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1.0 INDICE PAG.

2.0 OBJETIVO ......................................... 3

3.0 ALCANCE .......................................... 3
4.0 RESPONSABILIDADES ................................ 3
5.0 DESARROLLO ....................................... 4
5.1 IMPORTANCIA CLINICA .......................... 4
5.2 MUESTRA ...................................... 4
5.3 NOMBRE DEL EQUIPO O INSTRUMENTO .............. 4
5.4 FUNDAMENTO O PRINCIPIO DEL METODO ............ 5
5.5 CALIBRADORES ................................. 5
5.6 CONTROLES .................................... 5
5.7 REACTIVOS .................................... 5
5.8 LINEALIDAD ................................... 5
5.9 LIMITES DE REFERENCIA ........................ 6
5.10 INTERFERENCIAS .............................. 6
5.11 FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD ......... 6
5.12 CALIBRACION O CURVA DE CALIBRACION .......... 6
5.13 PREPARACION DE MUESTRAS, REACTIVOS,
CONTROLES Y CALIBRADORES .................... 6
5.14 CONTROL DE CALIDAD INTERNO .................. 6
5.15 PROCESO ANALITICO ........................... 7
5.16 CALCULOS .................................... 8
5.17 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Y
LIMITES DE REFERENCIA ........................ 8
5.18 LIMITES Y RESPONSABILIDAD DE LIBERACION
DE RESULTADOS ................................ 10
5.19 INFORME DE RESULTADOS ....................... 10
5.20 BIBLIOGRAFIA ................................ 10

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2.0 OBJETIVO

Establecer los lineamientos a seguir para el cultivo de

Mycoplasmas genitales.

3.0 ALCANCE

Aplica cada vez que se realice un cultivo de Micoplasmas

genitales.

4.0 RESPONSABILIDADES

4.1 JEFE DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

4.1.1 Aprobar el presente documento.

4.1.2 Tomar acciones en caso de cualquier incumplimiento en

el desarrollo de este procedimiento.

4.2 SUPERVISOR DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

4.2.1 Revisar y mantener el procedimiento actualizado.

4.2.2 Supervisar que el desarrollo de la prueba se cumpla de

acuerdo a este procedimiento.

4.3 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

4.3.1 Ejecutar el presente procedimiento.

4.3.2 Comunicar al Supervisor o Jefe de Departamento de

Microbiología cualquier desviación observada en el
cumplimiento de este procedimiento.

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5.0 DESARROLLO

5.1 IMPORTANCIA CLINICA

Los Mycoplasmas son microorganismos que no tienen pared

celular, por lo que no son sensibles a los β-lactámicos como
la penicilina. Dos géneros son de importancia clínica como
causa de infección genital; Mycoplasma hominis y Ureaplasma
urealyticum. Mycoplasma fermentans, de poder patógeno mal
definido, también puede tener importancia etiológica en estas
infecciones.

5.2 MUESTRA

5.2.1 Tipo de muestra: exudado endocervical, exudado vaginal,

exudado vulvar, exudado uretral contenido en medio de
transporte, así como orina y semen.

5.2.2 Especificaciones de aceptación y rechazo de la muestra:

Muestras con signos de contaminación o que no sean
recibidas en el contenedor correspondiente.

5.2.3 Estabilidad de la muestra: 72 horas (temp. Ambiente).

5.2.4 Tiempo de retención y almacenaje de la muestra después

de su proceso: 4 días en la cámara fría de 4°C a 8°C.

5.3 NOMBRE DEL EQUIPO O INSTRUMENTO

5.3.1 Incubadora. Ver Procedimiento Específico para el Manejo

de Incubadoras código PRE-MIC-005.

5.3.2 Centrífuga. Ver Procedimiento Específico para el Manejo

y Mantenimiento de Centrífuga código PRE-MIC-008.

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5.3.3 Pipeta. Ver Procedimiento Específico para el Manejo y

Mantenimiento de Equipo de Micropipetas Finnpipette
código PRE-BMO-010.

