un oligozaharid mic, format
din patru resturi glucidice.
Hidrocarbonatele se gasesc i n structura proteoglicanilor,
molecule membranare integrale, alcatuite din lanturi polizaharidice
lungi, legate de un lant proteic. Tn timp ce proteina traverseaza du-
blul strat lipidic, lanturile polizaharidice ramani n afara celulei,
constituind parte componenta a matricei extracelulare.
Ca dispozitie celulara,i n membranele plasmatice, lanturile
oligozaharidice marcheaza, de obicei, fata extracelulara,i n timp
cein membranele organitelor (aparat Golgi 9i reticul endoplasmic),
ele se gasesc pe fata citoplasmatica.
121
H NHCOCH3 Peptid
H
-0 0-CHa CH
l Serina
C=O
NHCOCH 3
Figura 30: Structura biochimica a carbohidrafilor membranari
Din punct de vedere al organizarii spatiale, de§ii sunt mo-

lecule mici, alcatuite din maxim 15 monozaharide, carbohidratii
prezinta o mare diversitate. Aceasta se datoreaza atat capacitatii
de legare a acelora§ii monomeri n diverse structuri arborescente,
cat §ii posibilitatii unui monomer de a se lega cu altul, prin inter-
mediul mai multor locuri distincte. Toate aceste aspecte due la o
mare varietate §ii specificitate a carbohidratilor membranari.
122
Ynveli§iul celular
Localizarea carbohidratilori
n monostratul extern al mem-
branelor plasmatice, precum §ii caracterul lor de specificitate tisu-
lara sugereaza implicarea acestor moleculei n procesele de co-
municare intercelulara.
De exemplu, carbohidratii din structura glicolipidelor mem-
branei eritrocitare determina grupa sangvina.
4.1.4. FUNCTIILE NtEMBRANEI CELULARE

Membranele plasmatice au, n primul rand, functia de fron-
tierai
ntre mediul extra- §ii intracelular, ceea ce implica un contact
direct cu o mare varietate de agenti fizici. Un astfel de rol confera
plasmalemelor proprietati de o deosebita importantai n mentinerea
vietii celulei. Ele intervinin:
1. transferul de substanfei ntre cele doua compartimente -
celular §ii extracelular (apa, substante minerale, molecule organice);
2. transferu/ de informafii (hormoni, agenti patogeni, substante
medicamentoase) care determina modificari functionalei n celule.
Analiza multiplelor informatii care ajung la celule fac ca plas-
malemele sa intervinai n:
- mecanismele recunoaJterii celulare care realizeaza
formarea tesuturilori n perioada embrionara (intr-un mediu de cul-
tura, n care se gasesc doua tipuri celulare - epiteliale §ii conjunc-
tive - dupa 1 - 2 zile, fiecare tip celular se separa de celalalt §ii
agreeaza fiecarei ntr-o colonie);
- fenomenele inhibitiei de contact - proprietatea unor
celule de a opri mi§icarile celulelor vecine (celule!e canceroase au
pierdut aceasta proprietate, avand posibilitatea de a invada te-
suturile sanatoase - metastaza);
- adezivitatea celulara care se realizeaza prin intermediul
jonctiunilor celulare (zone de cuplaj celular);
- fixarea de substant,e: medicamentoase, molecule de en-
docitat, toxine, bacterii, viru§ii, droguri etc.;
- miJcarea celulara se realizeaza prin intermediul inter-
actiunii dintre plasmalema §ii fibrele de actina §ii miozina.
De integritatea morfo-func{ionala a plasmalemelor, depinde
nu numai mentinerea organizarii §ii functionarii normale a celuielor
ei, ci §ii viatai
ntregului organism.
123
Glicocalixul sauinveliul dulce al celulei (Bennett, 1963)

este o patura glicoproteica localizata la suprafata externa a mem-
branei plasmatice, a carui integritate este absolut necesara des-
fa urarii normale a activitatilor functionale a celulelor.
Structura morfologica
La microscopul electronic, glicocalixul apare sub forma unui
material fibrilar, cu o grosime de aproximativ 50 nm, i care este
format din doua componente:
- una interna sauinveliul de suprafata, cu o grosime de 20
nm, putin densa la fluxul de electroni;
- una externa sau lamina externa, cu o grosime de 30 nm,
putin mai densa decat prima.
Structura moleculara
Pin punct de vedere chimic, glicocalixul este format dintr-o
mare cantitate de glucide legate fie de lipide sau de proteine.
Se disting:
- glicolipide - constituenti majori;
- glicoproteine;
- proteoglicani (polipeptide plus polizaharide).
Functiile glicocalixului
Principalele functii ale acestui component ali nveliului
celular sunt:
- Roi de protecfie a plasmalemei; acesta constituie o struc-
tura rezistenta la enzimele mucolitice i proteoliticei n afara de hia-
luronidaza i neuraminidaza.
- Roi de absorbfie. Glicocalixul poate absorbi sau fixa anti-
corpi citofili care modifica fagocitoza; joaca un rol deosebit de im-
portant n fenomenele de endocitoza, deoarece, la acest nivel, se
gasesc zonele receptoare specifice pentru diferitele molecule: bio-
logice (hormonii), medicamentoase sau toxice.
124
Tnveli ul celular
- Roi rn permeabilitate - demonstrat prin tratarea glicoca-

lixului cu neuraminidaza; aceasta enzima distruge integritatea morfo-
functionala a glicocalixului, prin distrugerea acidului sialic din struc-
tura lui, Tmpiedicand controlul schimbului ionic prin membrana
celulara.
- Roi rn adezivitatea celulara - glicoproteinele glicocalixului
a doua celule vecine, Tn prezenta ionilor de Ca2+ participa la for-
marea unor tipuri de jonctiuni celulare (desmozomi).
- Roi rn fenomene/e de recunoa§tere ce/ulara.
Celulele de acelai tip, de aceeai origine, apartinand unui
individ, au proprietatea de a se recunoate Tntre ele. Aceasta func-
tie reprezinta i un mijloc de aparare (fagocitoza).
Glicoproteinele glicocalixului fac parte din grupa antige-
nelor de suprafata, substanta pe care organismul este capabil sa
le recunoasca.
125
Alberts, 8. (2009). Essential cell biology (3rd ed.). New York: Garland
Science.
Bauer, 8., Davidson, M. & Orwar, 0. (2006). Direct reconstitution of
plasma membrane lipids and proteins in nanotube-vesicle net-
works. Langmuir, 22(22), 9329-9332.
Benga, G. (1989). Water transport in biological membranes. Boca Ra-
ton, Fla.: CRC Press.
Benga, G. & Tager, J. M. (1988). Biomembranes: basic and medical
research. Berlin; New York: Springer-Verlag.
Bogdanov, M., Mileykovskaya, E. & Dowhan, W. (2008). Lipids in the
assembly of membrane proteins and organization of protein su-
percomplexes: implications for lipid-linked disorders. Subcell
Biochem, 49, 197-239.
Capaldi, R. A. (1977). Membrane proteins and their interactions with
lipids. New York: M. Dekker.
Chalfant, C. & Del Poeta, M. (2010). Sphingo/ipids as signaling and re-
gulatory molecules. New York, N.Y. Austin, Texas Springer
Science; Landes Bioscience.
Davey, J. & Lord, M. (2003). Essential cell biology: a practical approach.
Oxford ; New York: Oxford University Press.
Fuertes, G., Gimenez, D., Esteban-Martin, S., Garcia-Saez, A., San-
chez, 0. & Salgado, J. (2010). Role of membrane lipids for the
activity of pore forming peptides and proteins. Adv Exp Med Biol,
677, 31-55.
Jones, P. (2011). Cell structure, processes, and reproduction. New York:
Chelsea House.
Kalckar, H. M., Haber, E. & Harvard Medical School. (1984). The Cell
membrane: its role in interaction with the outside world: a volume
in honor of Professor Herman Kafckar on his seventy-fifth birth-
day. New York: Plenum Press.
Lee, R. C., Despa, F., Hamann, K. J. & New York Academy of Sciences.
(2005). Cell injury: mechanisms, responses, and repair. New
York, N.Y.: New York Academy of Sciences.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (61h ed.). New York: W. H.
Freeman.
Mazzarello, P. (1999). A unifying concept: the history of cell theory. Nat
Cell Biol, 1(1), E13-15. doi: 10.1038/8964
Mcintosh, T. J. (2007). Lipid rafts. Totowa, N.J.: Humana Press.
126
inveliul celular
Meszaros, A & Balogh, G. (2010). Multiple drug resistance. New York:
Nova Science Publishers.
Michel, H. (1991). Crystallization of membrane proteins. Boca Raton:
CRC Press.
Niemela, P. S., Miettinen, M. S., Monticelli, L., Hammaren, H., Bjelkmar,
P., Murtola, T., Vattulainen, I. (2010). Membrane proteins diffuse
as dynamic complexes with lipids. J Am Chem Soc, 132(22),
7574-7575.
Pebay-Peyroula, E. (2008). Biophysical analysis of membrane proteins:
investigating structure and function. Weinheim: Wiley-VCH.
Rosetti, C. M., Maggio, 8. & Oliveira, R. G. (2008). The self-organization
of lipids and proteins of myelin at the membrane interface.
Molecular factors underlying the microheterogeneity of domain
segregation. Biochim Biophys Acta, 1778(7-8), 1665-1675.
Seddon, A M., Curnow, P. & Booth, P. J. (2004). Membrane proteins,
lipids and detergents: not just a soap opera. Biochim Biophys
Acta, 1666(1-2), 105-117.
Wilson, K. & Walker, J. M. (2009). Principles and techniques of bio-
chemistry and molecular biology (ih ed.). Cambridge, UK New
York: Cambridge University Press.
127
Functiile plasmalemei
ln 1952, oamenii de §tiinfa care au
privit primele imagini de microscopie
electronica ale unei celule eucariote
au fost surprin§i de uimitoarea com-
p/exitate a acestui edificiu. Utilizand
noua tehnologie a raze/or X a putut
fi explorata, pentru prima data, mem-
brana celulara (plasmalema), a carei
existenfa se banuia de mu/ta vreme,
dar care nu putea fi individualizata
rn microscopia fotonica.
Treptat, concepfiile privitoare la struc-
tura acesteia au devenit din ce in ce
mai complexe, tot mai aproape de
realitate, ajungandu-se, rn final, la
modelul actual de mozaic fluid. Con-
comitent, s-au aprofundat §i cuno§-
tinfele referitoare la funcfiile plasma-
/emei, teoriile actuate, ajungand la o
complexitate deosebita.
Membranele plasmatice constituie frontiera dintre mediul
intrc- l?i extracelular, ceea ce implica contactul lor nemijlocit cu o
mare varietate de agenti fizici l?i chimici care pot modifica profund
activitatea celulara.
n general, este cunoscut faptul ca plasmalema 1ndepli-
i
ne9te, 1n primul rand, un rol de transport. Miezul hidrofob al
acesteia actioneaza ca o bariera 1n calea trecerii multor substante,
mai ales a moleculelor polare, solubile 1n apa. Altar substante,
1nsa, le este permisa trecerea prin membrana cu ajutorul unor pro-
teine cu 1nalta specificitate. Mai mult, exista situatii 1n care mem-
brana celulara se invagineaza 1ntr-o anumita portiune formand
compartimente 1nchise, numite vezicule, care actioneaza precum
nil?te containere pentru transferul unor substante de pe o parte pe
cealalta a membranei.
De9i bistratul lipidic reprezinta o bariera pentru difuzia io-

nilor 9i moleculelor mari (peste 150 D), polare, anumite proteine
membranare permit trecerea selectiva a acestora. Celulele au,
astfel, posibilitatea controlului traficului membranar de substante 9i
ioni. Proteinele membranare integrale, implicate 1n transportul io-
nilor 9 i substantelor, au fast 1mpartite 1n trei categorii, fiecare cu
proprietati distincte:
• proteine carau§, cu activitate de tip enzimatic (nu-
mite 9i proteine enzim-like), ce reprezinta o cale de trans-
port transmembranar, 1n sensul gradientului electrochimic,
pentru o serie de substante 9i ioni;
• proteine carau§ cu activitate de tip pompa, proteine
- enzime ce utilizeaza energia rezultata din hidroliza ATP
pentru transportul ionilor 9i a unor substante prin mem-
brana. Au rol importanti n stabilirea 9i mentinerea gradien-
telor de concentratie i electrochimicei n limite fiziologice;
• proteine canal - pori specifici pentru transportul
ionic; unele canale sunt deschise permanent, majoritatea
isa se deschid doar temporar; trecerea ionilor prin aceste

n
canale influenteaza potentialul electric membranar.
Proteinele carau§ se clasificai

n:
1. proteine uniport care transporta un singur substrat (ion
sau molecula)i n sensul gradientului de concentratie. De exemplu:
difuzia facilitata de proteine carau§ - carau§ii glucozei (GLUT);
2. proteine cotransportori care folosesc energia furnizata de
un gradient electrochimic §i transporta doua molecule diferite sau
un ion §i o moleculai n aceea§i directie (simport) saui n directii di-
ferite (antiport).
Uniport Simport Antiport
Figura 31: Tipuri de proteine carau§
Ambele categorii au o arhitectura asemanatoare (proteina

multi-pass, cu 12 segmente hidrofobe transmembranare), utilizea-
za acela§i mecanism de transfer al substratelor, evoluand, pro-
babil, dintr-un precursor comun. Ca §i proteinele tip pompe, ca-
rau§ii proteici se gasesci
n toate membranele, oriunde metabolis-
mul celular necesita schimb de molecule sau ioni.
5.1.1. CLASIFICAREA TRANSPORTULUI MEMBRANAR
Panai n prezent, au fost delimitate clar o serie de tipuri fun-

damentale de transport care coexista la nivelul plasmalemei,i n
proportii variabile, n functie de tipul celular.
132
Tabel 12: C/asificarea transporl:ului

rn funcf ie de dimensiunile molecu/ei transportate
Microtransport (microtransfer)
• Transport pasiv:
• Difuzie simpla:
difuzia prin bistratul lipidic;
difuzie mediata de peptide.
• Difuzie facilitata
difuzia mediata de proteine carau!.?;
difuzia mediata de proteine canal;
difuzia prin ionofori.
• Transport activ:
• Primar (Pompa re ionica};
• Secundar (Pompare moleculara);
• Translocarea de grup.
Macrotransport (macrotransfer)
• Transport direct
• Transport vezicular:
• Endocitoza:
Pinoci'toza:
pinocitoza independenta de receptori;
pinocitoza mediata (dependenta)
de receptori;
Fagocitoza;
• Exocitoza;
• Transcitoza.
n primul rand, transportul unei molecule prin bariera mem-

i
branara depinde de marimea moleculei transportate; astfel putem
distinge un microtransport sau microtransfer i un macrotrans-
port sau macrotransfer.
n sistemul de microtransfer,i
i n functie de consumul de
'
energie necesar pentru efectuarea micarii moleculelor, transpor-
133
tul poate fi fara consum de energie i Tn sensul gradientelor de

concentratie (transport pasiv) sau cu consum de energie, Tmpo-
triva gradientelor de concentratie (transport activ).
Transportul pasiv se poate realiza Tn mod simplu, mole-
culele strabatand direct bistratul lipidic (difuzie simpla) sau pot fi
,,ajutate" Tn drumul lor de proteinele de la nivelul membranei (di-
fuzie facilitata).
Transportul activ poate fi primar (pompare ionica), secun-
dar (pompare moleculara) sau translocare de grup.
Tabet 13: C/asificarea transportului Tn funcfie de efectori
difuzia simpla ATP -

bistratul lipidic
prin bistrat independenta
difuzia facilitata ATP -

proteine canal
de proteine canal independenta
difuzia facilitata ATP -
carau: uniport
de proteine carau independenta
carau: cotransportori simport i antiport
ATP -
carau tip pompe pomparea ionica
dependenta
ionofori canal
ionofori carau
vezicule endocitoza
exocitoza
transcitoza
Sistemul de macrotransfer se poate realiza fie prin trans-

portul direct al macromoleculelor, fie cu ajutorul veziculelor. lntro-
ducerea moleculelor Tn celuia poarta numele de endocitoza, elimi-
narea produilor de secretie/excretie se numete exocitoza, iar
134
combinatia celor doua formeaza transcitoza. Prin endocitoza, pot

fi introduse, Tn citoplasma, atat substante lichide (pinocitoza), de-
pendent de receptori sau independent de receptori, cat i sub-
stante solide (fagocitoza).
6.1.2 TRANSPORTUL ATP·tNDEPt:NDENT
Transportul pasiv se Tncadreaza Tn sistemul de micro-

transfer. El se realizeaza fara consum de energie i Tn acord cu
legile osmozei, Tn care substantele se deplaseaza rn sensul gradi-
entului de concentratie, din mediul cu concentratie mai mare Tn eel
' '
cu concentra{ie mai mica - Tn cazul moleculelor neTncarcate elec-
tric sau rn sensu/ gradientului electrochimic - Tn cazul ionilor.
5.1.2.1. DIFUZIA SIMPLA PRIN BISTRATUL LIPIDIC

Prin acest tip de transport, tree prin membrana substantele
care se dizolva Tn bistratul lipidic (numite substanfe lipofile).
ti
ti • • ti
$
*
$
• ti
*
ti ti
Exteriorul celulei ti ti 1\11,
•
ti
• • •• ti
*
•
ti
• • *•
* • $
lnteriorul c *
Figura 32: Modelul difuziei simple; moleculele se deplaseaza
rn sensul gradientului de concentraf ie
fn difuzia simpla, un rol esential Tl detine coeficientul de per-

meabilitate, adica masura Tn care o membrana biologica limiteaza
difuzia simpla a substantelor dizolvate. fn 1902, Overton a obser-
135
vat ca substantele liposolubile tree mai u9or 9i mai repede prin

membranele biologice. Callander 9i Barlund au precizat ca pro-
portia Tn care tree substantele dizolvate prin membrane depinde
atat de gradul lor de solubilitate n lipide, cat 9i de marimea lor.
Cu cat sunt mai liposolubile, ele patrund mai rapid, iar moleculele
mici tree, Tn propof1ie mai mare decat cele mari, la solubilitate egala.
Permeabilitatea (P) pentru moleculele care traverseaza
membranele biologice se exprima Tn viteza (cm/sec.) cu care o
substanta trece prin membrana Tn unitatea de timp. Ea se calcu-
leaza cu ajutorul urmatoarei ecuatii:
K ·D K = coeficientul de separare;
P = -- D = coeficientul de difuziune;
t t = grosimea membranei.
Coeficientul de partifie (K) pentru majoritatea substan-

telor, se mascara cu ajutorul unui amestec ulei - apa, Tn care se
introduce substanta de cercetat. Dupa agitarea amestecului i
separarea celor doua faze, se determina, Tn fiecare dintre ele,
concentratia substantei respective. Cu cat acest coeficient are o
valoare mai mare, substanta este mai liposolubila i traverseaza
mai rapid membrana. Se abat de la aceasta regula apa, ureea,
metanolul i alte substante, Tn special, neelectrolitii hidrofili cu pon-
dere moleculara mica.
Coeficientul de difuziune (D) reprezinta cantitatea de sub-

stanta care trece, Tn unitatea de timp, din compartimentul celular
i
n eel extracelular sau invers. Pentru calcul, este necesara cu-
noaterea suprafetei de schimb i a diferentei de concentratie a
substantei n cele doua medii separate de membrana. Coeficientul
este generat de diferenta de mobilitate a ionilor unei sari i se
determina prin metode radioizotopice.
Este evident ca multe substante pot intrai n celula sau pot
parasi celula prin difuzie simpla atata vreme cat concentratia lor n
cele doua medii este diferita.
Tn transportul unor substante cui ncarcatura ionica (ionii de
Na+, er, ca++, K+ etc.), apare o noua valoare numita gradient de
potenfial electric care imprima acestora o energie suplimentara,
determinata de zonele de atractie sau de respingere electro-
136
statica, cauzata de polarizarea plasmalemelor (negativa la interior,

pozitiva la exterior). Plasmalema se comporta,i n teorie, ca un
condensator, la exteriorul ei, predominand cationii de Na+, iar la
interior, macroioni proteici cu sarcini negative (-). Aceasta gene-
reaza poten(ialul de membrana sau de repaus.
H20
uree
gliceroi
C02
glucoza
zaharoza
H\ Na', K+
er. Hco3·
Ca2+, Mg2+
Figura 33: Difuzia simpla prin plasmalema a diverse/or c/ase de substante
Tn 1911, Donnan, lucrand cu celule introdusei ntr-o solutie de

KCI, a constatat ca K+ va parasi celula, datorita gradientului de
concentratie (concentratia intracelulara a K+ este mai mare
intracelular - 140 mM fata de cea a mediului extracelular - 5 mM),
dar nu §i a gradientului electric (+ la exterior, - la interior); er intra
137
i celula datorita aceluia§i gradient de concentratie (concentratia

n
extracelulara a Cl" este mai mare de -110 mM decat intracelular -
4 mM), de§i va fi respins de acela§i gradient de potential electric.
145 mM 110 mM 5 mM
Exteriorul celulei Na+ er K+
l
!
lnteriorul celulei Na
+
er K+
5-15 mM 4 mM 140 mM
Figura 34: Reprezentare schematica a plasmalemei

din punct de vedere al Tncarcarii electrice §i al concentratiilor mo/are de ioni
pe cele doua fete (extracelulara §i citoplasmatica).
Echilibrarea concentratiilorin cele doua medii va fi reci-

proca §i nu implica decat forte fizice. Aceasta este determinata de
prezenta,in interiorul celulei, a anionilor proteici nedifuzibili,i
ntr-o
concentratie mai mare decati n lichidul interstitial, provocand acu-
mularea la suprafata externa, a plasmalemei de cationi nedifuzibili.
Acest fenomen constituie unul dintre mecanismele de producere a
potentialului de membrana.
Relatia dintre gradientul de concentratie §i eel de potential

electrici
n repaus este data de ecuatia Nernst:
E = valoarea fn milivolti
R = constanta de gaz universala
T = temperatura absoluta
C1 = concentra\ia mare
C2 = concentratia mica
138
Tinand cont de cele de mai sus, echilibrul Donnan, n cazul

KCI, poate fi exprimat astfel:
Cand fortele de difuzie tind sa egaleze fortele electrostatice

opuse ca sens, se ajunge la o stare de echilibru cunoscuta sub
numele de echilibrul Donnan,i n care fluxul de ioni, eel generat de
fortele de difuzie i eel generat de fortele electrostatice, se ega-
lizeaza, iar micarea ionilor nceteaza.
Suma celor doua gradiente - de concentratie i de potential
electric - de care dispun substantele cu sarcini electrice, numita
potenfial electrochimic al substanfei, determina sensul l}i amploa-
rea transportului pasiv.
5.1.2.2. DIFUZIA SIMPLA PRIN PROTEINE - IONOFORII

lonoforii sunt molecule mici, hidrofobe (inclusiv medica-
mente) care maresc permeabilitatea bistratului lipidic membranar
pentru anumiti ioni. Majoritatea sunt sintetizati de microorganisme,
probabil ca armai n competitia cu alte microorganisme sau cu
structuri ale organismelor pe care le invadeaza.
Exista doua categorii de ionofori:
• tip carau§ sau transportori mobili ai ionilor;
• tip canal.
Deoarece functionarea lor nu este conditionata de existenta
' ' '
unei surse de energie, ei permit deplasarea ionilor numai conform
gradientului electrochimic al acestora.
Un exemplu de ionofor carau§ este Valinomicina, polimer
cu structura inelara ce transporta K+, conform gradientului sau
electrochimic: preia ionul pe o fata a membranei, difuzeaza prin
bistrat l}i i elibereaza pe partea cealalta a membranei. n acelal}i
mod, FCCP, alt ionofor caraul} care face membranele permeabile,
selectiv, pentru H\ este utilizat, adesea, pentru disiparea gradi-
entului electrochimic al H\ prezent la nivelul membranei interne
mitocondriale, blocand astfel productia mitocondriala de ATP. Un
alt exemplu de ionofor caraul}, A23187, transporta cationi divalenti
139
(Ca2 +, Mg2 +).i

n celulele expuse la acest ionofor, Ca2+ intrai n
celula, fiind utilizat pentru studiul efectelor cre9terii concentratiei
Ca2+ liber n citoplasma (stimuland, astfel, anumite mecanisme de
semnalizare intercelulara).
Gramicidina A este un exemplu de ionofor tip canal, specific
pentru Na+. Aceasta este produsa de anumite bacterii, pentru a
distruge alte microorganisme, prin alterarea gradientelor Na+ 9i K\
esentiale pentru supravietuirea acestora, dovedindu-se, astfel, un
antibiotic eficient. Alti ionofori de tip canal sunt filipina, nistatina 9 i
amfotericina B care formeaza canalei n membranele care contin '
un procent ridicat de steroli, printre care membranele fungilor; sunt
folosite ca medicamente antifungice.
5.1.2.3. DIFUZIA FACILITATA DE PROTEINE CANAL

Proteinele canal sunt proteine membranare integrale, multi-
pass care realizeaza canale hidrofile prin bistratul lipidic. Pentru
integrareai n bistratul lipidic, aceste canale exprima helixuri amfi-
patice (hidrofobe), n raport direct cu bistratul lipidic (peretele exte-
rior al canalului proteic),i n timp ce peretele interior al canalului
este campus din reziduuri mari polare (hidrofile). Aceasta structura
permite ionilor sau moleculelor mici polare sa traverseze bistratul
lipidic. Astfel, proteinele canal ndeplinesc trei functii importante:
1. Colaboreaza cu proteinele tip pompe 9 i cu cele carau 9 pen-
tru mentinerea volumului celular,i n procesele de absorbtie
9 i secretie (de exemplu: la nivelul glandelor salivare, rini-
chiului etc.);
2. Reglarea potentialului electric membranar - deschiderea 9i
nchiderea coordonata a canalelor ionice poate schimba
i
potentialul membranar 9i genera un semnal electric ce se
raspande9te rapid la suprafata celulei. Mecanismul este
utilizat de neuroni 9i celulele musculare pentru comunicare
rapida;
3. Anumite canale ionice favorizeaza cre9terea concentratiei
intracelulare de Ca2+ (prin intrarea acestor ioni din mediul
extracelularin celula sau prin mobilizarea lor din REN) ne-
cesara desfa 9 urarii unor procese celulare, inclusiv secretie
celulara 9i contractie musculara.
140
Eficienta transportului ionic prin aceste canale este foarte

mare, de ordinul a un milion de ioni per secunda, de o mie de ori
mai mare decat orice carau§ proteic cunoscut. Tn acela§i timp,
transportul prin canale ionice nu poate fi cuplat cu vreo sursa de
energie, deci va fi numai ATP-independent.
Celulele controleaza activitatea proteinelor canali n doua
moduri:
- pe termen lung - fiecare celula exprima o paleta unica de
proteine canal, n functie de specificul sau (de exemplu:
neuronii §i celulele musculare exprima canale cu poarta
comandata de voltaj, necesare poter:itialului de actiune,
celulele epiteliale exprima canale de Na+. er, K+ §i pentru
apa, necesare proceselor de secretie, reabsorbtie de la
nivel glandular §i renal etc.);
- pe termen scurt - celulelei nchid/deschid anumite pro-
teine canal, functie de conditiile fiziologice sau semna-
lele primite din mediul extracelular.
Studiul proteinelor canal are o importanta deosebitai n me-
dicina, deoarece canalele ionice sunt tinta multor toxine puternice
(curara, toxina cobrei, tetrodotoxinei etc.), cat i a unor medicamente
(de exemplu: antiaritmice etc.) §i anestezice. Mutatiile la nivelul
genelor care codifica proteinele canal determina o serie de afec\iuni,
dintre care notam anumite aritmii cardiace, litiaza renala etc.
Canalele ionice se caracterizeaza prin:
- selectivitate pentru anumiti ioni - determinata de marimea
porului i de structura proteinei cei i edifica; sunt fie cation-se-
2
lective (pentru Na+, Ca +, K+ sau non-selective i permeabile pen-
tru toti trei ionii), fie anion-selective (de exemplu: pentru Cr);
- proprietatea de a fi inchisldeschis - canale cu poarta;
- arhitectura moleculara.
Canalele cu poarta sei

mpart n:
1. Canalele cu poarta comandata de voltaj - se deschid
atunci cand membrana este depolarizata. Acestea formeaza un
grup important, deoarece stau la baza mecanismului excitabilitatii
membranare. Printre cele mai importante, sunt cele selective
pentru Na+. K\ Ca2+. Cercetarile experimentale de electrofiziologie
i farmacologie au condus lai mpartirea canalelor cu poarta co-
141
mandata de voltaj pentru Ca2+ Tn cinci subtipuri distincte: L, T, N, P

i R (exista i tip Q, dar au proprietati asemanatoare celor P).
Subtipurile variaza functie de cinetica activarii - inactivarii,
voltajul prag pentru activare, conductanta i sensibilitatea la di-
veri agenti de blocare.
Cele de tip L sunt importante Tn reglarea contractiei mu-
chiului cardiac i neted, cele de tip N + P/Q sunt implicate Tn eli-
berarea neurotransmitatorilor i hormonilor, iar cele de tip T me-
diaza intrarea Ca2+ Tn neuroni i controleaza functii dependente de
Ca2+: reglarea altor canale, enzime etc.
Acestea au rol Tn:
- generarea potentialului de actiune;
- controlul unor functii celulare.
'
2. Canalele cu poarta comandata de ligand sunt activate
prin legarea unui mesager chimic la un situs specific de la nivelul
moleculei proteinei canal. Astfel, neurotransmitatorii rapizi (gluta-
matul, acetilcolina) actioneaza prin intermediul acestor canale.
Canalele cu poarta comandata de ligand, activate de neurotrans-
mitatorii de excitatie, sunt relativ non-selective i transporta Ca2+ i
alti cationi. De exemplu, receptorul pentru glutamat tip NMDA (cu
permeabilitate mare pentru Ca2 +) este un contributor important al
preluarii ionilor de Ca2+ de catre neuronii postsinaptici (i celulele
gliale) din SNC; aceasta va avea ca efect activarea lor i/sau indu-
cerea apoptozei prin activarea unor proteaze Ca2+-dependente;
mecanismul este numit excitotoxicitate i este implicat Tn unele
boli neurodegenerative.
Unele dintre aceste canale din plasmalema sunt sensibile
atat la semnalele intracelulare, cat i la cele extracelulare.
Alte canale ionice cu poarta sunt numite i receptori iono-
tropici (contin o molecula receptor i se deschid cand acesta leaga
o molecula-semnal specifica).
Tn general, medicamentele pot afecta functionarea cana-
lelor cu poarta sau a celor ionice (de exemplu: unele medicamente
vasodilatatoare inhiba deschiderea canalelor de calciu tip L).
3. Joncfiunile de tip gap care reprezinta canale cu poarta,

cu functionare mai lenta, dar care se deschid i nchid ca raspuns
142
la modificarile concentratiei intracelulare de calciu i;,i protoni (mo-

dificare de pH).
Mecanismul difuziei facilitate se explica prin existenta unor
proteine membranare care recunosc i;,i fixeaza, mai mult sau mai
pu\in selectiv, substantele accelerand transportul acestora, numite
proteine purtatoare sau transportoare.
Unele proteine de transport vehiculeaza substanta numai
ntr-un singur sens, numite uniporte. Altele functioneaza ca sis-
i
teme cotransportoare, n care transferul unei substante se face si-
multan sau consecutiv unei a doua solutii fie Tn aceeai;,i directie -
simport sauin directii opuse - antiport.
5.1.2.4. DIFUZIA FACILITATA DE PROTEINE CARAU$

Difuzia facilitata de proteine carau1de tip uniport (uni-
portori) realizeaza transportul moleculelor mici, hidrofile, prin
membrana, avand urmatoarele caracteristici:
- rata difuziei facilitate prin uniportori este mult mai mare
decat cea a difuziei simple prin bistratul lipidic;
- deoarece moleculele transportate nu patrund Tn miezul hi-
drofobic al bistratului, coeficientul de parti\ie K este irelevant;
- exista o viteza maxima de transport, Vmax - rata trans-
portului este maxima;
- transportul este specific - fiecare uniportor transporta
numai un singur tip de molecula sau un grup de molecule Tnrudite;
masura afinita\ii transportorului pentru substratul sau este Km
(constanta Michaelis) ce reprezinta concentratia la care transpor-
torul functioneaza la jumatate din capacitate (viteza de transport
fiind egala cu 1/2 din Vmax);
- se face prin mecanismul de ,,ping - pong", o modificare
conforma{ionala, reversibila a structurii proteice, care se deose-
bei;,te prin complexitate de mecanismul ionoforilor caraui;,;
- se desfai;,oara ca o reactie de cataliza enzimatica, con-
form unei cinetici Michaelis - Menten.
143
V,...x Cinetica difuziei facilitate
Concentratia solvitului (S)
Figura 35: Cinetica difuziei facilitate prin proteine carau§
Prin difuzie facilitata, se realizeaza transportul anionilor, al

ureei, al glicerolului i altar neelectroliti prin membrana eritrocitului,
cat i transportul glucozei i aminoacizilor prin plasmalema mai
multor tipuri celulare.
Fiecare proteina transportoare are un loc specific de legare
a substratului (substanta transportata). Viteza transportului atinge
valoarea maxima (Vmax), caracteristica pentru fiecare transportor,
atunci cand acesta este saturat (adica atunci cand toate locurile
de legare sunt ocupate). Apoi, fiecare transportor are o constanta
caracteristica de legare a substantei ce o transporta, numita KM,
egala cu concentratia substantei cand viteza de transport atinge
jumatate din valoarea maxima. Aceste caracteristici definesc o
cinetica de tipul Michaelis - Menten. Alte caracteristici asemana-
toare catalizei enzimatice sunt: dependenta de pH, inhibitia com-
petitiva prin compu i similari cu substratul, inhibitia necompetitiva
prin alte substante (ioni de metale grele) prezente Tn urme.
Difuzia facilitata a glucozei

Glucoza este sursa primara de energie, motiv pentru care
majoritatea celulelor organismelor animale contin o proteina mem-
branara ce faciliteaza difuzia glucozei din torentul sangvin Tn celule.
Celulele umane prezinta eel putin treisprezece proteine ce
actioneaza ca transportori facilitativi ai glucozei (izoforme).
144
Aceste izoforme numite proteine tip Glut (Glut1 - Glut13),

se diferentiaza 1n functie de tesutul 1n care sunt localizate, ca 9i
prin caracteristicile cinetice 9i reglatorii. Expresia !or 1n diferite ti-
puri celulare 9i proprietatile functionale specifice permit ca celulele
din organism sa regleze metabolismul glucozei independent 9i, 1n
acela9i timp, avand ca efect mentinerea constanta a concentratiei
glucozei 1n sange. De exemplu: Glut 2 - 1n ficat 9i 1n celulele
secretoare de insulina din pancreas, Glut 4 - 1ncelulele musculare
9i adipocite - celule care raspund la insulina - prin cre9terea pre-
luarii glucozei, Glut 5 transporta fructoza, Glut 1 - 1neritrocite (2%
din proteinele membranare).
lnsulina reprezinta un hormon produs de celulele endocrine
ale pancreasului, are un rol-cheie 1n mentinerea unui nivel normal
al glucidelor 1n sange. Cre9terea postprandiala a nivelului sangvin
de glucoza stimuleaza secretia de insulina care, la randul sau, prin
mecanisme de semnalizare celulara, activeaza uniporterii Glut 4
situati 1n vezicule membranare, imediat sub plasmalema, la nivelul
adipocitelor 9i al mu9chilor. Ace9ti uniporteri var fi translocati la
plasmalema cu ajutorul elementelor citoscheletului, vor fuziona cu
plasmalema 9i vor realiza, apoi, preluarea glucozei din sange. Du-
pa revenirea nivelului glucozei 1n limitele fiziologice, uniporterii re-
vin la situatia initiala.
5.1.2.5. AQUAPORINELE
Aquaporinele sunt proteine integrale ale plasmalemei, res-

ponsabile de reglarea fluxului transmembranar al apei.
Descoperirea acestor transportori ai apei a fast facuta 1n ca-
drul cercetarilor asupra membranei eritrocitului uman. Prin electro-
foreza, s-a dovedit ca aceste canale pentru apa sunt, de fapt,
proteine canal, denumite, ulterior, aquaporine.
Canalele pentru transportul apei au fast efectiv descoperite
1n anul 1986, de catre Prof. Dr. Gheorghe Benga, 9eful Catedrei
de Biologie Celulara 9i Moleculara din cadrul Universitatii de Me-
dicina 9i Farmacie ,,luliu Hatieganu" din Cluj-Napoca.
Aquaporinele sunt localizate 1n membranele tuturor celulelor
din corpul uman, avand un rol deosebit de important 1n creterea,
dezvoltarea §\i mentinerea sanatatii organismului. Descoperirea lor
145
a modificat fundamental modul de abordare a transportului apei

prin membranele biologice: acest transport nu se realizeaza numai
prin difuzie simpla, prin bistratul lipidic, ci i prin difuzie facilitata de
catre aceste proteine canal, cu o viteza de zece - o suta de ori
mai mare decat prin primul mecanism.
Structura moleculara a aquaporinelor difera de cea clasica a
canalelor ionice cu patru subunitati peptidice care delimiteaza un
por central. Aquaporinele sunt formate ca un tetramer peptidic,
fiecare delimitand un canal hidrofil propriu. Fiecare canal hidrofil
are forma de clepsidra cu vestibulul delimitat de resturi hidrofobe
i hidrofile, ntr-o configuratie care sa permita trecerea exclusiva a
apei - selectivitate deosebit de mare.
Molecula de apa, odata ajunsa la partea superioara a clep-
sidrei AQP, este preluata de un complex care functioneaza ase-
menea unui lift i mpinsai nspre parteai ngustata a canalului,i n aa
fel ncat oxigenul se afla la partea inferioara, iar cei doi atomi de
hidrogen din compozitia apei, la partea superioara. Odata ajunsa
aici, molecula de apa ,,se ciocnete" de peretii AQP (diametrul
acestei poftiuni este exact diametrul unei molecule de apa), care
sunt hidrofobi, i se rasucete, ajungand la partea inferioara a
clepsidrei, cu atomul de oxigen orientati n spate fata de citoplas-
ma celulara. Primii care vor interactiona cu formatiunile celulare
' '
propriu-zise sunt cei doi atomi de hidrogen.
Trebuie specificat faptul ca moleculele de apa circula cu viteza
mare prin AQP. Acest fenomen se datoreaza atat faptului ca mo-
lecula de apa interactioneaza slab cu peretii proteinei canal, cat i
datorita complexului transporter, care imprima acceleratia necesara
intrarii moleculei de apa i
n parteangustata a clepsidrei AQP.
i
146
Functiile plasmalernei
Figura 36: Structura molecu/ara a unei aquaporine.

A. Prezentare desfa§urata a celor §ase e/emente helica/e
ce formeaza un monomer rmpreuna cu motivele NPA specifice.
B. Modul de asamblare a componentelor unui monomer.
C. Gruparea ce!or patru monomeri ai aquaporinei rntr-un tetramer
147
Aceasta forma de clepsidra a AQP are multiple avantaje

pentru transportul de apa. Astfel, moleculele de apa pot circulai n
ambele directii cu viteza, atat din exterior spre celula, cat 9i din-
spre celula spre exterior. Acest fenomen de transport 9 i curgere a
apei esteintalnit pretutindeniin lumea vie.
O importanta proprietate a canalului este selectivitatea. Mo-
leculele de apa aluneca de-a lungul canalului, orientandu-se spre
campul electric format din atomii peretelui acestuia. Protonii sunt
opriti 9i respin 9 i datoritai
ncarcarii lor pozitive.
Tipuri de aquaporine
Prin cercetari succesive, s-a evidentiat faptul ca exista o familie
a acestor proteine canal pentru apa (aquaporine, AQP) care numara
unsprezece membri, numerotati de la AQPO la AQP10, aquaporina 1
fiind prima descoperita. S-a demonstrat faptul ca aceasta familie a
aquaporinelor cuprinde doua tipuri de proteine canal:
- aquaporinele propriu-zise (transporta apa);
- aquaglicoproteinel e (transporta, pe langa apa, 9i glucoza).
AQP1 se gase9te bilateral 9i apical, n membrana plasmatica
a tubilor proximali, n zona descendenta a ansei Henle. A mai fost
gasita 9i n eritrocite, n endoteliul vascular, tractul gastro-intestinal
9i plamani. Ea nu este reglata de vasopresina (ADH).
AQP2 este situata la nivelul nefrocitelor din tubii renali 9i are
rol modulator al actiunii antidiuretice a ADH.
Mutatiile de la nivelul genei ce codifica aceasta proteina de-
termina insensibilitatea renala la vasopresina - diabet insipid ne-
frogen congenital (persoanele afectate secreta cantitati mari de
urina, datorita lipsei de raspuns la vasopresina).
Absenta aquaporinei din cristalin produce cataracta la o
varsta foarte tanara.
n sistemul nervos central, au fost identificate AQP3, AQP5 9i
i
AQP8i n neuroni, precum 9 i AQP4, AQP5 9 i AQP9,i n astrocite 9i
celule ependimare.
AQP4 predominai n organele periventriculare cu rol im-
portant n echilibrul hidric al encefalului 9 i homeostazia lichidiana a
ntregului organism. Deficitul experimental de AQP4 determina o
i
scadere marcata a edemului cerebral postischemic, sugerand po-
sibilitatea functiei de osmoreceptor a acesteia la nivelul tesutului
nervos cerebra-spinal.
148
5.1.3. TRAr.lSPORTUL ATP-DEPENDENT {ACTIV)

Conceptul de transport activ, dependent de ATP, dateaza
din 1902, cand J . Berstein a descris permeabilitatea celulelor exci-
tabile. Transportul majoritatii moleculelor i ionilor catre interiorul
celulelor i catre mediul extracelular necesita prezenta unor pro-
teine membranare specializate (pompe ATP dependente) l?i ener-
gie furnizata de ATP. Toate aceste al?a numite pompe sunt pro-
teine transmembranare cu unul sau mai multe situsuri de legare a
ATP, localizate pe fata citoplasmatica a membranei. Ele se nu-
mesc ATP-aze l?i pot hidroliza ATP fn ADP i P cu eliberare de
energie utilizata pentru transportul ionilor sau moleculelor
ATP-ul este produs prin reactiile de fosforilare oxidativa din
mitocondrii, motiv pentru care transportul activ este cuplat cu res-
piratia celulara.
Pompa Pompa
lnteriorul celulei ATP-dependentii dirijatii de luminii Simport An!iport
Figura 37: Reprezentare a transportu/ui activ
Tn transportul activ, energia este utilizata pentru trecerea

substantelor de pe o fata pe cealalta a biomembranelor, fmpotriva
gradientului de concentratie, fenomen cunoscut sub numele de
mecanism de pompare (se efectueaza un lucru mecanic, dar nu fn
sensul strict al cuvantului).
Se cunosc doua sisteme de pompare:
• mecanismul de pompare ionica sau transportul activ primar;
• mecanismul de pompare moleculara sau transportul activ
secundar.
149
5.1.3.1.
MECANISMUL DE POMPARE IONICA (TRANS-
PORTUL ACTIV PRIMAR)
Se cunosc trei tipuri de pompe ionice:
- Pompe ionice de tip P (de la ,,fosforilare") contin doua
subunitati catalitice a identice i doua subunitati mai mici 13 cu
functie reglatorie. Tn timpul ciclului de functionare al pompei,
gruparea fosfat, eliberata prin hidroliza ATP-ului, este transferata
unui reziduu de acid aspartic al proteinei transportoare, fapt ce va
determina o modificare conformationala a acestei proteine. Schim-
barea conformatiei permite expunerea unor situsuri ionice spe-
cifice i modificarea afinitatii pentru ioni (de exemplu: ATP-aza Na-
K dependenta).
- Pompele ionice de tip V sunt total diferite de cele de tip
P. Acestea contin mai multe subunitati transmembranare i cito-
plasmice i transporta doar protoni (H+). Pompele de tip V se ga-
sescin veziculeleimbracatein clatrina, endozomi, complexul Golgi,
veziculele de secretie (inclusiv veziculele sinaptice),i n plasma-
lema osteoclastelor, macrofagelor,i n membranele ce delimiteaza
lizozomii, granulele secretorii i vacuolele celulelor vegetale,i n
plasmalema celulelor tubilor renali, cu rol n mentinerea echilibrului
acido-bazic al organismului, pompand protoni n urinai n formare.
Ele utilizeaza energia furnizata de ATP fara a forma o proteina
fosforilata.
Prezinta doua domenii:
un domeniu V1 care se gasetei n citoplasma, este hidrofil i
este campus din cinci polipeptide; componenta citosolica
are structura A383CDE, subunitatile A i B continand situ-
surile de cuplare i hidroliza a ATP;
un domeniu VO care contine cateva c6pii de proteolipid c i
1 de polipeptid a; subunitatile a i c formeaza canalul de
transport al protonilor.
Au doua functii:
1. acidifiaza compartimentele mai sus mentionate, iar pH-
ul acid determina disocierea ligandului de receptori n endosomi,
activeaza hidrolazele lizozomale etc.
150
2. gradientul de protoni realizat la nivelul membranei con-

fera energia necesara transportului altar molecule H+- asociate,
cum ar fi preluarea neurotransmitatorilor de catre veziculele sinap-
tice (Pollard T.D. i colab., 2004).
- Pompele ionice de tip F se gasesc i'n membrana bacteriilor
i i'n cea a mitocondriilor i cloroplastelor i au un rol deosebit de
important i'n sinteza de ATP, fiind numite i ATP-sintetaze.
Acestea actioneaza i'n sensul invers, al sintezei de ATP din
ADP i Pa, prin micarea protonilor i'n sensul gradientului de con-
centratie (se va vedea mecanismul sintezei ATP la nivelul mito-
condriilor).
Dei aceste proteine sunt denumite A TPaze, sistemul este
atat de compact construit, i'ncat energia stocata i'n legaturile fosfo-
anhidridice, la nivelul ATP (aa-numitele legaturi fosfat macroer-
gice), nu este disipata: ATP nu este hidrolizat i'n ADP i P pana
cand ionii nu sunt transportati. Proteina de transport colecteaza
energia libera, produsa i'n timpul hidrolizei ATP, i o utilizeaza
pentru a deplasa ionii i'mpotriva unui gradient electric sau chimic.
Alt grup de proteine ce transporta activ ioni este grupul
transportorilor tip ABC (ATP-Binding Cassette) ce leaga ATP,
numiti aa deoarece toti membrii acestei superfamilii prezinta un
domeniu omolog de legare pentru ATP. Include numeroase pro-
teine transportoare, fiecare avand specificitate pentru un anumit
substrat sau grupuri de substraturi care pot fi molecule glucidice,
aminoacizi, fosfolipide, peptide, polizaharide sau chiar proteine.
Cele mai cunoscute sunt ATP-aza de rezistenta multidrog (MDR-
ATP-aza) i CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conductance
regulator - o proteina implicata i'n transportul ionilor de clor prin
membrana).
Transportul activ al ionilor, n general, este necesar pentru:
mentinerea echilibrului osmotic al celor doua compartimente:
celular i extracelular;
pastrarea unei concentratii constante de anioni i cationi i'n
cele doua medii;
mentinerea potentialului de membrana la valori normale, cuprinse
i'ntre -20 mV i -200 mV, i'n functie de tipul celular i specie.
151
Biologie celulara !?i moleculara
Pompele de tip P
Majoritatea pompelor ionice sunt descrise din punct de
vedere structural !?i functional: de Na+ i K\ de ca++, de H+/K+, de
H+ sau pompa de protoni etc.
Pompa de Na+/K+ sau Na+-K+-ATP-aza se gasete 'fn
plasmalema tuturor celulelor eucariote. Prin intermediul ei, Na+ va
fi pompat la exteriorul celulei, iar K+ va intra 'fn celula. Se cunoate
ca prin difuzie simpla electrochimica, Na+ intra 'fn celula, iar K+ o
parasete.
Existenta numai a difuziei simple ar duce, 'fn foarte scurt
timp, la uniformizarea concentratiei acestor ioni 'fn cele doua
compartimente, cu consecinte grave 'fn ceea ce privete existenta
celulei, 'fn special, i a organismelor, 'fn general (concentratia Na+
este de 145 mM extracelular i de 5 - 15 mM intracelular, iar a K\
de 140 mM intracelular i de 5 mM extracelular). Pentru menti-
nerea acestor constante este necesara pomparea Na+ i K+ 'fm-
potriva gradientului de concentratie. Aceasta se realizeaza cu con-
sum de energie obtinuta prin hidroliza ATP i Tn prezenta unei en-
zime membranare specifice - Na+-K+-ATP-aza.
Spre deosebire de proteinele ce mediaza sistemul difuziei
facilitate ce pot transporta substante Tntr-un singur sens, aceasta
ATP-aza realizeaza micarea ionilor Tn ambele directii: Na+ - spre
exterior, K+ - spre interior. Raportul Na/K este 3/2 i datorita aces-
tuia, ATP-aza este electrogenica - contribuie direct la realizarea
potentialului de membrana.
ATPaza Na+K+ este o proteina transmembranara globulara,
cu Tnalta specificitate, formata din doua subunitati a i doua subu-
nitati :
• subunitatea mare catalitica sau a/fa de 100.000 daltoni;
• subunitatea mica necatalitica sau beta, o glicoproteina
de 45.000 daltoni.
Aceste doua subunitat,i se asociaza sub forma unui tetra-
mer cu o pondere moleculara de 300.000 daltoni. Acest complex
catalizeaza hidroliza ATP-ului i asigura transportul ionilor de Na+
i K+ 'fmpotriva gradientului de concentratie.
Prin hidroliza unei molecule de ATP, se realizeaza trans-
portul a trei ioni de Na+ Tn afara celulei i a doi ioni de K\ Tnauntrul
celulei. Fiecare molecula de ATP-aza catalizeaza pe secunda re-
actia de hidroliza pentru o suta de molecule de ATP.
152
Mecanismele pompei de Na+ i sunt complexe i necesita:

prezenta locurilor de legare a Na+ i K+ pe enzima;
translocarea enzimei n grosimea bistratului lipidic;
eliberarea ligandului.
Figura 38: Model functional al pompei de tip P (de exemplu: pompa Na+!<!:)
a. conformafia spafiala a pompei formeaza o deschidere catre fafa
citoplasmatica; b. hidroliza unei molecule de ATP furnizeaza energia necesara
fixarii a trei molecule de Na+; rn acest moment, are foe procesul de fosforilare;
c. pompa rea/izeaza translocarea prin mecanism de ,,ping-pong" cu expulzia
celor trei ioni de Na+ la exteriorul celulei; d. structura spafiala modificata permite
cup/area a doi ioni de !<! din exteriorul ce/u/ei; e. prin defosforilare, ATP-aza revine
la conformatia initia/a, eliberand cei doi ioni de K+ rn celula
' '
Functionare
Cand proteina leaga trei ioni Na+ pe fata interna a mem-
branei i devine fosforilatai
n urma hidrolizei ATP, trece din starea
conformat,ionala E1i n starea conformat'ionala E2. Aceste schim-
bari de conformatie sunt necesare pentru a schimba afinitatea
proteinei pentru cei doi ioni ce trebuie transportati: trebuie sa preia
ionii din zone ce au concentratie relativ scazuta pentru acetia,
deci trebuie sa prezinte o afinitate mare pentru aceti ioni. Tre-
153
cerea 1n starea conformationala E2 are drept consecinta expu-

nerea catre compartimentul extracelular a locurilor de legare i
pierderea afinitatii pentru ionii de Na. Dupa eliberarea acestora,
proteina preia doi ioni Na+, se desfosforileaza i se re1ntoarce ast-
fel 1n starea conformationala E1, expunand locurile de legare spre
interior. Se pierde afinitatea pentru ionii de K\ iar acetia sunt
eliberati 1n interiorul celulei; ulterior, ciclul se reia.
D' in cele de mai sus, rezulta ca trecerea ionilor, 1n general,
a Na+ i K+, 1n special, prin membranele biologice, se realizeaza
prin doua procese diferite:
prin difuzie electrochimica simpla care tinde sa restabi-
leasca echilibrul Donnan;
prin transportul activ, 1mpotriva gradientului electrochimic,
care reface concentratia diferita a celor doi ioni 1n cele doua
medii.
Pompa de Na+/K+ este implicata i 1n transportul activ al
unor molecule ca acizii aminati i glucoza, ceea ce explica consu-
mul de aproximativ 1/3 din necesarul de energie pentru majorita-
tea tipurilor celulare i de pana la 70%, 1n cazul neuronilor care
trebuie sa-i refaca potentialul de membrana dupa depolarizarea
ei 1n urma excitarii.
Pompele de Ca2+ (Ca2+-ATPazele)

Se gasesc la nivelul plasmalemei i la nivelul membranelor
mitocondriale i ale reticulului endoplasmatic (RE). De la nivelul
RE din celulele musculare, adevarat rezervor de calciu, Ca 2+ este
eliberat la formarea complexului actino-miozinic, 1n vederea reali-
zarii contractiei.i n citoplasma celulelor musculare, concentratia
2
Ca + liber variaza 1ntre 10 M (repaus) i mai mult de 10 M (con-
tractie). Modelul mecanismului de actiune al acestor ATP-aze din
membrana RE muscular implica doua stari conformationale E1 i
E 2 cu afinitati diferite ale proteinei pentru ionii de Ca2+.
Activitatea Ca2+-ATP-azelor din RE din muchi se inten-
sifica daca crete concentratia Ca liber 1n citoplasma: vor pompa
Ca2+ 1n RE, suplimentand activitatea Ca2+-ATP-azelor similare din
plasmalema, asigurandu-se astfel ca nivelul concentratiei ionilor
de Ca2+ liberi din citoplasma celulelor musculare 1n repaus ramane
1n limitele fiziologice.
154
Creteri mici ale concentratiei ionilor de calciu Tn citoplasma

determina o varietate de raspunsuri celulare.
Ca2+-ATP-azele din plasmalema transporta ioni de calciu Tn
afara celulei, Tmpotriva gradientului electrochimic. Subunitatea ca-
talitica a acestei pompe este similara ca structura i secventa cu
subunitatea pompei de calciu din RE din muchi.
Activitatea acestei ATP-aze este reglata de calmodulina, o
proteina citoplasmatica de legare a Ca2+.
Pompa de H+/K+ se Tntalnete la nivelul plasmalemelor

celulelor epiteliale ale mucoasei gastrice, realizand efluxul de H\
concomitent cu influxul de K+. Ea se gasete i Tn plasmalema
procariotelor (Halobacterium halobium).
Ca i pompa de Na+/K+, este formata din doua subunitati:
a. a sau catalitica compusa din 1.033 acizi aminati cu
PM=11OKDa. 80% se gasete Tn citozol, 5% extracelular i
15% - intramembranar. n segmentul intracitoplasmatic, are
loc de legare pentru ATP i H+ pe care Tl schimba cu K+.
b. p cu PM=65-80KDa - asemanatoare cu p din ATP-aza
Na+/K+ i nu are rol functional de transport.
Rolul pompei este de a furniza H+ Tn lumenul gastric, la

schimb cu influx de K+ Tn celula. H din lumenul gastric se vor com-
bina cu ionii de er i se va forma acidul clorhidric (HCI) necesar
digestiei gastrice. n stare de repaus, moleculele acestei pompe se
gasesc Tn membrana unor vezicule citoplasmatice. Prezenta bolu-
lui alimentar determina o cascada de raspunsuri celulare stimulate
hormonal ce conduc la eliberarea histaminei care se va lega la
receptorii sai situati la nivelul plasmalemei celulelor parietale gas-
trice acido-secretoare. Activarea R-histaminici determina deplasa-
rea veziculelor ce contin aceasta ATP-aza catre polul apical, fuzio-
narea lor cu plasmalema, formarea unor depresiuni adanci sau ca-
naliculi i activarea pompei. Aceasta va pompa protoni Tn lumenul
gastric Tmpotriva gradientului de concentratie.
Pompele de protoni transporta H+ prin membrana organi-
telor i a altor structuri celulare, fiind localizate la nivelul membra-
nei mitocondriale, membranei endozomilor, a veziculelor de secre-
tie, a lizozomilor, Tn plasmalema osteoclastelor, macrofagelor, Tn
155
plasmalema celulelor tubilor renali, cu rol Tn mentinerea echilibrului

acido-bazic al organismului, pompand protoni Tn urina Tn formare.
Ele utilizeaza energia furnizata de ATP, fara a forma o proteina
fosforilata.
Transportorii de tip ABC

Superfamilia transportorilor ABC reprezinta a treia categorie
de ATP-aze transmembranare ce contin o caseta de legare a ATP
(ABC).
Sunt doi membri importanti:
1. ATP-aza de rezistenta multidrog (MOR - ATP-aza -
proteina P170, numita l?i MDRP, acronim de la ,,multiple drug re-
sistance protein".
A fost descoperita atunci cand medicii oncologi au constatat
ca tumorile sunt, adesea, rezistente la un numar mare de medi-
camente anti-cancer. Explicatia acestui fenomen este: celulele tu-
morale supraexprima o ATP-aza MOR numita P170; ea utilizeaza
energia furnizata de ATP, pentru a pompa molecule hidrofobe
(cum sunt majoritatea medicamentelor anti-cancer) din celule spre
exterior.
i
n mod normal, aceste ATP-aze sunt exprimate Tn ficat, ri-
nichi l?i intestin l?i pompeaza substante toxice Tn urina, bila l?i lu-
menul intestinal.
Celulele tumorale supraexprima aceste proteine l?i pom-
peaza spre exteriorul celulei diferite medicamente ce pot fi efici-
ente din punct de vedere medical.
i
n cazul unui cancer hepatic (hepatom), tratamentul este
dificil l?i datorita faptului ca structurile afectate prezinta rezistenta
la un numar mare de medicamente anti-cancer.
MOR - ATP-aza (P170) se pare ca functioneaza l?i ca un
canal de Cl-sensibil la volum (volume - sensitive Cl-channel) ce
necesita ATP pentru activitatea sa.
2. Proteina CFTR - acronim de la ,,cystic fibrosis trans-
membranare conductance regulator".
CFTR are o structura asemanatoare cu MOR-ATP-aza,
fiind format din segmente hidrofobe constand din l?ase a - helixuri
transmembranare ce folosesc, ca l?i cai de translocare, doua
domenii mari hidrofile pe fata interioara a plasmalemei spre cito-
plasma l?i, uneori, chiar Tn citoplasma, care prezinta situsuri de
156
Functiile p!asmalemei
legare a ATP-ului; hidroliza ATP-ului determina o schimbarei n
structura proteinei, facilitand transportul moleculelor hidrofobe in
1
cazul MOR, sau a Cl-, n cazul CFTR. CFTR este un canal de Cl-
sensibil ATP 9 i AMPc.
Defectele genetice ale CFTR sunt responsabile de fibroza
chistica a pancreasului (mucoviscidoza), caracterizata prin dis-
functii ale CFTRi n celulele epiteliale de la nivel pulmonar i pan-
creatic. Daca nu este eliminat er, nu este atrasa nici apa (prin os-
moza), iar secretia enzimelor pe caile pancreatice 9i a mucusului
de pe caile respiratorii este blocata (fiind prea vascoasa). De aici,
9i simptomele majore (steatoree, care necesita administrarea, zil-
nica, de enzime pancreatice) 9i infectii respiratorii (care necesita
administrare de antibiotice 9i substante pentru fluidificarea secre-
tiilor respiratorii).
5.1.3.2.MECANISMUL DE POMPARE MOLECULARA (TRANS-

PORTUL ACTIV SECUNDAR)
Simportul
Mecanismele care explica pomparea moleculara sau trans-
portul activ secundar postuleaza faptul ca ionul motor,i n cazul
nostru, Na+.impreuna cu o molecula (oza sau acid aminat) se
fixeaza pe doua locuri distincte ale transportorului 9i formeaza un
complex ternar. De exemplu, transportul activ al unor oze sau acizi
aminati Tn celulele animale este propulsat de gradientul de Na+
care este mai mare pe versantul extern al plasmalemei. Absorbtia
glucozei de enterocite de nefrocite se face printr-un sistem de
simporl Tn care glucoza 9i Na+ se leaga Tn locuri diferite pe
proteina transportoare a glucozei. Na+ are tendinta de a reintra Tn
celula, Tn sensul gradientului sau electrochimic, antrenand 9i glu-
coza cu el Tn celula. Cu cat gradientul Na+ este mai ridicat, cu atat
viteza de intrare a glucozei este mai mare 9i invers. Na+ patrun-
zand Tn celula cu glucoza este pompat la exterior prin ATP-aza
Na+/K+ care, mentinand gradientul de Na+. antreneaza indirect
transportul de glucoza.
Acela 9i mecanism este utilizat 9i la transportul acizilor ami-
nati, n plasmalema diferitelor tipuri celulare, exista eel putin cinci
tipuri de proteine transportoare, fiecare dintre ele legand un grup
de acizi aminati cu structura asemanatoare 9i ioni de Na+.
157
La bacterii, cele mai multe sisteme de transport folosesc, n

locul Na\ protonii (H+) asociati cu transportul molecular. De exem-
plu, trecerea unui proton la Escherichia coli determina acumularea
unei molecule de glucoza (antiport).
Spa\iu
extracelular
Figura 39: Prezentare complementara a transportului activ secundar

cup/at cu transportul activ primar
Antiportul
1. Antiportul 3Na+ I Ca2+ - la nivelul muchiului cardiac
care cupleaza un influx de Na+ cu un eflux de Ca2+: sunt necesari
trei ioni de Na+ pentru a scoate un ion de Ca2+ din citoplasma. Prin
scaderea concentratiei intracelulari de Ca2+, acest antiport reduce
forta muchiului cardiac.
2. Antiporturi cu rol n reglarea pH-ului celular:
- Na+Hc0-3/Cr importa un ion de Na+ i Hco-3 i exporta
er; enzima citoplasmatica, numita anhidraza carbonica, catali-
zeaza disocierea HC0-3i n C02 i OH-. C02 difuzeazai n mediul
extracelular i ionul hidroxil se combina cu protonii din interiorul
celulei i formeaza H20. Scopul acestui cotransport este creterea
pH-ului intracelular prin consumarea protonilor.
- Na+/H+ cupleaza influxul de Na+ cu efluxul de H+.
i
n anumite circumstante, pH-ul celular poate crete peste li-
mita normala de 7,2 - 7,5. Pentru a scadea pH-ul, multe tipuri
celulare utilizeaza un antiport anionic ce realizeaza schimbul 1:1
158
Heo· 3 9 i er. Acest antiport exporta Heo·3 (vazut ca un complex

oH·9i e02) 9i importa er, ceea ce va duce la scaderea pH-ului.
Activitatea acestor trei proteine antiport depinde de nivelul
pH-ului celular 9i ofera celulelor un mecanism reglator deosebit de
sensibil care mentine pH-ul intracelular 1n apropierea valorii de 7,4.
3. Proteinele antiport i fosforilarea oxidativa
La nivelul membranei mitocondriale, exista doua proteine
antiport: HP0/·10H·9i ATP/ADP. Primul catalizeaza importul unui
HPo/· cuplat cu exportul unui ion hidroxil; celalalt antiport permite
unei molecule de ADP sa intre odata cu ieirea unei moleculei de
ATP. Aceasta proteina antiport este un dimer cu p.m. 30.000 Da 9 i
reprezinta aproximativ 1O - 15% din totalul proteinelor membranei
interne mitocondriale. Aceste doua proteine antiport functioneaza
1mpreuna 9i produc un influx de 1ADP 9i 1P 9i un eflux de 1ATP
cu 1OH-. Fiecare ion hidroxil expulzat se combina cu un proton
translocat 1n spatiul intermembranar, 1n timpul functionarii lantului
transportator de electroni pentru a forma H20.
Proteinele transporter tip pompa, cele carau$ $i cele canal
coopereaza la nivelul organismului, functionand, adesea, 1n ade-
varate circuite sau cicluri. Pompele stabilesc gradientele eiectro-
chimice la nivel membranar, proteinele canal regleaza $i contro-
leaza permeabilitatea membranei pentru ioni mentinand potentialul
de membrana, iar cele carau9 utilizeaza gradientul electrochimic
pentru transportul unor substraturi.
Exprimarea selectiva a unei palete largi de pompe, canale
$i carau9i 1n diferite tipuri de membrane permite buna functionare
a celulelor. eunoa$terea lor permite explicarea atat a complexelor
mecanisme celulare fiziologice, cat 9i a unor aspecte patologice.
lata cateva exemple 1n acest sens:
1. Transportul glucozei la nivel intestinal 9i renal necesita
urmatoarele componente la nivelul plasmalemei enterocitelor 9i,
respectiv, nefrocitelor:
Na+K+-ATPaza
SGLT1 - simportul Na+/glucoza localizat 1n zona apicala a
plasmalemei; uniportul prin transportorii GLUTS localizati 1n zona
bazolaterala a plasmalemei; Na+K+-ATPaza realizeaza gradientele
pentru Na+ $i K+ la nivelul plasmalemei pompand Na+ la exterior i
K+Tn interiorul celulei; SGLT1-simportul Na+/glucoza utilizeaza ten-
dinta Na+ de a se deplasa, conform gradientului sau, pentru a pre-
159
lua glucoza; uniporterii GLUT5 faciliteaza apoi transportul glucozei

din citoplasma catre fluxul sangvin. La nivel intestinal, acest
mecanism permite preluarea glucozei rezultata i
n urma proceselor de
digestie. Celulele tubilor renali utilizeaza o strategie asemana-
toare pentru recapturarea glucozei.
Creterea postprandiala a nivelului sangvin de glucoza
stimuleaza secretia de insulina care, la randul sau, prin mecanis-
me de semnalizare celulara, activeaza uniporterii GLUT4 de la
nivelul adipocitelor i muchilor, care vor realiza apoi preluarea
glucozei din sange.
2. La nivel renal,i
n ansa lui Henle, celulele utilizeaza Na+K+-
ATP-azele i simporturile Na+/K+/2Cr pentru reabsorbtia NaCl:
numarul mare de ATP-aze de Na+K+(5000/µm 2) de la nivelul polului
bazo-lateral creeaza un gradient pentru Na+, motorul simportului
mai sus mentionat. KCI care intrai mpreuna cu Na+ prin intermediul
simportului Na+/K+12cr parasete celulele prin proteine canal:
canale de K+ de la nivelul plasmalemei polului apical i bazo-lateral
i canale de er situatei
n plasmalema polului bazo-lateral.
Furosemidul, medicament cu efect diuretic, utilizat n terapia
unor afectiuni cardiovasculare, inhiba simportul Na+/K+/2Cr din
plasmalema celulelor ansei lui Henle, reducand reabsorbtia Na+ er.
5.1.3.3. TRANSLOCAREA DE GRUP

Translocarea de grup reprezinta o forma deosebita de
transport,i
n care substanta,i
n contact cu fata externa a plasma-
lemei, formeaza o legatura covalenta cu unul dintre constituentii
ei, n celula, gasindu-se sub o forma chimica diferita.
Spatiu
extracelular
Spatiu
intrace1u1ar
@oza1
-P
(citoplasma)
Figura 40: Modelul functional al translocarii de grup
160
De exemplu, unele bacterii fixeaza glucoza din mediul extra-

celular pe care o transforma 1n glucoza-6-fosfat, prin fosforilare,
forma sub care se acumuleaza 1n interiorul bacteriei.
5.1 .4,. TRANSPORTUL PRIN VEZICULE
Reprezinta un tip specific de transport prin membrane care

este realizat prin vezicule. Se deosebe!;,te de microtransferul prin
proteins sau prin bistratul lipidic.
Majoritatea celulelor pot sa elimine sau sa importe macro-
molecule specifice prin bistratul lipidic.
Exista trei tipuri de transport vezicular, 1n funcie de directia
de transport:
transport din mediul extracelular 1n celula;
transport din celula 1n mediul extracelular;
transport transcelular.
particule solide
•
•
•
Citozol receptor
vezicula
fagozom cu fnveli
vezicula
FAGOCITOzA PINOCITOZA. ENDOCITOZA.

mediata de receptor!
Figura 41: Tipuri de transport prin vezicu/e
A transportul din mediul extracelular 1n celula este denumit

endocitoza; se descriu doua tipuri de endocitoza, 1n functie
de dimensiunea veziculelor de transport:
161
1. fagocitoza (celula mananca) se realizeaza prin vezicule

mari, pentru particule de mari dimensiuni cum ar fi
bacteriile 9i de9eurile celulare;
2. pinocitoza (celula bea) implica transportul intracelular
pentru fluide sau solutii sub forma de picaturi, prin inter-
mediul veziculelor mici;
8. transportul din celula catre mediul extracelular se nume9te
exocitoza;
C. transportul transcelular se nume9te transcitoza. De exemplu:
macromoleculele transportate prin peretele capilarelor sang-
vine. Transcitoza se poate realiza prin:
vezicule independente care traverseaza celulele en-
doteliale de la fata luminala la fata interstitiala;
prin canale forma' te de vezicule 'care fuzio' neaza (se
alipesc).
5.1.4.1. ENDOCITOZA
Este transportul de materiale de la exterior spre interiorul
celulei. Endocitoza este de doua feluri dupa natura substantelor ce
patrund 1n celula: fagocitoza 9i pinocitoza. Prin fagocitoza, patrund
substante solide (gr. fagein = ,,a bea", deci, ,,celula bea"). Tn am-
bele cazuri de endocitoza, materialele patrundi n celula 1nglobate i n
vezicule ce se desprind din plasmalema 9 i care ajunsei n cito-
plasma, se numesc fagozomi (in cazul fagocitozei), respectiv en-
dozomi timpurii (in cazul pinocitozei). Fagozomii 9i endozomii
timpurii se unesc apoi cu alte vezicule numite endozomi tardivi 9 i
cu lizozomi, structuri n care materialeleincorporate sunt digerate,
produ9ii de digestie trecandi n citoplasma. Trebuie mentionat ca
particulele solide mari sunt ingerate (fagocitate) numai de catre
celulele specializate (fagocite). Tn schimb, majoritatea celulelor au
capacitatea de a 1ngloba macromoleculei n solutie.
Terminologiain acest domeniu a suferit modificari n ultimii
ani. Tn 1963, Ch. de Duve a introdus termenul de endocitozai n
care includea doua tipuri de activitati: ingestia de particule solide
(fagocitoza) 9i preluarea fluidelor (pinocitoza). Studiile recente au
aratat ca fagocitoza 9i pinocitoza sunt doua activitati fundamental
diferite, motiv pentru care termenul de pinocitoza ai nceput sa fie
162
din ce Tn ce mai putin utilizat, iar eel de endocitoza, folosit pentru

preluarea fluidelor.
Fagocitoza este realizata de tipuri celulare specializate

care se mai numesc i fagocite; la om, acestea sunt de doua
tipuri: macrofage i neutrofile. Fagocitele formeaza un sistem fa-
gocitar aflat sub sistem nerves i umoral. Acest sistem are com-
ponente mobile (celulele circulante i. Tn special, neutrofilele) i
componente sesile reprezentate de macrofage. Acestea se afla Tn
splina, ganglionii limfatici, ficat (celulele Kupffer), vasele sangvine,
alveolele pulmonare, pleura, peritoneu.
fn timp ce organismele heterotrofe cum ar fi amoebele i
ciliatele folosesc fagocitoza pentru preluarea particulelor alimentare
i organismelor mici, la majoritatea speciilor animale, fagocitoza
este mai mult un mecanism cu rol protector decat o modalitate de
hranire. Fagocitele sunt specializate Tn ingerarea microorganis-
melor, celulelor aIterate, senescente, a corpiior apoptotici etc. fn
termeni cantitativi, aceasta functie este deosebit de importanta:
macrofagele fagociteaza 1011 hematii senescente Tn fiecare zi.
Fagocitoza are mai multe etape:

1. chemotactismul care reprezinta micarea dirijata a fago-
citelor catre locul infectiei; semnalele moleculare care determina
'
aceasta deplasare sunt reprezentate de proteins serice (compo-
nentele sistemului complement, kalicreina), components bacteriene.
2. recunoa§terea materialului de ingerat §i ata§area fagoci-

telor se realizeaza cu ajutorul receptorilor din plasmalema fagoci-
telor ce identifica i leaga o serie de components de pe suprafata
materialului ce trebuie ingerat.
fn cazul bacteriilor, este necesara acoperirea lor cu anti-
corpi i/sau componente ale sistemului complement, Tnveli ce
este apoi recunoscut de receptorii de la suprafata fagocitelor. Pro-
cesul de modificare a suprafetei bacteriene pentru fagocitoza se
numete opsonizare. Alte categorii de receptori de la nivelul fago-
citelor recunosc grupari glucidice din plasmalema celulelor ce tre-
buie fagocitate (daca acidul sialic este Tndepartat din membrana
eritrocitelor, acestea sunt rapid fagocitate).
163
3. fnglobarea - activarea receptorilor de la nivelul fago-

citelor determina emiterea de pseudopode de catre acestea, care
nconjura particula de fagocitat, fuzioneaza apoi la capetei
i nchi-
zandu-se i formand vezicula numita fagozom.
4. distrugerea celulelor fagocitate - odata format, fago-

zomul fuzioneaza cu lizozomii, iar materialul fagocitat este distrus
de enzimele lizozomale sau radicalii liberi de oxigen generatii n
interiorul fagozomului.
microorganism
Celula fagocitara
Figura 42: Prezentare schematizata a stadiilor fagocitozei
Fagocitarea materialului este dirijata i de activitatea con-

tractila a microfilamentelor de actina situate sub plasmalema. Nu
toate bacteriile ingerate de fagocite sunt distruse. Anumite specii
reuesc sa pacaleasca mecanismul fagocitar, dezvoltandu- i me-
canisme de supravietuire.
164
Exemple:
- fn cazul Mycrobacterium tuberculosis (responsabil de
aparitia tuberculozei), fagozomii 1n care sunt incluse aceste bac-
terii nu reuesc fuziunea completa cu lizozomii; aceste microorga-
nisme, odata ingerate, inhiba fuziunea membranei fagozomului cu
lizozomii, ceea ce ar duce la formarea fagolizozomului i la dis-
trugerea lor.
- Alt agent patogen, Listeria monocytogenes, ce provoaca
encefalita, produce o fosfolipaza ce distruge integritatea membra-
nei lizozomale, permitand bacteriei sa iasa 1n citoplasma. Aici ea
este asemanatoare unei rachete, prin deplasarea 1n interiorul celu-
lei, datorita polimerizarii monomerilor de actina chiar 1n spatele
bacteriei. Aceasta este declanata de o proteina prezenta la un
capat al bacteriei care, la randul sau, ataeaza i activeaza pro-
teine din citoplasma cu rol 1n polimerizarea actinei.
Endocitoza poate fi 1mpartita 1n doua categorii:

a) endocitoza in faza fluida care reprezinta preluarea
nespecifica a fluidelor din spatiul extracelular; orice molecula, indi-
ferent de dimensiunea ei, prezentai n fluidul extracelular, va fi
internalizata. Acest tip de endocitoza apare continuu 1n anumite
tipuri celulare specializate 1n sinteza i secretie, la nivelul carora, un
numar mare de vezicule secretorii fuzioneaza cu plasmalema,
pentru eliberarea continutului, ea fiind necesara pentru mentinerea
unei suprafete constante a plasmalemei. Virtual, toate celulele
eucariote ingera continuu parti mici din plasmalema sub forma
veziculelor de endocitoza. Rata internalizarii plasmalemei prin acest
proces variaza de la un tip celular la altul. De exemplu, un macrofag
ingera aproximativ 3% din plasmalema 1n fiecare minut, 1n timp ce
la nivelul fibroblastelor, acest tip de endocitoza are o rata mult mai
mica. Din moment ce suprafata celulara i volumul celular raman
neschimbate, este clar ca aceeai suprafata membranara ce este
1ndepartata prin endocitoza este adaugata la suprafata celulara prin
exocitoza, procesul invers. fn acest sens, cele dou procese sunt
legate i constituie un ciclu, endocitoza - exocitoza.
b) endocitoza mediata de receptori ofera o cale de pre-

luare eficienta i selectiva a macromoleculelor prezentei
n concen-
tratii relativ scazute 1n spatiul extracelular.
165
Evenimente membranare
Acestea implica legarea unei molecule la un receptor spe-
cific, care se concentreazai n regiuni specializate ale plasmalemei,
depresiunile i nvelite pe fata citoplasmatica cu un ansamblu de
proteine: adaptina, clatrina, dinamina etc.
Clatrina polimerizeazai ntr-o structura cu trei brate numita
triskelion. Asamblarea triskelioanelori n ret,eaua cei mbraca de-
presiunile este initiata de legarea subunitatii a a moleculei de
adaptina AP-2i n locuri specifice, pe fata citoplasmatica a plasma-
lemei. Aceasta legare necesita agregarea moleculelor de AP-2, iar
reglarea acesteia este realizata de moleculele de izonitolfosfat
(IP), sugerandu-se ca hormonii 9i factorii de cre9tere ce induc pro-
ducerea de IP regleaza 9i formarea acestor depresiuni. Asambla-
reainveli9ului de clatrina, pe fata citoplasmatica a plasmalemei
este considerat semnalul pentru invaginarea membranei n acest
lac 9i are doua functii importante: confera forta mecanica necesara
9i influenteaza concentrareai n depresiuni a unor receptori. De
fapt, o parte din receptori intrai n depresiunilei
nvelitei
n clatrina
indiferent daca au legat sau nu liganzii specifici, altii intra numai cu
ligandul specific legat. Acest aspect indica faptul ca aceste de-
presiuni functioneaza ca adevarate filtre moleculare, retinand anu-
miti receptori 9i excluzand pe al\ii. Perioada de viata a acestor
depresiuni invelitein clatrina este scurta: dupa aproximativ un
minut de la formare, se adancesc, sei nchid 9i formeaza veziculele
rnvelite rn clatrina (aproximativ 2.500 veziculeimbracatei n clatrina
parasesc plasmalema unui fibroblasti n cultura,in fiecare minut).
lmediat dupa formare, aceste vezicule pierdi nveli9 ul de clatrina 9i
fuzioneaza cu endozomii timpurii.
Endozomii
Compartimentul endozomal, vizualizati n microscopia elec-
tronica, apare ca un set heterogen de tubuli 9i vezicule care se
extind de la periferia celulei panai
n apropierea complexului Golgi.
Pot fi identificati doua tipuri de endozomi: endozomii timpurii,
situatii
n vecinatatea plasmalemei, 9i endozomii tardivi, situatii n
vecinatatea complexului Golgi. lnteriorul compartimentelor endo-
zomale este mentinut acid de o ATP-aza de protoni din membrana
acestora, iar acest mediu acid are un rol esential n functia
organit.
. '
acestui
166
Endozomul timpuriu actioneaza ca o statie de sortare pe

caiea endocitotica.i n mediul i'or acid, multi receptori internalizati i
i schimba conformatia i elibereaza moleculele ligand care, de
obicei, sunt destinate descompuneriii n lizozomi, iar receptorii sunt
reciclati la polul apical sau bazolateral (I §i a II-a ca/e a endocitozei
- ca/ea reciclarii receptorilor), alti liganzi endocitati raman legati la
receptori i sub forma complexelor ligand - receptor ajungi n en-
dozomul tardiv i apoii n lizozomi, unde sunt degradate (a Ill-a
cale a endocitozeij .
Varietatea cailor pe care diferiti receptori le urmeaza din
endozomi depinde de locul de legare a complexelor receptor - li-
gandin depresiunilei mbracatei
n clatrina, de tipul moleculei ligand i
de prezenta unor ,,semnale de sortare" prezente la nivelul mole-
culei receptor cei i ghideaza catre o anumita cale.
Exemple pentru caile endocitozei:
- lnternalizarea colesterolului (LDL) - calea reciclarii re-
ceptorilor pentru un nou ciclu de endocitoza.
endocitoza / reciclarea
receptorilor
la nivelui
vezicula eliminarea plasmalemei
cu
nveli$
i nveli$ului
i lizozom timpuriu /
.......,
fuziune cu lizozo
Figura 43: Prezentare schematizata a stadiilor fagocitozei
Transportul colesteroluluiin celula se face prin pinocitoza

mediata de receptori l}i are ca rol prevenirea acumularii de coles-
terol n sange, cu riscul formarii de placi ateromatoase. Majoritatea
167
colesterolului este transportat Tn sange legat de LDL (lipoproteine

de densitate joasa). LDL reprezinta molecule de dimensiuni mici
care contin colesterol legat de proteine. Daca o celula are nevoie
de colesterol, atunci va exprima receptori pentru LDL la suprafata.
Receptorii pentru LDL se aglomereaza la nivelul depre-
siunilor de la suprafata celulei. Toate particulele cu LDL care se
leaga la aceti receptori sunt endocitate foarte rapid. Veziculele
formate cu Tnveli de clatrina pierd foarte repede acest Tnveli i
fuzioneaza cu endozomii timpurii, apoi cu endozomii tarzii i. Tn
final, cu lizozomii. Astfel, Tn 10 - 15 minute de la cuplarea cu re-
ceptorii de suprafata, LDL ajunge Tn lizozomi unde esterii de coles-
terol sunt hidrolizati, iar colesterolul liber este eliberat i folosit de
celula. Receptorii pentru colesterol urmeaza calea I de reciclare.
Receptorii pentru LDL sunt desprini de LDL Tn endozomi i recir-
culati la suprafata membranei celulare.
- Endocitoza fierului, sub forma complexelor transferina - Fe
- reciclare similara cu receptorii pentru LDL, dar mult mai complexa.
Fe este transportat Tn sange de o proteina numita trans-
ferina. Suprafata celulara prezinta receptori pentru transferina.
Transferina (compusa din apotransferina i ionul de Fe) este en-
docitata i ajunge Tn endozomii timpurii. pH-ul scazut elibereaza
Fe din transferina, iar apotransferina ramane legata de receptorul
pentru transferina. Ansamblul receptor - transferina este reciclat la
suprafata celulei. La suprafata celulei, pH-ul devine fiziologic (=7)
i apotransferina se desprinde de receptor. Receptorul ramane la
suprafata celulei, iar apotransferina va cupla alti ioni de Fe com-
punand transferina care poate fi din nou legata la receptori. Fe
este transportat Tn lizozomi. Receptorii pentru transferina urmeaza
calea I de reciclare a receptorilor.
- Endocitoza EGF, o molecula proteica mica ce stimuleaza
proliferarea celulelor epidermice.
Receptorii pentru EGF sunt reciclati prin calea Ill. Recep-
torii pentru EGF se acumuleaza Tn depresiunile membranare dupa
cuplarea cu EGF. Majoritatea receptorilor nu sunt reciclati la su-
prafata celulara dupa fuziunea veziculelor de endocitoza. Aceti
receptori sunt degradati Tn lizozomi, Tmpreuna cu EGF.
168
5.1.4.2. EXOCITOZA
Termenul de exocitoza descrie mecanismul prin care celu-
lele eucariote elibereaza, 7n spatiul extracelular, moleculele sinte-
tizate la nivelul structurilor celulare 9i ambalate Tn vezicule delimi-
tate de membrane proprii sau Tn granule.
Substantele eliberate prin acest mecanism includ neurotrans-
mitatori, enzime, anticorpi, micele fosfolipidice (celulele de tip II din
epiteliul pulmonar), heparina, peptide reglatoare etc. Acestea sunt
7mpachetate 7n vezicule cu diametrul cuprins Tr:itre 50 nm, 7n cazul
veziculelor sinaptice, 9i 1µm, Tn cazul eozinofilelor 9i granulelor cu
mucus din celulele epiteliale.
fn multe tipuri celulare (de la microorganisme pana la hepa-
tocite), exocitoza este de tip constitutiv, adica nu depinde de anu-
mite semnale specifice. fn alte tipuri celulare (celulele specializate
7n sinteza 9i secretie care edifica glandele endocrine compacte,
celulele care alcatuiesc sistemul neuroendocrin difuz etc.), exo-
citoza este de tip reg/at, adica apare ca raspuns la anumite mole-
cule-semnal care activeaza receptori specifici la nivel celular.
Fuziunea membranei veziculelor cu plasmalema 9i elibera-
rea continutului vezicular reprezinta procesul celular fundamental
de care depinde eliberarea continutului.
fn urma informatiei aduse de anumite molecule-semnal,
'
veziculele de secretie fuzioneaza cu plasmalema Tn unele zone
ale acesteia 7n care se gasesc porii de fuziune sau porozomi.
Utilizarea microscopului de forta atomica, cu rezolutie pana
la nivel nanometric, Tn cercetarile efectuate pe celulele acinilor
pancreatici, a evidentiat prezenta acestor structuri asemanatoare
porilor la nivelul plasmalemei polului apical, cu un diametru de 100
- 180 nm 9i profunzime de 15 - 25 nm. Nu au fost identificate
structuri similare la nivelul polului bazolateral al acelora9i celule.
Printre evenimentele moleculare care au loc Tn momentul
exocitozei, Tn special a celei reglate, se numara: activarea fosfoli-
pazei C, a protein-kinazei C, eliberarea de Ca2+ etc. De aseme-
nea, un rol important Tl joaca unele proteine de legarea GTP.
lata mai jos cateva exemple de exocitoza:
- evacuarea produ9ilor de secretie celulara (a se vedea 9i
capitolul Secrefia celulara);
169
- evacuarea neurotransmitatorilori
n spatiul sinaptic;
- evacuarea granulelor de melanina din melanocitele din
piele (care sunt apoi fagocitate de catre cheratinocite, rezultand
astfel pigmentarea pielii);
- evacuarea resturilor nedigerabile din veziculele lizozo-
male, proces numit defecare celulara;
- evacuarea enzimelor lizozomalei n conditii fiziologice (de
pilda, din osteoclaste) sau patologice -i n procesul numit regur-
gitare ce/ulara sau rn starea de §OC.
5.1.4.3. TRANSCITOZA
Tn 1979, Nicolae Simionescu a publicat articolul n care noul
l?i inspiratul termen ,,transcitoza" a fost introdus, pentru prima data,
i
n literatura l?tiintifica. Conceptul sau asupra transcitozei sustinea
ca,in celulele endoteliale, transportul rapid l?i eficient al macro-
moleculelor din plasmai n lichidul interstitial ce este facut via vezi-
cule, canale l?i fenestratii este realizat prin transportul ,,substantei
dizolvate prin endoteliu prin intermediul unei scurtaturi ntre endo-
citoza l?i exocitoza, numita transcitoza. Moleculele mari pot fi
transportatei n endoteliul microvascular prin multiple cai bidirec-
tionale. Gaile de conducere pot fi reprezentate de canale mari l?i
fenestratii (transcitoza convectiva). Majoritatea macromoleculelor
sunt transportate probabil prin intermediul unor vezicule distincte
(transcitoza disipata)". Cele doua tipuri de transcitoza ar putea fi
interschimbabile, lucru ce confera proceselor de transport o mare
adaptabilitatei n functie de conditiile locale ale schimburilor plasma
- lichid interstitial.
'
Concept ul a fost bazat pe o colaborare cu Maya Simio-
nescu 9i George E. Palade, cu privire la transportul transendotelial
al macromoleculelor. Tn anii urmatori, Nicolae Simionescu a extins
acest concept la ,,transcitoza mediata de receptori" a unor ma-
cromoleculei n celulele endoteliale.
Noul termen l?i concept au fost imediat adoptate de comuni-
tatea l?tiintifica l?i au devenit atat de larg utilizatein cazul a diferite
sisteme celulare,i ncat astazi foarte putini oamenii i cunosc l?i i
mai citeaza originea; acest lucru este obi 9nuit pentru conceptele
clasice (cum ar fi endocitoza, exocitoza etc.).
170
T RA NS C ITOZA
nes pe c if ica s pe c ifica
mediata de
faza fluida adsorbtie
receptori
Figura 44: Diagrama mecanismelor §i cai/or de transcitoza macromoleculara

rn celula endoteliala. Moleculele de transport sunt reprezentate de vezicule
ale plasmalemei (pv) care se pot deplasa, strabatand endoteliul sau se pot uni
unele cu celelalte, formand canale transendoteliale (c). fn urma legarii ligandului
la nivelul depresiunilor membranei superioare (up), acestea se transforma
rn vezicule de transport. j -jonc(iune intercelulara
Cercetari ulterioare Yn lnstitutul ,,Nicolae Simionescu" 9i Yn

alte laboratoare au dovedit existenta extinsa a transcitozei. Alaturi
de colaboratorii sai, Nicolae Simionescu a demonstrat existenta,' Yn
celulele endoteliale, a transcitozei LDL, P-VLDL, tiroxinei, precum
9i a transcitozei mediate de receptori a albuminei. A fast de-
monstrat faptul ca influxul LDL-ului Yn celulele endoteliale urmeaza
o cale duala: endocitoza mediata de receptori (care asigura nece-
sarul de colestrol pentru celula Yn sine) 9i transcitoza. Transcitoza
LDL-ului asigura necesarul de colesterol celorlalte celule din pe-
retii vaselor i tesuturile Ynconjuratoare, i poate, Yn conditii fiziolo-
gice, monitoriza acumularea excesiva a LDL-ului plasmatic. Trans-
citoza LDL-ului Yn endoteliul vascular Ynseamna influxul nesaturabil
i cu slaba afinitate, realizat prin intermediul invaginarilor netape-
tate i a veziculelor plasmalemice. P-VLDL-ul plasmatic este trans-
portat la nivelul endoteliului aortic atat prin endocitoza, cat i prin
transcitoza. Hiperlipidemia determina creterea ratei transportului,
Yn special, a transcitozei, ducand la acumularea de lipoproteine
i/sau a componentelor lor Yn subendoteliu. Pentru o anumita mo-
lecula, rata endocitoza/transcitoza poate varia Yn functie de starea
fiziologica a patului vascular implicat. Transcitoza mediata de re-
ceptori a albuminei implica, Yn principal, invaginari netapetate 9i
171
vezicule plasmalemice ce sunt Tnvelite cu proteine de legare ale

albuminei (ABP). Se pare ca transcitoza mediata de receptori im-
plica fie situsuri de legare cu afinitate ridicata (de exemplu, pentru
albumina), fie situsuri de legare cu afinitate scazuta (de exemplu
pentru LDL). Semnificatia generala a transcitozei este universal
recunoscuta Tn numeroasele lucrari tiintifice ce au aparut pe
aceasta tema.
Mecanismele transcitotice - fie specifice, fie nespecifice -
sunt acum acceptate ca procese celulare primare, prezente Tn
marea majoritate a epiteliilor polarizate, cu rol de a asigura func-
tiile fiziologice principale cum ar fi schimburile, nutritia, hormonii i
alte molecule de transport Tntre compartimente separate.
5.2.1. DATE GENERALE PRIVIND SEMNALI·

ZAREA CELULARA
Poetul englez John Donne Ti exprima credinta Tn existenta

i importanta interdependentei umane prin cuvintele ,,Nici un om
nu este O insula".i n mod similar, pentru a supravietui i celulele
trebuie sa comunice cu ,,vecinii" lor, sa monitorizeze conditiile din
mediul extracelular i sa raspunda corespunzator diferitilor stimuli
ce ajung la suprafata plasmalemei. Ele Tndeplinesc aceste interac-
\iuni prin fenomenul de semnalizare celulara.
Comunicarea prin semnale intercelulare implica ase etape:
1. sinteza moleculelor-semnal;
2. eliberarea moleculelor-semnal de catre celula care sem-
nalizeaza;
3. transportul semnalului catre celulele-tinta;
4. recunoaterea stimulului de o structura specifica, numita
receptor,
5. transmiterea semnalului catre moleculele efectoare spe-
cifice de la nivelul fetei interne a plasmalemei sau din
172
citoplasma. Functie de tipul celular i de stimul, ras-

punsul implica fie o schimbarei n expresia genica,i n
activitatea unor enzime, fie reconfigurarea citoschele-
tului, schimbarea permeabilitatii ionice, activarea sinte-
zei AON sau chiar moartea celulara (apoptoza);
6. i
ncetarea raspunsului celular, ca rezultat al distrugerii
sau inactivarii moleculelor-semnal, combinata cu o sca-
dere a nivelului stimulului extracelular.
Receptorii sunt macromolecule glicoproteice care pot lega,
reversibil i prin complementaritate, o molecula-semnal (ligand).
Acetia pot fi situati la suprafata celulei saui n interiorul ei.
Liganzii sunt de o imensa diversitate. Celulele comunica,
schimband sute de tipuri de semnale, incluzand proteine, peptide
mici, aminoacizi, nucleotide, steroizi, retinoizi, derivati de acizi grai
i chiar gaze solubile ca NO i CO. De obicei, semnalele sunt emi-
se de o celula prin exocitoza.
Studiul proceselor de semnalizare celulara este deosebit de
important, deoarece comunicarea intercelulara afecteaza toate as-
pectele atat structurale, cat i functionale. Fiind implicatei n reglarea
tuturor proceselor celulare, cunoaterea mecanismelor de sem-
nalizare celulara este esentiala pentru ai ntelege, de exemplu, cum
celulele pot pierde controlul proliferarii i se transforma malign.
5.2.2. MODALITATI DE SEMNALIZARE (COMUNI-

CARE) INTERCELULARA $1 TIPURI DE MOLECULE·
SEMNAL ENDOGENE. TIPURI DE REACTII ,DE RASPUft'S
Se cunosc trei modalitati de comunicare celula - celula:

1. transmiterea indirecta a unui semnal prin intermediul sub-
stantelor
'
chimice secretate - unele celule secreta substante
'
chimice care transmit la distanta un mesaj celular;
2. transmiterea directa a unui semnal prin intermediul mole-
cule/or legate de plasmalema - celulele prezinta molecule
legate la membrana plasmatica ce influenteaza alte celule
cu care vini
n contact fizic direct;
173
Biologie celulara l?i rnoleculara
3. transmiterea directa a unui semnal prin joncfiunile ,,gap" -

contactul direct a doua celule prin interrnediul jonctiunilor
perrneabile de tip ,,gap" care leaga citoplasrnele celulelor
1nvecinate.
Sernnalizarea poate avea loc 1ntre celule situate la distanta
sau 1ntre celule aflate 1n contact direct (fig. 45).
Tntre doua celule situate la distanta, sernnalizarea poate fi
de tip paracrin, endocrin sau neurocrin. Ca varianta, sernnalele
ernise l?i captate de aceeal?i celula realizeaza rnodul de sernnali-
zare autocrin.
2. €71@
3.
Figura 45: Modalitati de semna!izare intercelulara: 1 - transmiterea indirecta

a unui semnal prin intermediul substanfelor chimice secretate; 2 - transmiterea
directa a unui semnal prin intermediul molecule/or legate de plasmalema;
3 - transmiterea directa a unui semna/ prin joncfiunile ,,gap"
Figura 46: Modalitafi de semna!izare intercelulara: a - semnalizare paracrina;

b - semna!izare endocrina; c - semnalizare neurocrina
174
Doua celule vecine se pot aflai n contact direct, permanent

(comunica prin intermediul jonctiunilor ,,gap") sau temporar (celu-
lele sistemului imun).
Modul de semnal izare paracrin se dezvoltai ntre celule
situatei
n imediata apropiere a celulei emitatoare de semnal. Sem-
nalizarea se face prin mediatori locali care au o durata de viata
scurta, fiind preluati de celulele receptoare, de matricea extrace-
lulara sau degradati enzimatici
n mediul extracelular.
Modul de semnalizare neurocrin (sinaptic) este descris la
nivelul neuronilor care comunica 1ntre ei sau cu celulele efectoare
prin intermediul sinapselor (1n cazul de fata, chimice - deoarece
exista i sinapse electrice), unde se produce descarcarea unor
mediatori sintetizati de neuroni i transportati pe calea axonala
pana la nivelul sinapsei. Moleculele-semnal implicate sunt neuro-
transmitatorii.
'
Modul de semnalizare endocrin este un sistem de semna-
lizare care determina toate celulele unui organism sa se comporte
ca un tot.
Moleculele-semnal emise de celulele cu activitate endo-
crina (grupate 1n glande endocrine sau relativ dispersei n cadrul
sistemului APUD - amine precursor uptake and decarboxylation
sau SNED) sunt numite hormoni; acetia sunt eliberati 1n fluxul
sangvin care Ti transporta catre tesuturile-tinta, prin urmare, catre
celulele dotate cu receptori specifici, unde vor actiona specific,
determinand un raspuns celular.
Modul de semnalizare autocrin reprezinta o modalitate de
autosemnalizare, 1n care semnalele emise de o celula sunt cap-
tate de aceeai celula. Tn timpul dezvoltarii embrionare, cand o ce-
lula este orientata pe o anumita cale de diferentiere, ea poate eli-
bera semnale autocrine care accentueaza aceasta direct,ie de dez-
voltare. Exemplu: 1n formarea rapida a placentei, proliferarea cito-
trofoblastelor se considera a fi rezultatul unei stimulari autocrine;
aceste celule secreta PDGF (platelet derived growth factor - factor
de cretere derivat din trombocite) i exprima receptori pentru
PDGF, a carer activare are efect mitogenic.
Un tip de molecula-semnali n semnalizarea autocrina este
reprezentata de eicosanoizii. Acetia sunt derivati de acizi grai
sintetizati 1n plasmalema, eliberatiin mediul extracelular, unde i i
exercita actiunile i apoi sunt rapid degradati enzimatic. Eicosa-
175
noizii deriva din acidul arahidonic (desprins de fosfolipaza A2 din

membrana) i au o mare varietate de actiuni biologice, Tntre care:
contractia fibrelor musculare netede, agregarea plachetara partici-
pand la mecanismele durerii i inflamatiei locale.
lntricarea dintre sistemele de reglare paracrin i autocrin
este evidenta.
Reactiile de raspuns celular la prezenta moleculelor-semnal

pot fi clasificate;
• in funcfie de timpul de riispuns:
O Reactii de ordinul milisecundelor (Tn cazul neurotrans-
mitatorilor);
@ Reactii de ordinul secundelor (daca receptorii sunt situati
la nivelul plasmalemei);
e Reactii de ordinul orelor/zilelor, daca receptorii sunt si-
tuati intracitoplasmatic sau intranuclear.
• in funcfie de modalitatea de riispuns:
O Modificare a metabolismului celulei-tinta (de exemplu:
creterea glicogenolizei, Tn momentul Tn care celula hepatica pri-
mete un semnal de tipul moleculei de adrenalina);
@ 0 modificare de potential la nivelul membranei celulare,
prin activarea sau inactivarea unor canale ionice (de exemplu:
generarea potentialului de actiune);
e O modificare a expresiei genice: Tn special, procese de
transcriptie - la nivelul nucleului (acest tip de raspuns se produce
mai lent i dureaza mai mult).
Tipuri de molecule-semnal
A Semnale care traverseaza plasmalema:
- compui hidrofobi, liposolubiii (hormoni steroidieni,
tiroidieni, retinoizi, vitamina D);
- molecule hidrofile suficient de mici sau non-polare
(CO, NO).
B. Semnale care nu traverseaza plasmalema - necesita
lantul receptor - traductor - amplificator - compui hidrofilici, in-
solubili Tn medii lipidice.
176
5.2.3. ftECEPTORII: DEFINITIE, CJ_ASIFICARE
Receptorii sunt macromolecule glicoproteice care pot lega,

reversibil 9i prin complementaritate, o molecula-semnal (ligand).
Clasificarea receptorilor
A. in functie c:1, localizare:
1. Receptori situati la nivelul membranelor biologice:
- i
n plasmalema: pentru hormoni polipeptidici;
- i
n membrana organitelor: receptorii pentru IP3 din
membrana reticulului endoplasmic.
2. Receptori intracelulari:
-i
n citoplasma:
o pentru unii hormoni tiroidieni;
o pentru hormonii steroizi;
o pentru vitamina D;
o pentru retinoizi.
-i
n nucleu:
o pentru unii hormoni tiroidieni;
o pentru hormoni steroizi.
n cazul hormonilor tiroidieni, preluarea T4 de celula-tinta

i
este urmata de conversiai .
n forma activa T3 ce interactioneaza cu
R din citoplasma sau nucleu. R pentru T3 se gasesci n numeroase
celule tip neuronal 9i non-neuronali n timpul dezvoltarii, T3 fiind
important pentru dezvoltarea creierului.
B. fq 1,-..nctie de nat,ura lig«lln.dului:
1. Receptori pentru liganzi endogeni:
pentru neurotransmitatori;
pentru mediatori chimici;
pentru molecule vehiculate pe cale umorala:
• pentru hormoni;
177
• pentru antigene endogene (receptori de pe su-

prafata limfocitului T);
• pentru anticorpi;
• pentru complement;
• pentru glicoproteine i lipoproteine cu densitate
mica.
2. Receptori pentru liganzi exogeni:

pentru componente virale;
pentru toxine microbiene;
pentru antigene exogene.
C. in functie•
de activitatea in cadrul ciii de semnalizare,
receptorii pot fi mpaftiti n:
receptori cu activitate catalitica:
• receptori cu activitate guanilat-ciclazica;
• receptori tirozin-kinazici;
• receptori tirozin-kinazici.
receptori fara activitate catalitica:
• receptori cuplati la canale ionice;
• receptori cuplati cu proteinele G;
• receptori pentru citokine.
Termenul de transducfie a semnalului indica faptul ca sti-
mulul primit de receptorul celular este diferit de semnalul transmis
n interiorul celulei.
i
Transductia semnalului este un proces complexi n care
informatia este purtata de caile de semnalizare reprezentate de o
serie de proteine distincte.
Receptori cu activitate catalitica

Receptorii cu activitate guanilat-ciclazica (RGCJ prezinta
un domeniu extracelular cu activitate receptoare i un domeniu in-
tracelular cu activitate guanilat-ciclazica.
Legarea ligandului la acest tip de receptor activeaza dome-
niul citoplasmatic guanilat ciclazic (mecanism valabil pentru pepti-
dul natriuretic atrial). RGC utilizeaza GMPc ca mediator intrace-
lular, aa cum receptorii cuplati cu proteinele G utilizeaza AMPc,
deosebirea fiind absenta, Tn primul caz, a intermedierii transmiterii
178
semnalului prin proteinele G. GMPc rezultat din hidroliza ATP, va

activa o serie de fosforilaze care pot fosforila proteine intrace-
lulare, inducand realizarea unui raspuns celular.
Citozol GMP ciclic
Figura 47: Model functional al RGC
Receptorii tirozin-kinazici (RTK) sunt receptori cu activi-

tate catalitica intrinseca, realizand, prin activare, degradarea ATP
§,i transferul unei grupari fosfat pe reziduuri Ser/Thr ale proteinelor-
{inta intracelulare. RTK sunt de doua tipuri, I §,i II, ace§,tia dimeri-
zand 1n cadrul procesului de cuplare a ligandului. Semnalul intra-
celular este transmis de receptorul de tip I.
Receptorii pentru insulina §,i numero§,i factori de cre§,tere
(TGFbeta) sunt receptori de tip tirozin-kinazic care se cupleaza cu
ligandul; legarea enzima - ligand duce la dimerizarea receptorilor,
urmata de activarea fie a serin/treonin-kinazelor, fie a tirozin-kina-
zelor. Aceste tipuri de receptori fosforileaza reziduuri din domeniul
citoplasmatic al receptorului Tnsu§,i. Autofosforilarea RTK creeaza
situsuri de legare pentru unele enzime citozolice, aducandu-le Tn
vecinatatea substraturilor de la nivelul plasmalemei.
179
Biologie celulara l}i moleculara
Receptor serin/treonin-kinazi c (TGFf1)
HO-
r\ ,
ATP ADP
Figura 48: Model functional al receptorului serinltreonin-kinazic
RTK fosforileaza numeroase proteine substrat, afectandu-le

activitatea. Multe dintre aceste proteine-substrat sunt, de asemenea,
tirozin-kinaze, formand astfel o cascada de fosforilari care au laci n
citoplasma. Unele tirozin-kinaze citoplasmice actioneaza direct asu-
pra transcriptiei genice prin transportul n nucleu 9i transferul gruparii
fosfat unor factori de transcriptie pe care astfel Ti activeaza.
Receptor tirozin-kinazic (insulina, EGF}
proteina substrat
\
HO-Q-
proteina de cuplare a fosfotirozinei
t
proteina fosforilata
Figura 49: Model functional al receptorului tirozin-kinazic
180
Receptorii tirozin-fosfatazici (RTP), dupa cuplarea ligan-

dului, activeaza la nivelul domeniului lor citoplasmatic, protein-fos-
fataza care are rolul de a defosforila unele proteine intracitoplas-
matice.
Receptor tirozin-fosfatazic (proteina leucocitara CD45)
proteina substrat
Figura 50: Model functional al receptorului tirozin-fosfatazic
Receptori fara activitate catalitica

Receptori asociafi la canale ionice (sau care sunt, ei
1n§i§i, canale ionice)
Prin cuplarea la proteina-canal, ligandul 1i modifica acesteia
conformatia, modificand, pentru scurt timp, permeabilitatea la ioni
a canalului respectiv. Este cazul neuromediatorilor care, odata eli-
berati 1n spatiul sinaptic de catre celula presinaptica, se leaga de
receptorii ataati canalelor ionice din membrana celulei postsinap-
tice. Aceasta legare duce la deschiderea canalelor care are drept
consecinta modiflcarea polaritatii i a excitabilitatii celulei postsi-
naptice (raspuns celular). Receptorii legati la canale ionice apartin
unei familii de proteine transmembranare multi-pass. De exemplu:
receptorii pentru acetilcolina la nivelul jonctiunii neuromusculare.
181
Receptori care activeaza calea JAK-STAT

Ace9ti receptori sunt proteine transmembranare uni-pass,
nu prezinta activitate enzimatica intrinseca, dar se asociaza direct
cu protein-kinaze citoplasmatice.
Exemple de liganzi: interferoni, interleukine (11-2, 3, 4, 5, 6, 7,
11), factor de cre9tere (GH), prolactina (PRL), eritropoietina (EPO),
trombopoietina, factor granulocitar - macrofagic stimulator de colonii.
Legarea ligandului determina dimerizarea receptorilor mo-
nomerici. Receptorul astfel dimerizat activeaza una sau mai multe
tirozin-kinaze citoplasmatice. Pentru exemplele de liganzi mentio-
nate mai sus, receptorul dimerizat interactioneaza cu JAK (Janus-
kinaza) care fosforileaza reziduuri tirozinice de la nivelul uneia sau
mai multor proteine STAT (Signal Transducer and Activator of
Transcription - un factor de transductie a semnalului 9i de activare
a transcriptiei genice). Aceste proteine STAT formeaza, la randul
lor, dimeri care patrund i'n nucleu 9i se cupleaza la nivelul promo-
torilor unor gene pe secvente de AON specifice, ceea ce determi-
na initierea proceselor de transcriptie. Gaile Jak-STAT sunt mult
mai scurte decat caile RTK, astfel i'ncat raspunsul celular la liganzi
va fi mult mai rapid.
Receptorii cuplafi cu proteinele G fac parte dintr-o mare

familie cu aproape o suta de membri, prototipul fiind o proteina
transmembranara multi-pass cu 9apte pasaje transmembranare.
Din familie, fac parte rodopsina, proteina sensibila la radiatiile din
spectrul vizibil, gasita i'n celulele retiniene de la vertebrate 9i, de
asemenea, receptorii olfactiei, tot la vertebrate. De-a lungul evolutiei
speciilor, ace9ti receptori 9i-au pastrat nu numai secventa de ami-
noacizi, ci 9i relatia cu proteinele G. De9i aceste tipuri de receptori
leaga specii diferite de hormoni hidrosolubili 9i pot media diferite
raspunsuri celulare, ei poseda o serie de proprietati comune:
secventa de aminoacizi care formeaza receptorul con-
tine 9apte domenii transmembranare formate fiecare din
22 - 24 aminoacizi hidrofobi;
bucla din receptor, cuprinsa i'ntre zonele transmembra-
nare 5 9i 6, precum 9i segmentul C-terminal, sunt esen-
tiale pentru cuplarea cu proteinele G.
182
Proteinele G pot actiona,i n calitate de comutatoare, deoa-

rece acestea existai n doua stari reversibile: o stare activai
n care
este legata o molecula de GTP 9i una inactivai n care este legata o
molecula de GDP. Diferenta 'dintre aceste doua conformatii este '
faptul ca proteina G cu GTP poate lega proteine specifice pe care
cea cu GDP nu le poate lega.
Trecerea din starea inactivai n starea activa 9 i invers, a
proteinelor G, este ajutata de o serie de proteine accesorii ce se
pot lega la acestea 9i le regleaza activitatea:
1. Proteinele de activare a GTP-azelor (GAPs):
Majoritatea proteinelor G au capacitatea de a hidroliza
GTP legat, dar aceasta capacitate este mult accelerata
de interactiunea cu o GAPs specifica care stimuleaza
hidroliza GTP legat, ceea ce va conduce la inactivarea
proteinei G. Prin urmare, GAPs scurteaza raspunsul
mediat de proteina G.
2. GEFs - Factorii de schimb guanin-nucleotidici:
Daca se leaga de o proteina G inactiva, stimuleaza di-
socierea GDP legat, urmata de legarea GTP 9i activa-
rea proteinei G.
3. lnhibitorii de disociere guanin-nuc/eotidici (GD/s) inhiba
eliberarea GDP legat la o proteina G 9i mentine protei-
na G inactiva.
Proteinele G sunt structuri heterotrimerice care sunt ment,i-

nutei
n plasmalema prin legaturi covalente de lanturile lipidice. Au
fast descoperite 9i caracterizate de Martin Rodbell 9i colegii sai, la
nceputul anilor 70. Au fast numite proteine G, deoarece leaga
i
guanin-nucleotide (GDP sau GTP). Sunt formate din trei subunitati
polipeptidice: a, f3, y. Exista 9i proteine G formate dintr-o singura
subunitate. Subunitatile f3 9i y sunt comune tuturor proteinelor G,
iar cele a sunt specifice: as, ai (ai1, ai2, ai3 etc.), aq (activeaza
fosfolipaza C) etc.
Subunitatea a are doua domenii: unul cu functie GTP-azica,
ce are patru situsuri de legare specifice pentru receptor, guanina,
efectorul membranar 9i subunitatea f3y; altul a carui functie nu este
nca pe deplin elucidata, dar se presupune ca ar contribui 9i la
i
activitatea GTP-azica a subunitatii, acest domeniu avand o struc-
tura helicoidala.
183
, Biologie celulara §ii moleculara
Subunitatea {3y
La mamifere, exista cinci tipuri de subunitati 13 care difera
1ntre ele 1n proportie de 53 - 90% §ii §lase tipuri de subunitati y ce
prezinta diferente structurale mult mai mari. Rolul subunitatii l3y nu
este doar unul pasiv, de a pozitiona complexul proteinei G. Re-
cent, s-a evidentiat activitatea enzimatica atat a subunitatii 13, cat
§ii a celei y. La fel ca subunitatea a, subunitatea l3y interactioneaza
direct cu mai multe tipuri de efectori (enzime, canale ionice etc.).
Cuplarea subunita\ii l3y cu ace§lti efectori potenteaza actiunea sub-
unitatii a asupra lor sau determina, pe cont propriu, activarea sau
inhibitia efectorilor.
' n cazul proteinelor Gi, subunitatile 13, y pot inhiba sinteza
de AMPc 1n doua moduri: legare la adenilatciclaza direct; legare la
alte subunitati as libere din aceea§li celula, 1mpiedicand activarea
adenilatciclazei de catre acestea.
Functia proteinei G este releu de transmisie a semnalului
de la receptorul activat la un efector din membrana plasmatica.
Proprietatile receptorilor biologici

1. Specificitatea
a. De legare - 0 molecula informationala, avand o anu-
mita structura chimica §ii configuratie spatiala, interactioneaza cu
un anumit tip de receptor. Ligandul §ii receptorul sau specific au
configuratH spatiale complementare, cuplarea lor realizandu-se
printr-un mecanism de tip lacat - cheie.
b. De raspuns - Cuplarea unui ligand cu receptorul sau
specific poate determina raspunsuri diferite 1n functie de specia-
lizarea celulei ce exprima receptorul.
2. Saturabilitatea
La nivelul unei celule, receptorii specifici pentru un anumit
ligand se afla 1ntr-un numar constant, determinat genetic. Un re-
ceptor poate cupla, succesiv, un numar limitat de molecule-sem-
nal, dupa care este inactivat, internalizat §ii metabolizat.
3. Pluralitatea
Pentru aceea§li molecula informationala, coexista fn orga-
nism mai multe tipuri §ii subtipuri de receptori, raspunsul ceiular
depinzand de tipul sau subtipul de receptor activat §ii de teritoriul
1n care se gase§lte.
184
Functiiie plasmalemei
Exemple:
pentru acetilcolina, exista receptori de tip muscarinic i
de tip nicotinic;
pentru adrenalina, exista receptori de tip a cu subtipurile
a1 i a2 i receptori de tip cu subtipurile 1, 2 i 3.
5.2.4. SEMNALIZAREA PRIN HORMONI POLI-

PEPTIDICI
5.2.4.1. CALEA ADENILATCICLAZEI

Aceasta cale are doua etape:
Etapa intramembranara
1. Activarea proteinei G de catre receptori
Legarea unui ligand la un receptor cuplat cu proteina G de-
termina schimbari Tn conformatia receptorilor i creterea afinitatii
acestuia pentru proteina G aferenta.
Urmeaza cuplarea complexului ligand - receptor la proteina
G, la nivelul fetei interne a plasmalemei, formandu-se complexul
proteinei G - receptor. lnteractiunea cu receptorul activat induce o
schimbare Tn conformatia subunitatii a, ceea ce va conduce la
eliberarea GDP i legarea GTP. n tare activa, un receptor poate
activa, la randul sau, o succesiune de proteine G, realizand prima
amplificare Tn cazul acestei cai de semnalizare.
2. Transmiterea semnalu/ui de la proteina G la efector

Schimbarea GDP cu GTP modifica conformatia subunitatii
Ga, determinand disocierea acesteia de receptori i de celelalte
doua subunitati ce raman Tmpreuna - complexul Gy. Fiecare
subunitate Ga disociata (cu GTP ataat) este libera sa activeze o
molecula efector - cum ar fi adenilatciclaza - care va aduce Tn
actiune sistemul mesagerului secund. n acest caz, activarea ade-
nilatciclazei duce la formarea moleculelor de AMPc din ATP. Com-
plexul subunitatilor Gy poate lega proprii sai efectori, mai des un
185
canal ionic, oferind o cale aditionala pentru transmiterea semna-

lelori
n celula-tinta. Toti n acest timp, se desface i complexul
ligand - receptor, acesta din urma revenind la configuratia initiala.
Subunitatea as, legata de adenilatciclaza, catalizeaza hi-
droliza GTP-uluii n GDP, determinand inactivarea sa i revenirea
n pozitia initiala (asocierea cu subunitatea
i y).
d1 mon a
lmQ-1
Figura 51: Ca/ea adenilatciclazei - etapa intramembranara
186
b. Etapa intracitoplasmatica
AMPc este una dintre substantele ce actioneaza ca mesa-
ger secund Tn celulele eucariote, influentand o mare varietate de
activitati celulare. Efectele acestuia sunt mediate de proteinkinaza
A (PKA).
AMPc este sintetizat de o proteina membranara integrala -
adenilatciclaza (AC), al carui domeniu catalitic se afla pe fa1a
interna a plasmalemei. Aceasta are doua parti, fiecare continand
ase helixuri transmembranare plus o parte pe fata interioara a
plasmalemei. Deoarece determina, prin sinteza de AMPc, aparitia
raspunsului celular, este considerata un efectcir.
PKA este formata dintr-o subunitate catalitica i o subuni-
•••
tate reglatoare, capabile sa lege AMPc .
AMPc •
c.
subunitati svbunitati subunita\i reglatorii suburntati
reglatorii catalitice' inactiva cuplate cu AMPc catalitice activate
Figura 52: Mecanismul activarii proteinkinazei A
Legarea AMPc la subunitatile reglatorii ale PKA determina

activarea subunitat,ii catalitice Tnsot'ite sau nu de disocierea com-
plexului. Subunitatea catalitica activata va fosforila o serie de pro-
teine specifice conducand, Tn final, la aparitia raspunsului celular.
Substratul-tinta al PKA Tn hepatocit include doua enzime cu
rol esential Tn metabolismul glucozei (glicogen sintetaza) i fosfo-
rilat-kinaza (kinaza de fosforilare). Fosforilarea glicogen-sintetazei
inhiba activitatea sa catalitica 9i previne conversia glucozei Tn gli-
cogen (sinteza de glicogen).
Fosforilarea fosforilaz-kinazei activeaza enzima care, la
randul sau, va fosforila enzima glicogen-fosforilaza, ceea ce va
duce la convertirea glicogenului la glucoza ce va difuza Tn sange.
Conversia glicogenului este controlata de o serie de hormoni {de
187
exemplu: glucagon - secretat de pancreas i epinefrina secretata

de glandele suprarenale).
PKA ac ·
-j ATP
1"---) ADP
glicogen-fosforilaza
activa
GUCOUl:tt
O glucoza-1-fosfat
Figura 53: Efectul activarii PKA rn hepatocit
Fiecare dintre aceste molecule-semnal se leaga de recep-

torul specific, initiindu-se o serie de reactii ce var conduce, 1n final,
fie la activarea unei fosforilaze, fie la inhibarea glicogen-sintetazei.
Prin urmare, doi stimuli diferiti (glucagonul i epinefrina), recu-
noscuti de receptori diferiti, pot induce acelai raspuns, 1n aceeai
celula-tinta, datorita prezentei AMPc.
Legarea unei singure molecule hormonale la suprafata ce-
lulara poate activa un numar de molecule adenilatciclaza, fiecare
din ele putand forma un numar mare de mesageri AMPc 1ntr-o pe-
rioada scurta de timp. Aadar, produii mesagerului secund re-
prezinta un mecanism ce amplifica mult semnalul generat de me-
sajul original. Fiecare molecula de AMPc activeaza o singura PKA
ce fosforileaza un numar mare de fosforilaz-kinaze care, la randul
lor, fosforileaza un numar i mai mare de molecule de fosfirilaze
care var cataliza formarea unui numar de fosfati ai glucozei.
Aadar, ceea ce 1ncepe cu un stimul abia perceptibil la
nivelul suprafetei celulare este rapid transformat 1ntr-o mobilizare
majora a glucozei 1n celula. Cele mai bine studiate efecte ale
AMPc au lac 1n citoplasma, nucleul i genele participand i ele la
acest raspuns.
188
O fractiune a PKA activata se transloca Tn nucleu, unde fos-

forileaza proteine nucleare-cheie, Tn special, un factor de trans-
criptie numit GREB (proteins de Jegare la elementul de raspuns la
AMPc). Forma fosforilata a GREB se leaga ca un dimer, la un si-
tus pe AON, ce contine o anumita secventa de nucleotide, cunos-
cuta sub numele de elementul de raspuns la AMPc (CRE). CREs
sunt situati Tn regiunile reglatorii ale genelor ce Tndeplinesc un rol
Tn raspunsul la AMPc.
De exemplu, Tn hepatocite, o parte dintre enzimele impli-
cate Tn gluconogeneza sunt codificate de gene ce au Tn vecinatate
CREs. Prin urmare, epinefrina i glucogenul nu activeaza enzi-
mele catabolice implicate Tn conversia glicogenului, acestea pro-
movand sinteza enzimelor anabolice necesare sintezei glucozei
din mici precursori.
Finalizarea mecanismului de semnalizare

n acest moment, se cunoate ca legarea unui ligand la un
i
receptor cuplat cu proteina G (GPCR) a generat activarea a doua
complexe proteice-semnal:
a. complexul ligand - GPCR ce actioneaza asupra pro-
teinelor G i
b. subunitatea libera Ga cu GTP legat ce actioneaza asu-
pra efectorilor.
lnactivarea acestor complexe se desfaoara astfel:
1. Pana de curand, se considera ca GPCRi nceteaza sa
trimita semnale Tn momentul Tn care ligandul activator nu mai era
prezent Tn mediu i legat la receptori. S-a constatat de curand ca
multi receptori PCR, inclusiv receptorii - adrenergici i rodop-
sina, pot fi inactivati, chiar daca ei Tnca interactioneaza cu ligandul.
Acest proces al inactivarii receptorilor se numete desen-
sibilizare i are loc Tn doi timpi: 1) domeniul citoplasmatic al GPCR
activat este fosforilat de o kinaza specifica, numita kinaza recepto-
rilor cuplafi cu proteina G (GRK). Fosforilarea GPCR pregatete
etapa a doua. 2) legarea unei proteine numite arestina ce inhiba
abilitatea receptorilor de a se lega de alte proteine G heterotrimerice.
Desensibilizarea este unul dintre mecanismele ce permite
unei celule sa raspunda la o schimbare din mediul sau extrace-
lular, decat sa continue sa ,,arda" la nesfarit Tn prezenta unui
mediu neschimbat.
189
Mutatiile care interfereaza cu fosforilarea receptorilor rodop-

sinei de catre GRK conduc la moartea celulelor fotoreceptoare din
retina i se considera a fi una dintre cauzele orbirii din cadrul
afectiunilor de retinita pigmentara.
Moleculele de arestina se pot lega Tn timp ce sunt legate de
GPCR fosforilati i de moleculele de clatrina de la nivelul depre-
siunilor Tnvelite Tn clatrina. lnteractiunea dintre arestina legata de
receptor i clatrina se crede ca initiaza internalizarea GPCR prin
endocitoza. Functie de circumstante, receptorii internalizati prin
endocitoza pot fi defosforilati i reciclati la plasmalema sau pot fi
distrui prin mecanismul endocitozei.
2. Semnalizarea prin intermediul subunitatilor Ga activate

poate fi Tncheiata printr-un mecanism diferit: GTP legat este hidro-
lizat la GDP, astfel, puterea i durata semnalului este determinata,
Tn parte, de rata hidrolizei GTP de catre subunitatea Ga. Subuni-
tatile Ga au o activitate slaba GTP-azica care le permite sa hidro-
lizeze lent GTP legat i sa se inactiveze singure. Terminarea ras-
punsului este accelerata de interactiunea cu o proteina asociata
GAP ce marete eficienta activitaW GTP-azice a subunitatii Ga.
Odata hidrolizat GTP, subunitatea Ga-GDP se poate reasocia cu
subunitatile Gf3y, pentru a reforma complexul trimeric Tn stare inactiva.
Toxina holerica (produsa de agentul patogen al holerei
Vibrio cholerae) Ti exercita efectul prin modificarea subunitatii Ga
i inhibarea activitatii sale GTP-azice Tn celulele epiteliului intes-
tinal. Ca urmare, moleculele de adenilatciclaza raman Tn stare ac-
tiva, sintetizeaza AMPc, ceea ce va determina secretarea, Tn cantitati'
mari, de fluide intestinale, Tn lumenul intestinal, i deshidratarea.
Un alt mesager secund, extrem de important i cu raza de
actiune (se pare) mai vasta decat AMPc este IP3 care controleaza
concentratia de Ca2+. La nivel intracelular, Ca2+ se afla Tn con-
centratii scazute, pentru a asigura buna functionare a proceselor
celulare (10-7M). Tn schimb, concentratia acestui ion atat extra-
celular, cat i Tn unele compartimente subcelulare (reticul endo-
plasmic sau Tn celulele musculare - forma sa specializata - reti-
culul sarcoplasmatic) este crescuta (10"3M). Astfel, exista un gra-
dient de concentratie Tntre mediile non-citoplasmatice i cito-
plasma, Tn ceea ce privete Ca2+. De aceea, orice ocazie, Tn care
Ca2+ patrunde Tn celula, reprezinta (Tn limite fiziologice) un mod
190
(foarte raspandit) de semnalizare. Prin patrunderea Ca2+ Tn celula

se declaneaza procese secundare care vor culmina cu raspunsul
celular: contractie, micare, proliferare, diferentiere. Ca2+ devine
periculos pentru viata celulei daca nivelul concentratiei sale de-
paete 1o-5M. De aceea, celula are trei cai de a-I scoate Tn me-
diul extracelular:
antiportul Na+-Ca2+ ce pompeaza Ca2+ spre exteriorul
celulei la schimb cu Na\
Ca2+ - ATP-azele care pompeaza Ca2+ spre reticulul
endoplasmatic;
daca nivelul Ca2+ devine periculos (>105M), intervine un alt
mecanism, mitocondrial, care pompeaza Ca2+ Tn mi-
tocondrii cu ajutorul energiei furnizate de lantul transporter
de electroni. De asemenea, Tn citoplasma sau Tn organite,
exista proteine captoare de Ca2+ care 11 sechestreaza.
5.2.4.2. CALEA FOSFOLIPAZEI C
Ca i calea adenilatciclazei, are doua etape:
a. etapa intramembranara:
- receptorii implicati apartin aceleiai superfamilii cu apte
domenii transmembranare, iar dupa cuplarea lor cu ligandul, acti-
veaza o proteina G heterotrimerica de tip Gq.
Activarea acestei proteine Gq declaneaza activarea unei
fosfolipaze specifice (fosfolipaza C-p). Fosfolipaza C-p actioneaza
asupra fosfolipidelor membranare care contin inozitol (PIP i PIP2 -
fosfatidil inozitol i difosfatidil-inozitol), degradandu-le. Din aceasta
degradare, rezulta IP3 (inozitoltrifosfat) i DAG (diacilglicerol).
191
, Biologie celulara i moleculara
Exteriorul celulei
canal de Ca
fosfolipaza C dependent de
,I ligand
Citozol
Figura 54: Ca/ea fosfolipazei C/3
b. Etapa intracitoplasmatica
Fiecare dintre aceste substante se comporta ca un inter-
mediar 1n eliberarea unui nou mesager secund, anume Ca2+.
IP3 va activa canalele de calciu dependente de ligand de
la nivelul RE. Canalele de Ca2+ din membranele RE au
o structura similara cu a canalelor de Ca2+ clasice (din
reticulul sarcoplasmatic din fibrele musculare. Eliberarea
Ca2+ este reglata printr-un mecanism de feedback po-
zitiv: dupa activarea canalelor de Ca2+ din RE, prin cu-
plarea IP3 la receptorii asociati acestor canale i elibe-
192
rarea Ca2+, acesta va activa, el nsui, alte canale, ma-

rind brusc concentratia Ca2+ intracitoplasmatic. Ca2+ ac-
centueaza eliberarea de noi cantitati de ion din RE
(feedback pozitiv). Dar, aa cum am mentionat, Ca2 + are
efecte toxicein celula, daca depaete concentratia de
1o-5M. Aadar, el va trebui nlaturat dupa ce-i exercita
efectele de mediator secund.i nlaturarea Ca2+ se poate
face prin:
- inactivarea IP3 prin defosforilare de catre fosfataze (le-am
ntalnit
i i la inactivarea proteinelor fosforilate de PKA); inactivarea
IP3 nu se face numai prin defosforilare, ci i printr-o fosforilare su-
plimentara i
n pozitia 3, rezultand IP4 (1,3,4,5-tetrafosfat). Acest IP4
are o actiune interesanta, el putand stimula un raspuns celular
prelungit (prin urmare, o eliberare lenta a Ca2+ din depozite), fie o
reumplere a depozitelor intracelulare din surse extracelulare. Enzi-
ma ce catalizeaza productia IP4 din IP3 este activata de creterea
Ca2 + intracitoplasmatic. Este o reglare prin feedback negativ: cre-
terea brusca a Ca2+i n celule determina, maiintai, reactia de feed-
back pozitiv, apoi, de feedback negativ, ultima avand ca rezultat
fie pomparea Ca2+ extracelular sau catre depozite, fie generarea
unui compus (IP4) care va controla eliberarea de durata a Ca2+ cu
prelungirea efectelor.
- pomparea rapida a Ca2+i n afara celulei (vezi mecanis-
mele mai sus).
DAG este, eli nsui, un mediator secund. El poate fi
clivat mai departe pana la acid arahidonic ce va fi utilizat
n sinteza eicosanoizilor, la randul lor, mediatori. Pe de
i
alta parte, DAG va activa o protein-kinaza: protein-ki-
naza C (PKG) denumita astfel, deoarece este Ca2+-de-
pendenta. Activarea PKG este reprezentata de depla-
sarea acesteia din citoplasma pana la nivelul fetei in-
terne a membranei unde va fi acolata.
Acesta este efectul combinat al creterii nivelului intra-
celular al Ca2+ sub influenta initiala a IP3, actiunii DAG i a sar-
cinilor negative ale fosfatidil-serinei de pe fata interna a mem-
branei celulare. Cu toate acestea, este de mentionat ca nivelul de
DAG produs initial prin clivarea PIP2 nu poate fi suficient, el fiind
rapid inactivat. Pentru a men\ine un nivel de semnalizare ridicat un
timp suficient, unor raspunsuri ca proliferarea sau diferentierea ce-
193
lulara, DAG trebuie produs i de o alta sursa, o fosfolipaza care

cliveaza fosfatidil-colina.
Odata activata, PKC va fosforila diferite proteine-tinta cum
ar fi, de exemplu, canalele ionice din celulele nervoase, provocand
depolarizarea (raspunsul).
O alta modalitate de raspuns este activarea transcriptiei
genice, care se poate realizai n doua moduri: prin activarea unei
cascade de protein-kinaze care vor fosforila i activa,i n final, o
proteina asociata AON care va determina initierea transcriptiei sau
prin fosforilarea unei proteine inhibitorii care va elibera o proteina
de activare genica. Aceasta din urma va activa transcriptia genica,
dupa fixarea pe AON.
5.2.5.
SEMNALIZAREA PRIN MOLECULE·SEM·
NAL LIPOFILE - HORMONI STEROIZI
Steroizii reprezinta molecule-semnal hidrofobe mici care pot

difuza liber, prin plasmalema, n citoplasma i. respectiv, n nucleu.
Receptorii pentru steroizi sunt dimeri de proteine cu zinc
prezentei n nucleu (cu exceptia receptorilor pentru glucocorticoizi
care se aflai n citoplasma panai n momentul cuplarii cu ligandul).
Panain momentul n care se cupleaza cu ligandul, unii receptori
pentru steroizi, situati la nivelul nucleului, se asociaza cu histon-
deacetilazele, mentinand expresia genica reprimatai n acele re-
giuni ale cromozomilor.
Liganzii sunt hormoni steroizi ce regleaza expresia genica:
glucocorticoizii (de exemplu: cortizol, denumit i hidro-
cortizon) care cresc nivelul glucozeiin sange prin sti-
mularea gluconeogenezei la nivelul ficatului; sunt secre-
tati de corticosuprarenala, zona corticala a suprarenalei;
glanda suprarenala are doua zone: corticala care se-
creta glucocorticoizi, mineralocorticoizi i androgeni i
medulara care secreta adrenalina i noradrenalina;
mineralocorticoizii, cu efect asupra metabolismului mine-
ralelor (de exemplu: aldosteron);
hormoni sexuali (de exemplu: estradiol, progesteron,
testosteron).
194
complex
receptor-inhibitor
hormon
Figura 55: Semnalizarea celulara prin molecule /ipofile
Hormonii steroizi, tiroidieni, retinoizi, vitamina O difera ca §i

structura §i functie, dar au acela§i mecanism de actiune, fixarea
de un receptor intracelular, raspunsul celular manifestandu-se prin
transcrip{ie genica, ceea ce genereaza sinteza proteica.
Hormonii steroizi sunt sintetizati pornind de la colesterol §i
au acela§i schelet chimic. Odata eliberati din celulele produ-
catoare, sunt preluati de transportori proteici specifici din sange cu
ajutorul carora ajung pana la celulele-tinta. Aici sunt eliberati de
transportori i traverseaza plasmalema, fixandu-se puternic, dar
reversibil, la un receptor proteic intracitoplasmatic.
Activarea acestui receptor este urmata de expunerea situ-
sului de legare pentru AON, complexul hormon - receptor (H-R)
traverseaza porii nucleari, ajungandi n nucleu, se fixeaza pe o
regiune specifica din AON numita SRE (steroid responsive ele-
ment), parte a unui promotor genie, inducand dereprimarea unor
gene alaturate care vor initia transcriptia AON §i, deci, var initia
procesele de sinteza proteica.
Raspunsul propriu-zis cuprinde doua etape: o reactie pri-
mara, determinata de transcriptia unui numar mic de gene, care
aparein circa 30 de minute, fiind urmata, mai apoi, de un raspuns
tardiv, mult amplificat, reactia secundara.
195
n general, raspunsurile la aceste tipuri de substante sunt

I
extrem de specifice, din doua motive:i n primul rand, numai anu-
mite celule au receptori intracelulari pentru aceste substante i
acetia sunt specifici pentru fiecare ligandi n parte;i
n al doilea
rand, activarea genica nu se face printr-un singur semnal (H-R), ci
printr-o secventa de semnale aranjatei ntr-o ordine prestabilita i
caracteristica, de asemenea, fiecarui tip de ligand.
196
Alberts, B. (2010). Essential cell biology. New York, NY Garland Science.

Astumian, R. D. & Derenyi, I. (2001). Towards a chemically driven mole-
cular electron pump. Physical review letters, 86(17), 3859-3862.
Baldwin, S. A. (2000). Membrane transport: a practical approach. Oxford:
Oxford Univ. Press.
Bradshaw, R. A. & Dennis, E. A. Handbook of cell signaling. Amsterdam:
Elsevier.
Bull, J. L., Hunt, A. J. & Meyhofer, E. (2005). A theoretical model of a
molecular-motor-powered pump. [Evaluation Studies Research
Support, U.S. Gov't, Non-P.H.S.]. Biomedical microdevices, 7(1),
21-33.
Caplan, M. (1994). Cell biology and membrane transport processes. San
Diego: Academic Press. Cell communication and signaling (2003).
Cooper, G. M. & Hausman, R. E. (2009). The cell: a molecular approach
(5th ed.). Washington, DC: ASM Press.
Dudek, R. W. (2011). High-yield cell and molecular biology (3rd ed.).
Philadelphia: Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health.
Gordon, S. (1999). Phagocytosis: the host. Stamford, Conn.: JAi Press.
Ivanov, A. I. (2008). Exocytosis and endocytosis. Totowa, N.J.: Humana
Press.
Karp, G. (2010). Cell and molecular biology: concepts and experiments
(6th ed.). Hoboken, NJ: John Wiley.
Lauf, P. K. & Adragna, N. C. (2005). Cell Volume and Signaling.
Advances in experimental medicine and biology, 559.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (61h ed.). New York, NY: Freeman.
Loeb, J. A. (1987). Molecular mechanisms in receptor-mediated en-
docytosis. Ph.D., University of Chicago.
Marks, F., Muller-Decker, K. & Klingmuller, U. (2009). Cellular signal
processing: an introduction to the molecular mechanisms of
signal transduction. New York, NY: Garland Science.
Marsh, M. (2001). Endocytosis. Oxford England; New York: Oxford
University Press.
Rao, A. (2009). Calcium signaling in immune cell regulation. Oxford:
Wiley-Blackwell.
Regazzi, R. (2007). Molecular mechanisms of exocytosis. Austin, Tex. New
York, N.Y.: Landes Bioscience/Eurekah.com; Springer Science.
Sawyer, D. (1995). Membrane structure and function. New York:
McGraw-Hill, Health Professions Div.
197
Scheiner-Bobis, G. (2002). The sodium pump. Its molecular properties

and mechanics of ion transport. [Research Support, Non-U.S.
Gov't Review]. European journal of biochemistry I FESS, 269
(10), 2424-2433.
Segev, N. (2009). Trafficking inside cells: pathways, mechanisms, and
regulation. Austin, Tex. New York, N.Y.: Landes Bioscience; Sprin-
ger Science.
Stein, W. D. (1990). Channels, carriers, and pumps: an introduction to
membrane transport. San Diego: Academ. Press.
Zorec, R. (2009). Mechanisms of exocytosis. Boston, MA: Published by
Blackwell Publishing on behalf of the New York Academy of
Science.
198
Citoscheletul
Organizarea celulara la eucariote,

adoptarea unei geometrii variabile
§i mi§carile executate depind de
C/TOSCHELET - o refea intricata
de proteine filamentoase care se
extinde ln lntreaga citop/asma.
Tn celulele animale o funcfie de o
importanta deosebita este menfi-
nerea volumului celu/ar ln limite
normale, ln absenta peretelui ce-
lular. Oe§i nu demult, citoscheletul
era comparat, la scara, cu sche-
letul osos uman, astazi, concepfia
include proprietafile dinamice ale
citoscheletului, astfel lncat compa-
rafia se extinde la sistemul osteo-
musculo-articular uman.
lnteriorul unei celule se afla rntr-o continua micare, iar ele-
mentele citoscheletului reprezinta suportul acestor micari: pentru
schimbarea pozitiei organitelor 'in celula, segregarea cromozo-
miala 'in timpul mitozei, separarea celulelor-fiicf? prin aparitia an-
tului de diviziune. Citoscheletul pare a fi o noutate la nivelul euca-
riotelor; lipsete la procariote, iar la eucariote joaca un rol crucial.
Celula eucariota este asemenea unei companii care realizeaza o
mare varietate de produse i care poseda o rnalta compartimen-
tare i specializare i, 'in acelai timp, interconexiuni deosebite prin
sisteme de transport. Citoscheletul controleaza atat localizarea or-
ganitelor, cat i translocarea acestora.
Citoscheletul este o retea formata din trei tipuri de proteine
filamentoase:
filamente de actina;
microtubi;
filamente intermediare.
Fiecare tip de filament este format din tipuri diferite de sub-
unitati proteice: filamentele de actina au la baza actina, microtubii
au la baza tubulina, iar filamentele intermediare sunt formate de o
familie de proteine fibroase.
Funcfiile citoscheletului :
Suport structural - mentine forma celulara;
Compartimentare celulara - localizarea intracelulara a or-
ganitelor;
Situsuri de ancorare pentru ARNm i translatia proteica;
lntervine 'in procesele de micare celulara:
pentru cili, flageli, alte specializari;
contractie musculara;
diviziune celulara;
Transport intracelular - vezicular sau al organitelor.
Actina existai n celula sub doua forme: actina G - forma

globulara i actina F, forma fibrilara organizatai n microfilamente.
Actina este una dintre cele mai abundente proteinei n celu-
lele eucariote.
La pasari i mamifere, s-au descris ase tipuri diferite de
actina:
trei tipuri de a-actine, fiecare dintre ele fiind caracteristica
unui anumit tip de muchi;
doua tipuri de actine nemusculare, denumite p-actina i y-
actina, gasindu-sei n aproape toate celulele nemusculare;
un tip de y-actina, specifica muchiului neted intestinal.
Actina globulara este formata dintr-un singur polipeptid cu
greutate moleculara de 45.000 Da, de forma globulara, cu lungime
de 6 nm i latime de 4 mn. Actina G are locuri de cuplare pentru
mai multe substante:
pentru profilina (o proteina care inhiba polimerizarea);
pentru ioni cum sunt Ca sau Mg care controleaza poli-
merizarea;
pentru ATP (care furnizeaza energia pentru polimerizare);
pentru miozina (mai exact, pentru capul moleculei de miozina).
Polimerizarea actinelor in vitro
Polimerizarea actinei in vitro presupune trei etape. Polime-
rizarea actinei poate fi initiata prin adaugarea de saruri la o solutie
de actina G, formandu-se actina F.
Nueleere Elongare Echilibru
Figura 56: Etape/e polimerizarii actine/or ,,in vitro": nuc/eere, e/ongare, echi/ibru
202
Citoscheletul
Polimerizarea, care are ca rezultat formarea filamentelor de

actina, se desfa 9oarai n trei faze succesive:
- Prima faza sau faza de lag se caracterizeaza printr-o
agregare lenta a monomerilor de actina G care vor forma oligo-
meri scurti 9i instabili. Odata ce unii oligomeri au atins o anumita
lungime (trei sau patru subunitati), ei pot constitui centre de nu-
cleere 9i determina debutul fazei a doua.
- Faza a doua este o faza rapida, de elongare a filamentului
n formare, prin aditia monomerilor de actina la ambele capete.
i
Aceasta faza de elongare este largitai n determinismul ei de catre
ruperea aleatorie a unor filamentei n cre9tere, ceea ce creeaza noi
centre de nucleere la nivelul capetelor filamentelor rupte. Perioada
de lag poate fi exclusa experimental, prin adaugarea la solutia de
.
actina G, a unei mici cantitat i de centri de nucleere de actina F. Pe
masura ce filamentul de actina F cre9te, concentratia monomerilor
de actina G scade, pana ce ajunge la un echilibru cu filamentele.
- Aceasta a treia faza este denumita faza de echilibru
(steady-state), deoarece de 9i monomerii de actina G polimeri-
zeaza 9i depolimerizeazai n continuare la nivelul capetelor fila-
mentelor,i n masa acestor filamente, nu se mai produc modificari
semnificative. Concentratia de echilibru a monomerilor se nume9te
concentratie critica (Cc). Aceasta valoare este importanta, deoa-
rece mascara abilitatea unei solutii de actina G de a polimeriza.i n
conditii tipice in vitro, Cc este de 0,1µM. Peste aceasta valoare, o
solutie de actina G va polimeriza; sub aceasta concentratie, o so-
lutie de actina F va suferi depolimerizare.
Polimerizarea actinei estei .
nsotita de hidroliza ATP. Mono-
merii de ATP-actina G se adauga la capetele filamentului; odata
incorporatiin filament, ATP-ul legat de subunitatile de actina este
hidrolizat lent la ADP. Ca un rezultat al hidrolizei ATP, cea mai
mare parte a filamentului va fi campus din ADP-actina F,i n timp
ce ATP-actina F se gase9te spre capete. Totu9i, se 9tie ca hi-
droliza nu este esentiala pentru debutul polimerizarii, deoarece s-a
observat ca actina cu ADP sau cu un analog nehidrolizabil al ATP
este, de asemenea, capabila de a forma filamente.
Rolul ATP in polimerizare

Ra\iunea polaritatii structurale a actinei F se bazeaza pe
existenta a doua capete diferite ale filamentului. Aceasta diferenta
203
. Biologie celulara i moleculara
structurala este, de asemenea, detectabila 1n cadrul experientelor

de polimerizare, deoarece un capat al filamentului (+) va progresa
de cinci - zece ori mai repede decat capatul (-). Ratele de cretere
inegala sunt demonstrate de un experiment simplu care exploa-
teaza abilitatea actinei F de a constitui un centru de nucleere 1ntr-o
solutie de actina G. Daca filamentele de actina, decorate cu sub-
fragmente de miozina, sunt folosite ca centri de nucleere, micros-
copia electronica va arata filamente de actina dezgolite care vor
crete de la ambele capete ale filamentului decorat. Decorarea cu
capetele de sageata permite concluzia ca elongarea rapida, aadar,
capatul (+) corespunde capatului ,,pieptanat" al filamentului, iar elon-
garea lenta corespunde capatului (-), i anume, ,,varfului" filamentului.
Diferenta 1n ratele de elongare la capetele opuse ale unui
filament este cauzata de diferenta dintre concentratiile critice (Cc)
la capetele filamentului.
Luand 1n considera\ie valorile Cc pentru capetele (+) i (-)
ale filamentului, observam ca:
nu se produce nicio crel?tere sub o concentratie a actinei G
de 0, 1 µM;
se produc crel?teri numai ale capatului (+), pentru concen-
tratii ale actinei G 1ntre 0, 1 - 0,8 µM;
se produc creteri ale ambelor capete la concentra\ii ale
actinei G peste 0,8 µM (cu mentiunea ca creterea va fi mai
rapida la capatul pozitiv decat la eel negativ).
Diferenta dintre Cc la capetele filamentului conduce la un
fenomen interesant denumit ,,avans pas cu pas" ( treadmill - ,,ma-
ina de macinat cu roata dintata") (fig. 57).
•
•
Figura 57: Mecanismuf de roata dinfata (treadmiff machine)
204
Citoscheletul
Concentra\iile intermediare ale actinei G, cuprinsei ntre

Cc(+) i Cc(-), sunt reprezentate de subunitatile ce se vor disocia
de la capatul (-) i se vor adauga la capatul (+). Astfel, subunitatile
nou adaugate vor ,,calatori" prin filament, pas cu pas, pana vor
ajunge la capatul negativ unde se vor disocia de filament. Un
astfel de mecanism de ,,moara" este interesant, deoarece poate
efectua lucru mecanic. Teoretic, diverse structuri ataate filamen-
telor pot fi transportate, de-a lungul filamentului, prin intermediul
subunitatilor ce se ,,deplaseaza" prin filament. Tn celule, se pare ca
filamentele de actina nu sufera acest proces de ,,paire", deoarece
capetele lor sunt acoperite de proteine specifice; aceste proteine
vorimpiedica adi\ia sau pierderea de monomeri de actina. Un
proces similar de ,,paire" are loci n cazul asamblarii i deza-
samblarii microtubilor.
ATP este eel care controleaza parametrii polimerizarii acti-
nei, deoarece afecteaza Cc pentru polimerizare. Rolul ATP este
demonstrat de un experimenti n care filamentele de actina sunt
polimerizate cu monomeri de ADP-actina. Tn acest caz, polimeri-
zarea are loc la ambele capete, dar cu o viteza scazuta, caracte-
ristica polului (-). Astfel, indiferent de polaritatea structurala a fila-
mentului de actina, Cc la cele doua capete devine egala atunci
cand sunt incorporati monomeri de ADP-actina.
Un filament de actina poate fi distrus prin procese inverse
de depolimerizare.
Factori care influenteaza polimerizarea

Toxinele fungice rup chilibrul polimer - monomer. Tn 1970,
nainte ca tehnicile de mutageneza sau de utilizare a anticorpilor
i
inhibitori sa fie puse la punct pentru biologie, erau utilizate unele
medicamente pentru fragmentarea filamentelor de actina. Primul
medicament studiat a fost citocalazina B (sau D), un alcaloid fungic.
Citocalazina determina depolimerizarea filamentelor de ac-
tina la nivel celular, prin fixarea la capatul (+) al actinei F, blocand
aditia ulterioara a monomerilor. Concentratia '
critica a monomerilor
'
va deveni echivalenta cu cea de la capatul negativ, ceea ce va
determina disocierea monomerilor de filament. Tn cazuli n care
citocalazina este aplicata celulelor vii, citoscheletul actinic dispare,
iar micarile celulare ca locomotia i citokineza sunt inhibate.
205
Alta toxina, faloidina, are un efect opus citocalazinelor:

aceasta va preveni depolimerizarea filamentelor de actina. Toxina,
izolata din ciuperca Amanita Phalloides, poreclita i ,,ingerul mor-
tii", se cupleaza la interfata dintre subunitatile filamentelor de
actina, un loc ideal de cuplare care mentine aceste subunitati la un
.
loc. Astfel, chiar daca actina este diluata sub concentrat ia critica,
filamentele stabilizate de faloidina nu vor depolimeriza. Faloidina
se leaga numai de actina F, fiind eel mai utilizat marker pentru ac-
tina F,in microscopia fotonica. Asociata cu markeri fluorescenti;
faloidina va lega toate filamentele de actina F, distribu{ia acesteia
fiind evidentiata prin microscopie cu fluorescenta.
Asamblarea i dezasamblarea filamentelor de actina, orga-
nizareain retele sistematizate sunt procese dependente de pre-
zenta unor molecule mici, numite ABP (acting-binding proteins)
asociate acestor filamente proteice. Functiile lor sunt descrise pe
scurt n fig. 58.
Filamentele de actina interactioneaza cu cele de miozinai n
celulele musculare. n celulele nemusculare, filamentele de actina
interactioneaza cu molecule izolate de miozina.i n celulele nemus-
culare, microfilamentele de actina intrai n compozitia speciali-
zarilor plasmalemei cum ar fi microvilii i stereocilii sau participa la
formarea jonctiunilor nemusculare.
20
6
Citoscheletul
complemerdara
O monomer actina-ATP Pwtelne ASP

CJ monomer actinfiADP+Pa .z lie am::erare la membrana
()monomer acti11a,ADP
saul
a proteine!e membranare (A)
"'"''"'""'""• anexina IJ, distrofina
talina, vincu!ina
Prot.ine ABP
"' in fHopodU fascill'Ult s:i:..aetinina 'v

.. in fib-re de stress,. v_..actinina Proteine A!IP
de cuptareincruci1rata (X)
(ex. fllamina, spectrina)
de """"''"la eitoscllelet (l)

Actin la fllamante !ntermediare (sp,,i;trina)
Actina la filament• intem>ediarn ;microtubi {plectina, MAP2)
Ac! na la mkrotubi {tau)
Prot-ei:n& A.BP
oo gh!daro fl ,.,1,mzaw {$$)
Proteine AlilP de cuplare a mono......,rilor ex, cah:tesmot\
E ,s,;hlmb de nucleotldG (ex. profllina) m bwlina, trop.oml-oihrn
C • acoperire 11 sechestrare {ex. timozlna)
O ,am i
arare de monomari Ipolimorlzara (ex. twlnflllna, profilina)
N • nucleere (ex, Arp21J)
e
lid' capat "'
o cm ]
'
l"rnteine
· Cll®i!
\
de acopel'ire fl
,pentru capiitul pozltiv • CapZ, teos,na
• perrtru caplitul negativ - Arp213, tropomoduli na
,;;clnctare Iacoperlre, gel$Olln, vlllin
• depolimerizare lliscindare ,AOF/cofllina
Figura 58: Rofuf ABP 1n functionafizarea citoschefetufui actinic
207
Miozina reprezinta una dintre proteinele asociate filamen-

telor de actina fiei
n celulele musculare, fiei
n cele nemusculare.
Fibrele musculare componente ale mul?chiului striat sunt
celule gigantice (50 µm diametru l?i cativa centimetri lungime), mul-
tinucleate, formatei n timpul dezvoltarii, prin fuziunea mai multor
celule. Aproximativ 2/3 din masa uscata a celulei este formata din
miofibrile, elementele contractile ale celulei musculare. Miofibrilele
sunt structuri cilindrice de 1 - 2 µm diametru, de obicei, cu o lun-
gime egala cu cea a celulelor musculare.
Fiecare miofibrila este compusa din lanturi de elemente
contractile, denumite sarcomere, fiecare avand 2,2 µm lungime;
aceste sarcomere dau miofibrilelor, la vertebrate, un aspect striat.
Studiind miofibrilele la microscopul electronic (deci la o
putere de marire mai mare), se observa o serie de benzi lumi-
noase l?i ntunecate la nivelul fiecarui sarcomer: o linie densa (in-
tunecata), aflatai n mijlocul unei benzi luminoase, separa un sar-
comer de urmatorul l?i poarta numele de linia Z sau discul Z.
Fiecare sarcomer cuprinde o serie de filamente paralele l?i
precis aranjate, filamentele subtiri formate din actina l?i proteinele
asociate, atal?ate la discurile Z. Aceste filamente se extind pana la
mijlocul sarcomerului, unde se suprapun cu filamentele groase;
acestea din urma reprezinta polimeri ai izoformelor miozinei II.
20
8
Citoscheletul
Disc Z Disc Z
luminoasa ntunecata
i luminoasa
Filament de adina
Filament de mioz:ina
Figura 59: Miofibrile rn mu§chiul scheletic. Detaliu al fibrei musculare scheletice.

Schema a miofibri!ei, definifia §i structura sarcomeru/ui.
Miozina este una dintre cele mai abundente proteine din

organism. Exista multe tipuri de miozine, grupate dupa functiona-
litatea speciftcai n §apte pana la paisprezece clase. Functionali-
tatea §i clasiftcarea se raporteaza la proprietatile domeniilor cape-
telor miozinice. Pe baza diferentelor structurale, moleculele de mi-
ozina au fasti mpartitei
n doua grupe mari: miozinele convenfio-
nale (sau de tip II) §i miozinele neconven(ionale. Se cunosc, pana
n prezent, eel puf in 14 tipuri diferite de miozina neconvenfionala
i
(tip I §i tip Ill - XV), doua fiind caracteristice plantelor. Fiecare tip
de miozina are functii specifice,i n aceea§i celula, putand ft pre-
zente mai multe tipuri de miozina.
Unele forme de mi§care celulara pot fi generate de meca-
nismele polimerizarii actinelor. Alte tipuri nsa nu pot ft efectuate
fara interventia miozinelor ca proteine asociate filamentelor de ac-
tina - ca proteine motorii.
Miozina este o enzima unica, o ATP-aza care poate cupla
hidroliza acestui nucleotid cu modiftcari conformationale care de-
plaseaza aceasta proteina de-a lungul ftlamentelor de actina.
209
Acest tip de enzima care poate converti energia chimicai n energie

mecanica este denumita enzima mecano-chimica sau, colocvial,
proteina motorie. Astfel, miozina este motorul, filamentele de acti-
na sunt traiectele pe care se deplaseaza miozinele, iar ATP, com-
bustibilul necesar deplasarii.
Structura moleculara a miozinei tip II

Miozina este un dimer, format din doua lanturi grele i doua
perechi de lanturi uoare diferite (denumite esentiale i regla-
toare); ambele sunt proteine de legare a Ca2+ calmodulin-like, dar
diferai
n ceea ce privete modalitatea de legare a Ca2+.
Figura 60: Fragmentarea enzimatica a miozinei II. Prin tratament chimotripsinic,

rezulta doua fragmente denumite meromiozina grea (MMG) §i meromiozina U§oara
(MMU). Apoi, prin tratament papainic din MMG, se ob(in fragmentele S1 §i S2.
Fragmentul care contine capul i gatul miozinei se numete

meromiozina grea (MMG, HMM - heavy meromyosin),i n timp ce
fragmentul cozii ramas poarta denumirea de meromiozina U§oara
(MMU, LMM - light meromyosin) (mero,i n limba greaca,i n-
seamna ,,parte, fragment"). Digestia ulterioara a MMG cu papaina
(o proteaza izolata din papaya) va detaa acele portiuni ale gatului
210
Citoscheletul
care fac legatura dintre cap !?i coada. Astfel, apar fragmentele S1
care contin numai domeniul capului 9i S2 care are origineai n por-
tiunea distala a gatului. Regiunea capului corespunde jumatatii N-
terminale a lantului polipeptidic miozinic, n timp ce domeniul cozii
contine capatu1' C-terminal. Tntreaga molecula de miozina II are o
greutate moleculara de cca 520 kDa. Lan\urile grele au o greutate
de 220 kDa fiecare, iar cele doua perechi de lanturi U!?oare au
aproximativ 20 kDa fiecare.
Miozina poate cupla energia rezultata din hidroliza ATP cu

generarea fortei necesare mi!?carii. 0 carcteristica vitala a mio-
zinei este faptul ca ea este actin-activata. In absenta actinei, mio-
zina va cataliza conversia ATP la ADP !?i Pa. Tn absenta actinei
acest proces este foarte lent - aproape patru molecule ATP/ora. Tn
complex cu actina, hidroliza ATP are loc la o rata de 20 molecule/
secunda. Descriem aici modul de interactiune '
dintre o molecula de
miozina !iii un filament de actina. Procesul presupune cateva etape:
- ln faza inifiala, situsul de cuplare al ATP de pe miozina
este gol, dar miozina este cuplata strans pe actina. La nivelul mu!?-
chiului, aceasta stare corespunde denumirii de rigor mortis (rigi-
ditate cadaverica). Atunci cand mu!?chiul este deprivat de ATP
(moarte), devine rigid, deoarece moleculele de miozina raman toate
cuplate la filamentele de actina.
- ln prima faza a ciclului contracfiei, o molecula de ATP
se leaga la situsul specific de la nivelul capului miozinei, ceea ce
determina o modificare conformationala,i n urma careia situsul de
'
cuplare al actinei se deschide. Acest eveniment are ca rezultat
desprinderea capului miozinic de pe filamentul de actina. Dupa ce
capul miozinic s-a disociat de pe filamentul de actina, ATP este
hidrolizat la ADP !?i Pi. Tn timpul acestei faze, situsul de legare
211
pentru ATP se 1nchide, determinand cudarea capului m1ozinei.

ADP i Pi raman 1nsa legate la capul miozinic. Tn aceasta noua
conformatie, capul miozinei este capabil sa lege un nou monomer
din cadrul filamentului de actina.
- in a doua faza a ciclului contracfiei, miozina se va lega
din nou de filamentul de actina, dar la un alt monomer. Eliberarea
secventiala a Pi i apoi a ADP este cuplata cu modificari confor-
mationale la nivelul capului miozinic, producand forta necesara
micarii. Initial, legarea capului miozinic la actina este slaba, dar
odata cu eliberarea Pi de la nivelul situsului de legare pentru ATP,
legatura devine mai puternica (probabil, deoarece situsul de lega-
re pentru actina sufera o noua modificare conformationala care
determina re1nchiderea sa).
- in a treia Ji ultima faza a ciclului contracfiei, are loc i
eliberarea ADP care disociaza de la nivelul situsului de legare
pentru ATP. Totodata, are loc i reorientarea capului miozinic (ne
aducem aminte ca acesta fusese cudat 1n prima faza a ciclului
contractiei), acesta revenind 1n pozitia initiala, de rigor mortis-like.
Tn timpul acestei etape, domeniul capului 1 i modifica conformatia,
determinand deplasarea domeniilor gatului i cozii 1nspre capatul
(+) al filamentului de actina.
Conform acestui model, miozinele paesc de-a lungul
filamentelor de actina. Daca moleculele de miozina sunt ancorate
(cum este cazul filamentelor grease din fibra musculara), ele vor
tractiona filamentele de actina. Extremitatile filamentelor groase
din fibra musculara au capetele miozinice orientate 1n sensuri opu-
se, prin urmare, fiecare extremitate va tractiona un filament de ac-
tina 1n sens opus celuilalt capat.
Daca la o molecula de miozina I este ataata o vezicula, atunci
miozina va fi cea care se va deplasa cu tot cu vezicula, de-a lungul
filamentelor de actina care sunt ancorate 1nstructura citoscheletului.
Proteine asociate filamentelor subtiri i groase i Ca2+ •

reglarea contractiei musculare
Odata clarificata problema mecanismului contractiei mus-
cuiare, vom trata mai jos mecanismele reglarii acestei contractii.
Cu exceptia muchiului cardiac, muchiul striat i neted prezinta
perioade de activitate separate de perioade de inactivitate. Con-
tract,ia musculara este indusa de variat'i stimuli: electrici, hormo-
212
Citoscheletul
nali, chimici, toti extracelulari. Ca i multe alte procese intracelu-

lare, contratia musculara este indusa de o cretere a concen-
. .
trat,iei Ca2 +. In mod normal, concentratia Ca2 + citosolic este menti-
nuta sub 0, 1µM. Mentinerea acestei concentratii este mentinuta la
aceasta valoare, 1n mod diferit, 1n celulele musculare i nemuscu-
lare. Tn celulele nemusculare sunt utilizate Ca2+-ATP-azele mem-
branare (pompe de Ca2+) care pompeaza Ca2+ extracelular. Tn
celulele musculare, aceste pompe se Tntalnesc i la nivelul mem-
branei reticulului sarcoplasmatic (forma specializata a reticulului
endoplasmatic, la nivelul celulelor musculare striate).
Datorita necesitatii de a raspunde instantaneu prin contrac-
tie, la un anumit stimul, celulele musculare au dezvoltat un meca-
nism de semnalizare rapid i eficient.
Aceasta cale cuprinde invaginatii digitiforme ale plasma-
lemei care ajung Tn vecinatatea reticulului sarcoplasmatic, formand
o structura denumita triada. Sistemul este astfel constituit, 1ncat
semnalul de depolarizare ajunge rapid Tn citoplasma la nivelul unei
triade unde are lac stimularea reticulului sarcoplasmatic i elibe-
rarea de Ca2+ Tn citozol prin canalele de Ca2+ specifice. Astfel con-
tractia musculara este initiata. Contractia (interactiunea acto-mio-
zinica 1nceteaza atunci cand canalele se 1nchid i Ca2+ este pom-
pat 1napoi Tn reticul).
Contractia musculara, tropomiozina ,i troponinele

La nivelul fibrei musculare striate, contractia este reglata de
patru proteine accesorii: tropomiozina i trei troponine, tipurile C, I
l?i T. Ca2+ este eel care modifica pozitia acestor proteine 1n raport
cu filamentul de actina, iar acesta din urma controleaza interac-
tiunea actina - miozina.
Tropomiozina (Tm) este o molecula de aproximativ 40 nm
lungime; subunitatile care o formeaza se leaga cap la coada,
formand un lant continuu de-a lungul filamentului de actina; fiecare
Tm poseda apte situsuri de legare la actina i va cupla, 1n
consecinta, apte monomeri actinici.
Troponinele {TN) reprezinta un complex de trei proteine, TN-
T, TN-I, TN-C.
- TN-T (cu o greutate moleculara de 37.000 Da) este o pro-
teina elongata care se leaga la capatul C-terminal al tropomiozinei,
determinand i legarea TN-I i TN-C la aceeai tropomiozina.
213
- TN-I (GM-22000) leaga actina la fel ca 9i TN-T.

- TN-C (GM-18000) are rolul de a lega Ca2+ 9i controleaza
pozitia tropomiozinei pe filamentul de actina.
A doua categorie de structuri implicate Tn motilitatea celu-

lara 9i subcelulara, precum 9i Tn determinismul formei celulare
este reprezentata de microtubi. Ace9tia sunt polimeri alcatuiti din
subunitati de tubulina 9 i care, alaturi de filamentele intermediare,
umplu citozolul cuprins Tntre nucleu 9i citoplasma. De9i se com-
pleteaza morfologic, microtubii 9i filamentele intermediare au func-
tii diferite Tn celula.
Microtubii sunt responsabili de o multitudine de mi9cari
celulare, ca de exemplu, mi9carile cililor 9i flagelilor, transportul vezi-
cular intracelular, cre9terea la nivelul conului de cre9tere neuronal,
iar la unele protiste, de capturare a hranei din mediul extern.
·:·f\:..'
Figura 61: Microtubi. Microscopie electronica
214
Citoscheletul
Toate micarile rezulta din polimerizarea i depolimerizarea

microtubilor i din actiunea proteinelor motrice asociate microtu-
bilor, kinezina i dineina.
n unele cazuri, microtubii au functii pur structurale, jucand
I
un rol important 7n determinismul plasticitatii eritrocitare.
Microtubii sunt polimeri formati din subunitati globulare de
tubulina. Aceste subunitati sunt dispuse 7n forma unui cilindru de
24 nm diametru, de doua ori mai mare decat eel al filamentelor
intermediare i de trei ori mai mare decat eel al microfilamentelor.
Avand lungimi variabile, microtubii sunt structuri mult mai rigide
decat alte elemente citoscheletale, datorita arhitecturii lor tubulare,
mult mai complexa decat a microfilamentelor.
Tubulinele
Microtubii sunt alcatuiti din subunitati dimerice de monomeri
' '
de a-tubulina i -tubulina.
Subunitati
tubulinice
Protofilament
Figura 62: Microtub - schema. Tubulinele dispuse Tn heterodimeri.

Tubulinele din heterodimerii adiacenti sunt putin decalate, inducand aparenta
de spirale de monomeri a §i /J. Peretele microtubilor are aspect de tabla de §ah
215
Fiecare monomer tubulinic are forma globulara, cu un dia-

metru de 4 nm. Heterodimerul are o lungime de 8 nm. Fiecare
heterodimer leaga doua molecule de GTP. Primul situs de legare,
situat la nivelul a-tubulinei, leaga GTP ireversibil §ii nu Tl hidroli-
zeaza, Tn timp ce al doilea situs, situat pe p-tubulina, leaga GTP
reversibil §ii Tl poate hidroliza la GDP. Acest al doilea situs de
cuplare al GTP este denumit situs de schimb, deoarece GDP
poate fi Tnlocuit de GTP. Hidroliza GTP legat la p-tubulina este le-
gata de fenomenul de polimerizare, de aditie a subunitatilor tubuli-
nice la capetele microtubilor.
Un microtub este compus din 13 protofilamente, dar pot exis-
ta §ii variatii, la diferite specii, Tntre 11 - 15 protofilamente. Adesea,
protofilamentele se asociaza Tn structuri de tip dublet sau triplet,
cum ar fi cazul cililor vibratili §ii flagelilor (dublete) sau centriolilor
(triplete). Un dublet de microtubi este format din microtubii A §ii B.
Microtubul A este complet, format din 13 protofilamente, Tn timp ce
microtubul B consta din 10 protofilamente care formeaza un tub prin
fuzionarea cu peretele tubului A Un triplet de microtubi are Tn plus
1O protofilamente adaugate la un microtub B dintr-un dublet.
Asamblarea ti dezasamblarea microtubilor

Microtubii se asambleaza prin procese de polimerizare ale
dimerilor tubulinici ap. Dupa asamblare, stabilitatea microtubilor
depinde de temperatura: la 4°C, microtubii depolimerizeaza Tn dimeri
stabili ap, iar la 37°C, Tn prezenta GTP, dimerii tubulinici polimeri-
zeaza. Asamblarea microtubilor este asemanatoare cu cea a fila-
mentelor de actina.
Asamblarea microtubilor este dependenta de concentratie:
la concentratii ale dimerilor de tubulina peste Cc, se produce poli-
merizarea, iar la concentratii ale dimerilor sub Cc, se produce de-
polimerizarea.
Centrii de organizare ai microtubilor (MTOC - cen-

trozomi i)
Termenul de MTOC descrie structurile utilizate de celulele
interfazice pentru a organiza microtubii. Tn cele mai multe cazuri,
MTOC este un centrozom. Tn schimb, unele celule epiteliale au
MTOC care nu seamana cu centrozomii.
216
Citoscheletul
Centriolii sunt principalele structuri ale organitului mem-

branar cunoscut sub numele de centru celular sau centrozom,
descoperit i descris de Van Beneden, 'fn 1876. Granulele sale
centrale sau centriolii au fost descrii, de Boveri i Prenant,i n
1887, iar micarile lor, 'fn cursul diviziunii, de catre Flemming.
Centrul celular este prezent 'fn toate celulele care au pro-
prietatea de a se divide (este absent 'fn celulele nervoase). Se ga-
sete perinuclear i are rol 'fn diviziunea i motilitatea celulara.
Organizarea morfologica
i microscopia fotonica, centrul celular prezinta aspecte
n
diferite 'fn raport cu faza ciclului celular. n interfaza, are aspectul
unei formatiuni
'
ovalare mai bazofile numite centrozom; 'fn interiorul
acestuia, se afla 1 - 2 granule intens bazofile, birefrigente, centriolii.
Centrozomul este 'fnconjurat de o masa de citoplasma mai
densa, omogena, 'fmpreuna cu care formeaza centrosfera. De cele
mai multe ori, centriolii reprezinta singurele elemente vizibile ale
centrului celular interfazic.
n faza M (mitoza) a ciclului celular, de la periferia centro-
i
sferei pornesc, radiar, numeroase filamente alcatuind astenul, din
care se vor forma o parte din elementele fusului de diviziune.
Cercetari electrono-microscopice au aratat ca structura
centrozomului i a centrosferei nu se deosebete cu nimic de cea
a citoplasmei, centriolul, 'fn schimb, avand o structura complexa. El
are forma unui cilindru cu lungimea de 300 - 700 nm i un dia-
metru de 150 - 250 nm.
Cercetarile lui E. Harven i W. Bernard (1956), Burgos i
D.W. Fawcett (1956), M. Besis i colab. (1956) au stabilit ca pere-
tele centriolului, mai dens la fluxul de electroni, este format din
noua triplete de microtubi, dispuse paralel, n axul lung al acestei
structuri; microtubii sunt notati cu A, B i C (eel situat mai intern
fiind notat cu A, iar eel mai extern, cu C). Peretele fiecarui microtub
este format din 13 protofibrile de tubulina cu un diametru de 5 nm,
dispuse 'fn jurul unui lumen cu diametrul de 15 nm.
Microtubii A sunt uniti de microtubii C ai tripletelor vecine
printr-o linie densa la fluxul de electroni.
Centriolului i se descrie o extremitate proximala orientata
spre centrul celulei 9i o extremitate distala, spre periferia ei. Cen-
trul extremitatii distale este ocupat de un cilindru electrono-dens,
217
unit de microtubii A, prin punti radiare dense la fluxul de electroni

(roata de caruta).
Figura 63: Aranjamentul componente!or tubulare ale unui centrozom
Structuri asociate
Centriolul se poate asocia cu:
1. un alt centriol, formand un diplozom (cei doi centrioli sunt
perpendiculari unul pe celalalt);
2. satelifii pericentriolari sunt structuri sferice electrono-dense
ataati la peretele centriolar prin punti de microtubi (D. Szollosi -
1964; M. Bessis - 1967; H. Lin - 1969; W de The - 1974);
3. microtubii sunt ataati satelitilor pericentriolari i nu foarte
rar 1n contact cu microtubii centriolari.
Funct,iile centriolilor
Centriolii reprezinta centru/ cinetic al ce/ulei. Ei coordo-
neaza micarile celulare 1n diviziunea celulara i micarile externe
ale celulelor ciliate i flagelate, deoarece corpusculii bazali sunt
derivati centriolari.
218
Citoscheletul
Principala functie a centrozomului este aceea de centru

organizator al microtubilor, deoarece materialul pericentriolar for-
mat din proteine !?i, probabil, din ARN joaca rolul-cheiei n acest
proces. Acest material determina polimerizarea tubulinei !?i asam-
blarea microtubilor care au extremitatea (-)in centrozom, iar extre-
mitatea (+), cu cretere rapida, distal.
Un alt rol i constituie direcfionarea mi§carilor de locomofie
ameboida a fibroblastelor i leucocitelor.
Funct• iile microtubilor

lmplicarea rn transportul vezicular dintre diverse compartimente
Microtubii sunt structuri dinamice implicatei n transportul
proteic i n determinarea polaritatii unor tipuri de celule. Microtubii
au dispozitii diferite
n celulele epiteliale polarizate
i n interfaza.
i
O retea densa de microtubi scurti i dispui aleator este
ntre membrana apicala i aparatul Golgi. Tn fibroblaste, de
localizatai
exemplu, complexul Goigi este concentrati n apropierea MTOC.
Tn timpul mitozei, complexul Golgi se disperseaza n multiple vezicule i
i n
citozol. Cand microtubii citozolici se reorganizeaza, veziculele
Golgi se deplaseaza de-a lungul microtubilor catre MTOC, unde
se reagrega, pentru a determina complexe largi membranare. Mi-
crotubii sunt asociati i reticulului endoplasmatic.
Alte manunchiuri de microtubi sunt dispuse longitudinal n
axul apico-bazolateral. Microtubii sunt orientati cu capetele (-) spre
membrana apicala i cu cele (+), spre membrana bazolaterala.
Organizarea spatiala neobinuita a microtubilor are implicatii im-
portantein transportul vezicular, ghidat ntre compartimentele ce-
lulare membranare.
Filamentele intermediare (Fl) formeaza a treia componenta

fibrilara a citoscheletului celular.
Numele lor deriva din observa{ia ca diametrul (de circa 10 nm)
este intermediar ntre al microfilamentelor (cca 7 nm) i eel al mi-
219
crotubilor (24 nm). Fl se gasesci n aproape toate celulele euca-

riote, cu preponderentai n celulele epiteliale §ii neuroni, unde sunt
de zece ori mai abundente decati n alte tipuri celulare. Modul lor
de organizarei ntr-o retea ce strabatei ntreaga citoplasma, mod de
organizare oarecum asemanator celui al microtubilor, sugereaza
ca functia Fl este de a fortifica structurarea intracelulara, precum
§ii a celulelori
n tesuturi. Rolul structural al Fl este evidentiati n ca-
zurile extreme cum sunt ghearele sau firele de par, vestigii ale
celulelor epidermice. Fl sunt importante mai alesi n vecinatatea
membranei, acolo unde participa la medierea contactului interce-
lular sau celule-matrice extracelulara (MEC).
Exista o serie de caracteristici fizice §i biochimice care
deosebesc Fl de microtubi §ii microfilamente:
Fl sunt extrem de stabile; chiar la concentratii saline
mari sau dupa extractie cu detergenti, filamentele ra-
man polimerizate;i n consecinta, metodele de purifi-
care, care utilizeaza ca agent ureea, vor extrage Fl
dintre proteinele deja solubilizate;
Fl sunt structuri fibrilare a-helicale care vor asambla
filamente. Din punct de vedere al asamblarii, Fl nu
pot cup/a nucleotide, deci polimerizarea lor va fi in-
dependenta de ATP sau GTP;
cu toate deosebirile prezentate, exista o serie de
puncte comune care se vor observai n termeni de
structura §ii functie,i
n tabelul de mai jos.
Clasificarea filamentelor intermediare

Fl reprezinta o superfamilie de proteine a-helicale care, pe
baza similitudinilor de secventa, pot fi grupatein cinci clase (vezi
tabelul alaturat).
220
Citoscheletul
Tabet 14: Tipuri de Fl
I Fl PM Nr. polipeptide DistribL."
TIPUL I
keratine acide 40-57 >15 epitelii
TIPUL II
keratine bazice 53-67 >15 epitelii
TIPUL Ill .-
Desmina 53 1 muchi
Proteina fibrilara 50 1 celule gliale
gliala acida i astrocite
Vimentina 57 1 mezenchim
Periferina 57 1 neuroni
TIPUL IV
NF-L 62 1 Neuroni maturi
NF-M 102 1 din SN central
NF-H 110 1 i periferic
lnternexina 66 1 SNC
Nestina 240 1 Tn dezvoltare
celule neuro-
epiteliale stem
TIPUL V
Laminina A 70 1 Yn toate celulele
Laminina B 67 1
Laminina C 67 1
NF = neurofilamente;
L, H, M = low, medium, high, se refera la greutatile moleculare
PM = pondere (greutate) moleculara
221
Alberts, 8. (2010). Essential cell biology. New York, NY: Garland Science.
Amos, L. A & Amos, W. B. (1991). Molecules of the cytoskeleton. New
York: Guilford Press.
Carraway, K. L. & Carraway, C. A. C. (2000). Cytoskeleton: signalling
and cell regulation: a practical approach. New York: Oxford
University Press.
Chandar, N. & Viselli, S. (2010). Cell and molecular biology. Philadelphia:
Wollters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health.
Cooper, G. M. & Hausman, R. E. The cell: a molecular approach (5th
ed.). Washington, D. C. Sunderland, Mass.: ASM Press; Sinauer
Associates. Cytoskeleton (2010).
Hoboken, N.J.: Wiley-Liss. Cytoskeleton methods and protocols. (2009).
New York: Springer.
Gonzalez-Mariscal, L. (2006). Tight junctions. Georgetown, Tex. New
York, N.Y.: Landes Bioscience/Eurekah.com; Springer Science
+Business Media.
Gunning, P. (2008). Tropomyosin. New York Austin, Tex.: Springer
Science+Business Media; Landes Bioscience.
Howard, J. (2001). Mechanics of motor proteins and the cytoske/eton.
Sunderland, Mass.: Sinauer Associates, Publishers.
Karp, G. (2010). Cell biology (6th ed.). Hoboken, NJ: Wiley.
Lansing, S. & Rousseau, T. (2009). Cytoskeleton: cell movement, cyto-
kinesis, and organelles organization. Hauppauge, N.Y.: Nova
Science Publishers.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (6th ed.). New York, NY: Freeman.
222
Specializ rile
plasmalemei
Majoritatea celulelor vegetale §i
anima/e sunt organizate rn te-
suturi solide. Ce/ule/e animale
agregate rn §iruri §i straturi t§i
pot exercita capacita(ile func(io-
nale doar daca plasmalemele
for sunt organizate rn eel pu(in
doua regiuni discrete, fiecare
dintre acestea posedand funcfii
specifice. Aceste ce/ule sunt
dotate cu polaritate func(ionala.
Astfel, rn special fa nivelul celu-
lelor epiteliale, distingem doi
poli func(iona/i, unul apical §i
a/tu/, bazolateral.
Specializarile plasmalemei pot
fi permanente §i temporare.
Specializarile temporare reprezinta o consecinta a comu-
nicarii permanente dintre celula !i,i mediu, fiind rezultatul unor feno-
mene de semnalizare biologica. Tn general, aparitia specializarilor
temporare reprezinta o rearanjare a citoscheletului actinic. Moda-
litatile diferite de aranjare ale citoscheletului actinic determina apa-
ritia a doua categorii de specializari temporare: protruzii digitiforme
(denumite filopodil), protruzii rn banda (denumite pliuri sau /ame-
lipodil). Tn cadrul acestora din urma, filamentele de actina la nivelul
citoscheletului cortical sunt ata!i,ate la placi de legatura mem-
branare, formandu-se fibrele de stress care pot exercita diverse
forte asupra substratului. Semnalele biologice care determina for-
marea unor astfel de specializari actioneaza asupra unor GTPaze
mici din familia Rho (CDC42, Rae, Rho) (fig. 64).
, ,.-"'-=-
filopodii
Cf /
_.,r .
lamelipodii
-
Cf)
- ) I
'fibre de stre\ ss
Figura 64: Specializari temporare ale plasmalemei
Aceasta categorie cuprinde microvilii, stereocilii !i,i cilii vi-

bratili. Structura acestor specializari are la baza filamente de ac-
tina pentru microvili !i,i stereocili, precum !i,i microtubi in cazul cililor
vibratili, precum !i,i la nivelul cozii spermatozoizilor.
7.2.1. MICROVILII I STEREOCILII
MICROVILII
Celulele de la nivelul epiteliului intestinal suntinalt specia-
lizate pentru procesele de absorbtie. Suprafata luminala a celu-
lelor epiteliului intestinal este denumita platou striat, iar cea a ne-
frocitelor tubilor contorti, margine rn perie, datorita abundentei de
microvili, iar prezenta acestora reprezinta o adaptare functionala la
necesitatile absorbtive.
Tn' fiecare celula, sub plasmalema, la nivelul platoului striat,
se gase§ite citoscheletul actinic cortical, o condensare a retelei
citoscheletale. Acesta face parte, teoretic, din structurilei nveli§iului
celular. Citoscheletul actinic cortical emite manunchiuri de fila-
ments de actina care se extind, pe de o parte,i n miezul micro-
vililor, iar pe de alta parte, sunt ancoratei n reteaua de origins
actino-spectrinica (fig. 65).
filamente
de actina ·-··-··········· ·-·
plasmalema
. retea ...-·-·-·-··
· ···-
·
iterm inala
(a) (b)
Figura 65: Microvili - modalitati de ancorare

(a) = microscopie electronica de baleiaj; (b) = schema
Fiecare microvil are o lungime de 1µm §ii un diametru de

0,08 µm. Prezenta lor determina cre§iterea suprafetei de absorbtie
- de exemplu, la nivelul celulelor epiteliului intestinal, suprafata de
absorbtie cre§ite cu 20%. Microvilii sunt acoperiti de plasmalema
care prezinta, catre mediul extracelular, un glicocalix bogat, format
22
6
Specializarile plasmalemei
din reziduurile glucidice ale glicoproteinelor (de obicei, enzime

digstive) 9i glicolipidelor (fig. 66).
Glicoca!ix Microvm
Figura 66: Platou striat format din microvili la nivelul celulelor epite!iale
intestinale (microscopie electronica de transmisie)
Ultrastructura microvililor
Microvilii sunt structuri bine organizate, prezentand, i n
interior, un manunchi format din 20 - 30 de filamente de actina
dispuse paralel 9i care sei ntind de la varf panai n reteaua cito-
scheletala corticala. Filamentele de actina sunt asociate cu pro-
teine asociate actinelor cum ar fi villina i fimbrina, dar i cu pro-
teine mai pu\in abundente cum ar fi ezrina. Asamblarea micro-
vililor, dependenta de semnalele colectate din mediu, este posibila
numai n prezenta vilinei, fimbrinei i a miozinei I (fig. 67).
227
material
amorf
·, capatul (+)
al filamentelor
de actina
·· plasmalema
brate laterale
de miozina I
punti de legare
(vilina, fimbrina)
Figura 67: Ultrastructura microvi/ului (schema)
Reteaua corticala a citoscheletului, unde se termina i sunt

ancorati microvilii, este bogatai n spectrina, proteina care determina
stabilitatea i rigiditatea miezului acestor specializari. De asemenea,
reteaua actinica se intrica i cu numeroase filamente intermediare.
La nivelul varfului microvililor, manunchiul de filamente de ac-
tina se opretei ntr-un material proteic amorf, de compozitie nepre-
cizata.
La nivelul zonelor laterale ale microvililor, manunchiul de
filamente de actina este solidarizat la fata interna a plasmalemei
de brate de miozina I i de molecule de calmodulina, care me-
. .
diaza interact iunea acto-miozinica. Prezent a miozinei I la acest
nivel justifica mobilitatea activa a microvililor, spre deosebire de
stereocili. Coada moleculelor de miozina este ataata la plasma-
lema, iar capul interactioneaza cu moleculele de actina din fila-
22
8
rnent, actiune dependenta de hidroliza ATP. Moleculele de mio-

zina I se deplaseaza catre capatul (+) al filamentelor de actina,
capat care este 1nglobat 1n materialul amorf din varful microvilului.
Asamblarea microvililor are loc 1n doua etape. ln prima
etapa, are loc fenomenul de nucleere a monomerilor actinici, cu
formarea unui rudiment microvilar. ln faza a doua, miezul actinic al
microvilului devine mai organizat, iar microvilii se alungesc odata
cu consolidarea retelei terminale. Probabil ca i alte extensii ale
plasmalemei cu suport actinic prezinta acelai mecanism de for-
mare, baza constituind-o fimbrina i vilina.
STEREOCILII
Unele celule, cum ar fi celulele 1nalte din epiteliul unistra-
tificat al epididimului i al canalelor deferente, prezinta, la polul
apical, expansiuni cilindrice ale citoplasmei acoperite de plas-
malema asemanatoare microvililor, denumite stereocili. n structura
lor, nu exista brate laterale de miozina I, ceea ce determina imo-
bilitatea acestor specializari. Ei se aglutineaza i determina sensul
de evacuare al produsului de secretie.
7.2.2. CILII VIBRATILI

Cilii vibratili reprezinta specializari ale plasmalemei polului
apical. Au un diametru de 0,25 µm, lungimi variabile, de la cativa mi-
croni la cativa mm §,i prezinta un miez format din manunchiuri
organizate de microtubi. Sunt 1ntalniti la suprafata a numeroase tipuri
celulare, 1nvariate organe, de la protozoare la plante §,i la animale.
Func(ia principala a cililor variaza 1n functie de localizare.
Protozoarele i celulele libere folosesc cilii la deplasarea fluidelor
1n jurul suprafetei celulare, la locomotie §,i nutritie. La nivelul unor
celule fixe, 1n tesuturi
' animale, au functii' diferite.
Astfel, n cazul speciei umane, gasesc la polul apical al
1 se
epiteliului cailor respiratorii superioare §,i 1n unele segmente ale
epiteliului mucoasei cailor genitale feminine (trompa uterina).
Celulele epiteliale ale cailor respiratorii superioare sunt do-
tate, la polul apical, cu cili (109/cm2) care 1noata 1ntr-un start fin de
229
mucus, formand ,,un cover ciliar". Aceste specializari, dotate cu

capacitatea de micare sincronizata, vor 1ndeparta particulele stra-
ine patrunse 1n caile respiratorii 1n timpul inspirului, 1mpreuna cu
celulele ce trebuie eliminate.
La nivelul oviductului, transportul ovocitelor se face, de ase-
menea, cu ajutorul cililor.
O specializare 1nrudita, bazata tot pe microtubi, f/ageluf do-
teaza spermatozoidul, asigurandu-i mobilitatea.
Ultrastructura cililor evidentiaza o organizare complexa
cu urmatoarele zone: tija, zona de tranzitie, corpusculul bazal (ki-
netozomul) i radacina ciliara.
Tija cilului reprezinta partea libera a acestuia i este for-
mata dintr-un miez, denumit axonema, ce consta 1n noua dublete
periferice de microtubi i un dublet central. Fiecare dublet de mi-
crotubi este format dintr-un microtub cu perete complet (A - 13
protofilamente) i un microtub cu perete incomplet (B - 10 pro-
tofilamente). Microtubul B dintr-un dublet este situat mai extern
decat microtubul A. Jonctiunea dintre microtubii A i B din acelai
dublet este solidarizata de o proteina fibrilara ce 1nsotete longi-
tudinal cuplajul, proteina denumita tektina. Fiecare filament de
tektina are un diametru de 2 nm i o lungime de 48 nm. Modelul
,,9+2" este caracteristic pentru cili i flageli (fig. 68).
----mrcrotub B
---mlcrotub A
brate de
dineina
punte
radiara
dublet
central
Figura 68: Ultrastructura cilu/ui vibratil
23
0
Microtubul B dintr-un dublet este conectat la microtubul A din

dubletul adiacent, prin intermediul unor punti proteice de nexina.
Fiecare dublet periferic este conectat la dubletul central, prin
intermediul unor punti radiare proteice. La microtubul B al fiecarui
dublet periferic, sunt ataate doua brate proteice de dineina. Acestea
vor interactiona cu microtubul A dintr-un dublet adiacent.
Dubletul central estei
nconjurat de un manon proteic.
Zona de tranzi(ie se gasete sub tija i la acest nivel, dulbe-
tul central seintrerupe la nivelul unei structuri lineare, dense, la
fluxul de electroni, numita placa bazala. Microtubii dubletelor peri-
ferice traverseaza placa bazala, participand la constituirea urma-
toarei zone.
Corpusculul bazal este zonai n care cilul vibratil intrai
n
contact cu celula. El are o structura tipica, echivalenta cu jumatate
din structura unui centriol. Corpusculii bazali au, de fapt, structura
unor centri de organizare ai microtubilor, care au fost considerati
pe larg la capitolul Citoscheletul (fig. 69).
!,
l' pIet. ,u,,e··•m

n ,J1. crovJ·b'I
Figura 69: Ultrastructura corpuscu/u/ui bazal
231
Peretele corpusculului bazal are forma cilindrica 9i este

delimitat de noua triplete de microtubi.
Radacina ciliara se insereaza pe corpusculul bazal 9i este
formata din asocieri de microfilamente de actina ce formeaza stri-
atii cu o grosime de 70 nm ce alterneaza cu zone mai putin dense
la fluxul de electroni. Ea Tndepline 9te atat rol structural cat 9i di-
namic, fiind implicata Tn imprimarea mi9carilor ciliare metacronice.
Flagelii (Tntalniti la nivelul cozii spermatozoidului sau la pro-

tozoare) seamana cu cilii Tn ceea ce prive9te structura intima dar
sunt, de obicei, mai lungi. Lungimea cililor 9i flagelilor este functie
de specie 9i nu de resursele celulare Tn ceea ce prive9te mono-
merii tubulinici.
Mitcarea ciliara
Studiul diferitelor mi9cari ale cililor este dificil, datorita vite-
zei mari cu care acestea se efectueaza (600 - 1.700 batai pe mi-
nut). Mi9carile ciliare difera de cele flagelare. Cilii executa mi9cari
asemanatoare unui bici - ondulante 9i, mai rar, mi9cari pendu-
lante, iar flagelii au mi9cari cvasi-sinusoida/e, dar baza moleculara
a mi9carii lor este aceea9i. Mi9carea ciliara este similara mi9carilor
din Tnot - stilul ,,bras": initial, are loc o mi9care de forta (fig. ?Oa),
Tn care fluidul este deplasat la nivelul suprafetei celulare; ulterior,
are loc o mi9care de revenire lenta (fig. ?Ob). Fiecare ciclu de mi9-
care necesita o durata de 0,1 - 0,2 secunde 9i genereaza o forta
perpendiculara pe axul axonemei.
1
6
a. Micare de pendulare (faza activa) b. Micare de pendulare (faza pasiva • revenire)
Figura 70: Mecanismul mi§carii cili/or vibratili
232
Mil}carea ciliara este determinata de interac\iunea dintre

tubuJina i dineina (ATPaza asociata bratelor microtubilor A), 1n
prezenta ATP-ului l}i a ionilor de Ca2+ sau Mg2 +, printr-un me-
canism de glisare a microtubilor.
Avand 1n vedere ca bratele de dineina au tendinta de a se
' '
deplasa spre capatul negativ al microtubilor, ele se vor deplasa
catre baza microtubului B dintr-un dublet adiacent.
Modelul de mil}care al cililor implica alunecarea dubletelor
de microtubi, unele 1n raport cu altele, datorita interactiunii dintre
bratele dineinice atal}ate la microtubul A dintr-un dublet, brate care
se vor deplasa catre capatul (-) al microtubului B din dubletul adi-
acent, datorita energiei furnizate de hidroliza ATP. Aceasta mil}-
care presupune formarea !_;ii ruperea consecutiva de punti 1ntre
bratele de dineina l}i microtubul B (fig. 7 1).
Figura 71: Mecanismu/ de glisare a microtubilor
Sindromul cililor imobili 1ntalnit la specia umana este

1nsotit de o stare patologica extrem de rara, cunoscuta sub nu-
mele de situs inversus, 1ncare asimetria normala a corpului - po-
zitia cordului, ficatului, apendicelui - este inversata, ansamblu cu-
noscut sub numele de sindromul Kartagener.
233
lmobilitatea cililor este provocata de defecte aparute la

nivelul sistemului proteic al mecanismului motor (pierderea
bratelor de dineina, a fibrelor radiale, lipsa dubletului central i a
manonului central).i n consecinta, poate determina sterilitatea
masculina provocata de imobilitatea flagelilor spermatozoizilor.
Prezenta sindromului de situs inversus sugereaza ca ba-
taile unidirectionale ale cililor, Tn cursul dezvoltarii umane precoce,
pare a juca un rol important Tn determinarea asimetriei normale
stanga - dreapta a corpului.
Polul bazal, la marea majoritate a epiteliilor, se sprijina, Tn

Tntregime, pe o membrana bazala continua de natura glicoproteica
i cu o grosime de 50 nm.
La unele tipuri de celule epiteliale care joaca un rol im-
portant Tn transportul activ al substantelor, plasmalema polului
bazal se invagineaza mai mult sau mai putin profund Tn citoplasma
pe care o compartimenteaza, formand aa-numitul /abirint bazal.
Numarul i profunzimea acestor invaginari variaza Tn functie
de epiteliu i de rolul sau Tn transportul activ de substante.
De exemplu, Tn plexurile coroide, compartimentele labirin-
tului bazal sunt putin numeroase. n schimb, Tn nefrocitele tubului
contort distal, invaginarile plasmalemei sunt numeroase i pro-
funde; Tn compartimentele labirintului bazal, se gasesc numeroase
mitocondrii care furnizeaza energia necesara transportului masiv
de Na+ i K+.
Gel mai bun exemplu 11 constituie labirintul bazal al celulelor
glandelor saline de la pasarile marine. Acest organ glandular eli-
mina NaCl, ceea ce explica de ce aceste specii de pasari pot bea
apa de mare. Principalele celule ale acestui epiteliu poseda mii de
invaginatii bazale care se Tntind cu toata celula, oprindu-se aproa-
pe de polul apical, marind considerabil suprafata de schimb.
234
Alberts, 8. (2010). Essential cell biology. New York, NY: Garland Science.
Canion, 8. (1988). The effect of accoustic trauma on the tectorial mem-
brane, stereocilia, and hearing sensitivity: possible mechanisms
underlying damage, recovery, and protection. Stockholm: Almqvist
& Wiksell.
DeMali, K. A. & Burridge, K. (2003). Coupling membrane protrusion and
cell adhesion. Journal of cell science, 116(Pt 12), 2389-2397.
King, S. M. (2009). Structure and motility. Amsterdam. Elsevier.
Slaboda, R. D. (2009). Primary cilia. Amsterdam Elsevier/Academic Press.
235
Zonele de c,uplaj celular
ti matricea extracelulara
Celulele reprezinta ,,caramizile"

din care sunt constituite orga-
nismele mu/ticelulare. Aceste
ce/ule sunt reunite prin joncfiuni
sau zone de cup/aj celular care
se stabi/esc 7ntre celu/e sau
7ntre celule §i matricea extrace-
/ulara secretata de acestea.
Arhitectonica tisulara poate fi privita din punct de vedere
mecanic: celulele care compun un tesut poseda o retea citosche-
letala tridimensionala care este conectata la elementele matricei
extracelulare sau la elementele citoscheletale ale altor celule, prin
intermediul unor complexe jonctionale, cu o structura i o functio-
nalitate variata. Totui. nu poate fi ignorata implicarea, din cei n ce
mai studiata, a jonctiunilor n mecanismele transductiei semnalelor
biologice.
Specializarile plasmalemei pot fi permanente i temporare.
Majoritatea covar itoare a jonctiunilor poate fii ntalnita la
nivelul epiteliilor, undei
ndeplinesc diferite roluri §i unde pot fi clasi-
ficate dupa criterii functionale.
1. Jonctiuni ocluzive uonctiuni stranse)

2. Jonctiuni de ancorare:
'
cu situsuri de ataare a filamentelor de actina:
o jonctiuni de adezivitateintre celule (aderente in
centura);
o jonctiuni de adezivitateintre celule i matricea
extracelulara;
o jonctiuni septate (numai la nevertebrate);
cu situsuri de ataare a filamentelor intermediare
o jonctiuni celula-celula (desmozomi);
o jonctiuni celula-matrice (hemidesmozomi);
3. Jonctiuni de comunicare:
- jonctiuni gap;
sinapse chimice;
plasmodesmata (numai la plante).
Jonctiune stransa
..-Apare 1ntre celulele
Jonc\iune de adezivitate......_ epiteliale 1nvecinate
n banda
i !j,i Ympiedica trecerea
Realizeaza legatura prin inele moleculelor printre acestea
de filamente de actina
la acela9i nivel, .,.., Desmozom macular
1ndoua celule adiaeente
Jonctiuni sub forma de
"nituri" care ancoreaza
filamentele intermediare
a 2 celule vecine
Jonctiune gap-
--P-.,.._.ea::::;;:;;;;)+
Canale intercelulare
care perm it trecerea
Hemidesmozomi
moleculelor mici,
Ancoreaza filamJmtl6intermediare
hidrosolubile 9 i ionilor
din celule la rana bazala
Figura 72: Clasificarea funcfionala a joncfiunilor
Jonctiunile stranse joaca rolul unor bariere dotate cu per-

meabilitate selectiva care separa doua medii fluide de o parte l?i
de alta a doua celule aflate Tn contact. Tmpreuna cu jonctiunile de
adezivitate Tn banda formeaza, la nivelul celulelor epiteliale, o uni-
tate functionala denumita complex joncfional apical.
Cu un secol Tn urma, bariera formata de celulele epiteliale
era atribuita unor Tngrol?ari intercelulare denumite, la acea vreme,
240
Zonele de cuplaj celular i matricea extracelulara
bara terminala, i putea fi vizualizata prin intermediul unei coloratii

vital.e la polul latero-apical celular (fig. 73).
proteine
jonctkmale"'::,::
jonc\iune
stransa
celula.1 celuia2
Figura 73: Joncfiune stransa: schema; aspect pentalame/ar
Studiile de microscopie electronica din anii '60 au identificat

morfologia barei terminale ca fiind compusa din cateva tipuri de
jonc\iuni intercelulare. Cel mai apical sunt situate jonctiunile imper-
meabile (stranse), fapt determinat cu ajutorul unor trasori electro-
no-opaci. Tn ultimele doua decenii, au progresat i tehnicile de
determinare a structurii moleculare ale acestor jonctiuni, cele mai
dificil de studiat din acest punct de vedere.
Ultrastructura
Tn microscopia electronica, jonctiuniie stranse au un aspect
pentalamelar, deoarece spatiul dintre cele doua celule este, prac-
tic, inexistent.
Tn microscopia electronica de transmisie, acestea apar ca i
contacte focale 1ntre monostraturile externe ale celulelor adiacen-
te. Lanturile proteice care intra 1n contact sunt formate din proteine
transmembranare intricate i care interactioneaza la nivelul spatiu-
lui intercelular.
Tn microscopia electronica de baleiaj, se observa, la nivelul
jonctiunilor, structuri de anastomozare complexe, formate din lan-
turi proteice care se constituie 1n inele ce 1nconjoara polul apical al
241
membranei celulelor epiteliale. Studii de crio-electronomicroscopie

evidenvaza jonc unile stranse dintr-un punct diferit de vedere (fig. 74).
Jonctiunile stranse apar ca o retea interconectata de creste
pe fata citoplasmatica a membranelor adiacente. Observate la ma-
riri importante, aceste creste apar formate din lanturi de proteine
sferice de 3 - 4 nm diametru; la formarea jonctiunii stranse, parti-
cipa mai multe lanturi de proteine sferice de fiecare parte (fig. 75).
microvili
jonc1;. stranse
jonc\. gap
filam. intermediare ... ......M-··"'"""-''
membrana baza
Figura 74: Localizarea joncfiunilor Figura 75: Localizarea joncfiunilor

stranse (ME de baleiaj) stranse (schema)
Structura moleculara: lista proteinelor componente este Tn

continua cre§itere §ii majoritatea au fest dear identificate fara a Ii se
preciza functiile. De aceea, vom insista asupra celor cu functiona-
litate precizata.
$irurile care participa la formarea jonctiunii sunt formate din
proteine transmembranare denumite oc/udine. Acestea sunt co-
nectate la alte proteine localizate pe fata citoplasmatica de fiecare
parte a jonctiunii: Z0-1 9i Z0-2 ce fac parte din familia proteinelor
MAGUK (membrane associated guanilat kinase), avand roluri
242
Zonele de cuplaj celular ;,i matricea extracelulara
structurale l?i de semnalizare. Alte proteine fara roluri functionale

bine. precizate sunt cingulina, p130, 7H6, ZA-1TJ ;,i simplekina.
La nivelul jonctiunii, mai sunt localizate GTP-aze din clasa
Rho, tirozin-kinaze non-receptoare ;,i PKG.
Ocludina este o proteina transmembranara, cu o greutate
moleculara de 65kDa care formeaza doua bucle extracelulare de
aproximativ 47 aminoacizi, legate la domeniile N 9i C terminale.
Biochimia buclelor transmembranare este destul de neobi;,nuita:
acestea poseda un numar deosebit de mare de reziduuri de
glicina ;,i tirozina, ceea ce face ca aceste molecule sa fie implicate
n functia de bariera ;,i de adezivitate a acestor·jonctiuni. Domeniile
i
transmembranare se pot intrica asemenea elementelor unui fer-
moar, determinand un spatiu intercelular extrem de mic (2 - 8 A).
Proteinele din clasa MAGUK (intre care este inclusa recent
9 i p130), l?i anume Z0-1 9i Z0-2, compun suportul pentru asam-
blarea moleculelor de ocludinai n cadrul jonctiunilor stranse.
Cingulina, o proteina asemanatoare domeniilor cozilor mo-
leculelor miozinice se presupune a avea rol de ata9are a struc-
turilor jonctionale la filamentele de actina ale citoscheletului.
' .
Functiile J"onctiunilor stranse
Bariera realizata de jonctiunile stranse prin intermediul lan-
turilor proteice compuse din ocludine constituie un element de re-
zistentain calea de transport paracelular a solvitilor. Astfel, doua
medii sunt separate aproape complet 9i selectiv, n functie de sta-
rea functionala a jonctiunilor stranse.
Acestea au un rol deosebit la nivelul celulelor epiteliului in-
testinal l?i al barierei hematoencefalice.
La nivelul intestinului subtire, jonctiunile stranse dintre en-
terocite realizeaza separarea lumenului intestinal de sistemul vas-
cular, printr-o bariera dotata cu permeabilitate selectiva. Pentru a
traversa aceasta bariera, moleculele simple, ionii sau apa au doua
posibilitati: transportul parace/ular sau transportul transcelular.
Jonctiunile stransei mpiedica tocmai transportul paracelular, dar
nu complet, deoarece chiar ;,i la acest nivel, spatiul intercelular
este de circa 2 - 8 A. Astfel, apa poate trece de jonctiunile stran-
se, relativ u9or, n timp ce majoritatea ionilor l?i a macromolecu-
lelor mici sunt aproape complet blocate. Monozaharidele ;,i amino-
243
acizii sunt incapabili de a traversa bariera pe cale paracelulara,

fiind obligati sa abordeze calea transcelulara.
Jonctiunile stranse contribuie la menfinerea asimetriei mem-
branare Tn celulele epiteliale. Aceasta asimetrie reprezinta o necesi-
tate a transportului transcelular. Tn celulele epiteliale polarizate, com-
pozitia plasmalemei polului apical este diferita de cea a regiunii
bazolaterale. Jonct,iunile stranse contribuie la ment'inerea dome-
niilor proteice, prin Tmpiedicarea difuziunii Tn planul membranei.
Men{inerea domeniilor proteice permite transferul vectorial al mole-
culelor Tntr-un singur sens. De exemplu, glucoza este transportata
din lumenul intestinal spre fluxul sangvin, i nu invers, deoarece
transportorii de import sunt localizati la polul apical, iar cei de
export, la polul bazal.
Jonctiunile stranse nu sunt identice din punct de vedere
functional. Selectivitatea permeabilitatii acestor jonctiuni este ra-
portata, Tn special, la transportul de sodiu.
La nivelul barierei hematoencefalice, aceste jonctiuni sunt
localizate Tntre celulele endoteliale capilare. Bariera hematoen-
cefalica (celulele endoteliale cuplate prin jonctiuni stranse) permite
trecerea unor substante ca glucoza, drogurile, alcoolul - din sange
Tn LCR, C02 - din LCR Tn sange. Majoritatea antibioticelor tree
destul de dificil, de aceea pot aparea dificultati Tn tratamentul pa-
tologiei infectioase la nivelul SNC.
lntegritatea acestor jonctiuni depinde de prezenta ionului de
Ca2+.
Exista o stransa legatura functionala Tntre jonctiunile stran-
se i alte jonctiuni localizatei n celulai
n imediata vecinatate, spre
polul lateroapical, cum ar fi jonctiunile de adezivitate Tn banda.
Formarea jonctiunilor stransei n tesuturile embrionare sau Tn
culturile celulare este dependenta de formarea jonctiunilor pe baza
de cadherine. Nu este Tnca destul de clar daca moleculele de
cadherina initiaza formarea jonctiunilor stranse sau daca sunt
utilizate numai ca schele pentru asamblarea jonctiunilor mentionate.
244
La nivelul tesuturilor, ceiulele sunt mentinute laolalta prin di-

verse tipuri de jonctiuni; dintre acestea, mai importante pentru ade-
zivitatea fizica dintre celule sau dintre acestea i mediul extraceiular,
sunt jonctiunile de adezivitate. Aceste jonctiuni au roluri fundamen-
tale 1n determinarea i mentinerea organizarii tis1:.1lare.
Cele mai importante jonctiuni de adezivitate pot fi clasificate
dupa cum urmeaza:
- jonctiuni cu situsuri de ataare pentru actina;
- jonctiuni cu situsuri de ataare pentru filamente intermediare.
Tn functie de conectare i moleculele de cuplare transmem-
branare, jonctiunile se pot 1mparti Tn:
- jonctiuni celula - celula - cuplare prin cadherine;
- jonctiuni celula - matrice - cuplare prin integrine.
8.3.1. JONCTIUNI CU SITUSURI DE FIXARE PEN·

TRU ACTINA
A. Jonctiunile celula - celula se mai numesc i aderente

n centura ( zonula adherens - ZA - la nivelul celulelor epiteliale).
i
Totui. aceste jonctiuni iau diverse forme 1n diferite tipuri celulare:
regiuni de adezivitate la nivelul sinapselor 1n SNC, jonctiuni auto-
tipice la nivelul tecilor de mielina, discurile intercalare situate Tntre
miocardocite. Sistemele de adezivitate ce contin cadherine func-
tioneaza i Tn celulele care prezinta contacte intercelulare extinse,
fara a prezenta jonctiuni definibile din punct de vedere morfologic.
Jonctiunile de adezivitate se gasesc Tn special la nivelul
celulelor epiteliale, unde formeaza o banda continua (zonula
adherens) care Tnconjoara interiorul fiecarei celule din complex.
Sunt situate imediat sub jonctiunile stranse. Ca i structura,
fiecare celula prezinta, la acest nivel, un inel format dintr-un ma-
24
5
nunchi de filamente de actina. lnelul de actina este ataat la

membrana printr-un set de proteine ca: a, p, y cateninele, vin-
culina, a-actinina i plakoglobina. Ata amentul intercelular (intre
zonele unde inelele a doua celulei nvecinate sunt adiacente) se
face prin intermediul unor proteine din clasa cadherinelor. Aceasta
,,retea" poate suferi i modificari de pozitie datorita proteinelor mo-
torii de tip miozinic, intervenindi
ntr-un proces morfogenetic important
- plierea structurilor epitelialei
n forma de anturi - tuburi.
Moleculele de adezivitate sei mparti
n patru superfamilii:
selectine, imunoglobuline, integrine i cadherine.
Selectinele:
• glicoproteine intrinseci ce recunosc i se leaga la anu-
mite structuri oligozaharidice de la suprafata altor celule;
• rolin procesele inflamatorii; mediaza interactiunile
tranzitorii dintre leucocitele circulante i peretele vas-
cular la locul inflamatiei;
• tip E (endotelial);
• tip P (plachete);
• tip L (leucocite),
Superfamilia lg:
• implicatei n imunitate;
• unele mediaza adezivitatea celula - celula Ca2+ in-
dependent, mediaza interactiunea specifica a lim-
focitelor cu celule necesare pentru un raspuns imun
(macrofage, alte limfocite i celule-tinta);
• altele mediaza adezivitateai ntre celule non-imune.
De exemplu:
V - CAM (vascular cell adhesion molecule)
N - CAM
lntegrinele:
• proteine membranare intrinseci, prezente la supra-
fata tuturor celulelor organismelor vertebrate;
• au un lant a i unul 13;
• exista eel putin 18 subunitati diferite a i 8 subunitati l3;
• funcfii:
o adezivitatea celulelor la un substrat sau la alte
celule;
246
o transmiterea semnalelor din exterior catre in-

terior, prin legarea capatului extracelular la un
ligand (laminina, fibronectina) care determina
schimbarea conformatiei la capatul citoplas-
matic al integrinei, activeaza protein-kinaze ci-
toplasmatice avand ca rezultat fosforilarea;
• semnalele transmise de integrine pot influenta multe
aspecte ale activitatii celulare: motilitate, cretere i
chiar supravietuirea celulei.
Cadherinele
Cadherinele reprezinta o superfamilie de glicoproteine
transmembranare, de adezivitate Ca2+ dependente care reprezinta
suportul adezivitatilor homofilice celula - celula 1n toate tesuturile
solide ale organismului.
Cadherinele sunt implicate 1n recunoaterea intercelulara,
determina tranzitiile morfologice din cadrul modelarii i mentinerii
arhitectonicii tisulare. Cadherinele mediaza adezivitatea celulara
de rezistenta, dar, 1n acelai timp, sunt influentate de semnalele
reglatorii, 1n special, 1n perioada morfogenezei. Sunt descrise ca-
teva tipuri de cadherine (tabel 15).
Tabet 15: Tipuri de cadherine §i distribufia acestora la mamifere

Molecula Distributie celulara preponderenta
Cadherina E embrion preimplantar,
celule epiteliale - fn special,
fn jonctiunile de adezivitate fn banda
Cadherina P trofoblast
cord
plaman
intestin
Cadherina N sistem nerves
plaman
cord
mezodermul
embrionar ectodermul
Cadherina R neural optic
nervul
celule gliale
Cadherina M mioblaste
celule musculare striate mature
24
7
Moleculele de cadherina prezinta trei regiuni majore:

extracelulara - care mediaza adezivitatea specifica;
transmembranara - care traverseaza membrana;
citoplasmatica - este localizatai
n celula i este cuplata la
filamentele actinice, componente ale citoscheletului prin in-
termediul cateninelor. Ata area la citoschelet presupune i
participarea unor proteine asociate.
B. Jonctiunile celula - matrice se realizeaza sub forma

•
contactelor focale (placi de adezivitate) - fascicule de filamente de
actina care se leaga prin intermediul polipeptidelor asociate mem-
branei la o glicoproteina transmembranara, receptor pentru fibro-
nectina; segmentul extracelular al acestuia se leaga la fibronec-
tina, o proteina multifunctionala extracelulara care are un loc de le-
gare pentru receptorii sai i altul ce interactioneaza cu proteine struc-
turale din matricea extracelulara, cum ar fi, de exemplu, colagenul.
Aceste contacte focale sunt importante, deoarece permit
celulelor sa ramana intim asociate cu filamentele din matricea
extracelulara. De asemenea, ele faciliteaza anumite tipuri de mi-
care celulara (de exemplu: prin pseudopode).
Cai l EC1
:'I I EC2 Proteine asociate cadherinelor/cateninelor
cadherina
\Ill EC3 - substratul p120 src kinazei
- tirozin-fosfataze transmembranare
I - a-actinina
plasmalema
p-catenina
. (placoglobina)
a-catenina Proteine asociate jonc 1iunii de adezivitate

- miozina
- radixina
- vinculina
filament de actina
Figura 76: Jonctiunile de adezivitate rn banda - detaliu pentru o singura

molecula de cadherina; este evidenta structurarea cadherinei rn trei regiuni:
248
• extracelulara cu cinci domenii (EC-1 la EC-5, legate lntre ele

prin ioni de Ca2+, ceea ce asigura rigiditatea acestui segment);
• transmembranara (obturata pe imagine de plasmalema);
• citoplasmatica (legata de catenine (/J §i a) care fac legatura
cu filamentele de actina).
8.3.2.
JONCT,llJNI CU SITUSURI DE FikARE PEN·
TRU FILAMENTELE INTERMEDIARE
A. Jonctiuni celula - celula - desmozomi i. Sunt jonctiuni

1nforma de buton care conecteaza doua celule, avand rolul de a
distribui fortele de tractiune i de forfecare care apar 1ntre acestea.
La nivelul lor, se descriu o serie de structuri specializate
care faciliteaza conectarea citoscheletelor celor doua celule. Prin
intermediul desmozomilor intra 1n contact filamentele intermediare
ale celulelor adiacente.
Structura desmozomului cuprinde doua placi citoplasmatice,
una de fiecare celula, 1n care sunt ancorate elemente ale citosche-
letului fiecarei celule 1n parte (filamentele de keratina, 1n cazul celu-
lelor epiteliale i filamentele de desmina, 1n cazul celulelor miocar-
dice).
Proteinele de legatura transmembranare dintre cele doua
celule apartin unei clase de proteine de aderenta, dependente de
Ca2+ i care sunt tot cadherine de tip E. Acestea sunt reprezentate
de desmocolina i desmogleina.
Placile citoplasmatice reprezinta elementul de conectare al
elementelor citoscheletului cu proteinele transmembranare de
legare. Aceste placi proteice au o grosime de 15 - 20 nm i sunt
compuse din plakoglobina, o proteina 1nrudita cu vinculina - pro-
teina care conecteaza filamentele de actina ale citoscheletului ce-
lular la proteinele transmembranare 1n cadrul jonctiunilor de ade-
zivitate (fig. 77, 78).
Filamentele intermediare care se ataeaza la placa cito-
plasmatica mai sunt denumite i tonofi/amente. Ele au forma de
ansa, venind din citoplasma, ancorandu-se la placa citoplasmatica
i re1ntorcandu-se 1ncitoplasma.
249
placa
plasmalema
spa u
intercelular< . r-·
citoplasmatica
/,..' ·"-/filamente.
-
desmogleina intermediare
desmocolini:I (keratina)
(proteine
transmembranare)
Figura 77: Structura moleculara Figura 78: Structura unui desmozom

a unui desmozom macular macu/ar (electrono-microfotografie)
8. Jonctiuni celula - matrice: hemidesmozomii. Sunt

similari desmozo' milor cu deosebirea ca fac legatura dintre celula
i matricea extracelulara. Un exemplu sunt hemidesmozomii care
ataeaza celulele epiteliului intestinal (enterocitele) la membrana
bazala (o specializare a matricei extracelulare la limita dintre
epiteliu i tesutul conjunctiv). La nivelul epiteliilor, hemidesmozomii
determina o rigiditate i o rezistenta crescuta.
Se considera ca hemidesmozomii prezinta jumatate din
structura unui desmozom. Totui, exista diferente importante 1ntre
cele doua tipuri de jonc\iuni. Astfel, placa citoplasmatica la hemi-
desmozom este dubla i nu prezinta plakoglobina (fig. 79).
250
celulil
epiteliala
rnern tfana
1Jaza1,i
Figura 79: Hemidesmozom - structura moleculara
Linkerul transmembranar este reprezentat de integrine, eel

mai frecvent a6p4, care cupleaza, pe de o parte, filamentele inter-
mediare ale citoscheletului celular, iar pe de alta parte, faminina,
component fibrilar important al matricei extracelulare. Domeniul
citoplasmatic al integrinelor a6p4 este campus din circa 1.000
aminoacizi, fiind mult prelungit n citoplasma i interactionand fila-
mente intermediare.
Jonctiunile de tip GAP reprezinta modalitati de comunicare

directai
ntre celule l?i sunt distribuite pe suprafetele laterale ale
celulelor adiacente, permitand schimbul de molecule mici. Astfel,
prin aceste jonctiuni, tree ioni - aadar, curent electric -, eveni-
251
ment important n evitareai ntarzierilor la nivelul sinapselor. Jonc-

tiunile GAP sunt prezente i n tesuturile non-neuronale, unde de-
servesc procesele de integrare metabolica prin schimbul de ioni i
molecule mici - AMPc (329Da), precursorii AON i ARN, glucoza-
6-fosfat (259Da).
Majoritatea celulelor animale prezinta, la nivelul zonelor la-
terale, regiuni jonctionale specializate, caracterizate printr-un spa-
tiu intercelular (GAP)in care se observa un set de particule cilin-
drice. Aceste particule cilindrice sunt, de fapt, canale proteice fine,
prin care citoplasmele celor doua celule participante la jonctiune
intrai
n contact. Canalele au un diametru de 1,2 nm i permit trece-
rea moleculelor pana la 2.000 Da. n majoritatea tesuturilor, jonctiunile
GAP sunt aglomeratei n clustere de circa 0,3µ diametru (fig. 80).
Sinapsil electrica
Figura 80: Jonctiuni GAP la nivel sinaptic (model §i electrono-fotografie)
Sunt formate din doua unitati proteice numite conexoni,

unul de fiecare celula, alcatuite, la randul lor, din cate ase sub-
unitati proteice de conexina 32, o proteina de 32000 Da. Acetia
realizeaza o retea hexagonalai n planul plasmalemei i vor forma
prin apozitia celor doua unitati (fig. 81, 82), un canal ce strabate
spatiul intercelular, realizand comunicarea dintre cele doua celule.
n cazul acestor jonctiuni, spatiul intercelular este mult redus ca
i
dimensiuni (pana la 2 - 4 nm). Proteinele care reprezinta baza
structurii moleculare a conexonilor se numesc conexine (pondere
moleculara 27.000 Da).
252
Zonele de cuplaj celular *}i matricea extracelulara
jonc!iune
d gap
"·
··
·---.--"-' Lcoo-
ct-helix
ciloplasma citoplasma
Figura 82: Joncfiune GAP

Figura 81: Jonctiune GAP (schema)
(e/ectronofotografie)
Functii:
•
se gasesc i n sinapsele electrice *}i au un rol important
pentru functionarea acestora, fiind de 10.000 de ori mai
permeabile pentru ionii metalici decat restul sinapselor;
comunicarile intercelulare prin jonctiuni GAP au un rol
important n embriogeneza (in perioada de organogeneza);
aceste jonctiuni se gasesc *}i la nivelul glandelor salivare,i n
ficat, rinichi, piele, tiroida, prin intermediul lor realizandu-se
o cooperare metabolicai ntre celule. f n cadrul cooperarii
metabolice, o celula preia de la celulele vecine substante
pe care nu le poate sintetiza. Un component important care
poate trece prin jonctiunile GAP este AMPc care ac\ioneaza
ca mesager secund intracelular. A*}a cum s-a explicat an-
terior, cre*}terea AMPc este consecutiva stimularii hormo-
nale diverse. Trecerea AMPc are o semnificatie deosebita;
astfel, cre*}terea concentratiei intracelulare post-stimulare a
AMPc duce la cre*}terea concentratiei sale *}ii n celulele
vecine (de exemplu,i n cadrul unui epiteliu), initiind simultan
acela*}i tip de raspuns metabolic. Trecerea Ca2+ prin jonc-
tiunile GAP permite contractia mu*}chiului neted prin coor-
donarea contractiei fibrelor individuale; exemplificand, tre-
cerea Ca2+ prin jonctiunile GAP permite sincronizarea con-
253
tract,iei celulelor musculare netede intestinale cu determi-

narea peristalticii sau contractia uterului n timpul naterii;
au un caracter dinamic, comunicarea prin intermediul lor
fiind dependenta de Ca i pH. Tn mod normal, concentratia
extracelulara a Ca2+ este destul de ridicata (1x10-3 la 2x10-
3M)in timp ce concentratia Ca2+ liberi n citoplasma este
5
mai mica de 10- M. Daca se produce o efractie mem-
branara la nivelul plasmalemei sau a organitelor de stocare
a Ca2 +, concentratia acestuia din urma cretei n citozol,
rezultatul fiindinchiderea canalelor din jonctiunile GAP.
Astfel, deteriorarea unei celulei mpiedica, prininchiderea
jonctiunilor GAP, raspandirea mesajului biochimic de lezi-
une, protejand celulele vecine.
8.5.1. . DATE GENERALE $1 FUCTII

Matricea extracelulara poate fi denumita ca totalitatea mole-
culelor secretate de celule i imobilizatei n spatiul extracelular.
Matricea extracelulara este o structura dinamica, fiind un adevarat
organit celular, localizat n afara celulei.
Variatiile cantitative ale componentelor matriciale i modul
lor de organizare realizeaza o diversitate de tipuri, fiecare dintre
acestea fiind adaptata la necesitatile functionale ale tesutului res-
pectiv. Astfel, matricea poate fi calcifiata realizand structura dura a
osului sau a dintelui, poate constitui matricea transparenta a cor-
neei sau poate adopta o structurai m pletita ce confera elasticitate
tendoanelor.
Tn general, eai
ndeplinete roluri multiple:
stabilizeaza structura fizica a tesuturilor;
'
rol de lubrifiere, amortizare a ocurilor mecanice i asigu-
rarea elasticitatii tesuturilor i organelor;
rol n adezivitatea celulara;
254
Zonele de matricea extracelulara
influenteaza forma celulei, proliferarea, migrarea i dezvoltarea

acesteia Tn evolutia embrio-fetala;
rol metabolic;
prezenta matricei confera protectie celulei fata de o serie de
agenti patogeni, deoarece componentele matricei sunt mult mai
complexe i stabile decat lipidele i proteinele ce edifica plas-
malema.
8.5.2. COMPONENTELE MATRICEI EXTRACE-

LULARE
Matricea extracelulara este alcatuita din trei tipuri principale

de macromolecule:
- Glicoza-aminoglicanii (GAGs). Sunt numiti astfel de-
oarece sunt alcatuiti din unitati dizaharidice repetitive cu una sau
mai multe molecule aminoglucidice (de exemplu: N-acetilgluco-
zamina, N-acetilgalactozamina). Aceste unitati sunt organizate Tn
lanturi lungi neramificate, iar moleculele aminoglucidice sunt, de
obicei, sulfatate. Gruparile sulfat sau carboxil confera GAGs sar-
cini electrice negative, ceea ce va atrage osmotic cationi.
Au fast identificate patru tipuri de GAGs, pe baza rezidu-
urilor glucidice i alte caracteristici cum ar fi numarul de grupari
sulfat dintr-o unitate dizaharidica. Cele patru tipuri sunt:
1. Acidul hialuronic;
2. Condroitin su/fatul §i dermatan sulfatul;
3. Heparan sulfatul §i heparina;
4. Keratan sulfatul.
Proteoglicanii
GAGs cu excep\ia acidului hialuronic, se leaga covalent la
proteine, formand proteoglicanii (PG).
Prin urmare, PG sunt formati din miez proteic sintetizat Tn
reticulul endoplasmatic rugos i numeroase lanturi de GAGs ce se
adauga Tn aparatul Golgi.
Principalii proteoglicani din matrice sunt: agrecanul (loca-
lizat Tn cartilaj), betaglicanul (localizat la nivelul suprafetei celulare
i Tn matrice), decorina (larg raspandita Tn tesutul conjunctiv), per-
255
, Biologie celulara l?i moleculara
lecanul (la nivelul membranei bazale), serglicina (localizata Tn ve-

ziculele secretorii din glucide) 9i sindecan I (localizat la suprafata
fibroblastelor 9i a celulelor epiteliale).
Funcfiile PG:
sunt polianioni ce tind sa se agrege Tn prezenta cationilor
divalenti. Aceasta agregare determina o vascozitate mai
mare, utila matricei extracelulare ce Tnconjoara articulatiile;
actioneaza ca un filtru molecular; moleculele mari ale pro-
teinelor 9i agentii bacterieni nu pot penetra prin acest mediu
vascos;
pot lega molecule semnal (de exemplu: factori de cre9tere -
factorii de cre9tere fibroblastici sunt orientati catre receptorii
lor de catre PG);
au rol Tn formarea aparatului de filtrare renal 9i actioneaza
ca filtru molecular la nivelul membranei bazale glomerulare.
Colagenul: este una dintre cele mai abundente proteine

gasite Tn tesuturile animale, fiind responsabil de integritatea tesu-
turilor osoase, cartilaginoase, piele 9i tendoane. Din punct de ve-
dere molecular, colagenul are cateva caracteristici distincte: con-
tine doua tipuri mai rare de aminoacizi hidroxilizina 9i hidroxipro-
lina, lanturi scurte de oligozaharide compuse numai din glucoza 9i
galactoza, se poate plia 9i realiza legaturi Tncruci9ate pentru a edi-
fica forma fibrilara sau de retea.
Figura 83: Model al fibrei de colagen
Au fast identificate mai mult de zece izotipuri de colagen,

din care primele cinci sunt mai bine caracterizate Tn ceea ce pri-
ve9te structura 9i localizarea.
256
Zonele de cuplaj celular !l>i matricea extracelulara
Tipul I: primul descoperit !l>i prezent Tn proportia cea mai

mare (90% din colagenul tesuturilor umane), predomina Tn tesu-
turile rigide i contine cantitati mici de hidroxilizina !l>i carbohidrati.
Tipul II: este singurul tip prezent Yn cartilajul hialin 9i, Ym-
preuna cu tipul I, 9i Yn alte tesuturi, avand cantitati mari de hidroxi-
lizina 9i carbohidrati.
Tipul Ill: este, de obicei, asociat cu tipul I, fiind sintetizat de
fibroblastele care sintetizeaza !l>i tipul I.
Tipul IV: este prezent la nivelul laminei bazale 9i difera de
celelalte tipuri prin prezenta 3-hidroxiprolinei, manozei !l>i acidului
sialic. Nu poate forma fibre lungi, dar este flexibil 9i formeaza o
structura Yn forma de retea.
Celelalte izotipuri de colagen reprezinta componente mi-
nore ale anumitor matrice extracelulare fiecare avand o serie de
caracteristici distinctive.
Fibronectina (Fn) a fost, initial, descoperita ca proteina a
plasmei sangvine ce determina celulele Yn cultura sa adere la un
substrat colagenic.
Este o molecula mare, cu doua lanturi identice de apro-
ximativ 2.500 aminoacizi, grupati Yn cateva domenii repetitive, fie-
care domeniu avand roluri diferite Tn functia de realizare a lega-
turilor celula - matrice. Exista un domeniu de legare a colagenului,
doua domenii de legare a PG !l>i o secventa care se leaga la
receptorul membranar fibronectinic. Aceste domenii sunt alcatuite,
la randul lor, din module mici, eel mai cunoscut fiind modulul fibro-
nectinic repetitiv tip Ill ce apare de eel putin 15 ori Yn fiecare domeniu.
Receptorul pentru fibronectina este un membru al familiei
integrinelor, fiind o proteina membranara integrala ce se gase!l>te
Yn plasmalema unui numar mare de celule (de exemplu: mu9chi,
neuroni, fibroblasts etc.). Secventa peptidica de legare la acest
receptor este arginina - glicina - aspartat (ROG), situata la nivelul
unuia dintre domeniile fibronectinei.
Fibronectina este importanta nu numai pentru aderarea ce-
lulelor la matrice, dar 9i pentru directionarea migrarii celulare la
embrionii de vertebrate.
Laminina este o molecula a adezivitatii, specifica laminei
bazale. Ca 9i fibronectina, laminina este o molecula mare, ce con-
tine o serie de domenii functionale Tn cele trei lanturi polipeptidice
257
mentinutei
mpreuna prin pun{i disulfidice i aranjatei
n forma de
cruce asimetrica.
Figura 84: Domeniile functionale ale moleculei de laminina
Domeniile functionale sunt:

pentru legarea l'a colagenul IV;
legarea la heparan sulfat;
legarea la entactina;
doua sau mai multe domenii pentru legarea la proteinele
receptor de la nivelul plasmalemei.
Laminina este una dintre primele proteine ale matricei ex-
tracelulare sintetizatei n timpul dezvoltarii embrionare:i n perioada
timpurie a dezvoltarii embrio-fetale, lamina bazala convne doar pu-
vn colagen de tip IV, fiind alcatuita, n special, dintr-o rea de laminina.
8.5.3. MEMBRANA BAZALA

Membrana bazala reprezinta suportul flexibil al matricei ex-
tracelulare specializate care se afla la baza straturilor sau tubilor
formati din celule epiteliale. Membranele bazalei nconjoara, de
258
Zonele de cuplaj celular !_l,i matricea extracelulara
asemenea, celulele musculare individuale, celulele adipoase !_l,i

celuJele Schwann (care se dispun Yn jurul axonilor neuronilor peri-
ferici, pentru a forma mielina).
A!_l,adar, membrana bazala separa celulele epiteliale de te-
sutul conjunctiv subadiacent sau Ynconjurator. La nivelul glome-
rulului renal §i al alveolei pulmonare, membrana bazala se inter-
pune Yntre doua straturi celulare, functionand ca un filtru selectiv.
Totu§i, membranele bazale au roluri §i mai complexe: de-
termina polaritatea celulara, influenteaza metabolismul celular, or-
ganizeaza proteinele Yn membranele plasmatice adiacente, induc
diferen\ierea celulara !_l,i sunt cai de comunicare specifice pentru
migrarea celulara.
Figura 85: U/trastructura membranei bazale
Membrana bazala este sintetizata de catre celulele care se

sprijina pe ea. La microscopul electronic, aceasta apare constituita
din doua straturi: lamina lucida sau rara, adiacenta a membranei
bazale a celulelor epiteliale !_l,i lamina densa, situata imediat sub la-
mina lucida. Tn anumite cazuri, se distinge un al treilea strat ce
259
contine fibrile de colagen, numit lamina fibroticu/aris sau subla-

mina densa. Unii autori folosesc notiunea de membrana bazala
pentru a denumi ansamblul celor trei straturi,, vizibil 1n microscopia
optica. Alti autori utilizeaza alternativ termenii de lamina i mem-
brana baa/a.l n membrana bazala a unor epitelii pluristratificate,
cum ar fi epidermul, lamina densa este fixata la tesutul conjunctiv
subiacent prin fibrile ancorante, formate din colagen VII.
Dei compozitia membranei bazale variaza de la un tesut la
altul i chiar dintr-o regiune la alta a membranei, principalele ei
componente sunt: co/agenul de tip IV, proteoglicanul heparan
sulfat (perlecanul), /aminina i entactina.
Functiile membranei bazale:

1) Ro'lul de bariera selectiva a membranei bazale: 1n glo-
merulul renal, o membrana bazala, de o grosime neobinuita, ac-
tioneaza ca un filtru molecular, 1mpiedicand trecerea macromole-
culelor din sange 1n urina. Se pare ca proteoglicanul heparan-
sulfat are un rol important 1n aceasta functie: daca lanturile GAG
sunt 1ndepartate cu enzime specifice, dispar proprietatile filtrante
ale membranei bazale. De asemenea, membrana bazala poate
actiona ca o bariera selectiva i 1n cazul celulelor 1n micare.
2) Rolul membranei bazale 1n regenerarea tisulara: s-a ob-
servat ca are un rol important 1n regenerarea tisulara dupa lezare.
Cand sunt lezate tesuturi ca muchii, nervii i epiteliile, membrana
bazala supravietuie te i formeaza un suport pe care pot migra
celulele regenerate.
3) Rolul membranei bazale 1n migrarea celulelor embrio-
nare: probabil ca membrana bazala are un rol important 1n ghidajul
celulelor care migreaza 1ntimpul dezvoltarii embrionare.
26
0

Cheresh, D. A (1994). lntegrins: molecular and biological responses to
the extracellular matrix San Diego Acad. Press.
Haralson, M. A (2002). Extracellular matrix: a practical approach Oxford
IRL Press.
LaFlamme, S. E. (2008). Cell junctions: adhesion, development, and
disease. Weinheim: WILEY-VCH.
Lauri, S. (1999). Heparan sulfate-dependent cell-extracellular matrix in-
teractions in the regulation of hippocampa! long-term potentiation
(LTP). Helsinki.
Mecham, R. P. (2011). The extracellular matrix: an overview (1st ed.).
Heidelberg Springer.
Nelson, W. J. (2010). Cell-cell junctions: a subject collection from Cold
Spring Harbor perspectives in biology. Cold Spring Harbor, NY:
Peracchia, C. (2000). Gap junctions: molecular basis of cell commu-
nicaiton in health and disease. San Diego Acad. Press.
Ruoslahti, E. (1994). Extracellular matrix components. San Diego -
Acad. Press.
261
Nucleul
Celulefe eucariote pot fi anu-

c/eate (hematii, trombocite), uni-
nucleate (cele mai multe) sau
multinucleate (hepatocite, fibre
musculare striate, osteoclaste).
Procariotele nu au nuc/eu; aces-
tea poseda un echivalent nuclear.
Forma nucleilor
Respecta, fn general, forma celulei:
nuclei sferici fn celule sferice;
nuclei ovalari fn celulele prismatice·i'nalte sau cilindrice;
nuclei aplatizati fn celulele pavimentoase;
nucleu polilobat la neutrofile etc.
Pozit•ia nucleilor
Tn mod normal, nucleul ocupa, fn celula, o pozitie centrala
care poate fi fnsa modificata de numero!;ii factori:
acumularea substantelor de rezerva fn citoplasma
(de exemplu: fn celulele secretoare ale glandei paro-
tide, pancreasul exocrin, nucleul ocupa o pozitie me-
dio-bazala);
acumularea granulelor de secretie (de exemplu: fn
celulele caliciforme din mucoasa intestinala, nucleul
ocupa o pozitie bazala).
Dimensiunile nucleilor
Dimensiunile nucleilor variaza fn functie de tipul celular.
Oepind, de asemenea, de faza ciclului celular !;ii de activitatea
celulara. Dimensiunile medii ale nucleilor variaza fntre 3 !;ii 25 µm.
Tn celulele nervoase din cortexul cerebelului, nucleii nu depa!;iesc
2 - 3 µm, nucleul spermatozoidului are 4 µm, iar eel al ovocitului
ajunge la 20 - 25µm. Volumul nucleului depinde de volumul ce-
lulei: se poate vorbi de un raport nucleo-citoplasmatic, raport care
este constant, variind fntre 1/3 !;ii 1/20. Acest raport se modifica fn
celulele neoplazice, volumul nuclear crescand exagerat fn raport
cu citoplasma.
Numarul nucleilor
Majoritatea celulelor sunt uninucleate. Oaca activitatea me-
tabolica a celulelor este crescuta, celulele pot fi binucieate (de
Biologie celulara i;,i moleculara
exemplu: condrocite, hepatocite). Unele celule sunt multinucleate;

dintre acestea, unele au sute de nuclei. Celulele multinucleate se
clasifica Tn:
plasmodii - sunt formate din celule mononucleare Tn
care nucleii sufera diviziuni succesive fara diviziunea
citoplasmei. Exemple: celule musculare striate, os-
teoclaste.
- sincitii - sunt formate prin fuziunea mai multor celule
mononucleate. Exemple: sincitiul trofoblastic la su-
prafata vilozitatilor placentare.
Structura nucleului cuprinde: Tnvelii;,ul nuclear, cromatina,

nucleolul, carioplasma (nucleoplasma, sucul nuclear).
9.2.1. i
NVELl$UL NUCLEAR - STRUCTURA $1
FUNCTII
Reprezinta o structura complexa, lipoproteica, care separa

continutul nucleului de citoplasma. Este integru Tn interfaza i;,i se
dezintegreaza Tn timpul diviziunii celulare.
Are o structura dubla formata din:
membrana externa;
membrana interna;
- spatiu intermembranar (cisterna perinucleara);
pori nucleari.
Structura moleculara a membranei nucleare evidentiaza
'
prezenta lipidelor Tn membranele externa i;,i interna Tn proportie de
30% (majoritatea fosfolipide) i;,i a proteinelor (majoritatea enzime,
ca adenilat ciclaza sau receptori pentru hormonii steroizi), Tn pro-
portie de 60 - 80%. Spatiul perinuclear contine unele enzime
(peroxidaza), Ca2+ i;,i unii metaboliti,
266
Nucleul
a. Membrana nucleara externa

Are o structura obil?nuita, trilamelara, i'n microscopia elec-
tronica, cu o grosime de 5 - 7,5 nm. La acest nivel, se pot observa
ribozomi ataati acestei membrane, ceea ce sugereaza similitu-
dinea cu membranele reticulului endoplasmatic rugos (RER). De
altfel, membrana nucleara externa se continua cu membrana RER.
b. Membrana nucleara interna

De asemenea, cu aspect trilamelat, i'n microscopia electro-
nica, cu grosime tot de 5 - 7,5 nm, nu prezinta ribozomi atal?ati.
Pe fata interna, spre carioplasma, prezinta o retea densa de fila-
mente intermediare, laminine, care au rolul de a atal?a filamentele
cromatiniene la acest nivel.
c. Spatiul intermembranar (cisterna perinucleara)

Reprezinta spatiul cuprins i'ntre membranele nucleare ex-
terna l?i interna, avand o dimensiune de 20 - 40 nm. Acest spatiu
se continua cu lumenul RER.
Nucleol
Lamina
nucleara
Ribosomi
Heterocromatina
Reticul endoplasmatic rugos Membrana nucleara externa
Figura 86: Structura rnveli§ului nuclear
267
Membrana nucleara
Membrana nucleara interna
externa
Reticul endoplasmatic
Figura 87: Relafia dintre nuc/eu §i reticu/u/ endop/asmatic
d. Porii nucleari
Reprezinta punctele de legatura i continuitate dintre mem-
branele nucleare: externa i interna. Sunt, de asemenea, cai de
comunicare Tntre carioplasma i citoplasma.
Porii nucleari au o structura complexa, fiind responsabili de fe-
nomenele de transport dintre nucleu i citoplasma, Tn ambele sensuri.
Structura porilor nucleari (fig. 88):

fiecare por este delimitat de o structura discoidala,
denumita complexul porului nuclear, avand un dia-
metru de 80 nm pe interior i o greutate moleculara
de cca 125 milioane Da;
prezinta o simetrie octogonala, peretele porului fiind
format din opt subunitafi columnare;
catre centrul porului, fiecare subunitate octogonala
prezinta cate o subunitate sferica, denumita inelara;
catre spatiul intermembranar, fiecare subunitate co-
lumnara prezinta cate o protruzie sferica, probabil o
glicoproteina transmembranara de mari dimensiuni,
cu rol de ancorare a complexului la nivelul mem-
branei nucleare interne. Aceste protruzii sunt denu-
mite subunitati luminale;
'
268
Nucleul
catre citoplasma, la nivelul porilor, se observa cateva

prelungiri fibrilare;
catre nucleu, acela9i tip de prelungiri fibrilare, ata-
9ate la fata interna a membranei interne, sunt mai
bine reprezentate 9i condensate, formand o structura
de tip co9ulet (denumirea oficiala - co§ al porului sau
cu9ca a porului).
subunitate luminalii
subunitate luminala
- subunitate columnara
subunitate luminala
-;,cucaH porului nuclear

50 nm
Figura 88: Structura porului nuclear
Functiile
i
nvelifului nuclear
Funcfii metabolice ilustrate prin similaritate cu membra-
nele reticulului endoplasmatic rugos: elongarea lanturilor de acizi
gra9i, desaturarea acestora, sinteza fosfolipidelor 9i colesterolului,
glicozilarea lipidelor l?i proteinelor, detoxifierea celulara. Ribozornii
atal?ati la rnernbrana nucleara externa participa la sinteza proteinelor.
Funcfie de transport:
Transportul prin rnernbranele nucleare -i nvelil?ul nuclear
permite trecerea moleculelor cu greutate moleculara panai n 5.000
Da,i
n ambele sensuri. Moleculele transportate pot fi nucleotide,
aminoacizi, metabolif
Prin porii nucleari pot trece ARNm complexat cu proteine,
formand complexe ribonucleoproteice, alte enzime care se pliaza,
capatand o conformatie fibrilarai
n timpul transportului.
Transfer de informa\ie,in dublu sens, hormoni steroizi, ca-
rotenoizi, molecule lipofile din citoplasmai n nucleu l?i ARNm, en-
zime, ribonucleoproteine, din nucleuin citoplasma.
269
Traficul de membrane: prin Tnmugurirea membranei nucle-

are externe.
9.2.2. CROMATINA NUCLEARA

Cromatina reprezinta masa bazofilica dominanta Tn interio-
rul nucleului, vizibila Tn microscopia fotonica. Cromatina nucleara
nu are un aspect uniform. Tntre masele bazofile de cromatina, se
gasesc spatii denumite spafii intercromatiniene. Cromatina l}i cro-
mozomii reprezinta doua forme de organizare a materialului ge-
netic (AON). Tn interfaza (perioada dintre doua diviziuni succe-
sive), materialul genetic este reprezentat de cromatina, iar Tn tim-
pul diviziunii celulare, de cromozomi.
Cromatina in microscopia fotonica:

Cromatina se gasel}te:
dispersatain nucleoplasma, sub diferite forme:
granule de diferite marimi, numite cromocentri;
granule fin dispersate;
forma fibrilara
condensata la periferia nucleara, pe fata interna a Tn-
veli§ului nuclear, unde formeaza membrana cromatica.
Eucromatina fi heterocromatina:
Cromatina fin dispersata,i n mod uniform,i n nucleu se nu-
mel}te eucromatina. Este mai putin bazofila, iar din punct de ve-
dere functional, deosebim doua tipuri de eucromatina:
eucromatina activa reprezinta fractii de cromatina
unde au loc, n mod continuu, procese de transcriptie
(copierea unei catene de AONi n ARNm);
eucromatina permisiva care este parpal inactiva, dar
poate, n orice clipa, sa participe la procese de trans-
cripe.
Cromatina condensata sub forma de granule mari formeaza
heterocromatina l}i este intens bazofila. Oistingem doua tipuri de
heterocromatina:
270
Nucleul
heterocromatina constitutiva, care estei ntotdeauna

condensatai n interfaza; este inactiva genetic i nu
contine gene structurale i nu sufera procese de
transcriptie;
heterocromatina facultativa reprezinta cromatina
condensata care contine gene structurale inactive.
Acestea se pot activa sub influenta unor factori de
derepresie i se transformai n eucromatina. Hetero-
cromatina facultativa se poatei mparti n functie de
tipul de cromozomi de care apartinei n:
o heterocromatina facultativa autosomala, care
corespunde celor 22 de perechi de cromo-
zomi autosomali;
o heterocromatina facultativa gonosomala care
corespunde cromatinei sexuale ce formeaza
corpusculul Barr n celulele somatice de la fe-
meie i corpusculul F, n celulele somatice la
barbat.
Fibrele cromatiniene
La microscopul electronic, cromatina apare sub forma de
fibrile, cu diametru de 20 A, denumite fibrile cromatiniene; aceste
fibrile reprezinta unitatile structurale ale cromatinei interfazice i
ale cromozomilori n mitoza.
Structura biochimica a fibrei cromatiniene

Macromolecule de AON - 30%;
Macromolecule de ARN - 5%;
Proteine bazice - 40% sunt protamine i histone;
Proteine acide - 25% - non-histonice;
- Alte substantei
n cantitati mici: lipide, ioni.
Spatiile intercromatiniene
Reprezinta spa\iile dintre aglomerarile de cromatina i pot
avea urmatoarele aspecte:
fibrile pericromatiniene sunt reprezentate de ele-
mente fibrilare dispuse la periferia cromatinei. Sunt
compuse din molecule de ARN;
271
granule pericromatiniene au forma de granule - sunt

formate din granule de ribonucleoproteine;
granule intercromatiniene, grupe de particule formate
din ARNm;
corpi spiralati sunt agregate sferice formate din fibrile
spirale de ribonucleoproteine.
9.2.3. NUCLEOLII
Nucleolii sunt organite nucleare corpusculare responsabile

de biogeneza acizilor ribonucleici care intrai n constitutia ribozo-
milor. Nucleolii nu prezinta membrana proprie. Se gasesc 1n toate
celulele eucariote, numai n interfaza. Dimensiunile lor variazai n-
tre 1 - 2 µm. Nucleolii ocupa pozitii variatei
n nucleu: centrala, pa-
racentrala sau sub membrana nucleara.
Structura in microscopia fotonica

Nucleolul este deosebit de refringent. Are un contur ne-
regulat i continut heterogen. n coloratia uzuala cu hematoxilina-
eozina, nucleolii apar ca i corpusculi bazofili. Prin colorare cu im-
pregnatie argentica, distingem doua componente ale nucleolului:
nucleo/ema sau cromatina perinucleolara la periferie;
- pars amorfa sau corpul nucleolar.
Ultrastructura nucleolului
Se disting patru componente ale structurii nucleolare:
- pars fibrosa (componenta fibrilara) contine fibrile cu un
diametru de 50 A, dispusein retea (formate din ARN);
pars granu/osa (componenta granulara), contine gra-
nule cu diametrul de 200 A, asemanatoare cu ribo-
zomii (formate din ARN);
pars cromosoma (componenta cromozomiala) con-
tine fibrile dispuse la periferia nucleolului precum i
i
n interiorul acestuia. Pars cromosoma contine AON;
pars amorpha (componenta nestructurata) este omo-
gena, mai putin electrono-densa. Este dispersata printre
primele trei componente i este formata din proteine.
272
Nucleul
fn functie de ultrastructura, nucleolii se clasificai

n:
nucleoli reticular,· - reprezinta forma cea mai co-
muna,i n care componentele fibrilara i granulara
sunt dispuseintr-o retea densa;
nucleoli compacfi - contin elements granulare i
fibrilare foarte aglomerate; se gasesc numaii n nu-
cleii anumitor celule, cum ar fi limfocitele;
nucleoli inelari - sunt structuri neobinuite,i n care
elementele fibrilare i granulare sunt dispuse periferic.
Compozitia biochimica
Principalele elements care compun nucleolul sunt:
- ARN nucleolar - reprezentat de diferite stadii de ma-
turare ale ARNr (ribozomal);
AON nucleolar;
proteine nucleolare - reprezinta 90% i pot fi pro-
teine bazice sau histone i proteine acide sau non-
histone. Proteinele acide sunt reprezentate de enzime
care catalizeaza biosinteza i maturarea ARN;
mici cantitati de Ca, Zn, Mg.
Rolul nucleolilor
rol in sinteza ARNr. fn nucleol, se gasesc fragmente
de AON utilizate ca tipar numai pentru sinteza ARNr
(ribozomal);
rol in pregatirea mitozei - prezenta nucleolilori
n in-
terfaza este necesara desfa urarii unei mitoze corecte;
rol in transferul ARNm §i ARNti n citoplasma - nu-
cleolul reprezinta o statie intermediara pentru ARNm
i ARNtin drumul lor catre citoplasma.
Biogeneza nucleolilor
Pe parcursul unui ciclu celular, nucleolii nu sunt structuri
permanente. Ei sunt prezentii n interfaza i dispari
n timpul mi-
tozei. Aparitia lori
n telofaza depinde de cromozomii somatici: 13,
14, 15, 21 i 22, cromozomi care sunt denumiti organizatori nuc/eolari.
Organizatorii nucleolari sunt responsabili pentru formarea
componentelor cromozomiale ale nucleolilor (ARNm); celelalte trei
components - fibrilara, granulara i nestructurata sunt sintetizate
n faza G1 a ciclului celular.
i
273

Hemmerich, P. & Diekmann, S. (2005). Visions of the cell nucleus. Ste-
venson Ranch, Calif.: American Scientific Publishers.
Hnilica, L. S., Stein, G. S. & Stein, J. L. (1989). Histones and other basic
nuclear proteins. Boca Raton, Fla.: CRC Press.
Karp, G. (2010). Cell biology (61h ed.). Hoboken, NJ: Wiley.
Kouzarides, T. (1995). Organisation of the cell nucleus. Cambridge:
Company of Biologists.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (61h ed.). New York, N.Y.:
Freeman.
Mitchell, J. S. (1960). The cell nucleus. New York: Academic Press.
Mayne, G. (1980). Methods in ultrastructural cytochemistry of the cell
nucleus. Stuttgart; New York: Fischer.
Wang, E. (1990). Biochemical and structural dynamics of the cell
nucleus. San Diego: Academic Press.
274
Sinteza fi secretia
celulari
Procesele de sinteza $i secretie ce-
/ulara reprezinta modalitafi de ras-
puns ale ce/ulei, ca urmare a recep-
fionarii de semnale din varii surse.
Punctul central Tn aceste procese
este reprezentat de sinteza §i matu-
rarea proteinelor. Aceste procese au
foe rn citoplasma $i implica partici-
parea unor organite celulare cum ar
fi ribozomii, reticulul endoplasmatic
(RE) §i aparatuf Go/gi (AG). Daca
sinteza proteinefor are foe la nivelul
ribozomilor liberi din citoplasma sau
a ribozomilor ata§afi membrane/or
reticulului endoplasmatic rugos, ma-
turarea proteinelor nou sintetizate se
realizeaza atat ln compartimentul
luminal al RE, cat §i ln cistemele AG.
Proteinele sintetizate §i maturate la nivelul RE §i AG sunt
dirijate spre plasmalema, unde au lac procese de exocitoza, reali-
zand finalizarea raspunsului celular secretor. Traiectoria acestor
produ9i ai secretiei urmeaza un principiu comun - transportul vezi-
cular de la nivelul organitelor membranare de sinteza (RE) catre
organitele membranare de maturare (AG) 9i ulterior, pe variate cai,
spre plasmalema, pentru secretia prin exocitoza.
Proteinele sintetizate sunt fie proteine de secrefie, fie pro-
teine constitutive, care var ramane inseratei n structura membra-
nelor celulei sau ale altar membrane ale organitelor din aceea9i
celula. Transportul proteinelor sintetizatei
ntre compartimente se rea-
lizeaza, eminamente, prin vezicule de transport care provin, prin
nmugurire, din compartimentul de origine 9i care var fuziona ulterior
i
cu membranele compartimentului consecutiv pe traiectoria secretorie.
Este important de mentionat ca, de la aparitia veziculelor
dintr-un compartiment 9i pana la fuziunea cu membranele compar-
timentului urmator, membranele veziculare pastreaza aceea 9i si-
metriei n raport cu citoplasma: fata non-citoplasmatica ramane
aceea 9i pe tot parcursul procesului secretor. Astfel, o proteina
inseratai n membrana RER sau eliberatai n lumenui acestuia va fi
transportata de-a lungul caii secretorii, fara a suferi procese de
translocare sau de alterare a pozitiei n membrana.
Gaile secretorii posibile sunt prezentatei n fig. 89. Odata
sintetizate la nivelul RER, proteinele sunt inclusei n vezicule de
transport anterograd; aceste vezicule fuzioneazai ntre ele 9i for-
meaza un compartiment membranar aplatizat, denumit cisterna
Golgi-cis (fata de formare a AG). Anumite proteine din RE provin
din cisternele cis ale AG prin intermediul unor vezicule de trans-
port retrograd. Din cisternele cis ale AG, proteinele sunt inclusei n
noi vezicule de secretie care progreseaza 9i fuzioneaza cu cister-
nele mediale ale AG. De aici, proteinele sintetizate circula prin alte
vezicule anterograde spre zonele trans ale AG. Exista §i proteine
secretorii destinate i altar compartimente celulare, cum ar fi mito-

condriile, lizozomii, peroxizomii, nucleul; aceste proteine sunt diri-
jate spre o retea complexa de membrane 9i vezicule numita re-
teaua trans-Gol g i (TGN). Ulterior, proteinele sunt dirijatei
n trei ti-
puri de vezicule.
1. Prima categorie de vezicule este emisa prini nmugurire din
reteaua trans-Golgi i sei ndreapta direct spre plasmalema
pentru procese de exocitoza. Aceste vezicule sunt caracte-
risticei
n toate tipurile celulare pentru anumite proteine de
secretie care sunt emisei n mod continuu, realizand un pro-
ces de secretie constitutiva. Exemplei n acest sens sunt:
secretia colagenului de catre fibroblaste sau secretia pro-
teinelor serice de catre hepatocite.
2. A doua categorie este reprezentata de vezicule care sunt
stocatein citoplasma panai n momentuli n care un semnal
specific de exocitoza initiaza procesul de eliberare a conti-
nutului acestor vezicule catre exteriorul celulei. Aceasta ca-
le de secretie este numita discontinua sau reglata. Unii
hormoni peptidici (ACTH - adenocorticotrop, insulina, glu-
cagon) din celule endocrine sau diferite enzime digestive
din celulele acinare pancreatice, precum i unii neurotrans-
mitatori neuronali urmeaza aceasta cale de secretie.
3. A t'reia categorie de vezicule de secretie seindre' apta spre
lizozomi.
278
Sinteza i secretia celulara
Llzozom
trans-Golgi t6v ..-----=-------

Progreslune vezlculara ....
ntre compartimentele GolgiT
i
Transport vezicular retrograd
Golgi-medial ltre compartlmentele Golgl
n
RE Rugos
Sinteza proteinelorl
a niveh,B ribosOmilor
atatatl RE; transport co,.translatlonal
al protelnelorin RER
Figura 89: Cai secretorii posibile rn celula

(RER - reticul endop/asmatic rugos,
REN - reticu/ endop/asmatic neted, AG - aparat Golgi)
279
. Biologie celulara i molecuiara
10.2.1. GENERALITATI PRIVIND BIOSINTEZA

PROTEINELOR
Abilitatea celulelor de a mentine un Tnalt nivel de ordine Tntr-un

univers haotic depinde de informatia genetica, informatie care este
exprimata, mentinuta, replicata i ocazional ameliorata printr-o serie
de procese specifice cum ar fi: sinteza ARN i a proteine/or, repa-
rarea AON, replicarea AON i recombinarea genica.
n cadrul acestor procese, informatia dintr-o secventa line-
i
ara de nucleotide este transpusa fie Tntr-un alt !ant de nucleotide
(AON sau ARN), fie Tntr-un lant de aminoacizi (peptid).
Proteinele constituie mai mult de 50% din masa uscata a
unei celule, iar sinteza lor este esentiala pentru mentinerea statu-
sului celular, ca i pentru cretere i dezvoltare. Sinteza protei-
nelor reprezinta eel mai complex proces biosintetic descris pana la
momentul de fata; aceasta deoarece, la eucariote, procesul de
sinteza a proteinelor implica activitatea a 70 proteine ribozomale
diferite, a peste 20 de enzime necesare activarii aminoacizilor pre-
cursori, a zeci de proteine auxiliare alaturi de factori de initiere,
elongare i terminalizare, a aproximativ 100 de enzime aditionale
pentru procesare finala a diferitelor proteine, a peste 40 de tipuri
de ARNt. Circa 300 de macromolecule sunt implicate Tn coope-
rarea necesara sintezei proteinelor.
Necesar de ,,materiale" pentru biosinteza proteinelor

Sinteza proteinelor necesita, ca i constructia unei cladiri,
,,caramizi" care, Tn acest caz, sunt reprezentate de aminoacizi;
,,transportorii" - ARNt specifici;
,,constructori" - ribozomii;
,,un plan", aici reprezentat de informatia cuprinsa Tn ARNm,
copiat pe baza codului genetic cuprins Tn AON.
280
Sinteza 9i secretia celulara
ARNt - de transfer
ARNt reprezinta sistemul de transport pentru aminoac1211
care se var constitui, n citoplasma,in viitorul lant peptidic; actio-
neaza ca 9i molecule-adaptor, care var transla (traduce) secventa
nucleotidicai
n secventa peptidica.
Molecula de ARNt este o molecula mica, avand circa 70 -
90 nucleotide. Are o structura specifica, cu o extremitate pose-
dand sistemul de conectare la secventa codonului de pe ARNm
(prin urmare, un anticodon) 9i o alta care cuprinde sistemul de co-
nectare la un aminoacid specific.
O a doua functie a ARNt este aceea de a activa un ami-
noacid (AA) specific, cuplandu-1 la capatul carboxi-terminal printr-o
legatura deinalta energie; astfel, capatul carboxi-terminal ,,incar-
cat" din punct de vedere energetic va putea sa se cupleze cu re-
giunea amino-terminala a urmatorului aminoacid adus de un alt
ARNt. Activarea este posibila numaii n prezenta unei enzime,
specifica pentru fiecare aminoacid, numita aminoacil-ARNt-sin-
tetaza. Activarea este necesara, deoarece un AA neactivat nu va
putea fi adaugat unui lant polipeptidicin cre9tere. Activarea AA
necesita energia furnizata de hidroliza ATP.
buda D
(mziduuri
10·25}
Figura 90: Structura ARNt Figura 91: Structura ARNt

(forma desfa§urata) (structura tridimensionala)
281
Biologie celulara !;ii moleculara
Ribozomii
Ribozomii (corpusculii lui Palade) sunt organite celulare ne-
membranare ce participa la sinteza proteinelor prin asamblarea
acizilor amina1i 'i'ntr-o ordine stabilita de ARNm !;ii ARNt. Sunt pre-
zenti 'i'n toate celulele, cu exceptia eritrocitelor; se gasesc liberi 'i'n
citoplasma sau ata!?ati membranelor reticulului endoplasmatic ru-
gos !;ii membranei externe a 'i'nveli!;iului nuclear. Numarul ribozo-
milor variaza 'i'n functie de tipul celular !;ii starea funcvonala a celulelor.
La eucariote, ribozomul, ca !;ii organit fundamental al sinte-
zei proteice, este un nano-sistem !;ii, 'i'n acela!;ii timp, eel mai mare
complex biologic asimetric, structura sa fiind determinata prin di-
fractie cu raze X.
Scurt istoric:
1899, Garnier descopera structuri intens bazofile 'i'n cito-
plasma celulelor glandulare, cu rol 'i'n elaborarea !;ii transfor-
marea produ!;iilor de secretie, numite ,,ergastoplasma";
1938, A Claude izoleaza, prin ultracentrifugare diferentiata,
structuri de forma granulara pe care le nume!;ite microzomi
!;ii, ulterior, constata ca aceste granule au un continut bogat
'i'n ARN;
utilizand RN-aza !;ii spectrofotometria 'i'n ultraviolet - Cas-
persson !;ii Brachet stabilesc relatia stransa ce exista 'i'ntre
cantitatea de ARN 'i'n citoplasma !;ii capacitatea de sinteza
proteica a celulei, intuind rolul acestor molecule 'i'n proteo-
geneza;
1953, Porter - descrie existenta, 'i'n citoplasma, a unei re-
tele membranare pe care o nume!;ite RE, identic cu ergas-
toplasma descoperita de Garnier;
1956, G. E. Palade i Siekevitz, ca urmare a analizei mo-
leculare a microzomilor ob\inuti prin ultracentrifugare, con-
stata ca ace!;itia au un continut bogat 'i'n ARN !;ii Yi denumesc
ribozomi.
Structura morfologica
Ribozomii nu pot fi observati 'i'n microscopia fotonica.
Tn microscopia electronica, 'au fast descri!;ii ca !;ii corpusculi
elipsoidali cu diametrul mare de 20 - 25 nm, iar eel mic, de 15 -
17 nm.
282
8inteza 9i secretia celulara
Din punct de vedere ultrastructural cuprind doua subunita(i:

Subunitatea mica ¢ la eucariote, au un coeficient de
sedimentare 408 (308 la procariote);
Subunitatea mare ¢ la eucariote, au un coeficient de
sedimentare 608 (508 la procariote).
8ubunitatea mica prezinta o proeminenta numita cap, o
platforma 9i o baza sau corp (platforma 9i baza reprezinta 2/3 din
unitate). ntre cap 9i baza, se gase9te o strangulatie.
8ubunitatea mare prezinta trei proeminente, din care una
centrala numita protuberanta centrala, iar celelalte - tulpina 9i
creasta.i
ntre protuberanta entrala 9i creasta exista o depresiune 9i
un canal prin care avanseaza lantul polipeptidici n reticulul en-
doplasmatic rugos.
Ribozomii se formeaza prin autoasamblarea,i n citoplasma,
a celor doua subunitati,in prezenta ionilor de Ca + 9 i Mg2 +. lnfor-
2
matia necesara asamblarii ribozomilor este continutai n compo-

nentele sale, nefiind necesari factori neribozomali; ARNr este esen-
tial acestui proces. ARNr, dupa ce este sintetizat, este i
mbracat n
proteine, formand precursori ribozomali ce treei
n citoplasma.
Structura moleculara a ribozomilor

Ribozomii au o masa moleculara de 3,3 MDa i sunt com-
pu9i din:
ARN ribozomal (ARNr). Toate speciile de ARNr provin dintr-
un precursor comun care, dupa ce a fast sintetizat pe ma-
trita AON, este scindat. Pe langa rolul important pe carei i
arein asamblarea proteinelor ribozomale, ARNr joaca rol
important i
n procesul de recunoa 9tere i ntre ribozom-
ARNm-ARNt;
proteine bazice bogatein arginina !;li lizina;
2 2
ioni de Mg + 9 i Ca +.
a) subunitatea mica este formata dintr-o molecula de ARNr
cu un coeficient de sedimentare 188 !;li pondere moleculara
600.000 Da !;li 33 de proteine diferite;
b) subunitatea mare este formata din:
3 molecule ARNr cu un coeficient de sedimentare 288,
5,88 9i 58;
45 proteine diferite;
283
Structura tridimensionala a ribozomilor a fast descrisa com-

plet pentru E. coli,i n august 2000. Astfel, s-a constatat ca pro-
teinele din compozitie sunt structuri de asigurare a unitatii i mo-
bilita\ii ribozomale, fiind situate mai mult la suprafata ribozomului
de unde trimit extensii sinuoase spre interior, unde sunt locatiile de
cuplare a ARNt.
ribozom eucariotic (fobolan) ribozom procariotic (E. coli)

sos 705
4,22 MDa 2,52 MDa
ARN 18S ARN 28S+5,85S+5S ARN 16S ARN 23S
33 proteine 49 proteine 21 proteine 31 proteine
Figura 92: Subunitafile ribozomale §i componentele for molecu/are
Poliribozomii
Reprezinta complexe mari de 1O - 100 ribozomi i o
molecula de ARNm care se formeaza, mai ales, n celulele cu o
capacitate crescuta de sinteza a proteinelor. Aceste complexe
care pot transla simultan mai multe regiuni dintr-o singura mole-
cula de ARNm reprezinta un poliribozom sau polizom. Astfel, ci-
tirea ARNm este mult mai eficienta, facand posibila sinteza simul-
tana a unor c6pii multiple din polipeptidul specificat:
molecula de ARNm are o lungime variabilai n functie de
cantitatea de informatie continuta;
numarul ribozomilor ce participa la formarea poliribozomilor
estei
n functie de marimea proteinei ce trebuie sintetizata
(la sinteza colagenului participa - 100 ribozomi, la sinteza
globinei - 4 - 6 ribozomi);
284
ribozomii se ataeaza la moleculele de ARNm numai 1n

momentul sintezelor proteice - la terminarea lor, se disper-
seaza 1n citoplasma 1n cele doua subunitati;
poliribozomii liberi (ribozomi plus ARNm) participa la sin-
teza proteinelor structurale;
poliribozomii ataati la membrana RE intervin 1n sinteza
proteinelor de export (hormoni, mucus, enzime etc.).
ARNm, planul constructiei proteinelor

ARN este sintetizat (copiat) plecand de la molecula bica-
tenara de AON, sub influenta unor enzime denumite ARN-poli-
meraze; procesul poarta numele de transcripfie. Toate cele trei
tipuri de ARN (transfer, mesager sau ribozomal) reprezinta c6pii
ale unor secvente de AON.
ARNm este, prin urmare, o molecula monocatenara, cu lun-
gimea cuprinsa 1ntre 70 i 10.000 de nucleotide. Dei, 1n principiu,
orice parte a moleculei de AON poate fi transcrisa, numai anumite
zone sunt utilizate 1n acest scop, 1n functie de anumite secvente
nucleotidice, denumite promotori.
Sunt definite trei tipuri de ARN, i anume, ARNm, ARNt 9i
ARNr.
Codul genetic i modul de interpretare

Tn timpul sintezei proteice, complexul translational se mica
dinspre capatul 5' spre capatul 3' al moleculei de ARNm. Fiecare
aminoacid este specificat 1n secventa ARNm de catre un triplet de
nucleotide, denumit codon, care corespunde unei secvente simi-
lare de nucleotide la nivelul ARNt, anticodon.
Deoarece numai un anumit ARNt poate fi complementar
unui anumit codon de pe ARNm, acesta din urma va determina
aminoacidul specific ce va fi adaugat, 1n timp ce ARNt indica or-
dinea 1n care va fi inserat.
Avand 1n vedere ca ARN este compus din patru tipuri de
nucleotide, exista 64 de posibilitati de a aranja cate trei nucleotide
1ntr-un codon (4x4x4). Trei secvente din aceste 64 nu codifica
pentru aminoacizi, reprezentand codonii stop. Raman, prin ur-
mare, 61 de codoni care vor codifica pentru 20 de aminoacizi. De
aceea, majoritatea AA sunt reprezentati de mai mult de un codon,
motiv pentru care codul genetic este denumit degenerat. Doi AA,
285
Met i Trp sunt reprezentati de un singur codon i, n acelai timp,

sunt cei mai putin abundenti AA dintr-o celula.
3'
5•
5• 'A.R·N
·.···m
··· · ·· ..
1 2 3
codon
Figura 93: Complementaritatea ARNm-ARNt.

Alinierea ARNm §i ARNt este antiparalela.
3 2 1 2 1 3
anticodon (3') G
-------
c
----··-
c ··--
I G (5')
codon (5') c G G c (3')
1 2 3 1 2 3 1 2 3
Figura 94: Trei tipuri de relafii posibi/e codon - anticodon
atunci cand anticodonul ARNt confine inozinat
Degenerarea codului genetic consta fiei n faptul ca exista

mai multi ARNt specifici pentru acelai aminoacid, fiei n acela ca
un ARNt poate cupla mai multi codoni diferiti. Pentru unii ami-
noacizi, exista mai mult de un ARNt, iar unele molecule de ARNt
sunt astfel construite,i
ncat necesita o omologie numai la nivelul
286
Sinteza i secretia ce!ulara
primelor doua nucleotide din codon, tolerand o nepotrivire la eel

de-I treilea - ipoteza wobble (§ovaiala).
De exemplu, alanina (Ala) este codata de tripletele GCU,
GCC, GCA sau GCG. Primele doua perechi de baze (GC i AT),
la nivelul cuplului codon - anticodon, formeaza legaturi puternice
de hidrogen (numite legaturi Watson-Crick); i n schimb, a treia
baza azotata din codon (A, U sau C) formeaza punti de hidrogen
slabe cu reziduul inosinat, localizat n prima pozitie a anticodonului
(vezi figura de mai sus).
Rezumat:
1. Secventa de AA dintr-o proteina este construita pe baza translarii
informatiei codificatei
n ARNm, reprezentand copia unei catene
din AON. Acest proces este realizat de catre ribozomi.
2. Aminoacizii sunt specificati de codonii ARNm care reprezinta
triplete de nucleotide. Procesul de translatie necesita molecule
adaptor care sunt ARNt. Aceste molecule contin triplete de
nucleotide - anticodoni - care corespund codonilor din ARNm.
ARNt vor insera aminoacizii n pozi1iile lor specifice din lantul
polipeptidic.
3. Codonul AUG semnalizeaza i nceputul translatiei. Tripletele
UAA, UAG i UGA reprezinta codoni-stop.
4. Codul genetic standard este degenerat: prezinta multiple cu-
vinte-cod pentru aproape fiecare aminoacid.
5. Cuvintele de cod sunt universale la toate speciile cunoscute,
cu mici exceptii la mitocondrii i unele unicelulare.
6. A treia pozitie din fiecare codon este mai putin specifica decat
primele doua.
1b.2.2.
ETAPELE BIOSINTEZEI PROTEICE $1
EVENIMENTE MOLECULARE IMPLICATE
Sinteza proteinelor include trei etape principa/e i doua -

accesorii, una care precede sinteza propriu-zisa - activarea pre-
sintetica a precursorilor i una postsintetica - procesarea lantului
de aminoacizi.
n rezumat, etapele se prezinta dupa cum urmeaza:
i
287
Pentru sinteza unui polipeptid, cu o secventa

definita, sunt necesare doua conditii biochimice:
- grupul carboxil al fieparui aminoacid trebuie sa fie
activat pentru a facilita formarea legaturii peptidice;
- trebuie stabilita o legatura Tntre fiecare nou AA
i informatia din ARNm-ul care Tl codeaza.
ETAPA I Ambele necesitati sunt Tndeplinite de ataarea
unui AA la un ARNt specific, Tn prima etapa a
ACTIVAREA sintezei proteice. Ataarea AA corect este esen-
PRESINTETICA A tiala. Aceasta reactie are loci n citoplasma i nu Tn
PRECURSORILOR ribozom. Fiecare dintre cei 20 de aminoacizi
este cuplat covalent la ARNt specific prin energia
furnizata de hidroliza ATP, tn prezenta unor
enzime de activare dependente de Mg, numite
ARS (amioacil ARNt-sintetaze). Odata ce AA
este ataat la ARNt, se formeaza un aminoacil-
ARNt (AA-ARNt), iar AA este numit ,,activat".
ARNm care transporta codul pentru polipeptidul
de sintetizat se cupleaza la subunitatea ribo-
zomala mica i la AA-ARNt. Apoi, are loc cu-
ETAPA II plarea subunitatii mari, pentru a forma com-
plexul de initiere. AA-ARNt de initiere i codonul
.
INITIEREA AUG de pe ARNm semnalizeaza debutul sin-
tezei polipeptidului. Acest proces necesita GTP
i este indus de o serie de factori numiti factori
de initiere.
Polipeptidul nascent este alungit prin legarea
covalenta succesiva a unitatilor AA, fiecare fiind
transportat la ribozom, i n pozitia corecta de
ETAPA Ill-a
catre ARNt specific. Elongarea necesita protei-
ne citoplasmatice numite factori de e/ongare.
ELONGAREA
Ataarea fiecarui AA-ARNt i micarea ribozo-
mului de-a lungul ARNm este determinate de
hidroliza GTP (1 GTP la fiecare reziduu AA ada-
ugat la polipeptid).
Completarea lantului polipeptidic este semnalizata
ETAPA IV-a
de codonii-stop din ARNm. Polipeptidul este eli-
TERMINALIZAREA
berat din ribozom cu ajutorul factorilor de eliberare.
Pentru determinarea formei active biologic, poli-
peptidul trebuie pliat pentru determinarea con-
formatiei tridimensionale.l nainte sau dupa pli-
ETAPA a V-a
ere, polipeptidele sufera o procesare enzimatica
PLIERE fjl PROCESARE
care include Tnlaturarea unor aminoacizi (de
POSTTRANSLATIONALA
obicei, de la capatul amino-terminal), aditia gru-
parilor acetil, fosforil, metil, carboxil etc.), ata-
area unor grupari carboxilice sau prostetice.
28
8
10.2.2.1. ETAPA I - ACTIVAREA PRESINTETICA A PRE·

CURSORILOR
Aminoacil-ARNt-sintetazele activeaza ARNt.

Legarea ARNt la AA,i n vederea activarii acestuia, este un
moment esential al biosintezei proteice i este catalizat de 20
aminoacil-ARNt sintetaze (ARSs), fiecare fiind capabila de a re-
cunoate un anumit AA i ARNt-ul sau corespunzator. Aceste
enzime de cuplare leaga un AA la hidroxilii 2' sau 3' care sunt
liberi la nivelul ribozei din adenozina, i nspre capatul terminal al
moleculei de ARNt. Reactia de cuplare a AA este o reactiei n doi
pai, dependenta de hidroliza ATP.
Tn prima etapa, enzima, aminoacidul i ATP formeaza un
complex i elibereaza PPi.
Tn a doua etapa, grupul aminoacil este transferat din com-
plexul enzimatic pe ARNt, care va elibera AMP.
Aproape jumatate din ARSs transfera grupul aminoacil la
hidroxilul 2' al adenozinei, constituind sintetaze de clasa I, iar cele-
lalte, care transfera aminoacilul la hidroxilul 3' al adenozinei, re-
prezinta sintetaze de clasa II. AA-ARNt rezultat pastreaza energia
rezultata din hidroliza ATP, reziduul de aminoacid fiind astfel ac-
tivat. Echilibrul reactiei este dirijati
nspre activarea aminoacidului
datorita pirofosfatazei care desface legaturile fosfoanhidridicei nalt
energetice din pirofosfat.
Tntreaga reactie se poate scrie sub forma:
AA + ATP + ARNt aminoacil-ARNt + AMP + 2Pi
Ecuatia este reprezentata grafici

n fig. 95:
289
ARNt
R
H2N-6 -c -c(0
; 0
H
Figura 95: Schema de activare a aminoacidu/ui

§i formarea complexului AA-ARNt
Recent, s-a determinat structura ARSs din E. coli i din

multe eucariote, observandu-se ca fiecare tip de enzima are un
anumit model (secventa de AA) caracteristic fiecarei clase. Deter-
minarea structurii tridimensionale a celor doua tipuri de ARSs a
aratat diferentei
n ceea ce privete legarea ARNt. Fiecare molecula
de ARNt este recunoscuta de o aminoacil-ARNt-sintetaza specifica.
ldentificarea ARNt de catre ARS specifica este la fel de importanta
pentru translatie ca i asocierea corecta codon - anticodon. Odata
ARNt ncarcat cu un AA, asocierea codon - anticodon va directiona'
ARNt pe locul corect din ribozom. Daca este ataat un alt AA, se
produce o eroarein sinteza lantului.
Un experiment clasic demonstreaza acest fapt. Un reziduu
de cisteina deja ataat la ARNt a fasti nlocuit cu un rest de ala-
nina, astfel ncat cisteinil-ARNtCys a devenit alanil-ARNtAla. Ada-
ugati
n sinteza unei lant polipeptidicin cretere, Tn dreptul codonilor
pentru Cys, a aparut Ala. S-a demonstrat astfel ca numai
290
anticodonul ARNt este implicati

n recunoaterea ce va duce la
ataarea unui anumit AAi
n polipeptid.
aminoacil-ARNt
(cu aminoacid activat}
Figura 96: Activarea presintetica a aminoacidului §i ro/ul AA-ARNt-sintetazei
Nu esteinca elucidat,i
n totalitate, modul n care ARS iden-
tifica ARNt specific. Se tie totu i ca o ARS poate adauga acela i
291
AA la doi (sau mai multi) ARNt, cu anticodoni diferiti care codeaza

acelai AA. Astfel, fiecare dintre aceti ARNt diferiti au situsuri de
cuplare similare care vor fi recunoscute de sintetaze.
i
n vederea identificarii unui anumit AA de catre ARNt, un rol
important 11 joaca structura bratului acceptor al ARNt. lnsertia unei
singure perechi de baze la nivelul bratului acceptor pentru AA la
ARNtPhe poate comuta identitatea acestuia de la Phe la Ala.
Prin urmare, Tn aceasta etapa, are loc ataarea unei mole-
cule libere de Met la ARNt-Met (specific) sub actiunea unei ami-
noacil-ARNt-sintetaze specifice. Exista eel putin doua tipuri de
ARNtMet. Primul tip, desemnat sub sigla ARNtiMet, poate initia
sinteza proteica, Tn timp ce al doilea poate incorpora Met, dar nu
participa la creterea lantului polipeptidic. Aceea i enzima, metio-
nil-ARNt-sintetaza poate ataa Met, la ambele tipuri de ARNt, dar
numai complexul metionil-ARNtiMet poate cupla subunitatea ribo-
zomala mica, Tn vederea initierii sintezei proteice (la bacterii, gru-
pul amino al Met este formilat).
10.2.2.2. ETAPA 11 - INITIEREA

'
Semnalul de initiere la nivelul ARNm este codonul AUG.
Complexul Met-ARNt-Met (asistat de un complex proteina-
GTP) se ataeaza la subunitatea ribozomala mica i Tmpreuna se
leaga la ARNm, pe un situs specific, localizat, adesea, Tn imediata
vecinatate a codonului de initiere AUG.
La majoritatea bacteriilor, subunitatea ribozomala mica iden-
tifica situsul de initiere prin interactiunea dintre anumite secvente
din ARNr16s i ARNm. La nivelul ARNm, exista aa-numita sec-
venta Shine-Delgarno, chiar langa situsul de start al sintezei pro-
teice, secventa care este complementara cu o secventa la sau ime-
diat langa capatul 3' al moleculei de ARNr16s. Astfel:
ARNm 5'-UAAGG.AGG-(5-10 nucleoUde}-AUG
HO-AUUCCUCC-(aprox..1400 nucJeoUde)-5' ARNt
Semnalele start pentru sinteza proteica nu se potrivesc exact
cu secventa din ARNr, dar, Tn general, exista o corespondenta la
ase din opt nucleotide. Astfel, ARNr bacterian joaca un rol esential
Tn selectarea unui situs de start al sintezei proteice la nivelul ARNm.
Astfel, ribozomii bacterieni pot initia sinteza proteica la nivelul aces-
292
tor situsuri, chiar daca acestea sunt situate Tn mijlocul unor mo-
lecqle de ARNm foarte lungi.
La eucariote, mecanismul prin care subunitatea ribozomala
mica recunoate situsul de ini(iere nu este complet elucidat. Primul
semnal recunoscut este capatul 5', prezent la toate moleculele
ARNm la eucariote. Totui, unele molecule de ARNm viral care
sunt translate prin mecanismul celula-gazda, Tn eucariotele infec-
tate, nu poseda capat 5'. n acest caz, recunoaterea are loc cu
ajutorul unor factori proteici aditionali.
Dupa recunoaterea capului 5', are loc o glisare a sub-
unitatii mici de-a lungul moleculei de ARNm, Tn vederea localizarii
AUG. De obicei, este utilizat primul codon AUG, dar eficienta
initierii este accentuata considerabil de prezenta unor anumite nu-
cleotide Tn preajma AUG. Aceasta secventa, esentiala pentru
initiere, situata la capatul 5' al ARNm, se numete secvenfa Kozak
(Marilyn Kozak).
ARNm 5'-ACCAUGG-
Ca suport al acestei ipoteze, mentionam ca un ARNm cir-

cular artificial care nu are capete nu va fi translat. De asemenea,
ARNm fara capatul 5' sunt slab translate, iar mutatiile survenite la
nivelul secven\ei Kozak due la o scadere a initierii sintezei pro-
teice. Totui, chiar daca Tn cazul virusului poliomielitei, lipsete ca-
patul 5', ribozomul gasete situsul de initiere la 600 de nucleotide
de acest capat. Se pare ca la eucariote, translatia ARNm are loc
dupa recunoaterea capului 5' fie prin utilizarea primului AUG, fie
prin recunoaterea unui AUG proximal, datorita secventei Kozak
specifice.
Subunitatea ribozomala mica poate gasi situsul de initiere,
datorita unui grup de proteine, denumite factori de ini(iere (IF). S-
au caracterizat trei IF la procariote i eel putin cinci, la eucariote.
La procariote, /F3 este esential pentru gasirea AUG.
La eucariote, complexul e/F4 asigura faptul ca ARNm este
monocatenar (asigurand astfel atat fixarea capului 5', cat i eli-
minarea unor structuri secundare nedorite); de asemenea, e/F 4
asigura faptul ca 5' este pregatit pentru ca subunitatea mica sa
localizeze AUG. Numai dupa ce subunitatea mica gasete i leaga
AUG, subunitatea mare poate fi adaugata.
293
lnitierea lantului polipeptidic - proces dinamic
Acest proces cuprinde cateva subetape:

• e/F2 care aduce cuplata o molecula de GTP se va lega de Met-
ARNtiMet (la procariote, Met de la ARNtMet este formilata);
• efF2 Met-ARNtiMet leaga e/F3 §ii complexul e/F4 alaturi de
ARNm §ii R40;
• are lac pozitionarea corecta a Met-ARNtiMet la AUG, cu
consum energetic (ATP §ii GTP). Este eliberat e/F3;
• este cuplata R60, cu interventia e/F1 §ii ef Fs. Se consuma o
molecula de GTP. Se formeaza complexul de inif iere, cu
ribozomul functional, gata de sinteza §ii care va cuprinde
locurile E §ii P (spre capatul 5') §ii locul A (spre capatul 3').
Sunt eliberati factorii de initiere care-§ii reiau functia.
I
gena 3' regiune netrans!atata
Figura 97: lnifierea lanfu/ui po/ipeptidic. Capetele 3' §i 5' ale ARNm sunt cup/ate
cu un complex proteic care cuprinde unii factori de inifiere §i proteina de cup/are
PAB. e/F4E §i e/F4 G sunt parte a unui complex mai mare, numit e/F4F, complex
care cupleaza subunitatea ribozomala mica (40S).
294
10.2.2.3. ETAPA 111 - ELONGAREA

Procesul de elongare presupune interventia unor factori de
elongare (EFTu, EFTs i EF-G la eucariote).
f n acest moment, Met-ARNtiMet ocupa locul Pin ribozom
(fig. 100-1).
lnsertia
•
Sub influenta unui complex EFTu-GTP, are loc pozitionarea
corecta a unui AA-ARNti n locul A al ribozomului (fig. 100-2,
100-3). GTP este hidrolizat, iar EFTu-GDP este regenerat sub
influenta EFTs, fiind retransformati
n EFTu-GTP.
'
Locul A este liber pentru al doilea

AA·ARNt care va fi cuplat la lant
5' a· ARNm
Al doilea AA-ARNt este adus de catre EFTu-GTP,

eliberat ifixat pe locul A. GTP din complex este
hidro!izat iar EFTu-GDP este eliberat n citoplasma
uncle va regenera EFTu-GTP sub influenta EFTs-GTP
Pi
5' 3·ARNm
Al doilea AA·ARNt
este inserat in locul A
Figura 98: Elongarea lanfu/ui polipeptidic. Faza de insertie
295
Biologie celulara !iii moleculara
Transferul
Aici, lantul peptidic de pe locul P (in acest caz, doar Met) este
desprins de ARNt de pe locul P !iii cupleaza AA de pe locul A printr-o
legatura peptidica. Locul P va fi ocupat de un ARNt deacilat, iar locul
A, de un dipeptidil ARNt (fig. 100-4, 100-5, 100-6).
Formarea legaturii
peptidicei
ntre NH2
al AA de pe locul A ·
COO- al AA de pe
locul P
3'
dipeptidil-ARNt-2
trecerea AA din
locul P cu
formarea unui
dipeptidil ARNt
pe !ocul A
ARNm s .!IBI 3'
Figura 99: Elongarea /anfului polipeptidic. Faza de transfer a aminoacidului de pe

ATNt de pe /ocu/ P pe AA-ARNt de pe locu/ A, cu formarea unui dipeptidil-ARNt
296
Sinteza i secretia
celulara Translocarea
Prin hidroliza unei molecule de GTP, ribozomul se depla-
seaza catre capatul 3', cu un codon. Astfel, ARNt de pe fostul lac
P ajunge 1n locul E de pe ribozom i este eliberat 1n citoplasma,
locul P va fi ocupat de dipeptidil ARNt din locul A, iar locul A va fi
liber (fig. 100-7) i gata de a primi un nou AA-ARNt (fig. 100-8).
Acest proces este mediat de factorul de elongare EF-G, proteina
care aduce cuplata molecula de GTP necesara translocarii.
dipeptidil-ARNt-2
ARNm 5'
GTP
dep!asarea
ribosomului cu
un codon spre
capatul 3'
ARNm 5' 1
111Jlf8111(
Figura 100: Elongarea lanfu/ui polipeptidic. Faza de translocare
297
Prin acelai mecanism, se adauga, pas cu pas, cate un nou

aminoacid, conform codonilor respectivi, la lantul polipeptidic 'fn cre-
tere (fig. 100-8, 100-9, 100-10).
Desfaurarea secventiala a etapei de elongare a lantului
peptidic poate fi urmarita 'fn fig. 100.
2
Formarea
!egaturii
peptidice
3 4
298
7 8
9
10
Figura 101: Desfa§urarea secvenfia/a a etapei de e/ongare a lanfului peptidic
10.2.2.4. ETAPA IV - TERMINALIZAREA

Are loc 1n momentul Tn care citirea ARNm Tntalnete unul din
cei trei codoni stop, UAA, UAG, UGA. Acetia nu fixeaza niciun
ARNt, ci unul dintre cei doi factori specifici, RF1 sau RF2. Acetia,
induc hidroliza legaturii lantului peptidic cu ultimul ARNt, cu regene-
rarea COOH terminal. Sinteza se 1ncheie.
299
Figura 102: Terminalizarea /anfu/ui polipeptidic
Costurile energetice ale sintezei

- Formarea fiecarui complex AA-ARNt necesita doua gru-
pari fosfat (ATP - AMP).
O molecula GTP suplimentara este consumata la fiecare
activare incorecta a unui AA.
Primul pas al elongarii consuma 1 GTP.
Translocarea consuma 1 GTP.
Echivalentul energetic este 4x30,5 kJ/mol =
122 kJ/mol
de legaturi fosfodiesterice consumati per legatura pepti-
dica, n timp ce energia libera rezultata din hidroliza le-
gaturii peptidice este de numai -21 kJ/mol. Energia libera
netai
n timpul sintezei unei legaturi peptidice este de -
101kJ/mol.
300
Sinteza 9i secretia celulara
lmportanta clinica a procesului de sinteza a proteinelor

Sinteza proteinelor este un proces fundamental al fiziologiei
celulare 9i tinta principala pentru unele antibiotice sau toxine. Da-
torita diferentelor dintre mecanismele sintezei proteice la proca-
riote 9i eucariote, antibioticele toxice pentru unele bacterii sunt
relativ inofensive pentru eucariote. Evolutia naturala a permis ex-
ploatarea unor diferente minore pentru a afecta selectiv sistemele
bacteriene. Astfel, unele arme biologice sintetizate de unele micro-
organisme sunt toxice pentru altele.
Exempie:
Puromicina. Sintetizata de fungii Streptomyces a/boniger,
este unul dintre cele mai bine studiate antibiotice. Structura sa este
asemanatoare capatului 3' al unui AA-ARNt, ceea ce Ti permite
cuplarea pe locul A 9i participarea la formarea legaturii peptidice, cu
formarea unui peptidil-puromicin. Deoarece puromicina seamana
numai cu terminatia 3' a ARNt, ea nu se angajeaza 1n translocare 9i
se disociaza de ribozom scurt timp dupa cuplarea cu capatul caroxi-
terminal al peptidului. Acest eveniment opre9te sinteza proteica.
Tetraciclinele inhiba sinteza prin blocarea locului A, pre-
venind cuplarea AA-ARNt.
Cloramfenicolul inhiba sinteza proteica, prin blocarea pe-
ptidil-transferazei, cea care mediaza formarea legaturii peptidice.
Nu afecteaza sinteza citoplasmica la eucariote.
Cicloheximida blocheaza peptidil-transferaza la ribozomii
eucariotici, dar nu i la cei bacterieni.
Streptomicina, un trizaharid, determina erori de citire a codului
la concentratii scazute; la concentratii crescute, inhiba inierea.
Unii inhibitori sunt toxici pentru organismul uman 9i pentru
eucariote, 1n general.
Toxina difterica catalizeaza ADP-ribozilarea unei diftamide
(histidina modificata) de la nivelul factorului de elongare eEF2 pe
care 11 inactiveaza.
Ricinul, o proteina extrem de toxica, inactiveaza subuni-
tatea S60 a ribozomilor eucariotici, prin depurinarea unei adeno-
zine specifice din ARNr de 23S.
301
. Biologie celulara 9i moleculara
10.3.1. ULTRASTRUCTURA I STRUCTURA MO·

LECULARA
RE este un organit celular membranar, localizat perinuclear

i interiorul celulelor eucariote, format din trei elemente: o retea de
n
cisterne conectata printr-un sistem tubular complex, alaturi d' e ve-
zicule care realizeaza comunicarea cu alte organite intracelulare.
Membranele RE se continua, din loci n loc cu membrana nucleara
externa. RE este abundenti n celulele cu procese intense de sin-
teza 9i secretie, membranele sale reprezentand mai mult de juma-
tate din totalul suprafetei membranelori ntr-o celula eucariota. RE
se prezintai n celula sub doua forme: Reticul Endoplasmatic Ru-
gos (RER), cu ribozomi ata9ati la suprafata 9i Reticul Endoplas-
matic Neted (REN), fara ribozomi ata9ati. Cele doua tipuri de RE
difera 9i ca functii, 9i ca structura moleculara.
Structura generala a reticulului endoplasmatic include o re-
tea de structuri saculare, marginite de membrane, reunite de ele-
mente ale citoscheletului 9i conectate printr-o retea de canalicule
specifice. Membranele RE sunt de natura fosfolipidica 9i delimi-
teaza lumenul cisternelor RE, lumen care ocupa 10% din volumul
celular 9i care se continua cu spatiul perinuclear (spatiul ntre mem-
branele nucleare interna 9i externa).
Cele doua regiuni ale RE, rugos 9i neted, nu sunt separate
printr-o granita neta, ci prezinta interconexiuni morfologice 9i func-
tionale; RE rugos este specializati n sinteza proteinelor (avand
ribozomii legati de membrana), iar RE neted,i n sinteza lipidelor.
De aceea, RE neted este bine dezvoltat numaii n celule specia-
lizatei
n sinteza lipidelor,in restul celulelor fiind slab reprezentat;
n acest caz, este numit RE de tranzitie (in loc de RE neted). RE
i
mai este implicati n depozitarea calciului intracelular, iar mem-
branele sale reprezinta locul sintezei tuturor tipurilor de proteine 9i
302
lipide care intrai

n compozitia organitelor celulare (aparat Golgi,
lizozomi, endozomi, vezicule secretorii, chiar RE). Majoritatea pro-
teinelor destinate interiorului celorlalte organite celulare sau pro-
teinele destinate exportului (exocitozei) sunt produse, initial,i
n RE.
Structura moleculara generala a RE include 60% proteine i
40% lipide - fosfolipide i colesterol; glicoproteinele membranare
sunt situate pe fata luminala (non-citoplasmatica) a membranei.
Prin aceasta, lumenul RE prezinta asemanari cu spatiul extra-
celular, fiindca i n cazul plasmalemei, gruparile glucidice sunt n-
dreptate spre exterior (pe fata non-citoplasmatica).
Upide/e din membrana RE sunt,i n majoritate, fosfolipide:
fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina i fosfatidili-
nozitolul. Exista putin colesterol, iar acizii grai din fosfolipide sunt
foarte nesaturati, ceea ce confera o mare fluiditate membranei RE.
Enzimele cele mai frecventi ntalnitei
n RE sunt: NADH,
citocromul b5, ATPaza i enzima marker - g/ucozo-6-fosfataza.
Originea RE este incomplet elucidata, fiind posibil sa pro-
vina prini nmugurirea membranei nucleare externe.
RETICULUL ENDOPLASMATIC RUGOS (RER)

RER este format din saci (cisterne) i tuburi care au un lu-
men comun, avand la suprafata, ataati, ribozomi.
i
n microscopia fotonica, RER se poate observa ca o for-
matiune bazofila perinucleara. n celula, poate ocupa diverse po-
zitii: n celulele pancreasului exocrin sauin celulele parotidei, RER
ocupa o pozitie bazala. n hepatocite, RER este dispus concentric
i
n jurul nuclelui, formand corpii Berg. n neuroni, este bine dez-
voltat la nivelul corpului neuronal formand corpii Nissl. Membra-
nele RER se continua cu membrana nucleara externa iar lumenul
RER se continua cu spatiul perinuclear (vezi capitolul Nucleul).
RETICULUL ENDOPLASMATIC NETED (REN)

Este reprezentat de o retea de canalicule (canale mai mici)
care comunica cu sacii care formeaza RER. Nu prezinta ribozomi
la suprafata. Se poate gasi n toate tipurile celulare, dar este mai
bine dezvoltat n:
celule care sintetizeaza hormoni steroizi: suprarenala, ce-
lule interstitiale din testicul i ovar;
303
celule care sintetizeaza mari cantitati de glicogen: hepa-

tocite, miocite;
celule care sintetizeaza pigmenti: melanocite.
RER REN
Figura 103: lnterrelafiile RER - REN - schema
10.3.2. f UNCTIILE
•
RETICULULUI ENDOPLAS-
MATIC
Se descriu trei tipuri de functii:

functii specifice reticulului endoplasmatic rugos;
functii specifice reticulului endoplasmatic neted;
functii comune celor doua tipuri de reticul endoplasmatic.
10.3.2.1. FUNCTII SPECIFICE RER

1. Sinteza i sortarea proteinelor prin prezenta ribo-
zomilor ataati
Avand ribozomi ataati, principala functie a RE rugos consta
n sinteza proteinelor,
i i anume a proteinelor ,,de export", ce sunt
304
secretate de celule, precum i a proteinelor care vor intrai n

struc;;tura membranelor, destinate diferitelor compartimente mem-
branare ale celulei. Sei ntelege de ce RE rugos este foarte bine
dezvoltati n celulele pancreasului exocrin (care secreta enzime
digestive),in plasmocite (care sintetizeaza imunoglobuline),i n he-
patocite (care produc albumina i alte proteine serice). De ase-
menea, avand rol n biogeneza membranelor, este bine dezvoltat n
neuroni, care trebuie sa-i ntretina ,,o suprafata mare de mem-
brana" n prelungiri.
RER are capacitatea de a capta proteinele din citoplasma,
i
n timpul sintezei lor de catre ribozomi; o parte dintre aceste pro-
teine sunt translocate partial prin membrana RER i devin proteine
structurale, iar altele sunt translocate completin lumenul RER, de-
venind proteine secretorii.
Mecanismele de translocare prin membranele RER difera
pentru proteinele solubile (de export) fata de cele structurale (cu
domenii transmembranare).
Mecanismul de translocare pentru proteinele solubile

(de export)
Proteinele nou sintetizate poseda, fara exceptie, o secventa
semnal inifiala care induce mecanismele de translocarei n RER.
Captarea secventei-semnal depinde de prezenta a doua componente:
particula de recunoatere a secventei semnal (SRP - Sig-
nal Recognition Particle);
receptorul specific al acestei SRP, localizat numai pe fata
citoplasmatica a membranei RER.
Particu/a de recunoa§tere a semnalului are o structura bas-
toniforma i este compusa dintr-o extremitate bogatai n reziduuri
de metionina, care se cupleaza la secventa-semnal i o extre-
mitate care se cupleaza la nivelul ribozomului, inhiband situsul fac-
torilor de elongare. Ata area SRP la secventa-semnal a peptidului
nascent i. simultan, la situsul de cuplare a factorului de elongare,
determina oprirea procesului de sinteza a proteinei. Astfel, pro-
cesul sintetic se va relua numai dupa ataarea ribozomului la RER,
ceea ce previne eliberarea prematurai n citoplasma a proteinei
sintetizate. Ulterior, ribozomul se ataeaza la membrana RER prin
intermediul unui sistem specific numit translocon, care include re-
305
ceptorul pentru SRP 9i elementele receptiei ribozomului, cuplate

cu un sistem de translocare a proteinei nascente.
Figura 104: Sinteza proteinelor la nivelul RER. SRP cupleaza secventa-semnal

pentru RER §i blocheaza procesul de translatie; SRP cupleaza receptorul SRP
din membrana RER; ribozomul este andocat la membrana; GTP cupleaza
receptorul SRP, iar peptidul nou format ajunge ln porul care traverseaza membrana
RER; GTP este hidrolizat, iar SRP este eliberat ln citoplasma; Elongarea
polipeptidu/ui §i trans/ocarea acestuia ln lumenu/ RER; Polipeptidul este completat
§i clivat la nivelul secventei semnal de catre peptidaza semnalului
Dupa ata9area ribozomului la membrana RER, are loc ata-

9area unei molecule de GTP la complexul SRP-receptor SRP, ur-
mata de detal?area lan\ului peptidic de la complexul SRP-receptor
l?i atal?area sa la unitatea de translocare (numita l?i complex Sec61,
format din patru complexe proteice). Hidroliza GTP 1n GDP+Pi
determina desprinderea SRP de receptorul specific. Sinteza pepti-
30
6
Sinteza celulara
dului se reia, 1ntimp ce secventa-semnal ramane ataata la unita-

tea de translocare.
Cand sinteza polipeptidului este finalizata, capatul carboxi-
terminal este eliberat din ribozom, de la nivelul ultimului ARNt care
a participat la procesul de elongare, iar capatul aminoterminal este
eliberat, prin clivare enzimatica, de la nivelul transloconului (pro-
cesul este realizat de catre o peptidaza a semnalului) (fig. 105).
trans locator
inactiv
translocator
inactiv
Figura 105: Mecanismul de trans/ocare pentru proteine!e so/ubile la nivelu/ RER
Mecanismul de translocare pentru proteinele structurale

Procesul de translocare a proteinelor prin membrana RER
este mai complex pentru proteinele structurale, destinate a ra-
mane inclavate 1n structura membranelor RER. Pentru aceste pro-
teine structurale exista doua situatii posibile - sinteza de proteine
structurale cu un singur pasaj transmembranar (uni-pass) i sin-
teza de proteine structurale cu mai multe pasaje transmembranare
(muIti-pass).
Pentru proteinele transmembranare uni-pass, translocarea
se poate realiza 1n trei moduri:
1. peptidul semnal este situat terminal, la nivelul capa-
tului amino, initiaza translocarea, la fel ca i pentru
un peptid solubil (complet transferabil); transferul se
oprete 1n momentul 1n care, la nivelul translo-
conului, ajunge o secventa ,,stop" (hidrofoba) de an-
307
corarein membrana. Acest eveniment are loc dupa

clivarea secventei-start. Secventa-stop este trans-
ferata laterali
n bistratul lipidic l?i devine domeniul
transmembranar al noii proteine (fig. 106). Capatul
aminoterminal al noii proteine ramanein lumenul RER,
n timp ce extremitatea coo- ramanei
i n citoplasma
(modul I);
secventa
translocator
inactiv
proteina transmembranara
in membrana RER
Figura 106: Translocarea proteinelor structurale uni-pass la nive/ul RER (modul I)
2. peptidul semnal este situat intern,i ntre secventele

aminoacidice ale peptidului sintetizat. Procesul de
andocare ribozomala este similar celui descris pen-
tru proteinele solubile: secventa-semnal este recu-
noscuta de SRP care participa la andocarea ribozo-
mului la RER; sinteza peptidului se reia, mpreuna cu
procesul de translocare a proteinei nou sintetizatein
RER, pana la terminalizarea lantului peptidic. Tn mo-
mentul eliberarii din translocator, secventa-semnal
ramane inclavatain membrana RER. Tn functie de
orientarea secven{ei semnal, peptidul nou sintetizat
va prezenta fie capatul N-terminal (modul 2), fie pe
308
eel C-terminal (modul 3) spre exterior, catre cito-

plasma (fig. 107).
protei'na transmembranara
in membrana RER
··" ..
inactiv
Figura 107: Translocarea proteinelor structurale uni-pass la nivelul RER

(modurile II §i Ill)
Pentru proteinele transmembranare multi-pass, se pare ca

translocareai ncepe de la un semnal interni n lantul peptidic nou
sintetizat; sinteza continua pana la aparitia unui semnal-stop; ulte-
rior, cele doua secvente hidrofobe (start-stop) sunt glisatein bistratul
lipidic, iar la nivelul transloconului, apare o noua secventa-start,
urmata de o secventa-stop. Repetarea glisarii i reluarii procesului
sintetic duce la aparitia proteinelor transmembranare multi-pass.
309
Sortarea intracelulara a proteinelor

Sinteza polipeptidelor Tncepe Tn citoplasma. Tn momentul Tn
care polipeptidul are circa 30 de aminoacizi; sinteza poate urma
doua cai:
IMPORT CO-TRANSLATIONAL
Daca este destinat oric'arui dintre compartimentele siste-
mului endomembranar, polipeptidul devine asociat cu membranele
RER i este transferat, prin aceste membrane, 1n lumen (cister-
nele RER), Tn timp ce sinteza continua. Ulterior, dupa oprirea sin-
tezei, polipeptidul complet ramane 1n RER sau este transportat prin
vezicule la complexul Golgi sau catre alte destinatii. Proteinele
membranare integrale sunt inserate Tn membranele RER, pe masura
ce sunt sintetizate i nu sunt eliberate Tn lumen.
IMPORT POST- TRANSLAT/ONAL

Daca polipeptidele sunt des'tinate citoplasmei sau importului
nuclear, mitocondriilor, cloroplastelor sau peroxizomilor, sinteza lor
continua Tn citoplasma. Atunci cand polipeptidul este complet, este
eliberat din ribozom i fie ramane 1n citoplasma, fie este trans-
portat Tn organitele-tinta, prin transport post-translational. Mecanis-
mele de transport sunt specifice pentru fiecare organit.
2. Glicozilarea lantului polipeptidic

Glicozilarea lantului polipeptidic se realizeaza Tn timpul eta-
pei de elongare, prin ataarea de grupari glucidice; astfel, prote-
inele sintetizate Tn RER difera de cele sintetizate direct Tn citoplas-
ma, pe ribozomi liberi. Gruparile glucidice transferate sunt prefor-
mate 1n lumenul RER sub forma de oligozaharide (N-acetil-gluco-
zamina, manoza, glucoza); aceste grupari oligozaharidice rezulta
din asamblarea, element cu element, a monozaharidelor i ata-
area acestora la un lipid membranar special (numit dolico . prin
intermediul unor legaturi pirofosfat, puternic Tncarcate energetic.
Grupurile oligozaharidice sunt ataate lantului polipeptidic, la ni-
velul reziduurilor de asparagina (Asn), prin intermediul unei en-
zime de tip transferaza.
310
Sinteza celulara
3. Modificari ale lanturilor laterale de aminoacizi din

'
peptidele nou sintetizate, prin formarea de punti disulfidice; astfel,
se definitiveaza structura tertiara §i cuaternara a proteinelor.
10.3.2.2. FUNCTII SPECIFICE

•
REN
sinteza lipidelor, mai ales 1n celulele gonadelor, celulele
mucoasei intestinale; caracteristica este sinteza trigliceridelor
care se pot evidentia sub forma de picaturi de grasime;
functie de detoxifiere, prin enzime care participa la reactii
de oxidare, hidroliza, reducere sau conjugare. Detoxifierea
se adreseaza, 1n special, medicamentelor liposolubile sau
unor produ§i ai metabolismului celular. Metabolitii sunt de-
gradati printr-o serie de reactii catalizate de enzime din fa-
milia citocromului P450. Produ§ii de reactie devin hidroso-
lubili §i se pot elimina prin urina;
eliberarea glucozei din glicogen, 1n special, la nivelul hepa-
tocitelor: enzima implicata este chiar enzima marker glu-
cozo-6-fosfataza;
functie de eliberare/sechestrare a ionilor de Ca2+ spre/din
citoplasma. Eliberarea Ca2+ este determinata de actiunea
inozitol-trifosfatului (IP3), a§a cum s-a subliniat 1n subcapi-
tolul Semnalizarea ce/ulara. Tn mu§chiul striat, acest tip de
RE este bine reprezentat, purtand numele de reticul sarco-
plasmatic. Sechestrarea Ca2+ 1n lumenul REN este reali-
zata printr-un mecanism activ de pompare, realizat de pom-
pa de Ca2+ (pompa de tip P, simport, care transporta doi
ioni de Ca2+ simultan). Eliberarea/recaptarea Ca2+ din/catre
reticulul sarcoplasmatic induce 1n celula fenomene de con-
tractie/relaxare.
10.3.2.3. FUNCTII COMUNE RER $1 REN

RE este un sistem circulator intracitoplasmatic care induce
o compartimentare functionala a citoplasmei;
RE sintetizeaza fosfolipide pentru majoritatea organitelor
celulare (lizozomi, aparat Golgi, endozomi, vezicule secre-
torii, mitocondrii, peroxizomi); procesul are loc 1n membra-
nele RE, iar precursorii sunt preluati din citoplasma. Princi-
311
palul fosfolipid sintetizati n membranele RE este fosfatidil-

colina (lecitina), pornind de la colina, doi acizi gra!;,i i
glicerol-fosfat. Similar, sunt sintetizate fosfatidil-etanolamina
!;,i fosfatidil-serina, alaturi de fosfatidil-inozitol. Sinteza fosfo-
lipidelor are laci n monostratul citoplasmatic al RE, astfel ca
unele fosfolipide sufera mi!;,cari de translatie (,,flip-flop")
dintr-un monostrati n altul, cu o frecventa de 1.000.000 de
ori mai mare decat n cazul membranelor sintetice;
RE joaca rol de suport mecanic pentru citoplasma;
RE este uzina de membrane a celulei pentru care sinteti-
zeaza lipide !;,i proteine. Aceste elemente determina cre!;,te-
rea !;,i nmugurirea membranelor RE care var forma vezicule
care detin o parte din continutul lumenului RE. Aceste ve-
zicule sunt exportate prin exocitoza sau fuzioneaza cu
membranele altar organite.
CG este un organit celular membranar, format dintr-un grup

heterogen de compartimente delimitate de membrane - un grup
de cisterne (fig. 108). A fast descris la sfar!;,itul secolului trecut, de
catre Camillo Golgi, ca un ,,aparat reticular intern", datorita as-
pectului de retea perinucleara observat n ganglionul spinal de pi-
sica, dar multa vreme a ramas, pentru unii, un artefact. Abia dupa
1954, prin microscopie electronica, s-a pus capat disputei dove-
dindu-se realitatea acestui organit care a mai fast numit complexul
Golgi, apoi prin tehnici combinate biochimice !;,i morfologice, s-au
clarificat aspectele functionale.
312
Figura 108: Schema reprezentand complexul Golgi
10.4.1.
STRUCTURA, ULTRASTRUCTURA $1
COMPOZIT E MOLECULARA
Structurai
n microscopia fotonica
f n microscopia fotonica, CG este vizibil doar datorita unor
coloratii speciale, cum ar fi impregnatia argentica. Este un organit
polimorf, cu variate aspecte morfologice: vacuole, trabecule anas-
tomozate etc. Pozitia CGi n celula variazain functie de tipul i
functia celulei. n celulele nervoase (neuroni), CG este dispus peri-
nuclear. f n celulele glandelor cu secretie exocrina, CG este situat
ntre nucleu i polul apical, aproape de zona de sinteza a pro-
i
duilor de secretie. f n celulele endocrine, este situati
ntre nucleu i
polul bazal. Este o structurai n permanenta transformare (dina-
mica) i micare, situandu-sei n zonele din celula unde activitatea
metabolica este mai accentuata.
Structurai
n microscopia electronica (ultrastructura)
Aparatul Golgi este format din cisterne aplatizate (saci),
delimitate de membrane, cu extremitati dilatate, la care se aso-
ciaza o suma de vezicule i tuburi. Cisternele sunt, de obicei, sti-
vuite i uori
ncurbate, astfeli
ncat convexitatea ansamblului este
orientata catre nucleu. La celulele de la mamifere, sacii golgieni
313
Biologie celulara 1?i moleculara
sunt interconectati printr-un sistem de tuburi,i n timp ce com-

ponenta veziculara predomina spre extremitatile cisternelor.
Sacii sau cisternele complexului Golgi sei mparti
n zonele
cis (proximala, apropiata de nucleu 1?i RE, sau de formare), me-
diala 1?i trans (distala sau de maturare). Este preferabila denu-
mirea de cis 1?i trans, fiindca nui ntotdeauna sacii sunt curbati, iar
localizareain celula variaza.
Din punct de vedere functional, complexul Golgi prezinta
mai multe elemente, dispuse pe o axa carei ncepe de la fata cis a
CG (cea mai apropiata de RER) 1?i continua spre fata trans, orien-
tata spre plasmalema:
a. reteaua cis-Golgi (CGN), structura cea mai apropiata de
fata cis a CG, este alcatuita dintr-o retea interconectata de tuburi;
' '
se pare ca functioneaza ca o statie de triere a proteinelor care vor
fi returnate catre RE fata de cele care vor fi trimise catre urmatorul
'
compartiment golgian.
b. componenta principala este compusa dintr-un numar va-
riabil de saci turti(i (sau cisteme aplatizate), adeseori U1?0r curbati
(forma de cupa), dispu1?i n vecinatatea nucleului 1?i centriolilor. Nu-
marul de saci este variabili n functie de celula, n majoritatea ca-
zurilor: 5 - 11. Fiecare sac poate fi comparat cu o farfurie avand
partea centrala mai subtire 1?i periferia, mai dilatata. Daca au forma
curbata, de obicei, fata convexa prive1?te spre nucleu 1?i RE rugos,
iar cea concava, spre suprafata celulei.
La plantele superioare, apar cateva sute de saci, dispu1?i
sub forma unor aparate multiple Golgi, raspandite prin citoplasma
(denumirea veche la plante era de dictiozom).
c. reteaua trans-Golgi (TGN) reprezinta o retea distincta de
tuburi 1?i vezicule, care are rolul de statie de sortare pentru pro-
teinele ce vor fii nmagazinatei n vezicule cu diferite destinatii -
spre plasmalema sau spre alte organite celulare.
d. i
ntre fata proximala 1?i nucleu, se observa vezicule mici
de ordinul A, care se desprind din reticulul endoplasmic aflati n
vecinatate 1?i apoi fuzioneaza cu sacii proximali. Prin aceste ve-
zicule de tranzi(ie, materialele sintetizatei n RE sunt transportate
prin vezicule specificei n sacii aparatului Golgi. Membranele vezi-
culelor fuzioneaza cu membrana sacilor proximali (cis) golgieni, iar
continutul veziculelor se varsai n lumenul acestor saci.
314
e. De la extremitatea sacilor, ca i din sacii distali, se des-

prind vezicule mari, de 0,3 - 3 µm; majoritatea lor sunt repre-
zentate de vezicu/e de secrefie, care contin proteinele secretate
de celula, maturate 1n aparatul Golgi i care vor fi eliminate la ex-
terior prin exocitoza. De la periferia sacilor, se formeaza i lizo-
zomii primari.
Regiunea din celula 1n care se afla aparatul Golgi este aglo-
merata, cu multe vezicule i chiar zona citoplasmei 1n care este
inclus aparatul Golgi este mai densa decat restul matricei cito-
plasmatice i are aspect fibrilar-granular.
necontrastat oonfrastat cu Os
Com lex Gotgi ln ME
Figura 109: Diferite aspecte ale CG rn microscopia electronica de transmisie
315
Exista deosebiri morfologice Tntre zona cis i trans a apa-

ratului Golgi. Sacii din zona cis au membrana mai subtire, de circa
6 nm (ca i grosimea membranei RE), pe cand cei din zona trans
au membrane de 10 nm (de grosimea plasmalemei).
Prin metode histochimice i biochimice, s-a evidentiat loca-
lizarea distincta a enzimelor Tn sacii Golgi. Unele sunt dispuse Tn
zona trans, altele, Tn zona cis. Este interesant ca enzime caracte-
ristice plasmalemei (5'-nucleotidaza i adenilatciclaza) se afla la
periferia sacilor Golgi Tn regiunea mai dilatata. Exista, aadar, o
heterogenitate enzimatica a sacilor Golgi nu numai pe direc\ia po-
laritatii, ci i Tn aceeai cisterna, la centru fata de periferie, dupa
cum s-a demonstrat de catre Palade, Faquhar i colab.
10.4.2. FUNCTIILE
' '
CG
Functiile complexului Golgi pot fi rezumate astfel:

1. Functii legate de secretia celulara, concentrarea pro-
duilor sintetizati Tn RE, prelucrarea lor prin procese biochimice i
sinteza de noi componente, sortarea sau segregarea produilor de
secretie, ambalarea lor sub forma de vezicule i livrarea acestora
spre plasmalema.
a. Concentrarea produ§ilor de secre(ie, sintetizati Tn RE, se
face, fie Tn vezicule de secretie ce se desprind de pe fata
trans, cum este cazul pancreasului exocrin, fie, Tn majo-
ritatea celulelor, la periferia sacilor Golgi (Tn regiunile mai
dilatate ale acestora). Concentrarea rezulta din formarea
unor agregate, prin interactiuni electrostatice Tntre produii
de secretie i complexe proteine-polizaharide cu sarcina
contrara; rezulta scaderea activitatii osmotice i ieirea apei
din compartiment. lonii de Ca2+ pot i ei participa la interac-
tiuni electrostatice.
b. Prelucrarea biochimica a produ§ilor de secrefie implica mai
multe procese.
o Conversia pre-proteinefor Tn proteine de secretie se
realizeaza prin scindarea unor portiuni din lantul
polipeptidic; din proalbumina, rezulta albumina, din
proinsulina sau proparathormon, rezulta insulina i,
316
Sinteza i secretia celuiara
respectiv, parathormon etc. Enzimele proteolitice nu

au fostinca izolate §i, n unele cazuri, se pare ca ele
sunt ambalatei n vezicule de secretie §i acolo se pro-
duce proteoliza.
o G/icozilarea termina/a a proteinelor este o functie
majora a aparatului Golgi. Lanturile oligozaharidice,
care se gasesc grefate pe Asn, nca din RE, sunt, la
nceput, scindate,i
i ndepartandu-se toate resturile de
glucoza §i o parte din cele de manoza, de la periferia
oligozaharidului. Aceasta o face a-manozidaza, en-
zima caracteristica aparatului Golgi. Dupa aceea, se
adauga alte resturi glucidice, din cele aduse de nu-
cleotide ,,carau§i" (UDP, CMP etc.), prin glicozil-
transferaze localizatei n aparatul Golgi. Tn acest fel,
se ajunge la structura finala a glicoproteinelor de se-
cretie. S-au precizat §i detalii ale glicozilarii efectuate
n aparatul Golgi. Astfel,i
i ndepartarea resturilor de
manoza se facei n sacii Golgi cis; adaosul N-acetil-
glucozaminei are loci n sacii centrali, pe cand adao-
sul resturilor de galactoza de facei n sacii trans
(Schatz, 1985).
o G/icozilarea glicolipidelor,i n special, a cerebrozidelor
§i gangliozidelor (foarte activai n creier i rinichi) se
realizeaza prin glicoziltransferaze specifice.
o Sulfatarea, ca §i glicozilarea terminala, se petrece ex-
clusivin aparatul Golgi, prin sulfotransferaze, care
transfera grupari sulfat pe glicoproteine, proteoglicani,
glicolipide (de pilda, din cerebrozide, rezulta sulfatide).
o Prin reactiile amintite, aparatul Golgi joaca rolul
esentialin sinteza mucopolizaharidelor (proteoglica-
nilor) §i gangliozidelor.
c. Aparatul Golgi realizeaza §i sortarea sau segregarea pro-
du§ilor de secrefie (in special, separarea lor de enzime li-
zozomale) §i ambafarea lori n membrane compatibile de a
fuziona cu plasmalema. Veziculele de secre1ie au com-
pozitia membranei diferita de cea a sacilor Golgi §i mai
apropiata de plasmalema.
317
Prin toate func\iile de mai sus, aparatul Golgi joaca rol

central rn secrefia ce/u/ara; el nu este o simpla ,,halta" sau ,,sta\ie
deimbuteliere", nainte de a-i livra spre plasmalema.
2. Biogeneza lizozomilor implica, maii ntai, segregarea
enzimelor lizozomale de ceilalti produi de secretie. Un rol im-
portant revine faptului ca enzimele lizozomale au ca grupari glu-
cidice terminale manoza-6-fosfatul. Acest marker este recunoscut
de un receptor specific din membrana RE i a aparatului Golgi i
determina segregarea enzimelor lizozomalei n zona trans, de
unde se desprind veziculei mbracatein clatrina. Acestea, pier-
zandu- ii mbracamintea, devin lizozomi primari. Novikoff i colab.
(1977) au propus ca enzimele lizozomale sunt sintetizatei n anu-
mite cisterne ale RE i vacuole de condensare ce ar forma aa-
numitul GERL (,,Golgi-associated Endoplasmic Reticulum from
which Lysosomes arise'?. Astfel, s-ar unta trecerea enzimelor
lizozomale prin sacii Golgi, dar nu exista dovezi pentru aceasta.
3. Dirijarea traficului de membrane (sub forma vezi-
culelor)i
n celula este o alta functie majora a aparatului Golgi. Pe
de o parte, este o statie importanta pe calea secretiei celulare, pri-
mete vezicule din RE, le modifica (atat continutul, cat i mem-
brana) i apoi expediaza vezicule de secretie spre plasmalema,
care, prin exocitoza, varsa produii de secretiei n afara celulei. Pe
de alta parte, complexul Golgi expediaza vezicule/e cu enzime
lizozomale ce devin lizozomii primari.
Mai exista i alte procese de transport prin veziculei n ce-
lulai
n care aparatul Golgi joaca rol esential. Reciclarea membra-
ne/or a fost sugerata de Palade,i nca din 1959, ca o reutilizare a
componentelor plasmalemei de catre celula legata de secretia ce-
lulara. Din moment ce prin exocitoza, se adauga plasmalemei
componente din membrana veziculelor de secretie, trebuiei nde-
partata o portiune din plasmalema, pentru ca suprafata sa ramana
constanta. Aceasta se realizeaza prin endocitoza, din plasmalema
desprinzandu-se vezicule ce aduci napoi,i
n celula, componente ale
membranei ce fusesera folosite pentru exocitoza. Tn acest fel,
celula refolosete componentele membranelor. Totodata, endo-
citoza introduce,in celula, materiale de la exterior. Reciclarea
membranelor este un proces foarte important, calitativ i cantitativ;
seintalnetei
n toate celulele specializatei n secretie, precum i n
macrofage i neuroni (reutilizarea membranei, a veziculelor sinap-
318
Sinteza §i secretia celulara
tice). n reciclare, veziculele ajungi napoi de la plasmalema la sacii

Golgi, dar nu §i la RE. Procesul este energodependent.
n principiu, reciclarea poate aduce, la aparatul Golgi, pro-
i
teine de membrana, inclusiv enzime §i receptori, ce pot fi mo-
dificate, separate (reglicolizate, sulfatate etc.) §i refolosite; de ase-
menea, molecule informationale din exterior (hormoni, catecola-
mine) pot ajunge la aparatul Golgi, influentand metabolismul ce-
lulei (Farquhar §i Palade, 1981).
n sfar§it, exista date ce arata rolul aparatului Golgii
i n
biogeneza membrane/or. Proteine integrale de membrana (sinte-
tizatei
n RE rugos) sosesc pe calea veziculelor la aparatul Golgi
(fuzioneaza, probabil, cu portiunea periferica, mai dilatata, a sa-
cilor Golgi); apoi, dupa maturare (glicolizare terminala) se des-
prind, tot de aici, vezicule ce livreaza plasmalemei proteine (§i lipide).
Prin urmare, exista mai multe tipuri de trafic intracelular de
membrane n multiple directii, care implica aparatul Golgi ca o statie
centrala. Ca §ii n cazul secretiei celulare, *}i n traficul membranelor,
aparatul Golgi nu este doar o ,,halta" sau ,,dispecer'', ci este o
complexa ,,companie de productie *}i transporturi",i n care ,,containe-
rizarea *}i direc{ionarea" este numai un aspect, fiindca modificarea de
structura a componentelor transportate este esentiala.
n concluzie, merita subliniat caracterul heterogen al apara-
i
tului Golgi, chiari n acela*}i sac, ale carui portiuni dilatate sunt
,,rampele" la care vin *}i de la care pleaca veziculelei n direc{ii bine
definite. Este surprinzator (!?i mecanismelei nca nu sunt clare) cum
se poate men{ine individualitatea tuturor membranelor celulare
(exprimatei n diferente de compozitie chimica, inclusivi ntre diferitele
feluri de vezicule),i n ciuda repetatelor fuziuni de membrane.
Mecanismele celulare §i ale directionarii membranelor altar com-
ponentei n endocitoza *}i exocitoza reprezinta, n prezent, una dintre
cele mai complexe arii de cercetare ale biologiei celulare i mole-
culare.
319
Atkins, J. F., Gesteland, R. F. & Cech, T. (2011). RNA worlds: from life's
origins to diversity in gene regulation. Cold Spring Harbor, N.Y.:
Benedetti, A, Banhegyi, G., Burchell, A & NATO Public Diplomacy
Division. (2005). Endoplasmic reticulum: a metabolic compart-
ment. Amsterdam; Washington, DC: IOS Press.
Champe, P. C., Harvey, R. A & Ferrier, D. R. (2008). Biochemistry (41 h ed.).
Philadelphia: Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins.
Cooper, G. M. & Hausman, R. E. (2009). The cell : a molecular approach
(51hed.). Washington, D.C. Sunderland, Mass.: ASM Press; Sinauer
Associates.
Devlin, T. M. (2011). Textbook of biochemistry : with clinical correlations
(ih ed.). Hoboken, NJ: John Wiley & Sons.
EI-Metwally, T. H. (2010). Basics of medical molecular biology. Hau-
ppauge, N.Y.: Nova Science.
Esterhouse, T. E. & Petrinos, L. B. (2009). Protein biosynthesis. New
York: Nova Science.
Frank, J. (2011). Molecular machines in biology: workshop of the cell.
Cambridge; New York: Cambridge University Press.
Glick, B. R. & Pasternak, J. J. (2003). Molecular biotechnology : principles
and applications of recombinant DNA (3rd ed.). Washington, D.C.:
ASM Press.
Liljas, A (2009). Textbook of structural biology. Hackensack, N.J.: World
Scientific.
Lowe, M. & Vance, K. W. (2009). Structure and function of the Golgi
apparatus. Amsterdam Elsevier.
Martin, R. (1998). Protein synthesis : methods and protocols. Totowa,
N.J.: Humana Press.
Michalak, M. (2010). Quality control in the Endoplasmic Reticulum.
Amsterdam Elsevier.
Morre, D. J. & Mollenhauer, H. H. (2009). The Golgi apparatus: the first
100 years. New York, NY: Springer.
Nedelkov, D. & Nelson, R. W. (2006). New and emerging proteomic
techniques. Totowa, N.J.: Humana Press.
Nierhaus, K. H. & Wilson, D. N. (2004). Protein synthesis and ribosome
structure: translating the genome. Weinheim: Wiley-VCH.
Spirin, A S. & Swartz, J. R. (2008). Cell-free protein synthesis: methods
and protocols. Weinheim: Wiley-VCH.
320
Swanson, T. A., Kim, S. I., Glucksman, M. J. & Marks, D. B. (2007). Bio-
chemistry and molecular biology (41h ed.). Philadelphia: Lippincott
Williams & Wilkins.
Wiertz, E. J. H. J. (2005). Dislocation and degradation of proteins from
the endoplasmic reticulum. Berlin {[u.a.]: Springer.
Zimmermann, R. (2009). Protein transport into the endoplasmic reti-
culum. Austin, Tex.: Landes Bioscience.
321
Mitocondriile
Mitocondriile sunt organite pre-

zente in toate celulele vegetate
§i animale, ocupand un vo/um
important in citoplasma (pana
la 15 - 20%). De§i sunt destul
de mari ca dimensiuni pentru a
fi observate in microscopia fo-
tonica, fiind identificate inca din
secolul XIX, funcfia for a fast
elucidata abia dupa 1948, dupa
dezvoltarea procedurilor de frac-
fionare celulara.
Mitocondriile au forma cilindrica, sunt alungite, bastonifor-
me, cu un diametru de 0,5 - 1 µm.
Figura 110: Mitocondria. Aspect de microscopie e/ectronica de transmisie
Numarul mitocondriilor variaza cu necesitatile energetice ale

celulei; de exemplu, la nivelul hepatocitelor, fiecare celula contine
1.000 - 2.000 mitocondrii, 1/5 din volumul celular fiind ocupat de
aceste organite.i
n adipocite, limfocite, numarul mitocondriilor este
redus.
Dimensiunile mitocondriilor variaza Tn diferite tipuri de ce-

lule: Tn hepatocite i nefrocite, au lungimi de pana la 3 µm i dia-
metru de 0,5 - 1 µm; Tn celulele musculare, lungimea lor atinge 8 µm,
iar Tn celulele pancreasului exocrin, ajung la 10 - 12 µm.
Mitocondriile sunt structuri dinamice: observatiile pe celule
vii, Tn microscopia Tn contrast de faza, releva o mobilitate i o plas-
ticitate deosebita. Micarea mitocondriilor este raportata la ele-
mentele citoscheletului. Mitocondriile se deplaseaza Tn salturi prin
celula, fiind asociate microtubulilor. n final, ele se localizeaza Tn
compartimentele celulare, unde este necesara o cantitate crescuta
de ATP. De exemplu, Tn nefrocitele din tubul contort distal, mito-
condriile ocupa labirintul bazal, energia eliberata fiind utilizata Tn
procesele de transport.in celulele ciliare, mitocondriile se gasesc Tn
vecinatatea corpusculului bazal (centrul cinetic al cililor).
Mitocondria prezinta o membrana dubla. Fiecare mem-

brana are o grosime de 6 - 8 nm i are o structura clasica de bi-
strat lipidic cu proteine integrale i ataate, specifice. Se definesc,
astfel, doua spatii Tn mitocondrie, unul intern denumit matrice mito-
condriala i unul extern, intermembranar, camera extema, ce au
compozitii biochimice diferite.
ADN
mitocondrial ribozomi
matrice membrana externa
/ membrana. interna
spatiui
ntermembranar
/
,1--.\
ATP}
sintetaza creste
mitocondriale
Figura 111: Structura genera/a a mitocondriei
326
Mitocondriile
Membrana interna formeaza o serie de pliuri, denumite creste

mitocondriale, care proemina Tn matricea mitocondriala, marind su-
prafata acestei membrane. Numarul crestelor mitocondriale este de
trei ori mai mare Tn celulele musculare miocardice fata '
de celulele
hepatice.
Membrana externa este mai bogata Tn lipide decat mem-

brana interna (40% Tn membrana externa 9i 20% Tn cea interna) 9i
mai saraca Tn proteine (60% Tn membrana externa 9i 80% Tn cea
interna).
Fosfolipidele membranei externe:
. .
fosfatidilinozitolul detine o concentratie crescuta, fiind
considerat lipid marker pentru aceasta membrana;
alte fosfolipide: fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fos-
fatidilglicerolul 9i cardiolipina Tn cantitate scazuta.
Caracteristica membranei externe este aceea ca prezinta
rigiditate mai mare decat cea interna, datorita prezentei, Tn
cantitati mai mari, a acizilor gra9i saturati 9i a acidului galacturonic.
Proteinele membranei externe sunt descrise ca:
porine - canale de apa 9i pentru molecule sub 5.000 Da;
enzime - importante pentru metabolismul mitocondrial;
enzima marker - monoaminoxidaza - catalizeaza oxida-
rea aminelor biogene ca dopamina, serotonina, epine-
frina 9i norepinefrina);
colinfosfotransferaza, acil CoA sintetaza, cit.b5. reductaza.
Camera mitocondriala externa este asemanatoare, ca 9i
compozitie, cu citoplasma. Enzima marker este nucleotid-fosfoki-
naza care transfera nucleotide din citoplasma Tn mitocondrie.
Membrana intema este un bistrat lipidic care prezinta pli-
uri, denumite creste mitocondriale, care proemina Tn matricea mi-
tocondriala.
327
.Biologie celulara 9i moleculara
Fosfolipidul marker al membranei interne este cardiolipina.

Proteinele marker implicate 'fn metabolismul energetic ce-
lular sunt: FO-F1-ATPaza, enzimele lantului respirator 9i carnitin-
acid-gras-transferaza care transporta acizii gra9i spre matricea
mitocondriala.
Matrices mitocondriala are o structura foarte complexa
formata din:
- ioni: Ca2+ Mg2+, Mn2+ etc.;
- enzimele solubile ale ciclului Krebs 9i cele implicate 'fn oxi-
darea acizilor gra9i (malat - dehidrogenaza - enzima marker 9i
izocitrat - dehidrogenaza, fumaraza, citrat - sintetaza etc.);
- patru - cinci molecule de AON mitocondrial, cu structura
bicatenara dispuse circular ca la procariote, ce codifica un numar
mic de polipeptide mitocondriale integrate apoi 'fn membrana mito-
condriala interna 9i cele doua molecule de ARNr 9i 22 ARNt folo-
siti 1n sinteza proteinelor din organit;
- ribozomii mitocondriali;
- enzime care catalizeaza reactiile de autoreplicare, trans-
criptie 9i sinteza proteinelor.
Respiratia celulara f i metabolismul oxidativ

Mitocondria reprezinta punctul final al proceselor meta-
bolice de degradare a glucidelor, lipidelor sau aminoacizilor. Ener-
gia rezultata din prelucrarea componentelor elementare ale meta-
bolismelor glucidic 9i lipidic (glucoza, respectiv, acizi gra9i) repre-
zinta doar o mica parte din resursele disponibile. Prin reactiile
specifice ale glicolizei, din molecula de glucoza, se produc numai
doua molecule de ATP per molecula de glucoza oxidata, majorita-
tea energiei ramanand stocata 1n piruvat 9i 1n perechea de elec-
troni preluata de NADH, 1n cadrul acestui proces. Ulterior, 'fn pre-
zenta oxigenului 9i 1n matricea mitocondriala, celula poate extrage
suficienta energie pentru a genera 1nca 30 de molecule de ATP.
Piruvatul rezultat din glicoliza este transportat 'fn interiorui mito-
condriei 9i decarboxilat pentru a forma o grupare acetil (-
CH3Coo·) care este transferata coenzimei A pentru a forma
acetil-CoA (fig. 112).
Pentru acizii gra9i, procesul de beta-oxidare presupune ca
prim pas oxidarea !:}i activarea acestora prin cuplarea la grupul tiol
(-SH) al coenzimei A Acizii gra9i sunt transportati 1n matricea mi-
328
Mitocondriile
tocondriala prin intermediul unui carau proteic, iar la fiecare ciclu,

acid gras-acetil-CoA, elibereaza o molecula de acetil-CoA pentru
ciclul Krebs (fig. 112). Pe langa molecula de acetil-CoA, fiecare
ciclu de oxidare produce o molecula de NADH i una de FADH2.
Practic, acetil-CoA reprezinta punctul comun pe caile de
metabolizare a glucidelor i lipidelor. Aminoacizii intra direct Tn ci-
clul Krebs sau folosesc acelai punct comun al piruvatului (fig.
112). Atomul de S din acetil-CoA formeaza o legatura de Tnalta
energie cu acetatul (tioesterica). Ruperea acestei legaturi prin hi-
droliza elibereaza o mare cantitate de energie Tn momentul trans-
ferului grupului acetat unei alte molecule (Tn cadrul ciclului oxidarii
acizilor grai sau Tn cadrul ciclului Krebs) (fig. 112).
Mitocondria nu poate importa NADH format Tn citeplasma,
iar electronii acestui substrat sunt utilizati pentru a reduce un me-
tabolit cu masa moleculara mai mica i care poate fie sa intre Tn
matricea mitocondriala (prin intermediu! unui transporter reversibil
malat-aspartat), fie prin transferul electronilor catre FAD (transpor-
ter reversibil glicerol-fosfat), reactie din care rezulta FADH2.
fn cadrul ciclului Krebs, 'care se desfaeara Tn matricea
mitecondriala, are loc oxidarea a 2/3 din produii cu atomi de car-
bon, rezultand, Tn final, C02 i electroni de Tnalta energie ce vor
alimenta ATP-sintetazele din membrana interna mitocondriala, Tn
vederea sintezei de ATP.
Energia rezultata din reactia:
2H + 2e- + 1/202 = H20
poate fi pierduta brusc (proces de combustie) sau poate fi eliberata
lent, pas cu pas, i transformata, stocata Tn alte forme de energie.
O serie de produi sunt dehidrogenati Tn cadrul ciclului
Krebs, iar atomii de hidrogen sunt preluati de NAO, NADP sau
FMN i FAD care sunt asociati dehidrogenazelor.
Dehidrogenazele desprind cate doi atomi de hidrogen. Unul
este transferat ca ion hidrid (H- cu doi electroni) la NAO+, iar
celalalt este eliberat ca proton Tn solutie (H+). Asocierea dintre
NADH !iii NADPH cu dehidrogenazele este temporara !iii reversibiia.
Acceptorul final de electroni, o necesitate a metabolismului
oxidativ, este oxigenul.
329
Glucoza 2 ATP 0
{J,C-' _2 AOP 1 11 .
Fructoza 1,6 bisfosfat C-0
2 I d Alaninii
; 1--
Gliceralde¥da-3-fosfat .,.,...,., Cisteina ,
(2 molecule) /' C=O Glicina
3 I
I Serina
0 / CH3
1,3-bifosfohglicerat
(2 molecule) 2 ADP II l_lronin
Fenilalanina I
V c.:::_..2 ATP 1 piruvat
3fosfo..glicerat 11 Tlrozinil
0 I
(2 molecule)
Fosfo-enol-pirnvat /
I
L ra
(2 moleculeU ADP I -2'.tof j
{J, c._.2 ATP I
Piruvat I
{2molecule) / Aceto-Acetil-CoA
\ ...... .,.,..,,/'
t-
f I £::?
.,/) i Leucina
2 C=O ¢::1 lsoleucina
:, I l._!riptofan
CHs Oxidarea acizilor grasi
Acetil·CoA '
'"coo·
I
I
'c=o
I YI
I CH2
coo· \ I .
I Z
coo Enz: Citrat
HO-CH \ Oxalo-acetat sintetazii
I 1
CH2 I \
I . I \
COO I \ Enz: Aconitazil
I \
\ \
Enz: Fumarazil . Ho \ \
2
', \.
coo· .,..._ ----- .
I i Extracjia a 5 perechi de electroni\
CH ' {din atomii de hidrogen ai
11 , substratului). Electroniivor fi
yH
coo· ,,,,/' ) ¥1' -accepta\ii
n final de oxigen
---.,,--- --
Enz: Succin u.r: . . , "

dehidrogenazil FAD
/
\
i::,-
\
2 coo·
coo· 2 coo·1$1
G Gip 3 I
I 2
3 CH H. NAil+
, CH2
x I
I CH2
I . Enz: Succini/-CoA X CH a ketoglutarat YI
I 2 dehidrogenaza C=O
COO sintetaza Y c=o •I .
Succinat I ·coo
Argininil
S-CoA aketoglutarat Histidina
Tirozina
Fenilalanlnii
Succinil-CoA Glutamin
Glutamat Prolina
I Metionina
' Valina
Figura 112: Gaile catabolice ale principa/elor surse de energie

care genereaza electroni pentru lantul respirator
330
Mitocondriile
Fosforilarea oxidativa i lantul transportor de electroni

Fosforilarea oxidativa reprezinta etapa finala a metabolis-
mului aerob. La eucariote, fosforilarea oxidativa are loc la nivelul
mitocondriilor.
Fosforilarea oxidativa implica reducerea 02 la H2 0 datorita
electronilor preluati din ciclul Krebs de catre NADH i FADH2.
Fosforilarea oxidativa se desfaoara 1ntrei etape:
flux de electroni, prin intermediul unui lant de trans-
portori specifici, cuplati la membrana mitocondriala;
energia libera produsa prin acest proces exergonic
este utilizata pentru pomparea protonilor, 1mpotriva
gradientului de concentratie 1n camera externa mito-
condriala; se transforma, astfel, energia libera, rezul-
tat al oxidarii 1npotential electrochimic transmembranar;
fluxul transmembranar de protoni, 1n sensul gradien-
tului de concentratie, prin canale proteice specifice,
determina energia necesara sintezei ATP, catalizata
de un complex proteic (ATP-sintetaza).
Procesul de transport al electronilor se realizeaza printr-o
serie de complexe enzimatice respiratorii, localizate la nivelul mem-
branei mitocondriale interne; acestea formeaza lantul respirator
mitocondrial. Reactiile de reducere sunt necesare pentru a crea o
disociere a protonilor din atomii de H de electroni. Protonii raman
liberi 1n solutie i vor fi expulzati activ de catre complexele enzi-
matice respiratorii. Electronii nu pot exista liberi 1n solutie i de
aceea, trebuie transportati de complexele enzimatice care poseda
centri metalici care se pot reduce/oxida.
Marii acceptori de electroni din ciclul Krebs, glicoliza i oxi-
darea acizilor grai sunt NAO care se reduce la NADH+H i FAD
care se reduce la FADH2. lnitierea lantului respirator se face prin de-
livrarea acestor electroni unor perechi redox cu un potenal mai mic.
NADH livreaza doi electroni lantului respirator, iar, 1n final,
aceti electroni reduc oxigenul atomic la apa. Oxidarea succina-
tului la fumarat determina desprinderea a doi electroni care sunt
transmi i lantului respirator de FADH2. Enzima care catalizeaza
reactia este succinat-dehidrogenaza (succinat-DH), o parte din
complexul succinat CoQ reductaza. FADH2 livreaza tot doi elec-
troni, dar nu odata, ci seriat, intermediarul fiind o semiquinona.
331
Oxidarea NADH la NAO determina eliberarea a 2e·9i a unui

H+. Protonii se regasesci
n solutie, sub forma de ion hidroniu (H30).
Transferul de electroni de la NADH ta 02 este un proces
favorabil din punct de vedere termodinamic; deplasarea electro-
nilor determina o scadere de potential de 1,14V, echivalentul a
26,2 kcalmol pentru 1 electron 9i 56 kcal/mol pentru o pereche de
electroni. Unele studii au indicat faptul ca electronii pot traversa
distante considerabile (10 - 20A)i ntre centre redox adiacente, iar
circulatia lor se poate realiza prin efectul tunel, de-a lungul unor
punti de hidrogen sau chiar pe catenele laterale ale unor amino-
acizi din structura complexelor lantului respirator. Energia eliberata
este conservata 9i folosita pentru pomparea protonilor din solutie
n spatiul intermembranar.
i
Elemente ale lantului respirator

Componentele lantului respirator contin grupari prostetice
(flavine, FeS, Cu, hem), cuplate la particule proteicein membrana
mitocondriala interna. CoQ este o exceptie. Exista cca 12 trans-
portori de electroni grupati n patru complexe multiproteice.
Centrii cu Fe-S
Centrii cu Fe-S sunt reprezentati de FeS4, Fe2S2 9i Fe4S4
9 i au urmatoarele caracteristici:
reprezinta clustere care contin Fe legat la S anorganic 9i la
patru atomi de S din reziduuri cisteinice (fig. 113);
unii atomi de Fe sunt ferici (Fe3+), altii sunt fero9i;
dispozitia ciclica permite punereai
n comun a electronilor de
pe ultimul orbital.
De aceea, captarea electronilor i eliberarea lor este un
proces facil. Este captat cate un electron aditional care este distri-
buit n reteaua clusterului.
332
Mitocondriile
Figura 113: Diferite tipuri de centri cu Fe-S
Citocromii
contin un grup prostetic de tip hem, similar cu eel din he-
moglobina sau mioglobina;
Fe din centrul hemului este transportorul de electroni;
sunt n ordinea intrarii n lant: b566, b562, c1, c, a, a3;
structura lor difera U!iior ceea ce determina diferentei
n ceea
ce prive!iite tendinta de acceptare de electroni (fig. 114).
Figura 114: Centru tip hem C (caracteristic citocromilor tip c)
Tn inelul hemului, exista legaturi alternate simple !iii duble,

ceea ce face ca electronul acceptat sa fie dislocat la Fe, C sau N din
inel.
Ubiquinona
denumita !iii coenzima Q;
este un transportor de electroni (un electron odata);
poate difuza liber n membrana mitocondriala;
333
colecteaza electroni de la NADH-dehidrogenaza i de la

succinat-dehidrogenaza pentru electronii de la FADH2;
doneaza electronii citocrom-C-reductazei.
Transportul electronilor, prin aa-numitul lant respirator, pre-
supune prezenta a patru complexe proteice transmembranare, relativ
imobile, care includ variate tipuri de structuri transportoare de
electroni. Aceste complexe sunt numerotate cu cifre romane de la I la
IV i au functii diferite 1n cadrul lantului respirator. Tn afara com-
plexelor fixe, lantul respirator include doua componente mobile:
Coenzima Q sau ubiquinona, descrisa mai sus, reprezinta
un punct comun pentru donorii de electroni din bistratul
lipidic al membranei mitocondriale interne, deplasandu-se
1n acest mediu lipofil;
Citocromul c, o proteina solubila, specifica spatiului inter-
membranar mitocondrial (camera mitocondriala externa).
Ubiquinona i citocromul c realizeaza contactele mobile
1ntre complexele mari ale lantului respirator. Tn cadrul complexelor
multiproteice, electronii urmeaza cai bine definite, 1ntre centrii re-
dox intrinseci, a caror pozitie este fixa.
Citocromii, centrii de Fe-S i centrii de Cu pot transporta
doar cate un electron odata.
Transferul electronilor de la un complex enzimatic la altul
are ca rezultat generarea unei forte motrice, datorita careia pro-
tonii sunt pompati 1n spatiul intermembranar mitocondrial. Aici, ei
se acumuleaza i creeaza un gradient electrochimic ce va de-
termina functionarea ATP-sintetazei, 1n sensul sintezei ATP.
Complexul NADH-dehidrogenaza (Complexul I)

NADH-dehidrogenaza este o enzima cu eel putin 45 de
subunitati i o masa moleculara de circa 1GDa, care transporta
doi electroni de la NADH la CoQ, pentru a forma CoO-H2. Reactia
este termodinamic favorabila LiG =-16,6 kcal/mol.
334
Mitocondrii!e
Figura 115: Complexul I - NADH-dehidrogenaza
Energia este folosita la transportul a patru protoni, din

matricea mitocondriala 'fn spatiul intermembranar. Complexul I
transporta exclusiv doi electroni odata, 'fi transmite FMN (care
poate accepta cate un singur electron odata) 9i apoi unui centru
FeS. Cei doi electroni de la complexul I sunt transferati la CoQ
care preia 9i doi protoni din solutie, pentru a-i transmite comple-
xului Ill. Disfunctia acestui complex pare a fi implicata 'fn unele boli
neurodegenerative.
Complexul succinat-dehidrogenaza - SDH (Complexul II)

Acest al II-lea complex este format din patru polipeptide:
doua subunitati hidrofobe (C 9i D) (fig. 116) care ancoreaza
proteina 'fn membrana 9i doua subunitati hidrofilice (A 9i 8) care in-
clud una dintre enzimele ciclului Krebs, anume succinat-dehidro-
genaza (subunitatea A - SDHA). Subunitatea 8 contine trei centri
de Fe-S. SDHA descompune succinatul la fumarat 9i elibereaza doi
electroni care sunt preluati de FAD (care se transforma 'fn FADH2)
9i transmi*}i prin intermediul SDHB *}i unui centru tip hem la CoQ.
Electronii preluati de acest complex au energii reduse *}i strabat o
distanta de circa 40A, prin intermediul celor trei centri de Fe-S.
Grupul hem exercita o atractie particulara pentru electronii scapati
din complexe, jucand rolul de sistem tampon cu electroni *}i pre-
335
' Biologie celulara 9i moleculara
venind formarea radicalilor superoxid toxici. Transferul de electroni

prin acest complex nu este asociat cu pompare a de protoni.
.
mitocondriala
Figura 116: Comptexul II - succinat-dehidrogenaza
De la complexele I 9i II, rezulta, a9adar, doua molecule de

CoOH2, care transporta doua perechi de electroni 9i 4H+ catre
complexul Ill.
Citocrom c-CoQ-reductaza (complexul b-c1 sau Com-

p/exu/ Ill)
Complexul Ill catalizeaza transferul de electroni de la ubi-
quinol (CoOH2) la citocromul c. Este compus din eel putin 11 poli-
peptide 9 i functioneaza ca un dimer. Fiecare monomer contine trei
grupari hem (una a citocromului-c1, alte doua, cu potentiale redox
diferite,i
n citocromul b, denumite HembL §ii HembH) 9 i un centru
Fe-S (fig. 117).
Doua molecule de ubiquinona redusa vor fi oxidate la ni-
velul complexului Ill. Prima ubiqiunona redusa cedeaza secvential
cei doi electroni adu9i, unul unui centru de FeS, iar celalalt, cito-
cromului-b (HembL). Electronul de la centrul cu Fe-S este transmis
citocromului-c1 9i apoi, unei molecule de citocrom-c. Cei doi pro-
toni ai primei molecule de ubiquinol sunt eliberati n spatiul inter-
membranar. Electronul de la nivelul HembL va reduce partial CoQ
oxidata la un radical semiquinona. Al doilea electron va ajunge la
336
Mitocondriile
acest radical, Tn urma unei a doua etape de oxidare a unei a doua

mole.cule de CoOH2.
2H+
i
ntermembranar
matrice
mitocondriala
Figura 117: Complexul Ill - citocrom-c reductaza sau complexu/ b-c1
Tn a doua etapa, este oxidata o noua molecula de CoOH2.

Un electron din cei doi adul?i ajunge la a doua molecula de cito-
crom-c pe calea descrisa mai sus, iar al doilea electron ajunge,
prin intermediul citocromului-b, la radicalul semiquinona format Tn
prima etapa; se adauga Tnca doi protoni din matricea mitocon-
driala, iar CoOH2 este regenerata.
Tn final, acest complex transfera doi electroni de la CoQH2
la 2 molecule de citocrom-c l?i transfera, indirect, 2 + 2 protoni
(4H+) din matricea mitocondriala Tn spatiul intermembranar. Doua
molecule de citocrom-c se reduc astfel, prin preluarea celor doi
electroni de la complexul b-c1 l?i Ti transmit complexului IV.
Citocrom c oxidaza (Complexul IV)

Ultima etapa a lantului respirator presupune transferul suc-
cesiv al electronilor de la citocromul-c redus la oxigen. Electronii
adul?i de doi citocromi-c sunt suficienti numai pentru a reduce 1/2
molecule de 02 . Pentru o molecula de 02, vor fi necesari patru
electroni adul?i de patru molecule de citocrom c.
Citocrom-c-oxidaza este compusa din 13 subunitati, din
care trei sunt codificate de gene mitocondriale l?i contin toti centrii
redox specifici. Electronii sunt transferati initial, secvential (unul
cate unul) unui centru bimetalic, pe baza de Cu (CuA) din sub-
unitatea II; de aici, electronii tree Tn subunitatea I, la un hema, apoi
la un hema3 i la un al doilea centru, pe baza de Cu (Cus). Aceti
trei centri ai subunitat,ii I sunt situat'i la intervale de maxim 5A. Ac-
337
ceptarea primilor doi electroni determina reducerea centrului binu-

clear hema3-Cus; n momentuli n care centrul binuclear primete al
doilea electron, aici se cupleaza o molecula de oxigen. Dubla
legatura O = O este rupta, iar atomul de oxigen accepta o pereche
de electroni de la centrul hema3-Cus redus, formand, astfel, un
anion peroxid o/- (fig. 118).
2+ 3+ -
Fe--0 0- +--- F --0
' - 2+
-Cu 0--Cu
Figura 118: Utilizarea primilor doi e/ectroni ajun§i la complexul IV

pentru a forma anionul peroxid
Anionul peroxid este un compus binei ncarcat energetic, care

extrage imediat un al treilea electron disponibil la nivelul hemului
(care se comporta ca un rezervor de electroni) sau la nivelul unui
reziduu aminoacidic vecin. Simultan, centrul binuclear accepta doi
protoni din matricea mitocondriala i cliveaza legatura covalenta 0-
0, reducand unul dintre atomii de oxigen. Trecerea celui de-al pa-
trulea electron i importul ainca doi protoni de la nivelul matricei
mitocondriale determina formarea a doua molecule de apa.
Figura 119: Complexul IV al lantului respirator
33
8
Mitocondriile
La fiecare proton extras din matricea mitocondriala, o sar-

cma negativa ramanei n interior, sub forma unei grupari -OH-,
ceea ce contribuie la formarea unui gradient electrochimic la
nivelul membranei mitocondriale interne. Protonii preluati din ma-
tricea mitocondriala sunt utilizatii n doua moduri diferite, pentru
fiecare molecula de 02 redusa la 2H 2 0 de catre citocrom-c-oxi-
daza: 4 H+ sunt consumati pentru aceasta reactie de formare a
apei metabolice, iar alti 4 H+ sunt translocati prin membrana mito-
condriala interna catre spatiul intermembranar (fig. 119).
Figura 120: Elementele lanfului respirator §i funcfionalitatea acestora
i rezumat (fig. 120), lantul respirator este format din patru

n
complexe fixe transportoare de electroni, alaturi de doi transportori
mobili (ubiquinona - CoQ §i citocromul c - Cyt-c). lntrarea elec-
tronilori
n lantul respirator este mediata de complexele I §i 11 care
preiau electronii de la NADH §i, respectiv, de la FADH2. Comple-
xele I §i II transfera electronii catre CoQ care reprezinta un depozit
electronic mobil liposolubil. De la CoQ, electronii sunt transportati
la complexul 111, iar apoi catre proteina periferica Cyt-c, care este,
de asemenea, un transportor mobil de electroni. Cyt-c transfera
339
electronii complexului IV (citocrom-c-oxidaza) carei i transfera 02

pentru a forma apa metabolica. Complexele I, Ill i IV pompeaza
protoni n spatiul intermembranar mitocondtial, generand un gra-
dient electrochimic. Numarul de protoni pompati corespunde,i n
imaginile prezentate, cu energia generata de o pereche de electroni,
suficienta pentru a reduce numai jumatate din molecula de 02 .
Fluxul de electroni este asociat cu un transfer de protoni prin

membrana, ceea ce determina un gradient chimic i unul electric.
2H+
"
Figura 121: Mode/ul chemiosmotic al sintezei ATP
340
Mitocondriile
Membrana mitocondriala interna este impermeabila la

protoni, acetia patrunzandi napoii n matricea mitocondriala, numai
prin canale specifice FO. Forta generata de micarea pro-
tonilori
napoii
n matrice furnizeaza energia pentru sinteza ATP,
catalizata de complexul F1i n asociere cu FO (fig. 121).
Sinteza mitocondriala a ATP-ului este realizata de catre un
complex proteic, ATP-sintetaza, denumit i FO-F1-ATP-aza, situat
la nivelul membranei mitocondriale interne din 10i n 10 nm.
FO-F1-ATP-aza sau unitatea tripartita, este formata din trei
regiuni cu roluri i structuri diferite (fig. 122):
,,,,,_.,........ATP
Figura 122: Structura pe subunitafi a A TP-sintetazei
Baza(FO) este formata din subunitati de tip a, b, c, realizand

un sistem de transport al protonilor. Protonii sunt preluati
prin polul P al canalului (polul P reprezinta polul corespun-
zator fetei pozitive a membranei interne mitocondriale, adi-
ca fata dinspre camera externa) i sunt cuplati la subunita-
tile
'
c, determinand rotatia
'
acestorai
n ansamblu,i
n bistratul
lipidic al membranei interne. Astfel, energia potentiala a
341
·Biologie celulara i moleculara
protonilor este transformata 1n energie cinetica de rotatie a

proteinei FO.
Unitatea FO este 1ncastrata 1n bistratul 1ipidic al membranei
mitocondriale interne i prezinta 1O - 12 subunitati c care
realizeaza rotorul acestei subunitati. La subunitatile c, este
ataata subunitatea a i doua subunitati b care se extind
pana 1n zona subunitatilor a i p, actionand ca o cremaliera.
Capul ATP-sintetazei (subunitatea F1) proemina 1n matri-
cea mitocondriala i are, la randul sau, trei subunitati a, trei
f3 i alaturi de subunitatile y , o, e: care reprezinta sistemul de
conectare la subunitatii FO la F1. Subunitatea f3 contine
situsul catalitic al formarii ATP din ADP i Pi.
Tn timpul sintezei ATP, subunitatile FO i F1 sunt cuplate
prin intermediul subunitatilor y , o, £, H+ ajung la nivelul subuni-
tatilor c prin tunelul protoni, determina rotatia FO 1n planul mem-
branei i angrenarea subunita{ii y care este parghia modificarilor
conformationale ale subunitatii F1. Modificarile secventiale de
' ' '
conformat ie ale F1, induse de modificarea rota{ionala a pozitiei
subunitatii y , determina sinteza secventiala a moleculelor ATP din
ADP i Pi.
Dupa formare, ATP-ul este eliberat de la nivelul situsului p
1n momentul contactului cu subunitatea y , iar situsul p urmator din
structura F1 va fi ocupat de un nou ADP i un Pi care formeaza
urmatoarea molecula de ATP. Sinteza ATP-ului se desfaoara 1n
prezenta Mg2+.
,l
In cazul 1n care productia de ATP depaete necesitatile

celulei, se oprete sinteza acestuia i este initiata hidroliza lui tot
la nivelul unitatii F1, doar cand aceasta este separata de FO.
Desfaurarea normala a reactiilor fosforilarii oxidative poate

suferi diverse anomalii. Afectiunile metabolice ale lantului respi-
rator poarta denumirea de citopatii mitocondriale.
342
Mitocondriile
Primul caz de boala mitocondriala a fast descris de Luft li>i

colab.,i
n 1962, i se baza pe evidentierea unor anomalii morfolo-
gice ale mitocondriilor musculare. Mitocondriile aveau talie i far-
ma variabila (rotunds sau faarte alungite) i, de asemenea, pre-
zentau alterari ale structurii lor interns: creste neregulate, uneori,
rulate concentric, ncluziuni osmiofile. Ulterior, defects ale lantului
.
i
'
respirator au fast evidentiate i la un numar de pacienti cu in-
suficienta hepatica.
Diagnosticul unei citopatii mitocondriale este unul deosebit
de dificil i de complex, necesitand parcurgerea mai multor etape.
n prezenta unui tablou clinic evocator se ce'rceteaza prezenta
i
acidozei lactice, creterea raporturilor de oxido-reducere. Ulterior
se evidentiaza anomaliile morfologice mitocondriale i se realizea-
za studiul enzimelor lantului respirator i al ADN-ului mitocondrial.
343
·Biologie celulara l?i rnoleculara

Costello, L. (2009). Mitochondria and Cancer.
Duchen, M. R. (2008). Mitochondria and calcium in health and disease.
Amsterdam Elsevier.
Lemasters, J. J., Nieminen, A.-L. & Library Inc. (2002). Mitochondria in
pathogenesis.
Marin-Garcia, J. (2005). Mitochondria and the Heart. Developments in
cardiovascular medicine, 256.
Pon, L. A. (2001). Mitochondria. Sand Diego Acad. Press.
Schapira, A. H. V. (2002). Mitochondrial function and dysfunction. Ams-
terdam; London: Academic Press.
Scheffler, I. E. (2008). Mitochondria (ih ed.). Hoboken, N. J.: Wiley-Liss.
Svensson, 0. L. (2010). Mitochondria: structure, functions, and dysfunc-
tions. New York: Nova Biomedical Books.
Tanaka, M. (2007). Mitochondria and life. Amsterdam Elsevier.
Wainio, W. W. (1970). The mammalian mitochondrial respiratory chain.
New York: Academic Press.
344
Lizozomii
Uzozomii sunt organite celulare

dinamice, de/imitate de mem-
brana proprie, cu un confinut
enzimatic bogat, amplasat rntr-un
mediu acid care realizeaza con-
trolul digestiei intracelulare a
macromolecule/or. Sunt pre-
zenf i rn toate celulele animale
(cu excepfia eritrocitelor ma-
ture) §i se definesc mai mutt
prin caracteristicile funcfiona/e
decat prin cefe structurale.
Lizozomii au fast descoperiti de citologul belgian Christian
de Duve, Tn 1957, Tn urma cercetarilor biochimice privind distri-
butia intracelulara a enzimelor. Ulterior, conceptul de lizozom a
capatat 9i suport morfologic, prin evidentierea prin microscopie
electronica. Studiile electrono-microscopice evidentiaza atat faptul
ca lizozomii reprezinta mai mult de 5% din volumul celular, cat 9i
heterogenitatea de marime 9i structura morfologica.
Aparent, lizozomii reprezinta unele dintre cele mai simple
organite celulare: saci cu enzime (hidrolaze acide) ce pot digera
orice tip de molecule biologice. Din acest motiv, au fast considerati
initial doar echivalentul unui sistem digestiv al celulelor.
Cercetari recente sugereaza ca exista doua tipuri de lizo-
zomi: secretori §i convenfionali 9i ca cele doua functii atat cea de-
gradativa, cat 9i cea secretorie pot fi controlate.
Lizozomii convenfionali sunt parte a unui sistem complex,
numit sistemul endozomillizozomi (fig. 123). Se gasesc Tn majori-
tatea celulelor eucariote 9i datorita hidrolazelor acide pe care le
contin, au rol Tn degradarea 9i reciclarea unor molecule endogene
sau exogene.
.. ..
l
izozom endolizozom endozom secundar (tardiv)
Figura 123: Uzozomii convenfionali rn circuitul compartimentelor endozomale
Lizozomii secretori se gasesc Tn anumite tipuri de celule (de

exemplu: limfacitele T etc.) 9i sunt compartimente lizozomale spe-
cializate care stocheaza proteine secretorii nou sintetizate !i>i pre-
-Biologie celulara i moleculara
zinta secretie reglata ca raspuns la o serie de stimuli externi: de

exemplu: melanozomii, granulele bazofilului, granulele azurofile
din neutrofil, granulele dense din plachetele 'Sangvine, granulele
litice din limfocitele T citotoxice etc. Se deosebesc de lizozomii
conventionali prin faptul ca depoziteaza produsul de secretie spe-
cific celulei n care se gasesc.
Cercetarile au aratat cai n cazul limfocitelor T citotoxice,
granulele litice sunt singurele organite tip lizozomi prezente i se
caracterizeaza prin colocalizarea hidrolazelor acide lizozomale i a
proteinelor de secretie (de exemplu: perforina).i n alte tipuri celu-
lare (de exemplu:i n melanocite), au fost evidentiate ambele tipuri
de lizozomi.
Morfologia lizozomilor
Electrono-microscopic, lizozomii apar ca structuri citoplas-
matice veziculare, sferice, ovalare sau chiar tubulare (la nivelul
hepatocitelor, macrofagelor etc.) cu un continut heterogen, electro-
no-dens, delimitati de o membrana simpla. Forma lor este modu-
lata de o serie de factori, printre care pH-ul citoplasmatic, tipul ce-
lular i starea functionala a celulei.
Figura 124: Lizozomii convenfionali rn circuitul compartimentelor endozomale
Adesea, au o pozitie intracelulara caracteristica (de exem-

plu: n hepatocite- n vecinatatea canaliculilor biliari, n nefrocitele
i
tubului proximal -i n citoplasma supranucleara,i n fibroblastelei
n
cultura - perinuclear).
Marimea lizozomilor variazai ntre sub 1 µm,i n multe tipuri
celulare (de exemplu: hepatocite, neuroni), i cativa microni,i n
348
Lizozomii
macrofage.i n functie de tipul celular, exista diferente importante

privind prezenta lizozomilor: Tn fibroblastele normale §i hepatocite,
lizozomii reprezinta aproximativ 0,5% sau chiar mai putin din vo-
lumul citoplasmatic, Tn timp ce, n macrofage, acest procent este
mult mai mare.
Marimea §i numarul lizozomilor poate cre§te, n orice tip ce-
lular, atunci cand ace§tia acumuleaza reziduuri nedegradate sau
n cazul bolilor lizozomale numite tezaurismoze.
,
Heterogenitatea structurala a lizozomilor este, Tn primul
rand, consecinta functiei lor ca §i organite de digestie.i n macro-
fagele din hepatocite, structurile hematopoietice, limfatice, lizozo-
mii sunt, adesea, polimorfi §i pot contine materiale nedigerate sau
partial degradate. Un exemplu 11 constituie §i acumularea de gra-
nule de lipofuscina, n lizozomii neuronilor, cardiomiocitelor, hepa-
tocitelor sau a celulelor producatoare de hormoni steroizi.
12.2. STRUCTURA MOLECULARA

Lizozomii contin eel putin 60 enzime hidrolitice (hidrolaze
acide), incluzand proteaze, lipaze, fosfolipaze, glicozidaze, nucle-
aze, capabile de a controla digestia macromoleculelor intracelu-
lare, a componentelor celulare Tmbatranite, uzate cat §i a materia-
lelor internalizate din mediul extracelular. Pentru fiecare specie
moleculara, exista un tip de hidrolaza lizozomala. Pentru o func-
tionare optima, aceste hidrolaze trebuie activate prin clivaj pro-
teolitic §i necesita un mediu acid pe care lizozomii II ofera prin
mentinerea unui pH de aproximativ 4,5 - 5 1n interior. Astfel, mo-
leculele citoplasmatice sunt protejate, 1n cazul eliberarii acciden-
tale a hidrolazelor acide lizozomale,, n citoplasma, deoarece, la
acel nivel, enzimele sunt inactive, la un pH de circa 7,2.
Printre aceste hidrolaze, se gasesc fosfataza acida §i {3-
glucuronidaza, utilizate ca markeri histochimici pentru lizozomi.
Din punct de vedere molecular, membrana lizozomala prezinta:
1. o pompa de tip V (vacuolar), care pompeaza protoni n
matricea lizozomala, pentru mentinerea pH-ului acid intralizozomal;
349
2. Tnveli glicoproteic bogat Tn carbohidrati pe fata interna

(non-citoplasmatica), pentru protectia Tmpotriva actiunii propriilor
enzime;
3. eel putin apte proteine membranare intrinseci specifice,
proteine transportoare pentru transportul aminoacizilor, glucozei,
nucleotidelor i altar molecule din lizozomi spre citoplasma.
12.3. BIOGENEZA LIZOZOMILOR
Pe baza rezultatelor cercetarilor de biologie moleculara din

ultimii ani, se considera ca biogeneza lizozomilor face parte dintr-
un proces continuu, dinamic, de remodelare a veziculelor implicate
Tn derularea cailor endocitozei. Aceste remodelari veziculare sunt
reglate de molecule proteice complexe, cum ar fi rab5, rab7 etc.
Mai Tntai, hidrolazele lizozomale sunt sintetizate la nivelul
ribozomilor ataati reticulului endoplasmic granular (REG), translo-
cate Tn lumenul REG, unde sufera o serie de prelucrari urmate de
transportul prin intermediul microveziculelor catre reteaua cis-Golgi.
CH2o-P
ll' (Man6P)
Man-H
Man
I
'''it11
, ri-Ma n/ \ Man-Man
\
Man-Man6P.-Man
Oligozaharid cuplat
la asparagina (Asn)
Figura 125: Glicozilarea reziduuri/or asparaginice

pentru precursorii lizozomali §i fosforilarea manozei rn pozifia C6
La nivelul cisternelor Golgi, enzimele lizozomale sunt modi-

ficate prin adaugare de reziduuri glucidice, grupari fosfat i a gru-
parii marker de manoza - 6 fosfat (M6P) (fig. 125).
Tn reteaua trans-Golgi (TGN), sunt prezenti receptori spe-
cifici pentru M6P care recunosc, cupleaza i separa enzimele lizo-
350
Lizozomii
zomale de alte proteine din aceasta zona a cisternelor Golgi. Cu-

plarea oligozaharidelor la receptorul M6P are loc 'fn TGN la pH =
6,5 - 6,7 i reprezinta un fenomen reversibil, dependent de pH
(pH = 6 'fn endozomul secundar). Receptorii pentru M6P sunt pro-
teine transmembranare care sunt cuplate i la proteinele adap-
toare de pe fata citoplasmatica a complexului Golgi, fiind capabile
de a induce formarea de vezicule 'fnvelite 'fn clatrina. Aceste ve-
zicule se formeaza prin ,,'fnmugurirea" zonei TGN i prezinta un
continut electrono-dens omogen. Veziculele desprinse din TGN
fuzioneaza cu unul dintre compartimentele endozomale: direct cu
endozomul secundar sau via endozomul primar, de unde ajung 'fn
endozomul secundar, iar aici, datorita interiorului acid (pH = 6),
are loc separarea receptorilor de moleculele enzimatice, urmata
de reciclarea receptorilor catre TGN.
Exista 'fnca controverse privind momentul 'fn care veziculele
ce contin enzimele lizozomale intersecteaza calea endocitozei,
dar, oricum ar fi, endozomul secundar este compartimentul unde
se desface legatura pH-dependenta dintre enzimele lizozomale i
receptorii pentru M6P (fig. 126).
Galea de la endozomul secundar pana la lizozomul primar
sau protolizozom nu este, 'fnca, 'fn totalitate, elucidata fiind pro-
puse mai multe posibilitati:
1. enzimele lizozomale i proteinele membranei lizozomale,
ambalate 'fn vezicule de transport, se desprind din endozomul se-
cundar i fuzioneaza cu lizozomi preexistenti 'fn citoplasma;
2. endozomul secundar se fragmenteaza, sufera modificari
ulterioare i devine lizozom primar;
3. endozomul secundar fuzioneaza temporar (,,kiss-and-
run") cu un lizozom preexistent, formeaza un organit hibrid, rea-
lizeaza un schimb de molecule, urmat, dupa desprindere, de con-
densarea continutului
'
noului lizozom;
Mecanismul sortarii 'fn TGN nu este 'fntotdeauna eficient,
motiv pentru care cantitati mici din precursorii enzimelor lizozo-
male sunt eliberate prin exocitoza i recapturate de celula prin en-
docitoza mediata de receptori, responsabili de aceasta fiind recep-
torii pentru M6P - independenti din plasmalema (aspect 'fntalnit 'fn
cazul monocitelor/macrofagelor).
351
,Biologie celulara i moleculara
Se considera ca mecanismul reprezinta una dintre moda-

litatile prin care s-ar putea trata eficient o serie de afectiuni lizo-
zomale congenitale.
precursor enzima
lizozomalii
=..
}
-- ' precursor /
/"'"''@''.,,/ ,, de hldrola; /
\ f ', llzozo91ala
·.\. (\:7j ..
transport vezicular
reclclarea receptorllor
Figura 126: Transportul precursorilor hidrolazelor acide lizozomale din reteaua

trans-Golgi spre compartimentul endozomal (endozom precoce)
12.4. CLASIFICARE $1 FUNCTII
i mod traditional, Tn celulele animale, se descriu trei tipuri

n
de lizozomi conventionali, corelate cu functiile Tndeplinite de aceste
organite:
a. lizozomi primari/protolizozomi - organitele nou formate;
b. lizozomi secundari care pot fi:
1. heterolizozomilfagolizozomilvacuole de digestie -
rezultati Tn urma fuziunii lizozomilor primari cu vezi-
cule de fagocitoza (fagozomi), Tn cursul unui proces
numit heterofagie;
352
Lizozomii
2. autolizozomilcitolizozomi care se formeaza prin fu-

ziunea lizozomilor primari cu vezicula autofagica Tn
timpul procesului de autofagie;
3. crinolizozomi - formati Tn urma fuziunii lizozomilor
'
primari cu granulele de secretie - proces numit cri-
nofagie;
c. carpi rezidualiltelolizozomillizozomi ter(iarilcorpusculi
den§i - lizozomii Tn care digestia materialului internalizat s-a Tn-
cheiat; se caracterizeaza prin prezenta unui miez electrono-dens
format din materiale nedegradate.
Aa cum evidentiaza i clasificarea prezentata mai sus,
principa/a funcfie a lizozomilor este de digestie a unor constituenti
celulari sau extracelulari, fiind considerat,i, Tn mod curent, com-
partimentul final de degradare a materialelor internalizate pe caile
endocitozei mediate de receptori, cat i a celor fagocitate.
Aceasta functie a lizozomilor include urmatoarele procese:
1. Heterofagia
Prin fagocitoza, celulele specializate internalizeaza bacterii,
corpii apoptotici i alte particule cu diametrul de 0,5 µm. Dupa
formarea vacuolei de fagocitoza - fagozomul -, aceasta fuzio-
neaza cu un lizozom, formandu-se un organit hibrid - fagolizo-
zomul - a carui functie este de a degrada particulele fagocitate
prin procesul de heterofagie.
2. Autofagia este un mecanism important, prin care sunt
degradate o serie de componente citoplasmatice, inclusiv orga-
nite, de catre enzimele lizozomale. Are rol important Tn remode-
larea celulara din timpul diferentierii i dezvoltarii organismelor
multicelulare, Tn tum-over-ul global al componentelor celulare.
Este un mecanism catabolic conservat Tn decursul evolutiei ce se
Tntalnete Tn toate celulele eucariote. Este esentiala pentru supra-
vietuirea celulei Tn perioade de nutritie deficitara, oferind elemen-
tele esentiale prin degradarea constituentilor celulari existenti.
Activarea autofagiei Tn aceste perioade este reglata de o serie de
hormoni, inclusiv glucagonul i insulina.
Se descriu trei tipuri de autofagie: macroautofagie - numita
frecvent, simplu, autofagie, microautofagie - conservata de la or-
ganismele cele mai simple pana la mamifere i autofagie cha-
perone-mediate. descrisa numai la mamifere.
35
3
Macroautofagia este farma de autofagie care implica 1nglo-

barea unor parti mari de citoplasma ce contine, de obicei, organite
celulare sau parti Ymbatranite, uzate, din organitele celulare, cat i
alte elemente, Yn vezicule cu membrana dubla numite autofa-
gozomi (vacuole autofagice); acetia fuzioneaza apoi cu lizozomii,
farmand aa-numitele organite hibride - autolizozomi. Pe masura
ce degradarea continutului se apropie de final autolizozomii se
transfarma Yn lizozomi tertiari sau carpi reziduali. Etapele macro-
autofagiei sunt mediate de un grup de proteine complexe, iar mu-
tatiile genelor ce codifica aceste proteine sunt asociate cu o serie
de manifestari patologice.
i
n ceea ce privete microautofagia, ea reprezinta mecanis-
mul prin care are loc degradarea lizozomala atat a unor proteine
citoplasmatice, cat i a celor din membrana lizozomilor. Se con-
sidera ca implica Ynmugurirea, spre interior, a membranei lizozo-
male cu Ynglobarea unor parti mici din citoplasma, urmata de far-
marea unor vezicule Yn lumenul lizozomilor. Mecanismul a fast evi-
dentiat in vitro i este considerat de majoritatea autorilor ca mo-
dalitate de farmare a corpilor multiveziculari in vivo.
3. Crinofagia, ca i fagocitoza, este un mecanism specific
numai anumitor tipuri celulare i are rolul de a modula cantitativ
produsul de secretie ce urmeaza a fi exocitat. Initial, a fast des-
crisa Yn celulele hipofizei, dar cercetarile au evidentiat prezenta
acestui mecanism i Yn alte tipuri celulare specializate Yn sinteza i
secretie. Ea implica fuziunea directa a granulelor de secretie cu
lizozomii. Cu toate acestea, uneori, produii de secretie pot fi di-
rectionati din reticulul endoplasmic direct catre lizozomi, Yn vede-
rea degradarii, printr-un mecanism asemanator crinofagiei.
12.5. LIZOZOMII iN PATOLOGIE
Lizozomii sunt implicati Yn patologie Yn trei moduri impor-

tante: prin acumulare de materiale nedegradate, ceea ce conduce
la aparitia afectiunilor numite tezaurismoze lizozoma/e, prin rupe-
rea membranei i prin secretia necontrolata a hidrolazelor acide
lizozomale Yn mediul extracelular.
354
Lizozomii
Tezaurismoze/e lizozoma/e sunt boli congenitale ce au la

baza functionarea deficitara sau lipsa uneia dintre enzimele lizo-
zomale, datorita unor mutatii la nivelul genelor ce codifica protein-
enzima respectiva i/sau cofactorii acesteia. Rezultatul este acu-
mularea substratului enzimatic nedegradat Tn lizozomi, urmata de
marirea de volum a celulelor (balonizare), disfunctii celulare im-
portante i, Tn final, moartea celulara.
Majoritatea tezaurismozelor lizozomale au la baza disfunc-
\ia unei singure hidrolaze.i n cazul Tn care sunt asociate i defi-
ciente ale activatorilor, cofactorilor sau ale proteinelor implicate Tn
sinteza, procesarea i livrarea enzimelor lizoz0male catre organit,
se ajunge la perturbarea generalizata a functiei lizozomilor.
Manifestarile clinice ale tezaurismozelor sunt permanente i
progresive, se evidentiaza uneori Tnca din primul an de viata, fara
legatura cu alimentatia i,i n general, independente de alte afec-
tiuni fiind consecinta specificita\ii enzimei deficitare i a caii meta-
bolice Tn care este implicata, a alterarii functiilor celulare asociate
acumularii excesive de substrati n lizozomi i particularitatii tesu-
tului implicat. De exemplu, neuronii recicleaza cantitati mari de
gangliozide ce sunt componente de baza ale membranei lor i a
sinapselor. Enzimele de degradare ale gangliozidelor sunt bine
exprimatei n tesutul nerves, fiind necesare,in special,i
n primii ani de
viata, cand are lac elongarea axonilor, ramificarea dendritelor i
dezvoltarea sinapselor. Deficitul functional al uneia dintre aceste
enzime determina acumularea intra-neuronala de gangliozide i
afectarea functiilor celulare.
n preznt, se cunosc peste 40 de tipuri de tezaurismoze
i
lizozomale, iar cercetarile din ultimii ani au evidentiat i o serie de
implicari,in aceasta patologie, a proteinelor integrale din mem-
brana lizozomilor.
Tezaurismozele lizozomale pot fi clasificatei n functie de de-
ficitul enzimatic caracteristic i/sau substratul acumulat (tabel 16).
35
5
Tabet 16: Tezaurismoze lizozomale

Tip afectiune Proteina afectata' Substrat
acumulat
Sfingolipidoze
Boala Fabry a-galactozidaza A Ceramide
i alte substante
caracteristice
grupei sangvine B
Lipogranulomatoza Farber Ceramidaza Ceramide
Boala Gaucher B-qlucozidaza Glicozil-ceramide
Boala Niemann-Pick A si B Sfinqomielinaza Sfingomielina
Deficit de activator Activator sfingolipidic Glicolipide
sfingolipidic
Gangliozidoza GM-1 13-galactozidaza Gangliozide GM 1
Gangliozidoza GM-2 13-hexozaminidaza A Gangliozide GM2 l?i
(boala Tay-Sachs) qlicolipide fnrudite
Gangliozidoza GM-2 13-hexozaminidaza A Gangliozide GM2 l?i
(boala Sandhoff) l?i B glicolipide fnrudite
Gangliozidoza GM-2 Proteina Gangliozide GM2 l?i
(deficit de activator GM2) activatoare a GM2 glicolipide fnrudite
Mucopolizaharidoze
(MPS)
MPS I (sdr. Hurler) a-iduronidaza Dermatan-sulfat
si heparan-sulfat
MPS II (sdr. Hunter) lduronat-2 sulfataza Dermatan-sulfat
l?i heparan-sulfat
MPS IIIA (sdr. Sanfilippo) Heparan N-sulfataza Heparan-sulfat
MPS 1118 (sdr. Sanfilippo) N-acetil-a- Heparan-sulfat
qlucozaminidaza
MPS IIIC (sdr. Sanfilippo) AcetilCoA:a- Heparan-sulfat
glucozamid N-
acetiltransferaza
MPS 1110 (sdr. Sanfilippo) N-acetilglucozamin-6- Heparan-sulfat
sulfataza
Sdr. Morquio A N-acetilglucozamin-6- Keratan-sulfat,
sulfat-sulfataza condroitin-6-sulfat
Sdr. Morquio B 13-qalactozidaza Keratan-sulfat
MPS VI (Maroteaux-Lamy) N-acetilgalactozam Dermatan-sulfat
ina- 4-sulfataza
356
Lizozomii
Tip afectiune Proteina afectata Substrat

acumulat
(arilsulfataza B)
MPS VII (Sly) -glucuronidaza Heparan-sulfat.
dermatan-sulfat,
condroitin-4 i -6
sulfat
Oligozaharidoze
ti glicoprotei 11oze
Boala Pompe (tezaurismoza a-glucozidaza Glicogen
cu glicogen tip II)
Cistinoza Cistinozina Cistina
Boala Danon LAMP2 Deeuri
citoplasmatice
$i glicogen
Tezaurismoza infantila cu Sialina Acid sialic
acid sialic $i Boala Salla
Mucolipidoza (ML) IV Mucolipina-1 Lipide i
mucopolizaharide
acide
Boala Niemann Pick C NPC1 i 2 Colesterol i
sfingolipide
Altele
Galactosialidoza Catepsina A Sialil-oligozaharide
Boala cu celule I, N-acetilglucozaminil-1- Oligozaharide,
polidistrofia pseudo-Hurler fosfotransferaza mucopolizaharide
$i lipide
Deficienta multipla de Enzima generatoare de Sulfatide
sulfataze Ca-formil-glicina
Lipofuscinoza ceroida CLN1 palmitoil-tio- Tioesteri lipidati
neuronala (NCL)1 (boala esteraza-1
Batten)
NCL2 (boala Batten) CLN2 tripeptidil-amino- Subunitati c ale
peptidaza-1 ATP-sintetazei
NCL3 (boala Batten) Transportor al argininei Subunitati c ale
ATP-sintetazei
I
n cazul unor tezaurismoze, medicii practicieni au descris
simptomele bolii cu mult Tnainte de a se descoperi bazele mo-
leculare ale acestora: de exemplu: boala Tay-Sachs a fost descrisa,
Tnca din 1881, de Warren Tay, i apoi, Tn 1886, de Bernard Sachs.
357
.Biologie celulara l?i moleculara
Icazul bolii Gaucher, Tn 1882, Phillipe Gaucher descrie, la o

n
pacienta de sex feminin, existenta unei spline marite, cat i pre-
zenta unor celule mult marite de volum la acest nivel. Ulterior,
aceste celule au primit denumirea de celulele Gaucher. n urmatorii
50 de ani, au fost descrise mai multe simptome ale bolii Gaucher,
iar Tn 1934, materialul acumulat a fost identificat ca fiind glucozil-
ceramida. n perioada 1950 - 1960, Brady i colab. au evidentiat
faptul ca acumularea de glucozilceramida este determinata de dis-
functia 13-glucozidazei. Dupa momentul descoperirii enzimei res-
ponsabile, a aparut i conceptul de terapie de rnlocuire a enzimei
inactive prin administrarea formei active. Terapia s-a dezvoltat
mult la Tnceputul anilor '90 i este i astazi utilizata pentru trata-
mentul a peste 3.000 de pacienti din Tntreaga lume. Cu toate pro-
gresele facute Tn ultimii ani, pentru Tntelegerea bazelor moleculare
l?i genetice ale acestei boli, nu a fast Tnca elucidat mecanismul prin
care acumularea masiva de glucozilceramida Tn lizozomi afec-
teaza activitatile celulare normale.
Manifestarile clinice diverse i multisistemice observate Tn
tezaurismoze demonstreaza ca functionarea normala a enzimelor
lizozomale este esentiala pentru sanatatea celulelor organismului
uman.
358
Lizozomii
Andrews, N. W. (2002). Lysosomes and the plasma membrane:

trypanosomes reveal a secret relationship. The Journal of cell
biology, 158(3), 389-394.
Arnold. Lakowska, H, Maciejewski, R., Szkodziak, P. & Staskiewicz, G.
(2001). Changes in the activity of lysosomal enzymes in rat
kidneys in the course of acute pancreatitis. Medical science
monitor: international medical journal of experimental and clinical
research, 7(6), 1193-1197.
Luzio, J. P., Pryor, P. R. & Bright, N. A (2007). Lysosomes: fusion and
function. Nature reviews. Molecular cell biology, 8(8), 622-632.
Luzio, J. P., Rous, B. A, Bright, N. A , Pryor, P. R., Mullock, B. M. &
Piper, R. C. (2000). Lysosome-endosome fusion and lysosome
biogenesis. Journal of cell science, 113 ( Pt 9), 1515-1524.
Morales, C. R., Zhao, Q. & Lefrancois, S. (1999). Biogenesis of lyso-
somes by endocytic flow of plasma membrane. Biocell : Official
journal of the Sociedades Latinoamericanas de Microscopia
Electronica... et. al, 23(3), 149-160.
Mullins, C. (2005). The biogenesis of cellular organelles. Georgetown,
Tex. New York, N.Y.: Landes Bioscience/Eurekah. com; Kluwer
Academic/Plenum.
Mullock, B. M., Bright, N. A , Fearon, C. W., Gray, S. R. & Luzio, J. P.
(1998). Fusion of /ysosomes with late endosomes produces a
hybrid organelle of intermediate density and is NSF dependent.
The Journal of cell biology, 140(3), 591-601.
Murphy, R. F. (1991). Maturation models for endosome and /ysosome
biogenesis. Trends in cell biology, 1(4), 77-82.
Schmid, J. A , Mach, L., Paschke, E. & Glossl, J. (1999). Accumulation
of sialic acid in endocytic compartments interferes with the
formation of mature /ysosomes. Impaired proteolytic processing
of cathepsin B in fibroblasts of patients with /ysosomal sialic acid
storage disease. The Journal of Biological Chemistry, 274(27),
19063-19071.
Steer, M. L. & Saluja, A K. (1996). Lysosomal enzymes and pan-
creatitis. Gastroenterology, 110(3), 965-967.
Storrie, B. (1993). Endosomes and /ysosomes: a dynamic relationship.
Greenwich, Conn. JAi Press.
Tomlinson, S. (2008). Mechanisms of disease: an introduction to clinical
science (2nd ed.). Cambridge, UK; New York: Cambridge Uni-
versity Press.
359
Toyomura, T., Murata, Y., Yamamoto, A., Oka, T., Sun-Wada, G. H.,
Wada, Y. & Futai, M. (2003). From /ysosomes to the plasma
membrane: localization of vacuolar-type H+ -ATPase with the a3
isoform during osteoclast differentiation. The Journal of biological
chemistry, 278(24), 22023-22030.
Trombetta, E. S., Ebersold, M., Garrett, W., Pypaert, M. & Mellman, I.
(2003). Activation of lysosomal function during dendritic cell
maturation. Science, 299(5611), 1400-1403.
360
Peroxizomii
Peroxizomii sunt organite celu-

lare membranare implicate rn
metabolismul peroxidului de hi-
drogen §i {3-oxidarea acizilor
gra§i. Au fost descoperi(i, mai
rntai, rn 1954, de Rhodin, rn ne-
frocitele tubului proximal la mai-
mufa, numifi ,,microbodies" §i
mai apoi, electrono-microscopic
de Rouiller §i Bernhard, rn he-
patocitele de §Obolan.
Particularitatile biochimice ale peroxizomilor au fast eviden-
tiate de cercetarile lui de Duve §i Baudhuin (1975); constatand ca
aceste organite contin enzime care catalizeaza reactii prin care se
produce sau se descompune H202, de Duve introduce termenul
de peroxizomi.
Cu variatii de marime §i forma, precum l?i cu o serie de
diferente ultrastructurale, peroxizomii au fast evidentiati 1n toate
celulele eucariote (cu exceptia eritrocitelor mature), de la cele uni-
celulare la organismele pluricelulare, plante §i animale.
Caracteristici morfologice i moleculare

Peroxizomii au dimensiunile cuprinse 1ntre 0,1 µm (micro-
peroxizomii de la nivel intestinal §i cerebral) §i 0,2 - 1,0 µm (ca-
racteristic pentru peroxizomii de la nivelul hepatocitelor §i nefro-
citelor).
Electrono-microscopic, se constata ca au forma sferica sau
ovalara, sunt 1nconjurati de o membrana unica l?i au o matrice cu
aspect granular fin. La unele specii, 1n peroxizomii din hepatocite,
se evidentiaza, la nivelul matricei, o structura densa, cristalina,
numita nucleoid, ce contine uratoxidaza. Aceasta structura nu a
fast evidentiata 1n hepatocitele umane normale care nu contin
aceasta enzima.
Uneori, peroxizomii pot fi evidentiati sub forma unor tuburi
interconectate - reticu/ peroxizomal (de exemplu: 1n hepatocite),
sub farma de microperoxizomi - termen care se aplica celor cu
dimensiunile cuprinse 1ntre 0, 1 - 0,5 µm diametru - sau situati 1n
vecinatatea reticulului endoplasmic, fara a avea 1nsa comunicare
luminala. Aceasta vecinatate faciliteaza cooperarea biochimica
dintre cele doua organite. Raspandirea peroxizomilor atat 1n hepa-
tocite, cat §i 1n alte tipuri celulare este, 1n general, uniforma.
.Biologie celulara i moleculara
Numarul i volumul peroxizomilor poate crete ca raspuns

la nevoile metabolice ale organismului respectiv, cercetarile din
ultimii ani indicand posibilitatea existentei unui mecanism de re-
glare prin monitorizarea nevoilor metabolice celulare, excesul de
peroxizomi fiindi ndepartat, la un moment dat, prin autofagie.
Din punct de vedere molecular, cu cele aproximativ 60
enzime cunoscute din matrice i 45 proteine membranare, se poate
spune ca peroxizomii sunt printre cele mai simple organite celulare
ntalnitei
i n celulele eucariote.
Caracterizarea biochimica a peroxizomilor a fast realizata
initial de Ch. de Duve i colab., n 1975. S-a constatat ca indiferent
de tipul celular, catalaza este o prezenta constantai n matricea pe-
roxizomilor. Alaturi de catalaza, matricea peroxizomala contine
oxidaze (de tip a-hidroxiacid, D-aminoacid etc.) care produc,i n
urma reactiilor catalizate, H202 ce va fi apoi degradata de cata-
laza, dehidrogenaze, acil transferaze etc.
Atat membrana, cat i matricea peroxizomilor contine o serie
de proteine numite peroxine, cu roli n biogeneza organitului,i n
controlul numarului de peroxizomi i al volumului acestora (de
exemplu: Pex11, Pex.25), transportul acizilor grai, metabolitilor etc.
Spre deosebire de mitocondrii, peroxizomii nu contin AON i
nici ribozomi. Atat peroxinele, cat i alte proteine din matricea i
membrana peroxizomilor sunt codificate de gene (PEX) localizatei n
nucleu.
Deoarece peroxizomii, ca i mitocondriile, reprezinta o

structura importanta ce utilizeaza 02, s-a emis ipoteza conform
careia peroxizomii reprezinta un vestigiu al unui organit n care se
desfaura metabolismul 02i n primele celule eucariote. Conform
acestui punct de vedere, acest organit era utilizat probabil de ce-
lule pentru scaderea concentratiei intracelulare de 02, reactii oxi-
dative etc. Dezvoltarea ulterioara a mitocondriilor a facut ca o se-
rie de reactii ce se desfaurau anteriori n peroxizomi sa fie pre-
luate de acestea.
364
Peroxizomii
Tn ceea ce privete procesul de formare a acestui organit,

initial, s-a considerat ca peroxizomii sunt generati de reticulul
endoplasmatic neted, prini nmugurire i fisiune.
Tn urma studiilor de biologie moleculara, s-au evidentiat,
nsa, doua aspecte importante:
i
• aproape toate proteinele peroxizomale nu sunt glicozilate;
• atat proteinele matricei peroxizomale, cat i cele ale
membranei organitului sunt sintetizate la nivelul poliribo-
zomilor liberi din citoplasma i importate, post-transla-
tional, n organit.
Datorita acestor aspecte, pentru biogeneza acestui organit,
s-au propus doua modalitati ce coexista:
1. creterea i fragmentarea peroxizomilor preexistenti;
2. formarea unui nou organit pornind de la o vezicula
membranara pre-peroxizomala.
Tn ciuda argumentelor solide privind aceste doua modalitati
de formare a peroxizomilor, cercetarile recente au condus la ree-
valuarea rolului reticolului endoplasmici n biogeneza acestui or-
ganit. Astfel, s-a conturat un nou model, conform caruia mai ntai
are loc insertia,i n anumite zone din membrana reticulului endo-
plasmic, a moleculelor proteice Pex3 (proteina membranara pero-
xizomala) i formarea unor adevarate nuclee de origine a peroxizo-
milor din care, ulterior, prin nmugurire, se desprinde noul peroxizom.
Modelele implica importul proteinelor membranare i din
matrice, originea lipidelor membranare peroxizomale ramanandi n-
ca controversata.
lmportul proteinelor peroxizomale

Aa cum mentionam mai sus, majoritatea proteinelor din
matricea i membrana peroxizomilor sunt codificate de gene situ-
atei
n nucleu, sintetizate la nivelul poliribozomilor liberi din cito-
plasma i importate, post-translational,i n organit. Studiile de bio-
logie moleculara i genetica au evidentiat existenta a 28 gene
PEX ce codifica proteine peroxizomale sau cu rol n translocarea
acestorai
n organit, din care 13 sunt conservate la specia umana.
Recent, au fost identificate noi gene PEX ce codifica proteine cu
rol n reglarea numarului i proliferarii peroxizomilor.
Mecanismul unanim acceptat al importului proteinelor pe-
roxizomale implica o serie de peroxine localizate atati n cito-
365
plasma, cat i Tn membrana peroxizomilor (receptorii citoplasmatici

Pex5, Pex7, Pex 19 i proteinele integrale membranare Pex13,
Pex3, Pex16, Pex17 etc.).
Astfel, post-translational, proteinele peroxizomale ce pre-
zinta o secventa semnal (PTS1, PTS2 sau mPTS, Tn cazul protei-
nelor membranare) sunt transferate Tn citoplasma, recunoscute de
receptori, Pex5, Tn cazul secventei semnal PTS1 i Pex7, Tn cazul
PTS2, Tntregul complex fiind directionat catre membrana peroxi-
zomului unde se va lega la complexul proteic de translocare ce
contine peroxinele Pex13, Pex14, Pex2, Pex10 i Pex12. Dupa
transferul proteinei peroxizomale receptorii revin 1n citoplasma via
factorii de reciclare Pex1, Pex6 i Pex26.
Tn momentul de fata, este unanim admis faptul ca peroxi-

zomii sunt sediul unor importante procese metabolice ce includ:
1. {3-oxidarea acizi/or gra§i cu /ant lung §i foarte Jung de atomi de
carbon
Din punct de vedere functional, contributia mitocondriilor Tn
oxidarea acizilor grai este considerata a fi mai importanta decat
cea a peroxizomilor. Cu toate acestea, peroxizomii sunt speciali-
zati Tn catabolismul acizilor grai cu lant foarte lung (mai mult de
22 atomi de carbon), a unor acizi grai nesaturati etc. Deficientele
acestui sistem specializat al 13-oxidarii acizilor grai conduc la
aparitia unor modificari biochimice (de exemplu: nivele crescute
ale acizilor grai cu lant foarte lung), considerate markeri impor-
tanti Tn diagnosticul unor boli peroxizomale.
2. Sinteza p/asmalogenilor
Plasmalogenii sunt compu i importanti ai familiei fosfolipi-
delor structurale membranare, deosebindu-se de acestea prin
faptul ca lanturile de acizi grai sunt legate de glicerol prin legaturi
eterice i nu esterice. Se gasesc Tntr-o proportie destul de mare,
Tntr-o serie de membrane, cum ar fi teaca de mielina. Primele do-
366
Peroxizomii
ua. etape ale biosintezei acestor lipide membranare au loc Tn

peroxizomi; produsul acestor reactii este apoi transferat Tn reticolul
endoplasmic, unde este completata. sinteza acestor compu§i.
3. Sinteza de steroli §i acizi biliari
4. Oxidarea D §i L-aminoacizifor, L-a-hidroxiacizilor
5. Catabo/ismul purine/or, poliaminelor
6. Metabolismul peroxidului de hidrogen
Cantitatea destul de mare de H202, generata. de oxidarile

peroxizomale poate fi citotoxica., Tn lipsa mecanismelor de des-
compunere, detoxificare, de la nivelul organitului. Astfel, catalaza,
una dintre cele mai abundente enzime din peroxizomii din hepa-
tocite, Tndepline§te aceasta. functie §i descompune H202 prin unul
din mecanismele urmatoare:
catalatic:
2H202--+2H20+02
sau
peroxidazic:
H202+RH2--+R+2H20
Energia rezultata. din reactiile de oxidare ce au loc la nivelul

peroxizomilor i Tn urma ca.rora se formeaza. H202, nu este stocata.
sub forma. de ATP, ci este utilizata. ca energie calorica., Tn special,
de tesuturile specializate.
Dezvoltarea tehnicilor de biologie moleculara. a condus la

identificarea a -20 de afectiuni cunoscute sub numele de boli
peroxizoma/e, cu o incidenta.' de 1:25000. n functie de cauza lor,
au fast Tmpartite Tn doua mari categorii:
367
1. datorate deficienf ei unei singure enzime peroxizo-

male (cunoscute i sub numele de boli metabolice
peroxizomale) i
2. datorate deficienfei biogenezei organitului.
Tabet 17: Afecfiuni rn care sunt implicate metabolismul §i biogeneza peroxizomilor

Afectiuni legate de metabolismul
Enzima peroxizomala afectata
peroxizomilor
Adrenoleucodistrofie
Acil-CoA oxidaza (Acox1)
pseudo- neonatala
Deficienta de proteina MFP2 este implicatai n -oxidarea
multifunctionala 2 (MFP2) lanturilor lungi de acizi gra!?i
Deficienta de tiolaza peroxizomala 3-ketoacil-CoA-tiolaza
Adrenoleucodistrofie X-linkata ALDp (transporter)
Condrodisplazia Dihidroxiacetona-fosfat
rizomelica punctata Tip 2 aciltransferaza
Condrodisplazia
Alchil-dihidroxiacetona-fosfat sintaza
rizomelica punctata Tip 3
Boala Refsum Fitanoil-CoA hidroxilaza
Acidurie glutarica tip 3 Glutaril-CoA hidroxilaza
Hiperoxalurie tip 1 Alanina-qlioxilat aminotransferaza
Acatalasemie Catalaza
Acidurie mevalonica Mevalonat kinaza
Trihidroxi-colestanoil-CoA
Acidemie di/tri-hidroxi-colestanoica
oxidaza (Acox2)
Nanismul Mulibrey TRIM37
Neuropatia senzitivo-
2-metilacil-CoA racemaza
motorie a adultului
Afectiuni legate de biogeneza
Peroxina afectata
peroxizomilor
Pex1. Pex2, Pex3, Pex5, Pex6,
Sindromul Zellweger Pex10, Pex12, Pex13,
Pex16, Pex19
Pex1, Pex5, Pex6, Pex10, Pex12,
Adrenoleucodistrofie neonatala
Pex13
Boala Refsum infantila Pex1, Pex2, Pex5, Pex12
Condrodisplasia
Pex7
rizomelica punctata Tip 1
Tn categoria bolilor peroxizomale datorate deficien\elor bio-

genezei organitului, se 1ncadreaza sindromul Zellweger, adreno-
Jeucodistrofia i boa/a Refsum. Acestea se datoreaza unor mutatii
368
Peroxizomii
la nivelul genelor PEX (multe dintre ele afectand secventa PTS1 a

proteinelor peroxizomale) ce conduc la perturbari ale ' mecanis-
mului de import i translocare a proteinelor acestui organit.
Sindromul Zellweger a fast definit,i n 1967, de Passarge i
McAdams, ca sindrom congenital cu anomalii multiple, sugerandu-se
termenul de sindrom cerebro-hepato-renal. Majoritatea c6piilor cu
sindrom Zellweger sunt identificati la natere saui n primele luni de
viata, pe baza fenotipului caracteristic i a evidentierii unor modi-
ficari morfologice, printre care se numara absenta peroxizomilor la
nivelul hepatocitelor, mitocondrii cu forma neregulata, creste tubu-
lare i incluziuni paracristaline, la care se adauga hipotonia mus-
culara severa, afectarea renala, osteoporoza, hepatomegalia. lm-
posibilitatea formarii peroxizomilor conduce i la o serie de modi-
ficari biochimice caracteristice diferitelor cai metabolice localizate,
n mod normal, n acest organit.
i
Diferentierea clinicai
ntre pacientii cu boli metabolice pe-
roxizomale i cei cu deficiente ale biogenezei organitului este difi-
cila. Doar datele biochimice, alaturi de un examen electrono-mi-
croscopic pot conduce la un diagnostic de certitudine.
369

Antonenkov, V. D., Grunau, S., Ohlmeier, S. & Hiltunen, J. K. (2010).
Peroxisomes are oxidative organelles. Antioxidants & redox
signaling, 13(4), 525-537. doi: 10.1089/ars.2009.2996.
Fidaleo, M. (2010). Peroxisomes and peroxisomal disorders: the main
facts. Experimental and toxicologic pathology: Official journal of
the Gesellschaft fur Toxikologische Pathologie, 62(6), 615-625.
Fujiki, Y. (2000). Peroxisomes: biogenesis, function and disease:
proceedings of the international symposium - CREST research
conference; held March 12 - 14 1998, in Fukuoka, Japan. To-
towa, NJ: Humana Press.
Karnati, S. (2009). Functional characterization of peroxisomes and
pathological consequences of peroxisomal dysfunction in the
lung (1. Aufl. ed.). Giessen: WB Laufersweiler.
Karp, G. (2010). Cell biology (6. ed.). Hoboken, NJ: Wiley.
Latruffe, N. (1994). Peroxisomes. Berlin: Springer.
Lodish, H. F. (2008). Molecular cell biology (6th ed.). New York, NY:
Freeman.
Nenicu, A. (2010). Influence of peroxisomes on development, maturation
and adult functions of the testis (1. Aufl. ed.). Giessen: WB
Laufersweiler.
Oku, M., & Sakai, Y. (2010). Peroxisomes as dynamic organelles:
autophagic degradation. The FEBS journal, 277(16), 3289-3294.
Qian, G. (2010). Role of peroxisomes in physiology and pathology of
ossification and bone metabolism (1. Aufl. ed.). Giessen: WB
Laufersweiler.
Reddy, J. K. (1996). Peroxisomes: biology and role in toxicology and
disease. New York, NY: The New York Academy of Sciences.
Rucktaschel, R., Girzalsky, W., & Erdmann, R. (2011). Protein import
machineries of peroxisomes. Biochimica et biophysica acta,
1808(3), 892-900.
Saraya, R., Veenhuis, M. & Van der Klei, I. J. (2010). Peroxisomes as
dynamic organelles: peroxisome abundance in yeast. The FEBS
journal, 277(16), 3279-3288.
Wolf, J., Schliebs, W. & Erdmann, R (2010). Peroxisomes as dynamic
organelles: peroxisomal matrix protein import. The FEBS journal,
277(16), 3268-3278.
370
Ciclul celular
Toate organismele vii, indiferent

de gradul /or de complexitate,
7ncepand cu unicelularele §i ter-
minand cu mamifere/e, prezinta
un ciclu de viata caracterizat
'
prin procese de cre§tere, multi-
plicare, diferenfiere etc. Celu-
/ele, unitatile morfo-functionale
' '
ale lumii v ii, se nasc din celule
(R. Virchow - 1858), perioada
numita ciclu celular; acesta se
caracterizeaza prin derularea
unor procese fizico-chimice ex-
trem de complexe care asigura
perpetuarea §i evolufia filo-
ontogenetica a speciilor.
Ca definitie, ciclul ce/ular reprezinta ansamblul modificarilor
biochimice, morfologice §i funcfionale pe care le sufera o celula
din momentul aparifiei ei, prin diviziunea celulei-mama §i pana la
sfar§itul multiplicarii acesteia rn doua celule-fiice.
Studiul ciclului celular are o importanta deosebita Tn biolo-
gia celulara l?i moleculara, avand l?i implicatii practice, importanta
majora Tn prevenirea 9i tratamentul cancerelor, boala cu o mare
reprezentare Tn randul populatiei, provocata de perturbarea capa-
citatii celulei de a-9i regla propria diviziune.
' Tn etapa dezvoltarii embrionare 9i fetale, ciclurile celulare cu
derulare rapida asigura constituirea foitelor embrionare, a tesutu-
rilor l?i organelor care vor edifica individul adult.
Ciclul celular se deruleaza printr-o succesiune ordonata de
etape:
- G1 ( gap 1 sau growth) sau etapa presintetica este peri-
oada de cre9tere celulara Tn care informatia genetica este utilizata
prin intermediul A.RN., pentru sinteza unui mare numar de pro-
teine 9i de enzime necesare fazei S. Durata etapei G1 este foarte
variabila printre celulele unei specii;
- S (de sinteza), Tn care se realizeaza autoreplicarea geno-
mului. Tn urma acestei faze, fiecare cromozom va avea doua cro-
matide-surori, identice. Durata etapei S este aproximativ constanta
printre celulele unei specii;
- G2 (gap 2) sau postsintetica este o etapa de sinteza
proteica Tn care se verifica 9i autoreplicarea A.D.N.-ului, daca este
completa 9i corecta. Etapa G2 se caracterizeaza mai ales prin
producerea microtubulilor necesari formarii fusului de diviziune.
Aceste trei etape sunt cunoscute sub denumirea de inter-
fa:za sau perioada metabolica a celulei, premergatoarei celei de a
patra etape:
- M (de multiplicare).
, Biologie celulara l?i moleculara
Figura 127: Faze/e cic/u/ui ce/ular
Trecerea de la o etapa a ciclului celular la urmatoarea este

controlata de mecanisme specifice denumite orologiul de control
al ciclului celular care programeaza aceasta succesiune ordo-
nata de evenimente.
Orologiul de control al ciclului celular este un dispozitiv

biochimic complex care ac{ioneazai ntr-o maniera ciclica; el este
format dintr-un ansamblu de molecule proteice care interac{io-
neaza l?i care permit derularea normala sau oprirea temporara/
totala a ciclului celular G1 sau G2 din interfaza. Centrul acestui
orologiu se gasel?tein nucleu, spre care converg toate semnalele
reglatoare ale acestuia. Rolul esen{ial al orologiului de control al
ciclului celular este acela de a asigura ca autoreplicarea fiecarui
cromozom din celula-mama sa fie corecta l?i completai n vederea
producerii a doua c6pii identice, iar acel?ti cromozomi replicati sa
374
Ciclul celular
fie distribuiti Tn numar egal, fenomen numit segregare - Tn cele

doua celule-fiice pentru ca acestea sa primeasca o copie completa
a genomului celulei-mama.
Orologiul de control al ciclului celular reprezinta ,,directorui
executiv" al celulei, deoarece coordoneaza ansamblul mecanisme-
lor moleculare care conduc la multiplicarea celulara; este format
dintr-un ansamblu de molecule proteice care interactioneaza de-
clanand intrarea celulei Tn diviziune sau blocarea ei Tn interfaza.
Orologiul de control al ciclului celular prezinta urmatoarele
caracteristici:
a. sa activeze fiecare etapa a ciclului celular Tntr-un moment
specific care sa permita finalizarea corecta a acesteia;
b. sa initieze etapele Tn ordinea corecta (de exemplu: intrarea Tn
mitoza trebuie sa se faca dupa autoreplicarea genomului);
c. sa existe un comutator binar (activat/inactivat) care sa de-
claneze etapele Tntr-o maniera completa; daca evenimente
precum dezagregarea Tnveliului nuclear sau condensarea
cromozomilor ar fi initiate i nu s-ar termina corespunzator,
acest lucru ar reprezenta un dezastru finalizat prin moartea
celulara;
d. sa fie adaptabil pentru a modifica comportamentul siste-
mului de control al ciclului celular, Tn vederea adaptarii dife-
ritelor tipuri celulare la conditiile mediului Tnconjurator spe-
cifice acestora.
Programarea succesiunii de evenimente ale ciclului celular
este un sistem complex, guvernat de mai multe tipuri de molecule
proteice. Principalele proteine implicate sunt urmatoarele:
A. Ciclinele reprezinta un grup mic, dar extrem de im-

portant, de proteine ce reglementeaza parcurgerea ciclului celular.
Ciclinele sunt proteine a caror concentratie intracelulara variaza
ciclic, Tn raport cu etapele ciclului celular. itr-un ciclu celular, can-
titatea de cicline depinde de balanta dintre sinteza i degradarea
lor prin proteoliza ubiquitin dependenta.
375
·8iologie celulara 9i moleculara
(l)
.::;#
c
(l)
(.)
c:
u0
Faza G1 Faza S Faza G2 Faza M

Figura 128: Evolufia concentrafiei ciclinelor pe parcursu/ ciclului ce!ular
Oupa ordinea intrarii lor n actiune, ciclinele sei

mpart n:
• Ciclina O cu izoformele 01, 02 9i 03, fiecare din ele fiind
exprimatein tipuri celulare diferite;
• Ciclina E;
• Ciclina A;
• Ciclina 8 (izoformele 81 9i 82, cu localizare citoplasmatica
9 i 83i
n nucleu).
Recent, au mai fost identificate ciclinele F, G 9 i H, al caror
rol n derularea ciclului celular nu a fost nca elucidat complet.
B. Kinazele dependente de cicline (C.O.K. sau eye/in

dependent kinases) formeaza o familie de protein-kinaze care
initiaza sau regleaza evenimentele majore ale ciclului celular: re-
plicarea AON-ului, mitoza 9i citodiereza. lntensificarea activitatii
C.O.K., lainceputul mitozei, conduce la cre9terea fosforilarii unor
proteine specifice care controleaza condensarea cromozomilor,
dezagregareai nveli 9ului nuclear 9i asamblarea fusului mitotic.
C. Kinazele activatoare a ciclinelor (C.A.K. sau C.D.K.

activating kinases)
Activarea complexelor ciclina C.D.K. se producei n momentul in
care o alta protein-kinaza - C.A.K. - fosforileaza un acid aminat
situati
n imediata vecinatate a locului activ al C.O.K. Aceasta in-
duce o modificare a conformatiei tridimensionale, ceea ce con-
duce la o cre9tere suplimentara a activitatii C.O.K. care declan-
9eaza, la randul ei, evenimentele specifice ciclului celular.
376
Ciclul celular
D. Kinazele dependente de cicline inhibitorii (C.D.K.I. sau

cyclin dependent kinase inhibitor)
Kinazele dependente de cicline (C.O.K.) sunt inhibate de
doua familii de C.O.K.I. reprezentate de:
1. Familia p21, n care sunt incluse p21/cip1, p27/kip1 !?i
p57/kip2 care se leaga de complexele ciclina-C.O.K.
pe care le,inhiba;
2. Familia p16 reprezentata de p.16/INK4A, p.15/INK4B,
p.18/INK4C !?i p.19/INK40 care blocheaza specific
activitatea complexului ciclina 0-C.O.K. 4/6, i mpiedi-
cand cuplarea acestora 9i blocarea complexelor deja
formate.
Tn derularea ciclului celular, mai intervin 9i alte proteine:
• Proteina Rb (retinob/astoma protein-p.Rb), produsa prin trans-
criptia genei retinoblastomului, este o prezenta constantai n
derularea ciclului celular !?i se gase9te sub doua forme: fosfori-
lata/nefosforilata sau activa/inactiva. Tmpreuna cu alte proteine
p.Rb like (p.130/Rb2 i p.107), p.Rb sei ncadreazai n grupa
supresorilor tumorali, molecule implicatei n reglarea trecerii
G1/S prin blocarea complexului ciclina E-C.D.K2; inactivarea
acestui complex, prin cuplarea lui p.Rb la E2F, mpiedica trans-
criptia genelor etapei S, ca de exemplu myc, dehidrofolat re-
ductaza, AON polimeraza-a. Proteina E2F este un factor re-
glator al genelor, favorizand transcriptia genelor trecerii G1/S,
prin sinteza ciclinelor G1/S, ciclinelor S !?i a proteinelor nece-
sare autoreplicarii AON-ului.
• Proteina p.53 (supresol tumoral) este codata de o gena situata
pe AON-ul cromozomului 17, activata transcriptional de pro-
teina p.21. Aceasta proteina este un factor transcriptional care
devine activi n cazul alterarii AON-ului determinat de actiunea
unor factori fizici sau chimici. Proteina p.53 va activa trans-
criptia unor gene ale caror produ9i vor influenta atat desfa 9u-
rarea normala a ciclului celular (intarzierea derularii acestuia
panai n momentul repararii leziunilor AON), dar !?i oprirea lui i
intrarea celulei n apoptoza (sau moarte celulara programata)
n cazuli
i n care leziunile A.O.N.-ului nu pot fi reparate (0. P.
Lane i colab., 1995). Aceasta oprire mediata de p.53 se rea-
lizeaza prin acumularea lui p21 care se leaga de C.O.K., pe
care le inactiveaza (H. Zhang 9i colab., R. Lee 9i colab., 1994).
377
Func{iile lui p.Rb i p.53 sunt dereglate sau absente rn mai

mult de 50% dintre cancerele umane, ceea ce explica prolife-
rarea masiva a celulelor canceroase.
E. Factorii de transcripfie (T.F. - transcription factors)

reprezinta un mare grup de proteine ce recunosc i interpreteaza
informatiile stocate la nivelul genomului. Acetia se leaga la AON
i pot initia/inhiba programul de transcriptie genica. Prin urmare, ei
sunt elemente vitale pentru majoritatea proceselor celulare.
F. Factorii de cre,tere sunt proteine-semnal care intervin rn

procesele de cretere i multiplicare celulara.
G. Controlul ciclului celular depinde de o proteoliza ciclica a

proteinelor-cheie a sistemului de control al ciclului celular, rn
special a complexelor ciclina - C.O.K. Oegradarea ciclinelor, pre-
cum i a numeroaselor alte proteine intracelulare se realizeaza
printr-un mecanism care implica ubiquitina.
Aceasta este o proteina prezenta rn toate celulele eucariote.
Functia sa principala este marcarea altor proteine pentru distru-
gere (proteoliza).
lnterfaza ocupa cea mare parte a ciclului celular (aproximativ

20 - 26 ore, la mamiferele adulte), situandu-se, rn timp, rntre
sfaritul unei diviziuni i rnceputul diviziunii urmatoare (perioada
dintre doua diviziuni succesive).
La embrionii precoce de mamifere, ciclurile celulare au o
viteza incredibil de mare, datorita absentei etapelor de cretere; rn
acest caz, functionarea orologiului de control al ciclului celular este
redus la minimum, el intervenind numai rn autoreplicarea geno-
mului (AON) i segmentarea zigotului.
Oenumirea de interfaza se datoreaza faptului ca se considera
ca rn aceasta perioada, celula este inactiva, rn sensul ca nu se
378
Ciclul celular
observa schimbari morfologice majore: nucleul se afla Tn faza

metabolica, cele mai evidente structuri fiind Tnveliul nuclear, cro-
matina i nucleolii; nici Tn citoplasma, nu exista modificari sem-
nificative.
Din punct de vedere biochimic, Tnsa, interfaza este etapa ci-
clului celular care se caracterizeaza printr-o intensa activitate me-
tabolica: autoreplicarea genomului, transcriptia lui, biosinteze pro-
teice etc., reactii care pregatesc celula pentru multiplicare.
lnterfaza se deruleaza Tn trei etape succesive: G1, S i G2
urmate de etapa de multiplicare - M. Etapele G1 i G2 sunt pe-
rioade de cretere celulara, realizate prin transcriptia ADN-ului ur-
mata de biosinteze celulare, iar Tn etapa S, are lac autareplicarea
ADN-ului.
Tn conditii normale, ciclul celular se deruleaza fara Tntreruperi.
Tn cazul Tn are asupra celulelor actianeaza agenti genotoxici,
acetia au capacitatea de a opri, temporar sau definitiv, evolutia lui
Tntr-o anumita etapa a ciclului celular. Aceste Tntreruperi permit
celulelor sa aiba timp pentru a repara defectele aparute, Tnainte de
a progresa Tn etapa urmatoare. Tn cazul Tn care deteriorarile sunt
prea severe i nu pot fi reparate, celulele intra Tn apoptoza.
Traversarea etapelor ciclului celular este controlata de meca-
nisme reglatoare derulate la nivel molecular; acestea sunt numite
puncte de control sau de decizie, care pot fi:
• puncte de restrictie (R);
• puncte start (sau de progresie Tn etapa urmatoare).
Aceste puncte de control, Tn interfaza, sunt mai evi-
dente la nivelul progresiilor G1/S i G2/M. Tn etapa M
exista un al treilea punct de control la trecerea meta-
faza - anafaza.
Etapa G1 sau presintetica (gap1) are o durata de 10 - 16 ore

i este subTmpartita Tn subetapele G1 timpuriu sau postmitotica,
G1 mediu Tn care creterea celulara este evidenta i G1 tardiv Tn
care se fac ultimele pregatiri Tn vederea autoreplicarii genomului.
Ea Tncepe imediat dupa ieirea din mitoza i Tnceputul autore-
plicarii genomului. Are lac a cretere celulara masiva prin inter-
venia lui p.53 care paate funciana ca un factor de transcriptie prin
legarea la p.21/Cip1. Se presupune ca mentinerea unui echilibru
al nivelelar de cancentraie a lui p.53, Tn celulele embrianare, este
379
importanta pentru dezvoltarea normala a embrionului: supra sau

subexpresia lui p.53 poate conduce la moartea embrionului 9i la
un rise crescut al aparitiei de malformatii. '
Evenimentul central al tranzitiei G1/S (punctul-start) este
fosforilarea de catre ciclinele COK 4/6 a expresorului tumoral p.Rb.
P.53 poate opri temporar ciclul celular Tn G1, timp necesar
repararii leziunilor aparute Tn genom. Leziunile A.O.N.-ului induse
de diver9i agenti genotoxici sunt recunoscute de p.53 care se fi-
xeaza pe fragmentul de AON legat, 19i schimba conforma{ia tridi-
mensionala 9i opre9te ciclul celular Tn G1 tardiv, oprire necesara
repararii leziunilor AON.
Figura 129: Faza Gt a cic/u/ui ce/ular
Celulele care nu pot depa9i punctul de restric{ie din G1 intra

Tntr-un stadiu de repaos numit GO, timp de ore, zile, luni sau tot
restul vietii, ca Tn cazul neuronilor; Tn aceasta stare, celulele raman
'
active me tabolic, dar nu se mai divid.
Tn numeroase tipuri de cancere umane, nu exista punct de
restrictie Tn G1, ceea ce explica multiplicarea masiva 9i necontro-
lata a celulelor tumorale.
380
Ciclul celular
Figura 130: Etapa de tranzitie G1/S
Figura 131: Etapa de tranzifie SIG2
381
Etapa S (sintetica) are o durata de aproximativ 6 - 8 ore,

timpi
n care se realizeaza autoreplicarea genomului §i sinteza pro-
teinelor histone (H1, H2 A, H2B, H3 §i H4). La sfar§itul fazei S, fie-
care cromozom are doua molecule de AON identice (este bicro-
matidian).
Etapa G2 sau postsintetica dureaza aproximativ 3 - 6 ore;

eaincepein momentuli n care replicarea genomului este com-
pleta. $iin aceasta etapa, sub actiunea factorilor de transcriptie,
au loc sinteze necesare cre§terii celulare §i pregatirii pentru in-
trareain mitoza. Este finalizata replicarea genomului, celulelei n
G2 contin cate doua c6pii identice a AON-ului §i fiecare cromozom
replicat are doua cromatide-surori identice acolate pe toata lun-
gimea lor.
Figura 132: Faza G2 a cic/u/ui ce/ular
lntrarea i
n mitoza este conditionata §i de corectitudinea
autoreplicarii AON-ului;i
n cazul alterarii genomului, celula este
opritai
n G2, existand doua posibilitati: fie se repara leziunile AON,
permitand progresiai n M, fie leziunile nu pot fi reparate, celula
evoluand spre apoptoza.
382
Ciclul celular
Diviziunea celulara la mamifere se realizeaza prin:

o mitoza somatica sau ecuationala;
o meioza sau diviziunea reductionala care intereseaza
celulele germinalei n procesul lor de maturare;
o al treilea tipi
i reprezinta mitoza de segmentare care
este caracteristica segmentarii oului fecundat.
Spre deosebire de interfaza (perioada metabolica a celulei),
n cursul etapei M, se produc modificari morfologice care intere-
i
seaza elementele nucleare !;ii citoplasmatice:
• disparitia nucleului ca entitate;
• condensarea fibrelor cromatiniene §i aparitia cromozomilor;
• dedublarea centrozomului parental;
• formarea fusului mitotic bipolar;
• fixarea cromatidelor-surori pe microtubii fusului de diviziune;
• aparitia inelului contractil;
• citochineza (aparitia celor doua celule-fiice).
Prin acest tip de diviziune, se multiplica marea majoritate a

celulelor somatice ale organismelor pluricelulare. Ea are o durata
de 1 - 1,5 ore.
Mitoza somatica se deruleaza i n §ase etape: profaza,
prometafaza, metafaza, anafaza, telofaza §i citodiereza.
Figura 133: Structura genera/a a unui cromozom
383
Profaza
Profaza (Tn limba greaca pro =
,,Tnainte"' i phasis =
,,faza")
are durata cea mai mare (25 - 35 minute). Aceasta se caracteri-
zeaza prin:
• din cromatina, progresiv, cromozomii se delimiteaza tot mai clar;
• nucleolii devin din ce Tn ce mai putin vizibili;
• Tnveli ul nuclear se fragmenteaza;
• Tn citoplasma fiecare centriol patern, Tmpreuna cu procentiolul
sau, se Tndeparteaza unul de celalalt.
Figura 134: Aspectul unei ce/ule fn profaza
Figura 135: Aspectu/ centriolilor rn microscopie e/ectronica
384
Ciclul celular
Prometafaza
Prometafaza este etapai n carei nveli§ul nuclear §i nucleolii
dispar ca entitati structurale. Lamininele nucleare se disperseazai n
citoplasma, iar fragmentelei
nveli§ului nuclear formeaza vezicule.
Cromozomii sunt bine individualizati. Ace§tia sunt formati din
doua cromatide-surori, alipite prin conexiune, unite la anumite ni-
vele, caracteristice fiecarui cromozomi n parte, printr-o regiune
numita centromer; la acesta, se ata§eaza doua complexe pro-
teice - kinetocori cu o structura trilamelara, pe care se vor fixa
microtubii kinetocorieni ai fusului de diviziune.
Cei doi diplozomi care sunt centre de organizare ai micro-
tubilor migreaza catre cei doi poli ai celulei.
Figura 136: Aspectul unei celule rn prometafaza
Prin intermediul microtubilor kinetocorieni, cromozomii se vor

deplasa catre ecuatorul celulei.
n citoplasma, organitele celulare membranare se multiplica
i
prin fragmentare.
385
Metafaza
Metafaza (in limba greaca, meta = ,,in n,ijloc") se caracte-
rizeaza printr-o succesiune de evenimentei n care sunt antrenate
infrastructurile nucleare. Metafazai mpreuna cu prometafaza du-
reaza 25 - 35 minute.
Cromozomii (bine delimitati) plutesci n continutul nuclear (ca-
riolimfa). Membrana nucleara se fragmenteaza i ntregul continut
al nucleului vinei
n contact cu citoplasma.
Metafaza culmineaza cu momentuli n care cromozomii sunt
plasatii
n planul ecuatorial al celulei, fiind ataati de fibrele fusului, la
nivelul centromerului (numit i kinetocor). Metafaza reprezinta
stadiul eel mai potrivit pentru descrierea cromozomilor - ca numar,
forma, dimensiuni etc. (caracteristice pentru fiecare speciein parte).
Figura 137: Aspectul unei celule Tn metafaza
i apogeul metafazei, toti cromozomii sunt dispu ii

n n placa
ecuatoriala, ataati de fibrele fusului. Privita de la unul din polii
386
Ciclul celular
celulari, imaginea formata de cromozomi are aspectul unei stele,

de unde l}i denumirea de monaster (Tn limba greaca, aster = ,,stea").
Anafaza
Anafaza (Tn limba greaca, anna =
,,in urma") este etapa Tn
care cromatidele despartite prin clivarea centromerului Tncep sa
migreze spre cei doi poli celulari (spre cei doi centrioli). Anafaza
dureaza 5 - 8 minute.
La Tnceputul acestei etape, are lac separarea completa a cro-
matidelor-surori la nivelul centromerelor (kinetocorilor); fiecare cro-
mozom-frate migreaza, Tn sens opus, catre unul dintre polii celulei,
prin depolimerizarea microtubilor kinetocorieni.
Figura 138: Aspectul unei celule Tn anafaza
Tntrucat centromerul are l}i rolul de a fixa cromatidele pe

fibrele fusului l}i le faciliteaza mil}carea spre cei doi poli, a mai
primit l}i denumirea de kinetocor (Tn limba greaca, kinein = ,,a
mil}ca" l}i chorus = ,,lac Tn care se danseaza").
Tn momentul culminant al anafazei, daca se privel}te celula
din placa ecuatoriala spre fiecare dintre cei doi poli, se observa de
fiecare parte cum cromozomii alcatuiesc cate o figura Tn forma de
stea, de unde l}i denumirea de diaster.
387
Microtubii polari cresc Tn lungime, schimband forma celulei

din sferica Tn ovalara.
n momentul Tn care cromozomii ocupa cei doi poli ai celulei,
I
microtubii kinetocorieni dispar prin depolimerizare. La sfaritul
acestei etape, kinetocorii se dezagrega.
Telofaza
Telofaza (In limba greaca, telos = ,,sfarit") Tncheie ciclul di-
viziunii celulare. Aceasta dureaza aproximativ 20 minute i Tncepe
Tn momentul Tn care cele doua grupe de cromozomi (46x2) ocupa
cei doi poli ai celulei. Ei se vor despiraliza i formeaza o masa
compacta hipercromatica; din organizatorii nucleolari, Ti fac apa-
ritia nucleolii. n jurul celor doua grupe de cromozomi care for-
meaza cromatina, apare Tnveli ul nuclear alcatuit din fragmente de
reticul endoplasmatic.
Microtubii polari din zona ecuatorului celulei iau numele de
microtubi interzonali, iar restul se depolimerizeaza.
Figura 139: Aspectul unei ce/ule rn telofaza
388
Ciclul celular
Citodiereza
Citodiereza (citokineza)i ncepe la sfar itul anafazei, prin
aparitia antului de diviziune la nivelul planului ecuatorial al celulei;
acesta aparei n urma actiunii microfilamentelor de actina care se
insera pe fata profunda a plasmalemei i formeaza un fascicul
concentrici
n aceasta zona, numit inel contractil; acesta detine
un rol major n citodiereza.
Prin interactiunea actina - miozina, aceasta din urma apa-
rand la nivelul inelului contractili
n telofaza, antul de diviziune se
adancete, microtubii zonali i manonul proteic se dezagrega, iar
microfilamentele de actina se disperseaza i n citoplasma celor
doua celule-fiice.
Figura 140: Formarea celor doua celule-fiice rn urma procesului de citokineza
Dupa gradul de asemanare morfo-func\ionala dintre celula-

mama i cele doua celule-fiice, mitoza somatica se clasificai n:
1. Homeotipica,i n care nu exista deosebiri ntre celula-ma-
ma i celulele-fiice i este caracteristica diviziunilor de
refacere a capitolului celular al organismului i a prime-
lor etape ale embriogenezei;
2. Heterotipica sau mitoza de diferentiere,i n care celulele-
fiice sunt identice, dar mai diferentiate decat celula-mama;
'
389
3. Homo-heterotipica sau asimetrica,i n care una dintre ce-

lulele-fiice seamana cu celula-mama, iar cealalta este
mai diferen\iata;
4. Mitoza de dediferenfiere sau dei ntinerire,i
n care celu-
lele-fiice sunt mai putin diferentiate ca celula-mama;
. A - MEIOZA
14.4.2. MITOZA REDUCT' ION. AL . .
Meioza (in limba greaca, meion = ,,mai pu\in" i axis = ,,con-

ditie") reprezinta tipul de diviziune celulara caracteristica organis-
melor cu alternanta de faze (haploida - diploida). Prin intermediul
meiozei, are lac reducerea la jumatate a materialului genetic cro-
matic (a numarului de cromozomi) a celulei somatice, preconditie
a farmarii celulelor sexuale (a gametilor). Acest tip de diviziune in-
tereseaza numai celulele germinale primordialei n evolutia lor ca-
tre formele mature apte pentru fecundare, ovulul i spermatozoidul.
Procesul a fast descris de Weismann care,i n 1887, preciza
ca organismele sunt constituite din soma i germen. Prima divi-
ziune meiotica a fast observata i descrisa de catre Strasbourger,
la Angiospermate,i n 1888. Elucidarea deplina a procesului divi-
ziunii meiotice a avut laci nsa abiain 1905, prin cercetarile efec-
tuate de catre Farmer i Moore.
Asemenea mitozei, meioza este o diviziune indirecta (cario-
chinetica). De obicei, celulele care se var divide prin meioza se
deosebesc de cele care se var divide prin mitoza, deoarece cresc
mult n volum.
Spre deosebire de mitoza, meioza este mai complicata, are o
durata mai mare de timp i se compune,i n realitate, din doua di-
viziuni succesive:
• diviziunea I meiotica sau divi:ziunea heterotipica
(numita i diviziune reductionala) i
• diviziunea II meiotica sau diviziunea homeotipica
(cunoscuta i sub numele de diviziune ecuafionala).
Celulele germinale primitive - spermatogoniile i ovogoniile
tree printr-o serie de diviziuni care antreneaza modificari profunde
390
Ciclul celular
la nivel molecular, morfologic i functional. Rezultatul acestor

transformari este dublu:
1. Prin diviziunea reductionala, celulele germinale primitive -
celule diploide, ca i celulele somatice (2n - 46 cromozomi) ii
reduc numarul de cromozomi la jumatate - celule haploide (n-
23 cromozomi) la formele mature. Este un proces absolut ne-
cesarin vederea pastrarii caracteristicilor speciei; zigotul sau
oul fecundat trebuie sa contina aceiai numar de cromozomi ca
al organismelor patern i matern.
2. Meioza sau etapa distributiva se deruleaza toti n ase stadii:
profaza, prometafaza, metafaza, anafaza, telofaza i citodie-
reza,i
n urma carora rezulta doua spermatocite i ovocite de
ordinul I care vor forma spermatocitele i ovocitele de ordinul II
- celule haploide (n).
Spermatocitele i ovocitele de ordinul II intrai n meioza pro-
priu-zisa care se deruleazain doua etape succesive: meioza I i 11.
Meioza I
Prima diviziune meiotica este reductionala (sau heterotipica)
i se caracterizeaza prin aceea ca numarul de cromozomi din ce-
lulele-fiice se reduce la jumatate, comparativ cu numarul cromozo-
milor celulei-mama (celulei care a intrat n diviziune).
Profaza I
Profaza meiozei I are o durata mare i se desfaoarai n cinci
stadii succesive: leptoten, zigoten, pahiten, diploten i diakineza.
•• stadiul leptoten (leptos =,,fin"; teania= ,,banda") se ca-
racterizeaza prin cretereai n volum a nucleului, autore-
plicarea ADN-ului, sinteza histonelor i individualizarea cro-
mozomilor. Cromozomii sexuali (gonozomi) XX sau XY se
gasesc sub forma condensata - vezicula sexuala situata pe
fata interna ai
nveliului nuclear;
=
•• stadiul zigoten (zigon ,,jug, asuprire"),i n care cromozomii
omologi (un autozom de origine paterna i autozomul omo-
log de origine materna) se acoleaza pe toata lungimea lor,
printr-o retea proteica numita complex sinaptonemal, reali-
zand sinapsul;
391
•• stadiul pahiten (pachys = ,,gros") Tncepe Tn momentui Tn

care sudarea cromozomilor omologi este Tncheiata, structuri
care poarta numele de diada sau cromozom bivalent. La
nivelul fiecarui autozom al celor 22 bivalenti, apare un clivaj
longitudinal care determina aparitia a doua cromatide. Auto-
zomii vor avea cate doua cromatide paralele, iar fiecare au-
tozom bivalent va avea patru cromatide formand aa-nu-
mita tetrada;
•• stadiul diploten. Tn aceasta etapa, autozomii fiecarui biva-
lent se Tndeparteaza Tn partea lor centrala. Cei doi omologi
raman asociati Tntr-unul sau mai multe puncte numite chias-
me, nivel la care doua din cele patru cromatide se Tncaleca,
realizand crossing-over-ul. La acest nivel, se face un schimb
de material genetic Tntre cromatidele de origine paterna i
cele de origine materna. La femeie, ovocitele raman blocate
Tn diploten din a 5-a luna de viata fetala pana la pubertate
(12 - 13 ani).
•• stadiul de diachineza. Autozomii bivalenti se separa
complet i se asociaza formand structuri Tn forma de romb sau
bucla; fiecare autozom va avea Tn componenta sa un fragment din
autozomul omolog.
Tn aceasta etapa, condensarea cromozomilor este evidenta.

Vezicula sexuala dispare i din materialul ei, apar cei doi
cromozomi sexuali: XX sau XY.
392
Ciclul celular
Profaza I
Metafaza I
Anafaza I
Telofaza I
Figura 141: Etape/e principale ale meiozei I
Premetafaza I
Tn premetafaza,i nveliul nuclear i nucleolii dispar, diplo-
zomii sei
ndeparteazai ntre ei, apar microtubii fusului de diviziune, iar
autozomii se dirijeaza catre placa ecuatoriala.
Metafaza I
Me)afaza Ii
ncepe concomitent cu resorbia membranei nu-
cleare. In acela i timp, se formeaza i fusul. Cromozomii (biva-
len,
i) se dispun pe fibrele fusului,i
n zona ecuatoriala ( ntr-un sin-
gur plan), dar n aa fel ncat centromerul unui cromozom din com-
plexul bivalent este orientat spre un pol, iar al celuilalt cromozom,
spre polul opus, acesta fiind momentul producerii asortarii inde-
pendente a perechilor de cromozomi, dansul cromozomilor sau re-
393
combinarea intercromozomiala. Este stadiul Tn care cromozomii se

coloreaza intens 9i pot fi analizati 9i descri9i, mai ales din punct de
vedere morfologic. Spre sfar9itul metafazei I 9i'Tnceputul anafazei
I, cromozomii omologi Tncep sa se departeze unul de altul, din zona
centromerica spre varf 9i sa se departeze catre cei doi poli ai celuiei.
Anafaza I
Tn anafaza, legaturile proteice dintre cromozomii omologi ai
bivalentilor dispar, Tn celula, apar 46 cromozomi care formeaza
doua grupe a 23 cromozomi, fiecare grup migrand catre polii opu9i
ai celulei.
Telofaza I
Cromozomii bicromatidici au ajuns la fiecare dintre cei doi
poli ai celulei. Tn continuare, ei sufera procese inverse celor din
profaza, Tn final, luand na9tere doi nuclei. Tn fiecare dintre cei doi
nuclei, se gase9te jumatate din numarul de cromozomi ai celulei
initiale. Apoi are loc diviziunea citoplasmei, formarea membranei
celulare 9i delimitarea celor doua celule haploide care au nuclei
bicromatidici. Cele doua celule alcatuiesc diada.
Citokineza I
Citokineza, asemanatoare cu cea din mitoza somatica, mar-
cheaza separarea celulei-mame (diploida) Tn doua celule-fiice -
spermatocitele 9i ovocitelor de ordinul II, celule haploide.
Meioza II
Profaza II
Profaza II Tncepe prin respiralizarea cromozomilor, la speciile
la care s-a derulat telofaza I 9i citokineza (profaza II lipsind la spe-
ciile care nu au parcurs telofaza I 9 i citokineza).
394
Ciclul celular
Profaza II
Metafaza
II
Anafaza II
Telofaza II
Figura 142: Etape/e principa/e ale meiozei II
Metafaza II
Metafaza II se caracterizeaza prin faptul ca, n fiecare celula
a diadei, se formeaza fusul nuclear. Cromozomii bicromatidici (re-
du!?i ca numar la jumatate) se ata!?eaza cu centromerul la fibrele
fusului,i
n planul ecuatorial. Spre sfar!?itul metafazei II, cea mai
scurta faza dini
ntregul ciclu de diviziune, cromozomii ncep sa se
cliveze longitudinal, prin distantarea cromatidelor !?i clivarea cen-
tromerului.
Anafaza II
Cromatidele-surori ale fiecarui cromozom se despart !?i sei n-
dreapta spre polii celulari, catre polii fusului nuclear (spre fiecare
dintre centrioli).
395
Telofaza II
Cromozomii monocromatidici, odata ajun9i la polii fusului de
diviziune, intra 1ntr-un 9ir de procese ce se' deruleaza 1n sens
invers celor din profaza - cromozomii se alungesc, se subtiaza 9i
se hidrateaza puternic. Se formeaza cele doua mase nucleare
delimitate prin membrane proprii. Are loc citochineza, 1n urma ca-
reia din celula-mama, iau na9tere doua celule-fiice.
Avand 1n vedere ca 1nainte de meioza II, a mai avut loc o
diviziune (prima diviziune meiotica), rezulta ca prin meioza, dintr-o
celula-mama initiala, s-a ajuns la patru celule-fiice. Faptul eel mai
important este ca celula-mama era diploida ( 2n cromozomi bicro-
matidici), iar cele patru celule-fiice rezultate sunt haploide (au n
cromozomi monocromatidici). Prin procese morfo-fiziologice (a ca-
ror complexitate cre9te concomitant cu pozitia mai avansata a spe-
ciei 1narborele filogenetic), celulele haploide se transforma 1n gameti.
396
Ciclul celular

Bryant, J. A. (2007). The eukaryotic cell cycle. Oxford Taylor & Francis.
Chen, K. L. (2008). Progress in cell cycle control research. New York:
Nova Science Publ.
Friedman, A. & Borisyuk, A. (2006). Cell cycle, proliferation, and cancer.
Berlin Springer.
Giordano, A. (2004). Cell cycle control and dysregulation protocols:
eye/ins, eye/in-dependent kinases, and other factors. Totowa, NJ:
Humana Press.
Gutkind, J. S. (2000). Signaling networks and cell cycle control: the
molecular basis of cancer and other diseases. Totowa, NJ:
Humana Press.
Humphrey, T. (2005). Cell cycle control: mechanisms and protocols.
Totowa, NJ: Humana Press.
Leroy, N. H. (2008). Cell cycle control: new research. New York: Nova
Science Publ.
Lieberman, H. B. (2004). Cell cycle checkpoint control protocols. To-
towa, NJ: Humana Press.
Morgan, D. 0. (2007). The cell cycle: principles of control. London: New
Science Press
Poon, R. Y. C. & Levine, E. M. (2005). Cell cycle and development.
Amsterdam: Elsevier.
Stein, G. S. (2004). Cell cycle and growth control: biomo/ecular regu-
lation and cancer (2nd ed.). Hoboken, N.J.: Wiley-Liss.
397
Senescenta celulari
Tmbatranirea in sens biologic

este reprezentata de schim-
barile structurale §i func(ionale
ce survin intr-un organism odata
cu depa§irea perioadelor de
dezvoltare §i maturitate, in a§a-
numita perioada a post-matu-
ritafii. Aceasta se caracterizeaza
printr-o vulnerabilitate in cre§tere
la solicitarile mediului, cauzata
§i insof ita de un dee/in al func-
fiilor fiziologice §i adaptative ale
organismului ce se datoreaza,
la randul for, modificarilor mor-
fologice §i moleculare de la ni-
vel celular.
Existenta formelor de viata complexa a devenit posibila
numai datorita aparitiei 9i evolutiei unor mecanisme bine definite
ce regleaza proliferarea, diferentierea,i mbatranirea 9i homeo-
stazia celulara. Toate moleculele vii par sa sufere o deteriorare, ca
urmare ai mbatranirii, dar mecanismele prin care se produce aceasta
evolutie sunti nca incomplet elucidate. Cui naintareain varsta,
parametrii de functionare ai diferitelor organe, precum 9 i aspectul
reactiilor chimice arata fenomene de involutie fiziologicain directa
relatie cu varsta, producandu-se o remodelare aintregului organism.
Viata marii majoritati a populatiilor celulare din organismul
uman poate fi mpaftitai n patru faze:
• functionarea normala;
'
•imbatranirea (senescenta);
• agonia 9i
• moartea celulara.
Studiile realizatei
n aceasta directie au stabilit implicarea, n
acest mecanism complex, a doua categorii principale de factori:
• extrinseci (influenta mediului l;,i a stilului de viata);
• intrinseci (procese primare dei mbatranire determinate
genetic).
n functie de aceste doua categorii de factori, au aparut o
i
serie de teorii privind cauzelei mbatranirii celulare, clasificatein
diverse moduri.
Tn general, este vorba de:

teoriile pasive care considera cai mbatranirea ar fi conse-
cinta acumularii pasive de erori la nivelul constituentilor
celulari (AON, ARN, proteine i lipide) ce se datoreaza unor
agresiuni din mediu, la care se adauga mecanisme imper-
fecte de reparare;
teoriile active care consideraimbatranirea celulara un feno-
men activ programat genetic.
Aceste doua teorii,i n realitate, se gasesci
ntr-o stransa in-
terdependenta (de exemplu: prezenta proteinelor alteratei n inte-
riorul celulelor poate conduce la modificarea expresiei genetice).
/,--",
(
\'--2(o j
stress oxidativ /
d;sfunctie "-
telomerica
+
//---
alterari AON
;[$'.,'. .. ). -
SENESCENTA medicatie citotoxica

'
Figura 143: Factori ce influenteaza producerea senescenfei
Teoriile pasive
Teoriile pasive diferai
ntre elei
n ceea ce privete tipurile de
macromolecule modificate care determinai mbatranirea celulara,
cat i mecanismele ce conduc la aparitia acestor modificari macro-
moleculare. Teoriile bazate pe acumularea pasiva de erori se con-
centreaza pe mutatii somatice, proteine imperfecte, lipide distruse
sau combinatii de macromolecule alterate. Principalele teorii pa-
sive sunt:
402
Senescenta celulara
'
1. Rata de supraviefuire
O prima teorie pasiva privindi mbatranirea celulara propusa
initial de Pearl se bazeaza pe corelatia stransa dintre rata meta-
bolica i rataimbatranirii la diferite specii de animale. Folosirea de
,,combustibil" este un proces biologic de baza, esential vietii, dar
care poate avea i consecine nefaste. S-a demonstrat ca rata me-
tabolica se aflain relat,ie inversa cu durata viet'ii, deci este o com-
ponenta ai mbatranirii; atunci cand rata metabolica a unor animale
este redusa experimental, durata lor de viata crete.
2. Muta,tii somatice
Este cunoscut faptul ca numarul anomaliilor cromozomiale
cretei n celulele senescente, datorandu-se fie diminuarii efica-
citatii mecanismelor celulare de reparare a ADN-ului, fie acumu-
larii, cu varsta, a unui numar mare de agenti distructivi.
3. Acumularea de reziduuri
Aceasta se refera,i n special, la acumularea, odata cu avan-
sareai n varsta, a lipofuscineii n lizozomii secundari ai celulelor
postmitotice. Lipofuscina provine din glicozilarea non-enzimatica a
proteinelor cu rata de supravietuire mare, cat i a ADN-ului. Aceasta
glicozilare a ADN-ului, numita reacfie de glicare, depinde de posi-
bilitatea deintalnire dintre moleculele de glucoza circulante i gru-
parile amino libere de la capatul N-terminal al lanturilor polipeptidice
sau al lant,urilor laterale de lizina. Aceste react'ii sunt mult mai free-
ventein spatiile extracelulare i tesuturile conjunctive, deoarece glu-
coza circula liber prin aceste spatii, 1n timp ce 1n interiorul celulelor,
nivelul ei este mult mai atent controlat, iar proteinele acestor zone
(colagen, fibronectina i elastina) au durata de viata relativ lunga.
4. Legaturi incruci§ate
Aceasta teorie se refera la existenta unui proces progresiv
cu varsta de legare 1ncruciata a unor macromolecule intra- i
extracelulare. lntensificarea acestui fenomen, caracteristica celu-
lelor senescente, poate fi generata de unii agenti oxidanti, radicali
liberi produi prin reactia proteinelor glicate cu oxigenul etc. Tot-
odata, creterea, odata cu varsta, a numarului de legaturi ncru-
ciate a colagenului cu alte macromolecule ar putea explica sca-
derea elasticitatii tesuturilor organismelor senescente.
403
5. Teoria radicalilor liberi Yncearca sa explice o serie de

fenomene caracteristice Ymbatranirii celulare. Ar putea parea sur-
prinzator faptul ca ace§tia figureaza printre posibilii factori ce con-
duc la Ymbatranirea celulara, 9tiut fiind faptul ca radicalii liberi de
oxigen au, prin definitie, o durata de viata scurta, iar fenomenele
de Ymbatranire celulara implica o evolutie de ani de zile. Totu9i,
efectele toxice ale radicalilor liberi asupra acizilor nucleici, protei-
nelor 9i lipidelor sunt bine cunoscute.i n realitate, actiunea lor asu-
pra unei proteins este foarte scurta 9i supusa legii hazardului.
Dintre efectele citotoxice ale radicalilor liberi, amintim: oxi-
darea lipidelor 9i anume, a acizilor gra9i nesaturati apartinand fos-
folipidelor membranare ce conduce la alterari ale structurii plasma-
lemei, ale fluiditatii, deci la perturbarea functiilor acesteia; alcoolii,
aldehidele 9i hidrocarburile volatile, produ9i finali ai peroxidarii in-
hiba sinteza proteica, pot modifica permeabilitatea vasculara 9i
activitatea chemotactica; oxidarea proteinelor cre9te hidrofobicita-
tea 9i sensibilitatea acestora la proteoliza; Yn ceea ce prive9te efec-
tul radicalilor liberi asupra acizilor nucleici, cele mai susceptibile
componentele ale ADN-lui la actiunea acestora sunt timina 9i cito-
zina, urmate de adenina, guanina 9i de dezoxiriboza.
n mod normal, organismul dispune de sisteme naturals de
i
protectie Ympotriva radicalilor liberi, cele mai importante fiind loca-
lizate intracelular. Exista un sistem primar de aparare numit 9 i de
prevenire, ce diminueaza rata de initiere a reactiilor radicalilor li-
beri, prin descre9terea concentratiilor, 9i un sistem secundar ce
stopeaza efectele lor toxice chiar din stadiile incipiente. Din sis-
temul primar de aparare, fac parte o serie de enzime cum ar fi
superoxid dismutazele, catalaza, glutation-peroxidaza, glutation-
reductaza etc., unele proteins, cat 9i unele molecule mici raspan-
dite Yn sistemele biologice care pot elimina radicalii liberi pe cai
neenzimatice (de exemplu: vitamina C, acidul uric, taurina 9i hipo-
taurina, glutationul etc.). Sistemul secundar de aparare cuprinde
enzime cum ar fi multe glutation-transferaze ce au o activitate tip
peroxidaza, dependenta de glutation 9i care reprezinta sisteme de
aparare Ympotriva peroxidarii lipidelor, diferite oxido-reductaze, cat
9i alte enzime proteolitice. Enzimele nucleare pentru repararea
ADN-lui sunt considerate un sistem de aparare important Ympotriva
agresiunii radicalilor liberi: de exemplu: ADN-polimeraza 1, ADN-
404
Senescenta celulara
ligaza etc. Alaturi de aceste enzime din sistemul secundar de

aparare 1mpotriva radicalilor liberi, mai fac parte 9i alte molecule
cum ar fi vitamina E, principalul antioxidant lipidic solubil prezent
1n toate plasmalemele ce protejeaza 1mpotriva peroxidarii lipidelor,
-carotenul 9i bilirubina. Datorita localizarii predominant intracelu-
laare a acestor sisteme, radicalii liberi, formati 1n spatiul extrace-
lular, 1n special, 1n tesutul conjunctiv, au o durata de viata mult mai
lunga 9i o posibilitate mult mai mare de a exercita efecte toxice.
6.,,Catastrofa erorii"
Una dintre cele mai cunoscute 9i mai studiate dintre teoriile
erorii privind 1mbatranirea celulara a fost elaborata de Orgel, 1n
urma cu 30 de ani. ,,0 eroare catastrofala" exponentiala a fost
propusa ca o inevitabila consecinta a doi factori ce privesc trans-
criptia 9i translatia:
transferul informatiei ADN-ARN-proteina nu se reali-
zeaza cu acuratete;
'
implicarea proteinelor 1n acest transfer de informatie.
Cu varsta, se acumuleaza erori 1n transcriptie 9i translatie
care au ca rezultat sinteza unor proteine modificate care, la randul
lor, vor perturba transferul informational: enzime ca ARN-polime-
raza, aminoacil-ARNt-sintetaza, proteine ribozomale etc. Se reali-
zeaza, astfel, o cascada de erori, a caror rata depa9e9te capaci-
tatea reparatorie a celulei 9i va conduce la o adevarata ,,catastrofa".
Una dintre afirmatiile acestei teorii legata de nivelul crescut
al proteinelor modificate 1n celulele senescente este reala 9i una-
nim acceptata 9 i astazi. Se considera totu9i ca aceasta teorie nu
este corecta 1n totalitate, deoarece cre9terea numarului proteinelor
modificate 1n celulele senescente este rezultatul unor modificari
post-translationale, mai curand decat al unor erori de translatie.
1.Degradarea proteinelor alterate

Degradarea proteinelor 1n organismele senescente este
mult redusa, 1n special, 1n tesuturi cum ar fi: mu9chiul cardiac,
mu9chii scheletici, ficat 9i creier. 0 serie de cai lizozomale ale
proteolizei se diminueza odata cu 1naintarea 1n varsta, dar natura
exacta a acestui defect nu a fost 1nca identificata. Anumite carac-
teristici ale celulelor senescente pot fi explicate ca fiind o con-
secinta secundara a diminuarii proteolizei lizozomale. De exemplu,
405
acumularea proteinelor modificate 1n celulele senescente poate fi

explicata prin reducerea tum-over-ului proteinelor.
B. Teorii care considera. mba.tranirea celulara. un pro-

ces activ, programat genetic
1. 0 modalitate de programare este restricf ia codonilor.
Strehler i colab. au avansat ideea ca una dintre caile prin care
organismele dirijeaza sinteza anumitor proteine 1n anumite stadii
ale dezvoltarii este aceea de a utiliza codoni diferiti pentru codi-
ficarea aceluia i aminoacid 1n diferite gene. Oaca utilizarea codo-
nilor se schimba 1n diferite stadii ale dezvoltarii timpurii i numarul
codonilor posibili este finit, 1mbatranirea ar fi rezultatul reducerii
translatiei anumitor gene esentiale.
2. lnactivarea copierii multiple a secven(elor AON. Med-
vedev a sugerat ca diminuarea capacitatii proliferative celulare ar
putea fi rezultatul inactivarii secventiale a genelor repetitive. Con-
form acestei teorii, cand o copie a unei gene este modificata sau
inactivata selectiv, alte c6pii pot fi activate pana cand ultima copie
a genei respective este utilizata.
Tn acest punct, 1mbatranirea celulara s-ar datora absentei
unui produs genie important.
Multe proteine sunt codificate de gene unice (per genom
haploid) i, deci, generalitatea acestui mecanism pare 1ndoielnica.
3. Scurtarea telomerelor. Conform teoriei propuse de Olovni-
kov, celulele nu 1 i replica complet cromozomii 1n timpul diviziunii
celulare i. prin urmare, secventele AON replicate tardiv se pot pierde.
Oeoarece la capatul unitatilor replicative sunt localizate
anumite secvente de AON repetitiv neesentiale, rezulta ca genele
esentiale nu se pierd decat dupa un numar de diviziuni celulare.
lpoteza scurtarii telomerelor este un foarte bun exemplu al
faptului ca teoriile pasive i cele active de 1mbatranire celuiara
sunt oarecum legate. Scurtarea telomerelor poate fi un eveniment
programat sau unul legat de exprimarea, 1n celulele senescente, a
unei telomeraze diferite, sau de declinul activitatii telomerazei
'
odata cu varsta, datorat, de exemplu, reducerii ratei tum-over-ului
urmate de acumularea unor modificari post-translationale.
4. 0 teorie simpla a senescen(ei celulare programate pre-
supune activarea unei anumite gene (sau anumitor gene) dupa un
anumit numar de diviziuni celulare. Aceasta gena codifica o pro-
406
Senescenta celulara
teina ce inhiba intrarea 1nfaza S a ciclului celular (gene cu actiune

1ntarziata).
Disfunctiile unor posibili inhibitori ai proliferarii celulare, ale
carer rezultate sunt aparitia tumorilor la specia umana, au condus
i la identificarea acestora. Unul dintre ei este p53 ce ar trebui sa
fie supraexprimat 1n celulele senescente, ceea ce nu s-a constatat
deocamdata.
Un alt aspect important este eel legat de proteina Rb - unul
dintre principalii inhibitori ai derularii ciclului celular. Tn mod
normal, celulele tinere fosforiieaza aceasta proteina la trecerea din
faza G1 1n faza S; 1n schimb, celulele senescente au nivele simi-
lare de proteina Rb, dar nu realizeaza fosforilarea acestei pro-
teine, men\inand-o nefosforilata.
Cel mai studiat model celular al 1mbatranirii este repre-

zentat de fibroblatii umani 1n cultura. Astfel, fibroblatii normali au
o perioada de viata limitata; de exemplu, fibrobla tii umani fetali au
putut fi 1nmultiti de aproximativ 60 de ori, dupa care celulele i-au
oprit diviziunea. Cultivarea fibroblatilor de la persoane de varste
diferite a relevat faptul ca numarul diviziunilor scade cu varsta. Po-
tentialul proliferativ al celulelor poate fi modificat lent, prin supli-
mentarea unor compui, cum ar fi glucocorticoizii, factorii de cre-
tere. Dar nu numai fibroblatii au aceasta 1nsuire, exista i alte
tipuri celulare cu o perioada de viata limitata: keratinocitele, con-
drocitele, hepatocitele, celulele gliale, celulele musculare netede,
celulele endoteliale.
Parametrul eel mai important al 1mbatranirii celulare nu este
timpul de supravietuire 1n cultura, ci numarul diviziunilor celulare
complete, unul dintre evenimentele esentiale legate de fenomenul
de 1mbatranire celulara fiind scaderea potentialului proliferativ al
40
7
celulelor, urmat de diminuarea populatiei celulare din majoritatea

organelor.
Dintre modificarile morfologice i biochimice caracteristice
celulelor senescente, amintim:
• scaderea volumului celular;
• modificarile nucleare (retractarea i condensarea nu-
cleilor ce apar intens colorati cu detaliile de structura
disparute - picnoza nucleara);
• carioliza (disparitia nucleului);
• cariorexisul (fragmentarea nucleului);
• anormalitatile cromozomiale;
'
• reducerea ratei transcriptiei, translatiei i degradarii
proteice;
• scaderea bazofiliei citoplasmei cu acumulare de pig-
menti i lipide urmata de vacuolizarea ei;
• creterea numarului i marimii lizozomilor;
• acumularea unor forme alterate ale proteinelor struc-
turale, ceea ce conduce la perturbarea functiilor ce-
lulare (de exemplu: acumularea de a-ADN-polime-
raza modificata este partial responsabila de limitarea
capacitatii proliferative a fibroblatilor senescenti);
• supraexprimarea 1n celulele senescente a genei WAF-
1, numita i sdi-1 (inhibitorul sintezei de AON
caracteristic ce/ulelor senescente), al carui produs,
proteina Cip -1, este un puternic inhibitor al kinazelor
dependente de cicline ce actioneaza 1n faza G1 a
ciclului celular - element esential ce cauzeaza per-
turbarea homeostaziei proliferative celulare, scade-
rea sensibilitatii la o mare varietate de factori de
cretere i hormoni, datorata fie reducerii odata cu
varsta, a numarului de receptori celulari, fie alterarii
cailor de transductie a semnalului.
Doua evenimente importante sunt, 1n general, legate de
senescenta: diminuarea potentialului proliferativ i scaderea masei
celulare. Aceasta rarefiere celulara progresiva afecteaza majorita-
tea organelor, fiind evidenta, 1n special, la nivelul pielii, muchilor,
rinichilor, creierului i sangelui, fiind 1nsotita i de o cretere a
concentratiei de AON 1n plasma persoanelor 1nvarsta. Astazi, este
408
Senescenta celulara
unanim acceptat faptul ca aceasta scadere a masei celulare la

organismele senescente este probabil de natura apoptotica. Re-
centele progrese facute Tn Tntelegerea bazelor biologice ale se-
nescentei au condus la ipoteza ca mecanismele de inductie ale
apoptozei (moartea celulara programata) sunt activate de anumite
modificari fiziopatologice caracteristice Tmbatranirii celulare. Lega-
tura dintre apoptoza 9i Tmbatranire este totu9i Tnca intuitiva 9i in-
complet explorata.
Moartea celulara se produce instantaneu, putandu-se, prin
urmare, observa numai modificari post-mortem (celule cu forma
sferica, retractarea pseudopodelor, colorarea difuza a nucleului §ii
citoplasmei cu ajutorul colorantilor vitali, disparitia mitocondriilor,
cariorexis 9i carioliza nucleara), ce se datoreaza eliberarii enzi-
melor lizozomale 9i constituie semnul cert al mortii organismului.
Vasculopatia mbatranirii
La nivelul sistemului vascular, odata cu Tnaintarea Tn varsta,
apare ,,vasculopatia Tmbatranirii", ca rezultat al aparitiei unor me-
canisme adaptative ale organismului senescent. Ea este diferita
de ateroscleroza, dar este legata de aceasta prin predispozitia va-
selor mbatranite de a dezvolta leziuni aterosclerotice, fapt datorat
modificarilor morfologice, arhitecturale i chiar moleculare ce apar
la nivelul sistemului vascular, al celulelor endoteliale senescente:
diametrul vaselor se marete, sporete grosimea tunicii medii i
interne, cre9te 1n volum matricea extracelulara, devine mult mai
bogata 1n glucozaminoglicani 9i colagen, fibrele de elastina se
dezorganizeaza progresiv, fragmentandu-se, se altereaza trans-
portul transendotelial, favorizand intrarea unor macromolecule
plasmatice Tn spatiul subendotelial i crete retinerea unor com-
pu§ii cum ar fi LDL sau AGEs ce accelereaza ateroscleroza.
Permeabilitatea endoteliului vascular cre§ite odata cu varsta
1n timp ce capacitatea acestuia de a produce substante vaso-ac-
tive scade. De asemenea, odata cu Tnaintarea Tn varsta, acumu-
larea de AGEs determina aparitia unor evenimente celulare, cum
ar fi: stress-ul oxidativ, exprimarea unor molecule ale adezivitatii
leucocitare, migrarea transendoteliala a monocitelor, toate fiind
considerate fenomene prelezionale Tn procesul de aterogeneza.
Tmbatranirea afecteaza i abilitatea celulelor endoteliale de
a prolifera §ii de a repopula zonele denudate ce rezulta Tn urma
40
9
unor leziuni vasculare. S-a observat ca lungimea telomerului ce-

lulelor endoteliale recoltate de la donori de diferite varste des-
crete odata cu Tnaintarea Tn varsta. Alaturi de acestea, Tn cursul
fenomenului de Tmbatranire, se constata i modificarea proprieta-
tilor celulelor musculare netede din peretii vaselor (migrare i pro-
liferare), toate sporind susceptibilitatea vaselor la ateroscleroza.
410
Senescenta celulara
Abele, D. (2002). Toxic oxygen: the radical life-giver. Nature, 420(6911 ),

27. doi: 10.1038/420027a.
Adams, P. D. & Sedivy, J. M. (2010). Cellular Senescence and Tumor
Suppression.
Bonduriansky, R. & Brassil, C. E. (2002). Senescence: rapid and costly
ageing in wild male flies. Nature, 420(6914), 377. doi: 10.1038/
420377a.
Burton, D. G. (2009). Cellular senescence, ageing and disease. Age,
31(1), 1-9. doi: 10.1007/s11357-008-9075-y.
Cox, L. S. (2009). Cell senescence: the future of ageing? [Editorial
Introductory Research Support, N.1.H., Extramural Research
Support, Non-U.S. Gov't]. Biogerontology, 10(3), 229-233. doi:
10.1007/s10522-008-9207-x
Gewirtz, D. A., Grant, S. & Holt, S. E. (2007). Apoptosis, Senescence,
and Cancer.
Hoare, M., Das, T. & Alexander, G. (2010). Ageing, telomeres, senes-
cence, and liver injury. [Review]. Journal of hepatology, 53(5),
950-961. doi: 10.1016/j.jhep.2010.06.009
Kipling, D. (2001). Telomeres, replicative senescence and human
ageing. [Research Support, Non-U.S. Gov't Review]. Maturitas,
38(1), 25-37; discussion 37-28.
Mera, S. L. (1992). Senescence and pathology in ageing. [Review].
Medical laboratory sciences, 49(4), 271-282.
Mirzayans, R. & Murray, D. (2009). Cellular senescence: implications for
cancer therapy. New York: Nova Biomedical Books.
Shawi, M. & Autexier, C. (2008). Telomerase, senescence and ageing.
[Research Support, Non-U.S. Gov't Review]. Mechanisms of
ageing and development, 129(1-2), 3-10. doi: 10.1016/ j.mad.
2007.11.007.
Sikora, E., Arendt, T., Bennett, M. & Narita, M. (2011). Impact of cellular
senescence signature on ageing research. [Research Support,
Non-U.S. Gov't Review]. Ageing research reviews, 10(1), 146-
152. doi: 10.1016/j.arr.2010.10.002.
Studzinski, G. P. (1999). Cell growth, differentiation and senescence.
Oxford: Oxford Univ. Press.
411
Apoptoza
Existent,a formelor de viat'a com-

plexe a devenit posibila numai da-
torita aparifiei §i evolufiei unor me-
canisme bine definite ce regleaza
proliferarea, diferenfierea, fmba-
tranirea §i homeostazia celulara.
Reg/area populafiilor ce!ulare rn
fesuturile embrionare §i mai ales
rn cele adulte se realizeaza pe
baza unui echilibru fin intre multi-
p/icarea celulara, pe de o parte, §i
moartea celulara, pe de a/ta parte.
Aceste doua fenomene antagonice
sunt responsabi/e de menfinerea,
in limite normale, a numarului de
ce/ule dintr-un anumit teritoriu §i,
in acela§i timp, reprezinta un
control al fiecarui mecanism asu-
pra ce/uilalt.
Din punct de vedere al declanarii i al evenimentelor mole-
culare care au loc, moartea celulara poate fi de doua tipuri:
• moarte celulara prematura (necroza) i
• moarte celulara programata
Necroza (din greaca, nekros = ,,mart") este o moarte celu-
lara patologica i survinei n cazul unor alterari celulare majore.
Necroza se desfa oarai n mod haotic. Ea este cauzata de con-
fruntarea brusca a unei celule cu o serie de conditii nefiziologice
extreme precum: privarea completa de oxigen (infarct), agresiuni
chimice (acizi, baze, toxine, agenti infectioi), inflamatie, traume
fizice (caldura, frig), impacturi mecanice etc. Aceasta conduce la
pierderea controlului fluxului ionic, patrunderea rapida a apeii n
celula, urmata de umflarea acesteia, marirea de volum a orga-
nitelor, n special a mitocondriilor, distrugerea lizozomilor i dever-
sarea enzimelor hidroliticei n citoplasma cu distrugerea plasma-
lemei. Tot continutul celular este eliberat n spatiul extracelular, la
nivelul matricei i printre celulelei nvecinate. Enzimele lizozomale
astfel eliberate pot actiona i la nivelul celulelorinvecinate, cu con-
secinte dezastruoase.
Aceasta cascada de evenimente nu numai ca afecteaza i
celuleleinconjuratoare, pe distante importante, dar nu este nici
semnalizata corespunzator catre sistemul imun, astfeli ncat acesta
nu poate interveni pe loc pentru limitarea distrugerilor.
Atunci cand aria de necroza are oi ntindere suficienta, ea
se numete gangrena.
Moartea ce/ulara programata reprezinta orice tip de moarte
celulara care are loc dupa un tipar specific celulei. Aceasta se
desfa oarai n mod ordonat.
Conform conceptiilor clasice, moartea celulara programata
este de doua tipuri:
• apoptoza i
• autofagie sau autofagocitoza (auto-degradarea ferm

controlata a componentelor celulare, cu ajutorul enzi-
melor lizozomale proprii). '
Cercetarile actuale au descoperit 9i alte tipuri de moarte
celulara programata, precum:
• anoikis (moarte determinata prin desprinderea de
membrana bazala, a anumitor celule dependente de
imediata proximitate a acesteia);
• entozis (fenomen recent descoperit de includere a
unei celule-victima, Tn interiorul unei celule-agresor,
deta9area fortata a victimei de matricea extracelulara
locala 9i aparitia unui status de ,,celula vie Tn alta
celula vie"; fenomenul se finalizeaza fie prin elibera-
rea celulei-victima, fie prin degradarea ei de catre
enzimele lizozomale ale celulei-agresor);
• autoschizis (proces mai putin cunoscut, determinat de
pierderea unor zone largi de citoplasma libera prin
auto-excizii; Tn timpul acestui proces, nucleul se mic-
9oreaza, volumul celular scade la jumatate 9i majo-
ritatea organitelor se cantoneaza la periferia nucleului);
• cornificatie (proces de diferentiere terminala a ce-
lulelor din straturile superioare epidermice Tnsotit de
productie importanta de keratina 9i alte proteine spe-
ciale, pierderea nucelului 9i organitelor 9i Tncetarea
treptata a metabolismului celular);
• excitotoxicitate (proces mai putin cunoscut de moarte
celulara neuronala, prin exces de neurotransmitatori 9i
suprastimulare a receptorilor);
• degenerare Walleriana (proces de degradare axo-
nala care are lac la nivelul SNC sau SNP, ca urmare
a separarii traumatice a structurii axonului de nucelul
neuronal);
• paraptoza (proces mai putin cunoscut de moarte
celulara, asemanator apoptozei, dar fara implicarea
caspezelor 9i fara fragmentarea AON, cu vacuolizare
a plasmalemei 9i marire de volum a mitocondriilor);
• parthanatos (moarte celulara mediata de PARp-1
(Poly-ADP-ribose polymerase-1);
416
Apoptoza
• catastrofa mitotica (tip de moarte celulara progra-

mata ce are loci n timpul mitozei, prin segregarea
aberanta a cromozomilori n stadiile initiale sau prin
A degradarea AON i
n stadiile finale (metafaza/anafaza).
In prezent, aceste tipuri de moarte celulara sunt incomplet
cunoscute, ba chiar controversate, anumiti autori clasificandu-le
drept tieuri de moarte celulara programata, altii, drept tipuri de ne-
croza. In comunitatea l}tiin1ifica l}i medicala, i nsa, notiunea de
moarte celulara programata se suprapune, de cele mai multe ori,
peste cea de apoptoza.
Apoptoza este un fenomen fiziologic, reglator, ce echili-
breaza numarul celulelor dintr-un tesut normal. Ea face parte din
viata normala a celulelor, la fel ca l}i diferentierea 9i diviziunea,
este un proces activ ce punein actiune metabolismul propriu al unei
celule (constatare ce a determinat introducerea termenului de moarte
celulara programata sau ,,sinucidere celulara"). Celula participa activ
la un program de autodistrugere comparabil cu un suicid.
Spre deosebire de necroza, care este un fenomen pasiv ce
nu necesita participarea activa a celulei la procesele ce au ca
rezultat moartea sa l}i care se desfaoara haotic, pe arie larga i
cu afectarea celulelor nvecinate, apoptoza este un proces perfect
controlat.
Apoptoza este ireversibila i nu este toxica pentru celulele
nvecinate. Ea poate aparea atat n conditii fiziologice (dezvoltarea
i
embrionara, tum-over-u l normal al \esuturilor etc.), cat i patolo-
gice (tumori maligne etc.).
Dereglarile mecanismelor declanatoare ale apoptozei pot
fi cauza a numeroase i variate stari patologice.
lstoric
Un om de tiinta german, Carl Vogt, a fost primul care a
descris principiul de apoptoza,in 1842. Tn 1885, anatomistul Wal-
ther Flemming a emis o descriere mai precisa a procesului de
moartea programata a celulelor. Cu toate acestea, abiai n 1965,
subiectul a fost aprofundat, odata cu aparitia microscopiei elec-
tronice. In timp ce studia diverse tesuturi, John Foxton Ross Kerr
de la Universitatea din Queensland a fost capabil sa observe,i n
premiera, apoptoza i sa o diferentieze de moartea celulara
traumatica. Tn urma publicarii unei lucrri tiintifice, Kerr a fost invi-
417
tat sa se alature lui Alastair R. Currie i Andrew Wyllie (studentul

lui Currie) la Universitatea din Aberdeen.i n 1972, cei trei au
publicat un articol 1n ,,British Journal of Cancer". Kerr, care folosea,
initial, termenul de necroza programata a celulelor a renuntat la el
i. astfel, a aparut notiunea de apoptoza. John F. Kerr, Andrew H.
Wyllie i AR Currie au adoptat, 1n mod poetic, un cuvant grecesc
folosit pentru caderea frunzelor din copaci sau a petalele de la
flori. Apoptoza este o combinatie 1ntre prefixul apo- i radacina
ptoza. Apo 1nseamna ,,departe, 1n afara", iar ptoza, ,,cadere".
Kerr a primit, pe 14 martie 2000, premiul ,,Paul Ehrlich i Lud-
wig Darmstaedter", pentru descrierea apoptozei.i n 2002, datorita
cercetarilor lor 1n domeniul apoptozei, Sydney Brenner, Horvitz i
John E. Sulston au primit Premiul Nobel pentru Medicina.
Apoptoza rn cursul dezvoltarii embrionare, feta/e §i postnatale

Apoptoza apare frecvent 1n cursul histogenezei i organo-
genezei normale. Chiar din primele stadii ale dezvoltarii, o parte
dintre celulele germinale masculine sau feminine, cat i numero i
neuroni, dispar prin apoptoza. Moartea neuronala prin apoptoza a
fast constatata i mai tarziu, 1n timpul perioadei fetale i postnatale
(de exemplu, la nivelul sistemului nerves al vertebratelor, mai mult
de 50% dintre tipurile de neuroni normali mor 1n scurta vreme
dupa ce au realizat conexiunile sinaptice cu celulele-tinta). De
asemenea, motoneuronii, neuronii sistemului simpatic i ai retinei
pot disparea prin apoptoza. Morfogeneza cordului, duodenului,
resorbtia membranei interdigitale, disparitia canalelor Muller, fuzi-
unea proceselor palatine la mamifere utilizeaza, ca mecanism,
apoptoza. Se remarca faptul ca apoptoza apare 1n tesutul em-
brionar, 1ntotdeauna 1n acelai lac i 1n momente bine determinate
ale dezvoltarii.i
n aceasta perioada, ea afecteaza un numar mare
de celule, contrar celor observate la adult, cand este prezenta la
nivelul unei celule sau al unui grup restrans de celule.
418
Apoptoza
Apoptoza rn cursu/ rernnoirii celulare din tesuturile normale

la individul adult
Contributia apoptozei la tum-over-u l celulelor din tesuturile
normale este nul din aspectele mai putin studiate ale fiziologiei ce-
lulare. La adult,i n numeroase organe, celulele mature sunt,i n mod
regulat,i
nlocuite, tesuturile gasindu-se astfel ntr-un echilibru
dinamic: celulele su9a se divid, apoi se diferentiazai n celule ma-
ture care, dupa o anumita perioada de timp, dispar, moartea ce-
lulara programata fiind responsabila de acest turn-over. Se tie
astazi ca apoptoza este prezentai n timus, ·corticosuprarenala,
prostata, intestin, ficat, ganglionii limfatici, glanda mamara i ovar,
dar importanta fenomenului n-a fost decat rar cuantificata
morfologic: la nivelul ficatului, la specia umana i l?Oarece l?i la
nivelul corticosuprarenalei de l?Oarece. Tn primul caz, s-a constatat
ca 80 - 95% dintre celulele apoptotice erau localizatei n jurul ve-
nelor hepatice centrolobulare, iari n eel de-al doilea caz, numarul
celulelor apoptotice a fost estimat la aproximativ 6%.
Apoptoza hormono-dependenta sau sistemica

Se tie de multa vreme ca o scadere a concentratiei sang-
vine a anumitor hormoni estei nsotita de o atrofie a organelor-tinta.
Aceasta atrofie este acompaniata de o rata ridicata a apoptozei:
supresia secretiei de ACTH conduce la sporirea ratei apoptozeii n
corticosuprarenala, iar supresia secretiei de testosteron spore 9te
apoptoza i n celulele lobului ventral al prostatei; endometrul,
foliculul ovarian involueaza prin apoptoza,i n cursul ciclului ovarian
normal, ca l?i glanda mamara, dupa oprirea lactatiei. Se tie toto-
data ca reducerea fluxului sangvin poate conduce la declanarea
apoptozei la nivel hepatic, renal, cerebral sau cardiac.
Apoptoza rn sistemul imunitar

Apoptoza a fost intens studiatai n sistemul imun, unde se
pare ca joaca un rol importanti n eliminarea limfocitelor autore-
active, iar timocitele citotoxice, celulele K i NK induc apoptozai n
celulele-tinta.
'
419
16.3.1. . TANATOGENELE
Tn primul rand, programarea mortii celulare implica exis-
tenta unor gene, tanatogenele, ce codifica proteine cu efect letal
pentru celula respectiva. Analizele moleculare au condus la identi-
ficarea a doua gene, Ced-3 §i Ced-4, ce devin functionalei n celu-
lele ce intra
i
n apoptoza.
Daca aceste gene sunt inactivate, apoptoza nu se va mai
declan§a. Ambele gene actioneaza autonomi n declan§area mortii
celulare programate. Ced-3 codifica o proteina noua cu situsuri
pentru fosforilare, iar Ced-4, o proteina noua cu doua domenii de
legare a ionilor de calciu, dar modul n care interactioneaza cu alte
proteine sau cum anume o serie de alte proteine intervini n de·-
clan§area apoptozei estei nca incomplet elucidat. De asemenea, s-
a constatat ca pentru declan§area apoptozei,i n celulele de ma-
mifer, sunt esentiale §i alte gene: proto-oncogenele, c-myc (care,
n mod normal, stimuleaza proliferarea celulara), nivelele crescute
i
de P 53 etc.
16.3.2. GENELE SUPRAVIETUIRII

' '
Genele supravietuirii reprezinta o alta categorie de gene

care, n mod normal, actioneaza ca o franai n declan§area meca-
nismului apoptozei, fiind numite §i gene antiapoptotice. Daca
aceste gene sunt inactivate, multe celule care,i n mod normal, ar
trebui sa supravietuiasca, intrai
n apoptoza. Astfel, Ced-9 este o
gena ce prezinta un interes deosebit, deoarece actioneaza ca un
antagonist al programului de sinucidere. Daca functia sa este
activata ca urmare a unor mutatii, moartea celulara nu mai apare.
420
Apoptoza
Bcl-2, o proteina a membranei mitocondriale interne, poate
inhiba apoptoza atunci cand este superexprimata. Ea inhiba in-
duc{ia apoptozei de catre c-myc, facand totodata celulele mai pu-·
tin sensibile la radiatii i droguri citotoxice.
Activitatea a numeroase gene este esentiala pentru apop-
toza i mai mult, aceasta a fost conservatai n timpul evolutiei onto-
genetice de la viermi pana la specia umana, confirmand faptu! ca
apoptoza este o caracteristica importanta a celulelor animale.
16.3.3 INDUCTORI SAU INHIBITORI Al APOP-

TOZEI
Moartea fiziologica a celuleiincepe atunci cand o celula

dintr-un organism moare printr-un mecanism dirijat de proteinele
codificate de genomul-gazda. Scopul acestui proces este de a
nlatura celulele ,,nedorite"
i i se considera ca este pusi n practica
n trei situatii: '
i
1) dezvoltare i homeostazie;
2) mecanismul de apoptoza;
3)ini
mbatranire.
O mare varietate de stimuli sunt capabili sa induca apop-
toza unui anumit tip celular, de exemplu: hormoni, factori de cre-
tere, anticorpi monoclonali dirija\iimpotriva unei molecule de su-
prafata etc.
De asemenea, absenta unui stimul, agent fizic, metal, agent
biologic, xenobiotic, anticanceros, poate avea aceeai consecin\a.
Practic, apoptoza poate fi indusa de toti factorii ce induc
necroza, dar la o concentratie sau doza mai mica. S-a demonstrat
ca un grad redus de hipoxie induce apoptoza, iar hipoxia severa
provoaca infarct i necroza; hipertemia provoaca apoptoza sau
necroza, functie de cantitatea de caldura absorbita, ce depinde,
totodata, §i de tipul celular.
Lista substantelor naturals ce provoaca saui mpiedica apop-
toza este tot mai mare pe zi ce trece, dar este dificil de delimitat
actiunea acestora de cea a proteinelor codificate de gene inductoare
sau inhibitoare ale apoptozei, ce sunt n curs de identificare.
421
Bi-Ologie celulara ll>i moleculara
Deja sunt cunoscute rolurile multor substante endogene

precum:
a. Factorii de cre§tere. Factorul de creli>tere TGFf31 provoaca,
in vitro, apoptoza a numeroase tipuri de celule normale: hepatocite,
celule endometriale, eozinofile 9i celulele prostatei. Factorul de cre9-
tere nervoasa permite supravietuirea neuronilor simpatici, iar su-
primarea secretiei sale sau retragerea din mediul de cultura pro-
voaca apoptoza. Factorii de cre9tere hematopoietici inhiba apoptoza
celulelor hematopoietice, deoarece supresia sau retragerea sa din
mediul de cultura provoaca apoptoza acestor celule.
b. Citokinele. Printre citokinele inductoare ale apoptozei,
factorul de necroza tumorala a (TNF a) a fast eel mai intens stu-
diat. El provoaca, in vitro, apoptoza hepatocitelor, actiune poten-
tata de interferonul y. Alte citokine au actiune inductoare sau inhi-
bitoare asupra apoptozei granulocitelor, monocitelor sau limfoci-
telor. Unele citokine nu induc direct apoptoza, dar provoaca supra-
exprimarea transglutaminazelor, enzime ce au un rol important 1n
modificarile citoplasmatice 9 i nucleare din celula apoptotica. Lim-
fotoxina induce, 1n oligodendrocite, o rata mai ridicata a apoptozei
decat TNF a.
c. Hormonii. Glucocorticoizii induc apoptoza 1n limfocite T in
vitro (Wyllie 9i colab). In vivo, s-a constatat ca o cre9tere prelun-
gita a corticosteronului plasmatic poate provoca apoptoza limfoci-
telor B din maduva osoasa. De asemenea, este cunoscut faptul ca
glucocorticoizii pot declan9a apoptoza 1n celulele limfocitare maligne.
Hormonii sexuali. Supravietuirea celulelor endometriale
ovariene 9i prostatice depinde de concentratia sangvina a hormo-
nilor steroizi. Gonadotrofina hipofizara poate provoca, 1n ovar,
apoptoza celulelor din teaca granuloasa. Distrugerea celulelor
Leydig antreneaza scaderea testosteronului, ceea ce conduce la
apoptoza 1n linia celulara spermatica.
d. Alti compu§i. Monoxidul de azot poate provoca apoptoza
la nivelul neuronilor 9i macrofagelor.
422
Apoptoza
fn general, procesul mortii celulare fiziologice a fost 1mpartit

1n urmatoarele etape:
• etapa timpurie 1n care actioneaza stimulul sau sti-
mulii ce conduc la raspunsul apoptotic;
• receptionarea §i transductia semnalului - caile de
transductie vor transmite mesajul catre mecanismul
efector al mortii celulare; are loc activarea tanato-
genelor, urmata de sinteza unor macromolecule;
• etapa efectoare, ce include actiunea proteazelor, a
reglatorilor pozitivi sau negativi ai acestora, actiunea
endonucleazelor, transglutaminazelor ce au ca efect
fragmentarea nucleara (condensarea cromatinei §i
degradarea ADN-ului), urmata de fragmentarea
celulara 9i formarea corpilor apoptotici;
• etapa post-mortem, 1n care are loc fagocitarea cor-
pilor apoptotici.
Mecanismele care realizeaza apotoza sunt similare 1n toate
celulele animale 9i se bazeaza pe actiunea unor proteaze spe-
cifice. Ele au, 1n zona activa, cisteina 9i cliveaza proteinele-tinta la
nivelul acidului aspartic. De aceea, au fost denumite caspaze.
Acestea sunt sintetizate 1n stare inactiva (procaspaze) §i sunt
activate la cerere. Activarea se produce cu ajutorul unor proteine
adaptoare, ce aduna laolalta mai multe molecule de procaspaza.
Acestea, de§i inactive, 1mpreunate, au, totu§i, un slab potential
proteolitic ce se manifesta chiar asupra lor 1nsele 9i are ca rezultat
activarea lor reciproca.
Orice caspaza activa, pe langa rolul proteolitic, are §i rol de
a activa procaspazele din vecinatate. Astfel, o activare a catorva
molecule de caspaza antreneaza imediat activarea mai multor
molecule de procaspaze Tnvecinate, care, la randul lor, activeaza
alte molecule §i apoi alte molecule. Se formeaza, astfel, o cascada
42
3
al carei ritm crete exponential i a carei forta proteolitica se am-

plificai
n aceeai masura. Aceasta este cascada de activare a
caspazelor, mecanismul principal de functionare 'a apoptozei.
Activare prin divaj proteolitic
proteaza proteaza
inactiva activa
(procaspaza)
proteaza activa (caspaza A)
/ !\
oteoliza
----• ucleara
_ 0roteoliza
itozo!ica
APOPTOZA
Figura 144: Cascada de activare a caspazelor
424
Apoptoza
CAILE DE ACTIVARE ALE APOPTOZEI
Apoptoza poate fi declanata pe doua cai: calea extrin-

seca i calea intrinseca.
Activarea pe ca/ea extrinseca pornete de la nivelul recep-
torilor membranari ai celulei-tinta. Totul 1ncepe cu apropierea unui
limfocit killer care exprima, pe suprafata sa, o proteina denumita
ligandul fas. Ligandul se cupleaza cu receptorii specifici de pe ce-
lula-tinta, receptorii fas sau ,,receptorii mortii", activandu-i. Acetia
activeaza, la randul lor, proteinele adaptoare care aduna procas-
pazele 1nvecinate, acestea se agrega, 1 i manifesta efectul slab
proteolitic i se activeaza reciproc. Caspazele initiatoare astfel ac-
tivate declaneaza, apoi, 1n continuare, restul cascadei de acti-
vare. Activitatea proteolitica se marete exponential, ceea ce duce
la dezagregarea celulei cu formarea, 1n final, a corpilor apoptotici.
Vechea membrana celulara, transformata acum 1n membrana ce
1nvelete corpii apoptotici, exprima, pe suprafata ei, proteine spe-
cifice, ce reprezinta un semnal de pornire pentru procesul fago-
citarii corpilor apoptotici de catre alte celule. Componentele celu-
lare fagocitate sunt, mai apoi, reciclate.
limfoci! T killer
-
( -)ligand Fas
receptor Fas
celula apoptotlcii
Figura 145: Activarea apoptozei pe ca/ea extrinseca
Ca/ea intrinseca de activare pornete de la nivelul mitocon-

driei. Orice semnal declanator al suicidului celular determina eli-
berarea citocromului c de la nivel mitocondrial. Acesta se cupleaza
42
5
cu o proteina adaptoare specifica, Apaf-1, pe care o activeaza. Apaf-

1 activata determina agregarea procaspazelor 9 9i activarea lor
reciproca. De aici, se declan9eaza, 'fn continuare, cascada de
activare prin mecanismul cunoscut.
:1·-·----
citocromul c (spajiul intramembranar)
.. \ A -1
proteinli a<:laptoare
caspaza-9
(activa)
CASCADA
CASPAZELOR
tir
mitocondrie procaspazl!-9
(inactivl!)
Figura 146: Activarea apoptozei pe ca/ea intrinseca
Pe langa cele doua cai principale, mai exista 9i alte mo-

dalitati de activare mai putin cunoscute. AIF (apoptosis inducing
factor) este o proteina ce poate declan9a per se cascada de acti-
vare a caspazelor. Speciile reactive de oxigen, la randul lor, pot
declan9a apoptoza, datorita cre9terii concentratiei lor citoplasma-
tice, fie prin actiune directa, fie prin stimularea activarii citocromului c.
REGLAREA MECANISMELOR APOPTOZEI
Cascada de activare a apoptozei este un proces foarte di-

namic 9i al carei debut are un rezultat absolut cert: moartea ce-
lulei. De aceea, declan9area acestui proces 9i ajustarea lui, 'fn
sens pozitiv (stimulare) sau negativ (inhibare), trebuie foarte atent
reglate la nivel celular.
De acest reglaj sunt responsabile, 'fn principal, doua familii
de proteine: familia proteinelor Bcl-2 9i familia proteinelor IAP.
Proteinele Bcl-2 sunt elemente care inhiba apoptoza, fie
prin inhibarea eliberarii de citocrom c, fie prin alte mecanisme. Alte
proteine din aceasta clasa, precum proteina Bad, stimuleaza cas-
cada de activare, ajutand eliberarea citocromului c. Tn fine, alte
proteine (Bax, Bak etc.) moduleaza fin efectele celorlalte proteine
din familie, fie 'fn sens inhibitor, fie 'fn sens stimulator.
Proteinele din familia IAP sunt molecule cu rol inhibitor
pentru apoptoza. Ele se leaga de procaspaze, 'fmpiedicand agre-
426
Apoptoza
garea lor 9i activarea reciproca. Daca totul?i acestea au fost deja

activate, IAP se leaga la situs-urile active ale caspazelor, blocan-
du-le activitatea.
Apoptoza este reglata 9i cu ajutorul semnalelor extrace-
lulare. Acestea T9i gasesc raspunsul Tn interiorul celulei, semnalele
respective contribuind la reglarea nivelelor de proteine reglatoare:
Bcl2 §i IAP.
fn reglarea mecanismelor apoptozei, sunt implicati 9i alti
factori. De exemplu, cre§terea concentrafiei de AMPc stimuleaza
fragmentarea ADN-ului 9i pare a fi responsabila de cre9terea con-
centratiei intracelulare de calciu. Cre9terea coricentratiei de AMPc
se face fara activarea proteinkinazei C care ar Tmpiedica sinuci-
derea celulei, Tn timp ce activarea proteinkinazei A are efect in-
vers. fn macrofagele Tn apoptoza, s-a evidentiat o cre9tere a IP3
ce provoaca eliberarea calciului din locurile de stocare celulara.
Calciul are un rol major, deoarece daca se previne cre 9terea con-
centratiei sale citoplasmatice, se Tmpiedica activarea endonuclea-
zelor 9i invers, utilizarea unui ionofor calcic antreneaza fragmenta-
rea ADN-ului. Totodata, antagoni9tii canalelor de calciu - verapa-
mil 9i nifedipin - Tntarzie apoptoza. Tintele celulare ale ionilor de
calciu Tn initierea apoptozei sunt diverse: endonucleazele endo-
gene (calciu dependente Tn majoritatea tipurilor celulare) sau acti-
varea transcriptiei unor gene ce codifica receptori de suprafata
pentru semnalele declan9atoare ale apoptozei (de exemplu: re-
ceptorul fas care este implicat Tn sinuciderea autocrina a celulelor
T mature). Recent, s-a identificat o alta tinta a ionilor de calciu 9i
anume, o serin-proteaza nucleara, calciu dependenta, ce realizea-
za clivajul histonei H1 Tn timocite, limfocitele CLL 9i liniile celulare
din melanoame, ai carei inhibitori blocheaza activarea endonu-
cleazelor, demonstrand astfel ca proteazele, direct sau indirect,
controleaza activarea endonucleazelor.
42
7
CARACTERISTICI MORFOLOGICE
Din punct de vedere morfologic, apoptoza evolueazai

n trei
etape.
Prima etapa se caracterizeaza prin aparitia brusca a unor
alterari nucleare i citoplasmatice. Astfel, la nivelul nucleului, cro-
matina se condenseaza, iar un inel de cromatina condensatai n-
conjoara aproape complet nucleul, dand celulei un aspect ultra-
structural caracteristic. Fibrilele i granulele nucleolare sunt dis-
persatein nucleoplasma, dar organizatorii nucleolari raman intacti. Tn
citoplasma, organitele se apropie, se aglomereaza, fn special,
mitocondriile, filamentele citoscheletului i ribozomii liberi.
Celula ia un aspect rotunjit,i
n timp ce desmozomii sunt distru i,
iar spatiile intercelulare se largesc. Un aspect esential al acestei
etape este faptul ca reticulul endoplasmic i mitocondriile (in
special, ADN-ul mitocondrial) raman intacte contrar necrozei unde
se evidentiaza alterari morfo-functionale rapide ale aparatelor de
sinteza i 'energetic al celulei. Tn aceasta etapa, lizozomii nu sunt
alterati, iar plasmalema este impermeabila la colorantii vitali.
A doua etapa se caracterizeaza prin aparitia unei crenelari
a membranei nucleare ce anunta fragmentarea nucleara i cito-
plasmatica care va conduce la formarea fragmentelor celulare,
mai mult sau mai putin voluminoase, legatei ncaintre ele prin
punti citoplasmatice. Tn aceste tragmente, se pot evidentia resturi
nucleare, citoplasmatice, mai mult sau mai putin evidentiabile,
chiarin microscopia electronica. Tn acest stadiu,· volumul celular
scade, iar densitatea crete. Examinatai n microscopie electronica
de baleiaj, suprafata celulara prezinta bule citoplasmatice volu-
428
Apoptoza
minoase ce deformeaza plasmalema i;,i care sugereaza 1m-

portantele modificari ale citoscheletului. Fragmentele celulare sau
corpii apoptotici se desprind unii de altii, separandu-se de tesut
pentru a fi fagocitati de macrofage sau de celulele Tnvecinate. Ne-
utrofilele nu intervin Tn aceasta fagocitoza.
Cea de-a treia etapa este marcata de degradarea corpilor
apoptotici. Aceasta degradare provoaca leziuni ale piasmalemei
ce au drept consecinta permeabilitatea la colorantii vitali i distru-
gerea resturilor citoplasmatice l?i nucleare de catre macrofage.
Disparitia corpilor apoptotici nu este Tnsotita de niciun fel de re-
actie
'
inflamatorie limfocitara sau de reactii'
de fibroza, ceea ce
diferentiaza apoptoza de necroza. Aceste fenomene se desfa-
oara rapid, estimandu-se ca durata este de aproximativ ase ore,
cu situatii Tn care se pot Tntinde pe o durata de cateva minute pana
la cateva zile (de exemplu: apoptoza hepatocitelor dureaza apro-
ximativ trei ore).
.CARACTERISTICI MOLECULARE
Modificari nucleare
Din punct de vedere molecular, condensarea cromatinei se
evidentiaza printr-o remaniere profunda a ADN-ului: electroforeza
pe gel pune Tn evidenta fragmente de AON cu pondere moleculara
corespunzand unui nucleozom - 180 de perechi de baze. Punerea
Tn evidenta a unei fragmentari regulate a ADN-ului reprezinta un
element esential pentru confirmarea moleculara a modificarilor
morfologice ale cromatinei. De asemenea, proteinele matricei nu-
cleare parasesc nucleul Tn curs de apoptoza, fiind detectabile Tn
mediul de cultura. Fragmentarea ADN-ului este realizata de o en-
donucleaza activa la pH-neutru, Ca2+ i Mg2+ dependenta i inhi-
bata de Zn2+. Totui, endonucleaza responsabila de aceasta frag-
mentare nu a fost Tnca caracterizata cu certitudine.
Arends i Wyllie au extras, din nucleele timocite!or apop-
totice, o proteina de 130 Kda cu activitate endonucleazica ce ar
putea fi una dintre subunitatile topoizomerazei II, enzima ce are un
rol important Tn organizarea buclelor ADN-ului i a carei activare ar
putea induce segmentarea ADN-ului. Alaturi de aceasta, au fost
42
9
evidentiate i endonucleaze cu pondere moleculara mai mare,

cum ar fi proteina NUC-18, ADN-aza I i ADN-aza 11. ldentificarea
cu exactitate a endonucleazelor ce intervin 'i'n apoptoza este esen-
tiala pentru cunoaterea mecanismelor apoptozei.
Modificari citoplasmatice
Transglutaminazele, enzime Ca-dependente, cu localizare
citoplasmatica, sunt activate 'i'n marea majoritate a celulelor 'i'n curs
de apoptoza. Acestea catalizeaza polimerizarea proteinelor, cu
formarea de punti 'i'ntre acestea, i ar putea fi responsabile de mo-
dificarile ultrastructurale ale citoplasmei. Se considera ca aglome-
rarea organitelor celulare din primele doua etape ale apoptozei
'i'mpiedica ieirea macromoleculelor celulare, explicand astfel ab-
senta reactiei inflamatorii.
Modificari ale plasmalemei

Recunoaterea celulei apoptotice 'i'n curs de fragmentare de
catre macrofage sugereaza importante modificari ale proteinelor i
lipidelor membranare. Exista, pana 'i'n prezent, trei ipoteze pentru
explicarea acestui fenomen:
- prima, cea mai cunoscuta, se bazeaza pe existenta mo-
dificarilor glicoproteinelor i glicolipidelor membranare (de exem-
plu: pierdere de acid sialic etc.). Tn acest caz, nu numai macrofa-
gele, dar i alte celule ce au receptori pentru asialoglicoproteine,
cum ar fi hepatocitele, participa la fagocitoza celulelor apoptotice.
Tn acest context, s-a demonstrat ca apoptoza hepatocitelor este
'i'nsotita de o supraexpresie a receptorilor pentru asiaglicoprotei-
nele din hepatocitele 'i'nvecinate celor apoptotice cat i a recepto-
rilor specifici galactozei, localizati 'i'n celulele Kupffer;
- a doua posibilitate are 'i'n vedere posibilul rol al recepto-
rului vitronectinei, o proteina de adezivitate din familia integrinelor
ce interactioneaza cu ligandul CD 36 din macrofage;
- a treia posibilitate ar putea fi cea legata de modificarea
plasmalemei celulei apoptotice ce ar conduce la o expunere, 'i'n mo-
nostratul extern, al fosfatidil serinei. Ramane doar de demonstrat
existenta unui receptor macrofagic pentru fosfatidil serina.
430
Apoptoza
APOPTOZA $1 SENESCENTA CELULA.RA
n cursul mbatranirii, se observa o diminuare a numarului

I
de celule din majoritatea organelor, considerandu-se ca apoptoza
ar putea fi cauza acestei diminuari a masei celulare. Declan9area
apoptozeii n celulele senescente se datoreaza carenteii n factori
de cre9tere, anomaliilor transmiterii semnalelor inter- 9i intrace-
lulare 9i modificarii ciclului celular. Apoptoza iritervine, probabil,i
n
eliminarea celulelor sanatoase i pastrarea celulelor anormale.
Privarea de factori de cre9tere i/sau de supravietuire re-
prezinta o posibilitate de inductie a apoptozei: o celula ii poate
activa programul de autodistrugere, deoarece nu a primit semnalul
de supravietuire. Astfel, se explica regresia rapida prin apoptoza a
hiperplaziilor experimentale din numeroase organe (rinichi, ficat,
pancreas etc.).I n cursuli mbatranirii, ar putea avea lac un fe-
nomen analog de dereglare a mecanismelor homeostatice,i n ve-
derea mentinerii numarului de celule din organism. Acest fenomen
a fast evidentiatin cursul mbatranirii n anumite organe: involutia
glandei mamare 9 i a uteruluii n timpul menopauzei este de natura
apoptotica 9i legata de privarea de hormoni steroizi sexuali; mo-
dificarile cutaneo-mucoase sunt legate de deficitul de producere a
estrogenilor 9i au la baza activarea mecanismelor apoptozei; di-
minuarea sintezei de androgeni, odata cu varsta, este,i n parte,
responsabila de anumite atrofii organice,i n special de topirea
masei musculare la barbatuli n varsta. Atrofia musculara 9 i cu-
tanata, observatai n cursul senescentei, ar putea fi de origine
apoptotica 9i legata de diminuarea producerii factorilor de cre9tere
9 i de supravietuire, cum ar fi hormonul de cre§tere 9ifactorul de
cre9tere insulin-like-I (IGF-1). Faptul ca un tratament hormonal de
9ase luni cu hormoni de cre9tere conduce la sporirea semnificativa
a masei musculare, a grosimii epidermului i a densitatii osoase
vertebrale la persoanele cu varsta de peste 60 de ani, cu deficiti n
IGF-1, pledeazai n favoarea originii apoptotice a atrofiei organice
din senescenta. lnducerea apoptozei de catre scaderea factorilor
de supravietuire este un fenomen bine demonstrati n sistemul ner-
431
vos, unde neuronii mor, 1n absenta factorului de cretere neuronal

produs de celula-tinta.
Defecte ale semnalizarii transmembranare

Moartea prin apoptoza poate surveni 9i 1n cazul 1n care ca-
ile de semnalizare ce conduc la diviziune celulara sunti ntrerupte
sau perturbate. Astfel, protein-kinazele C au un rol importanti n
operatiunea unei celule pentru proliferare sau moarte. Activarea
PKC inhiba apoptoza, n timp ce inhibitorii PKC au un efect invers.
Tirozinkinazele sunt implicatei n procesul apoptotic, iar disfunctia
lor poate provoca oprirea ciclului celular 9i moartea prin apoptoza.
Tn cursul mbatranirii, activitatea tirozinkinazelor legate la receptori
membranari este diminuata, conducand la o alterare a transmiterii
semnalului proliferativ.
Alterarea ciclului celular

Trecand de ontogeneza, un organism multicelular trebuie
sa realizeze echilibrul ntre proliferare 9i moarte celulara, daca se
dore9te mentinerea unei talii constante. Nu este de mirare, a9a-
dar, ca aceleai gene sunt implicate atat n controlul ciclului celular
i al apoptozei. Tn cursul mbatranirii, este posibil ca modificarea
expresiei genelor ce controleaza mecanismele proliferarii sa de-
plaseze echilibrul proliferare - moartei n favoarea apoptozei. De
exemplu, p53 este un reglator al ciclului celular, dari n anumite
conditii, poate provoca apoptoza. Expresia sa este indusa, n spe-
cial, de evenimente susceptibile sa altereze ADN-ul, dar,i n anu-
mite cazuri, 9i de privarea de factori de cretere.
Tn concluzie, mecanismul apoptozei ce func\ioneaza i n
timpul organogenezei 9i apoi a vietii adultului, poate fi activat, iar
n alte situatii, mecanismele de control ale apoptozei sunt afectate
i
deimbatranire 9i activarea lor conduce la eliminarea celulelor
normale - apoptoza abranta.
432
Apoptoza
AI-Rubeai, M. & Fussenegger, M. (2004). Apoptosis. Dordrecht; Boston:

Kluwer Academic Publishers.
Herrmann, M. & Kalden, J. R (2003). Apoptosis and autoimmunity.
Weinheim: Wiley-VCH.
Holcik, M. (2005). Apoptosis in health and disease : clinical and therapeutic
aspects. London; New York: Cambridge University Press.
Karp, G. (2010). Cell biology (6th ed.). Hoboken, N.J.: Wiley.
Kumar, S. (1998). Apoptosis: biology and mechanisms. Berlin; New
York: Springer.
Kung, G., Konstantinidis, K. & Kitsis, R N. (2011). Programmed necrosis,
not apoptosis, in the heart. Circulation research, 108(8), 1017-1036.
LeBlanc, A. C. (2002). Apoptosis techniques and protocols (2nct ed.).
Totowa, N.J.: Humana.
Natale, V. & Business Communications Co. (2000). Apoptosis : new
growth opportunities. Norwalk, CT: Business Communications.
Nathke, I. S. & McCartney, B. M. (2009). APC proteins. New York, N.Y.
Austin, Tex.: Springer Science+Business Media; Landes Bioscience.
Preedy, V. R (2010). Apoptosis. Enfield, NH: Science Publishers.
Tomei, L. D. & Cope, F. 0. (1991). Apoptosis: the molecular basis of cell
death. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Tuder, R M., Hunt, J. M. & Schmidt, E. P. (2011). Hyperoxia and
apoptosis: too much of a good thing? American journal of
respiratory and critical care medicine, 183(8), 964-965.
Winkler, J. D. (1999). Apoptosis and inflammation. Basel; Boston:
Birkhauser.
433
Celula tumorall
Ce/ula tumorala reprezinta o
componenta tisulara care, la un
moment dat, evolueaza anor-
mal, 1n sensul unei cre§teri ne-
controlate. Cre§terea necon-
trolata poate fi de natura benig-
na sau maligna. Termenul de
,,tumora" se traduce cofocvial,
prin ,,umf/atura", deoarece re-
producerea celu/ara necon-
trolata determina, uneori, ma-
rirea dispropor(ionata a (esu-
tului afectat.
Ce/ulele tumorale maligne (de-
numite, 1n general, §i celule ma-
ligne, canceroase) au capacita-
tea de a invada t,esuturile ve-
cine sau la distanta (metasta-
zare) §i de a da na§tere unor
forma(iuni tumorale secundare.
Celulele tumorale maligne (denumite, Tn general, i celule
maligne, canceroase) au capacitatea de a invada tesuturile vecine
sau la distanta (metastazare) i de a da natere unor formatiuni
tumorale secundare. Celulele tumorale benigne nu invadeaza te-
suturile vecine sau la distanta, dar pot genera formatiuni tumorale
de marl dimensiuni care pot determina alte complicatii - afectarea
sistemului respirator, circulator sau a mobilitatii.
Tumorile benigne sunt, Tn mare parte, abordabile chirur-
gical,i
n timp ce tumorile maligne nu pot fi Tntotdeauna eradicate
prin aceasta metoda.
Celulele tumorale declaneaza creterea necontrolata, ca
urmare a unor mutat,ii suferite la nivelul AON, mutat'ii care se acu-
muleaza cu varsta. Mutatiile activeaza oncogenele sau reprima
genele supresoare ale tumorilor, ceea ce permite, Tn ambele ca-
zuri, creterea celulara necontrolata. Odata cu avansarea Tn vars..
ta, exista o incidenta crescuta a aparitiei tumorilor i, de aseme-
nea, crete incidenta aparitiei celulelor maligne.
Celulele tumorale anaplazice sunt slab diferentiate i au un
aspect primitivin raport cu celulele sanatoase. Tn tumorile malig-
ne, aceste celule reprezinta o prezenta constanta.
Organismele pluricelulare animale se organizeaza ca o
societate sau ca un ecosistem, Tn care indivizii sunt reprezentati
de celule. Aceste celule se reproduc prin diviziune celulara i se
organizeaza i n ansambluri colaborative sau tesuturi. Scopurile
celulare, Tn cadrul unui {esut, sunt similare i extrapolabile: celu-
lele se nasc, mor, se exprima Tntr-un habitat delimitat de limite pre-
cise, emit, receptioneaza i interpreteaza semnale, Tn scopul unui
control social care le dicteaza comportamentul. Astfel, fiecare ce-
lula actioneaza Tntr-o maniera responsabila, regasindu-se Tntr-o
stare de repaus, diviziune, diferentiere sau direciionandu-se spre
un proces de moarte ceiulara, spre binele general al organismului.
Perturbarile moleculare, Tn cadrul acestor procese echilibrate,
determina modificari anormale Tn cadrul unei societati multicelulare.
Tn corpul uman, numarul celulelor depaete 1.014 i, zilnic,
miliarde de celule sufera mutatii capabile de a deteriora echilibrul
lor social. Tn plus, un eveniment mai periculos este reprezentat de
faptul ca o mutatie confera unei celule un avantaj selectiv, ceea ce
Ti permite sa se dezvolte mai bine decat celulele vecine i sa poata
induce aparitia unei clone mutante. 0 mutatie care induce un com-
portament egoist la nivel celular poate afecta comportamentul
1ntregului grup de celule. Mutatiile repetitive, competitivitatea i

selectia naturala, procese care au lac la nivelul celulelor somatice,
pot determina o degradare ulterioara a interrelatiilor sociale la
nivel celular. Acestea sunt conditiile general acceptate de aparitie
a cancerului. Cancerul este o stare patologica, 1n care clonele mu-
tante individuale prospera pe seama vecinilor celulari, distrugand,
1n final, sistemul de organizare sociala a celulelor.
Celulele canceroase sunt caracterizate prin doua caracte-
ristici genetic transmisibile:
- Progenitorii lor i celulele tumorale 1n sine se reproduc
diferit fata de principiile normale ale diviziunii celulare;
- lnvazia i colonizarea unor teritorii destinate normal unor
alte celule.
Aceste caracteristici fac din cancer o patologie cu potential
letal. 0 celula anormala izolata, care nu prolifereaza dincolo de
vecinatatea sa, nu produce modificari semnificative, indiferent de
potentialul sau distructiv.i n schimb, proliferarea sa necontrolata va
determina aparitia unei tumori sau a unui neoplasm 1n care
masa de celule anormale crete implacabil. Cat timp celulele tu-
morale raman agregate 1ntr-o masa unitara, tumora este benigna
i poate fi tratata chirurgical. 0 tumora este considerata canceroa-
sa numai daca celulele au dobandit capacitatea de a invada te-
suturile vecine. lnvazivitatea implica abilitatea unei tumori de a eli-
bera un numar variabil de celule care patrund 1n fluxul sangvin sau
limfatic i formeaza tumori secundare (numite metastaze) 1n alte
locatii tisulare din organism. Cu cat celulele canceroase se ras-
pandesc pe arii mai largi 1n organism, cu atat starea patologica
este mai dificil de tratat.
Fiecare tip de cancer are anumite caracteristici care 1i re-
flecta originea. De exemplu, celulele care provin dintr-un carcinom
bazocelular, fiind derivate din keratinocitele stem din stratul bazal
al epidermului, var sintetiza, 1n continuare, filamente intermediare
din categoria citokeratinelor; celulele maligne dintr-un melanom,
provenite din celulele pigmentare ale pielii, var continua (de obicei,
dar nu obligatoriu) sa sintetizeze granule de pigment.
Comportamentul celulelor canceroase difera mult i 1n func-
tie de origine. Celulele carcinomului bazocelular sunt invazive la
nivel local, dar nu determina metastaze, 1n timp ce celulele mela-
438
Celula tumorala
nomului malign sunti nalt invazive, se multiplica rapid i produc

metastazei
ntr-un timp foarte scurt.
Celulele tumorale se reproduc nelimitat

Spre deosebire de celulele normale, celulele canceroase nu
nceteaza reproducerea nici dupa 50 - 60 de cicluri de multipli-
i
care. Pentru celulele normale, accentuarea multiplicarii este aso-
ciata de o accelerare a proceselor apoptotice, care elimina surplu-
sul celular. Una dintre cele mai importante caracteristici ale celu-
lelor maligne este pierderea capacitatii de a intrai n apoptoza;
aceasta duce la creterea i progresiu'nea tumorala.i n tesuturile
normale, procesele de multiplicare celulara i apoptoza se aflai n
echilibru, n timp cei
n tesuturile tumorale, fie proliferarea este ex-
cesiva pentru o apoptoza normala, fie proliferarea este normala,
iar apoptoza este deficitara (fig. 145).
diviziune apoptoza HOMEOSTAZIE

normala normala
diviziune
crescuta
,v-.·-;e -"-
apoptoza
normala
8
TUMORA
diviziune
..
apoptoza
... . - ·,
88v
TUMORA
normala scazuta
Figura 147: Modificarile de reproducere ale ce/ulelor tumora/e
439
Biotogie celulara i moleculara
Normal
Tumora benigna
Tumora maligna
Figura 148: Modificarile locale rn funcfie de agresivitatea tumorala
Celulele tumorale nu receptioneaza i nu interpreteaza

corect semnalele provenite de la alte celule
Sistemul celular normal este inhibat i depait de sistemele
de semnalizare ale celulei tumorale. Acest proces se poate datora
supraexpresiei genelor implicate Tn procesele de proliferare sau in-
hibarii activitatii genelor responsabile de limitare a diviziunii celulare.
Celulele tumorale maligne nu se autoagrega

Celulele maligne Ti pierd capacitatea de a sintetiza mole-
cule de adezivitate i. astfel, se pot detaa cu uurinta de celulele
vecine. In acest mod, se pot explica procesele de metastazare ca-
racteristice tumorilor maligne.
Figura 149: Celulele tumorale nu sintetizeaza molecule de adezivitate

de suprafafa §i T§i pierd pozif ionarea rn contextul tisu!ar
440
Celula tumorala
Tabet 18: Caracteristicile celulelor normale comparativ cu ce/u/e/e tumorale

Celule normaJe Celule tumorale
/ < •· ··•·•· ' :: <
Produsul reproducerii celulare Reproducerea este perpetua.
este identic.
Reproducerea este Nu receptioneaza
un fenomen limitat. li,i nu interpreteaza corect semnalele
provenite de la alte celule.
Se autoagrega Nu se autoagrega.
Tn locatia predestinata.
Se autodistrug, Pierd capacitatea de autodistrugere.
Tn cazul Tn care sunt afectate.
Devin specializate sau mature. Nu devin celule specializate,
Tn mare parte, raman imature.
Caracteristicile celulelor tumorale

- Pentru a determina aparitia unei tumori maligne, celulele
trebuie sa acumuleze o serie de modificari i abilitati noi, eviden-
tiabile pe masura dezvoltarii acelei tumori;
- Supravietuirea celulelor tumorale (bazata pe procese in-
tense de proliferare i numai uneori, diferentiere) depaete capa-
citatea similara a celulelor normale, inclusiv Tn culturi celulare, cu
sau fara pastrarea capacitatii de aderenta la substrat;
- Sunt insensibile la semnalele anti-proliferative extracelulare;
- Sunt mai putin expuse la apoptoza;
- Mecanismele intracelulare ale controlului ciclului celular sunt
afectate; celula tumorala nu mai raspunde corect la stress (hipoxie,
deteriorarea AON) §i nu mai poate controla diviziunea celulara;
- lnduc o contributie nutritiva de la celulele stromale normale;
'
- lnduc angiogeneza;
- Evadeaza din tesuturile de origine (invazivitate), supravie-
tuiesc §i prolifereaza Tn tesuturi heterologe, situate la distanta (meta-
stazare);
- Sunt genetic instabile;
- Prezinta modalitati de stabilizare a telomerelor.
441
Bioogie celulara i moleculara

Friedman, A & Borisyuk, A (2006). Cell cycle, proliferation, and cancer.
Berlin: Springer.
Wells, A. (2006). Cell Motility in Cancer Invasion and Metastasis. Cancer
Metastasis - Biology and Treatment 8.
442

BIOLOGIE CELULARA Si Moleculara SEDCOM LIBRIS 2011 1-1

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

BIOLOGIE CELULARA Si Moleculara SEDCOM LIBRIS 2011 1-1

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Carmen Elena Constantin Tudor Laurentiu

COTRUTZ COTRUTZ PETREU BADESCU

Editura SEDCOM LIBRIS

Descrierea CIP a Bibliotecii Nationale a Romaniei

Biologie celulara i moleculara I Carmen Elena Cotrutz,

Editura SEDCOM LIBRIS este acreditata de Consiliul National

Copyright © 2011 SEDCOM LIBRIS

Adresa: $os. Moara de Foe nr. 4, cod 700527, lai. Romania

8. Zonele de cuplaj celular §i matricea extracelulara .................. 237

12. Lizozomii .................................................................................... 345

accesibil, cu elementele de biologie celulara 9i moleculara de care

echipa - echipa de la disciplina de biologie celulara §i moleculara

Prof. univ. dr. Carmen Elena COTRUTZ

,,... Nu §tiu cum ma vede lumea,

(Sir Isaac Newton)

Figura 1: Reprezentarea fenomenu/ui Big Bang §i a consecinfei sale,

Astazi, oamenii de §tiinta au dovezi ca Universul a avut un

fost generatei n primele minute de foe ale Universului. Colabo-

Este posibil ca punerea 1n functiune a ,,Acceleratorului de

La 13,7 miliarde de ani dupa Big Bang, Universul nostru are

1.2.1. '7ARSTELE TERREi

Tabet 1: Sistemul geocrono/ogic

Actualmente, ne regasim 1n eonul Fanerozoic, era Ceno-

TERRAiN EONUL HADEAN, APARITIA PRIMELOR FORME

La 150 milioane de km de Soare, o astfel de aglomerare a

Tabel 2: Eonul Hadean (mai mutt de 3, 8 miliarde ani rn urma)

EONUL ARHEAN $1 PRIMA LINIE CELULARA

lecula de AON. S-au propus multe modele de replicatori, care au

Tabet 3: Eonul Arhean (3,8 - 2,5 miliarde de ani rn urma)

Tabel 4: Eonul Proterozoic (2,5 miliarde - 542 milioane de ani rn urma)

Progresele tiintifice remarcabile din ultimii 80 de ani fac

steia 1n timp, pana la impresionanta varietate de forme care popu-

ceptul de ,,supa primordiala" care s-ar putea forma din molecule

1.2.2.1.2. Panspermia sau originea cosmica a viefii

singhe (directorul Centrului de Astrobiologie din Cardiff, Scotia);

Mecanisme posibile pentru realizarea Panspermiei

1.2.2.2. MODELE EXPERIMENTALE, MODELE ACTUALE

1.2.2.2. 1. Condifii preexistente

Stanley Miller (celebru pentru realizarea experimentului de

1.2.2.2.2. Modele actuale

O modelul replicatorului - la Tnceput, au fast

1.2.2.2.3. De la prima molecula la celula ancestrala

Teoria supei prebiotice: experimentul lui Miller fi va-

• atmosfera Pamantului primitiv era una reducatoare;

Figura 2: Simularea sinteze/or abiotice (Miller - Urey)

Experimentul Miller - Urey (fig. 2) a simulat, n laborator, con-

C02 --+ CO + [OJ (oxigen atomic)

fn solutie apoasa, formaldehida, amoniacul i acidul cian-

CH20 + HCN + NH3 --+ NH2-CH2-CN + H20

Ulterior, apa i formaldehida pot reactiona printr-o reactie

se obtina cateva sute de compui organici diferiti, incluzand re-

FORMAREA POLIMERILOR - CONSTRUIREA MACRO-

S. W. Fox l?i colaboratorii (1960) au obtinut polipeptide nu-

Figura 3: Polimerizarea spontana, a/eatorie, a nucleotide/or

S. Akahori a emis o alta ipoteza, sugerand ca primele po-

modificari evolutive pana la o secventa de aminoacizi capabila sa

S-a constatat ca farmarea polimerilor nu necesita prezenta

I ultima jumatate de secol, au fost comunicate o serie de

Teoria plajei radioactive

PROCESUL EVOLUTIV DE LA MOLECULE (MONOMER!,

Cu tot optimismul oamenilor de tiinta, potrivit caruia ne

1.2.3. CE NE SPUNE RELIGIA DESPRE ORIGINEA

Toate datelei n aceasta problema sunt cuprinsei n primul