5.4 FUNDAMENTO O PRINCIPIO DEL METODO

5.4.1 Cultivo en medios específicos.

5.5 CALIBRADORES

5.5.1 N/A.

5.6 CONTROLES

5.6.1 Cepa de Ureaplasma urealyticum (ATCC 27813).

5.7 REACTIVOS

5.7.1 Mycofast evolution 3 (estable hasta su fecha de caducidad

almacenado a temperatura de 2° a 8°C.)

a) Frasco UMMt: Medio de transporte para micoplasmas.

b) Frasco UMMlyo: Medio de crecimiento liofilizado.
c) Galería con 20 pozos.
d) SMh: Activador de crecimiento para M. hominis.

5.7.2 Aceite mineral. Estable hasta fecha de caducidad

almacenado a temperatura ambiente.

5.8 LINEALIDAD

5.8.1 N/A.

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5.9 LIMITES DE REFERENCIA

5.9.1 Negativo.

5.10 INTERFERENCIAS

5.10.1 N/A.

5.11 FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD

5.11.1 N/A.

5.12 CALIBRACION O CURVA DE CALIBRACION

5.12.1 N/A.

5.13 PREPARACION DE MUESTRAS, REACTIVOS, CONTROLES Y

CALIBRADORES

5.13.1 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.13.1.1 Coloca los reactivos a temperatura ambiente 30

minutos como mínimo, antes de su uso.

5.14 CONTROL DE CALIDAD INTERNO

5.14.1 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.14.1.1 Con cada cambio de lote del reactivo, realiza un

control de identificación y de antibiograma con la
cepa de referencia de U. urealyticum.

5.14.1.2 Reconstituye un frasco UMMlyo con el caldo UMMt y le

agrega 100 µL del medio que contiene la cepa, lo

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incuba a 37°C ±1°C por 6 horas y lo inocula a un

nuevo caldo UMMt con 200 µL y posteriormente inocula
una galería de acuerdo como está descrto
anteriormente.

5.14.1.3 Realiza su lectura a las 48 horas de incubación,

deberá observar el siguiente resultado; 1(+), 2(+),
3(-/+), 4(+), 5(+), 6(-), 7(-), 8(-), 9(-), 10(-),
11(-), 12(-), 13(-), 14(-), 15(-), 16(-), 17(+),
18(+), 19(+) y 20(-).

5.14.1.4 Anota los resultados en el Registro de Control de

Calidad de Reactivos código FOR-MIC-010, de acuerdo a
su instructivo de llenado código INS-MIC-010.

5.15 PROCESO ANALITICO

5.15.1 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.15.1.1 Rotula la tira de plástico y los medios UTM, UMMlyo y

SMh con el número consecutivo correspondiente.

5.15.1.2 Inocula el medio UMMt con 300 µL de la muestra o del

caldo del medio de transporte.

5.15.1.3 Transfiere el medio UMMt inoculado al frasco UMMlyo

(después de su utilización se puede almacenar entre
2-8°C para su posible verificación).

5.15.1.4 Inocula cada pozo de la galería con 100 µL del medio

UMMlyo.

5.15.1.5 Inocula los pozos 6-7 (E y Mh ) con 50 µL del

suplemento SMh.

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5.15.1.6 Agrega dos gotas de aceite mineral a cada pozo

inoculado (todos) y los recubre con la película
adhesiva.

5.15.1.7 Incuba la galería a 370C ± 1°C, durante 24 a 48 horas

(para orina y semen puede continuar la incubación
hasta por 72 horas si fuera necesario).

5.15.1.8 Al término de la incubación saca la galería de la

incubadora y observa cada cúpula para detectar su
cambio de color. Interpreta los resultados de acuerdo
a lo descrito en el inciso 5.15 de este
procedimiento.

5.15.1.9 Registra los resultados del cultivo en la lista de

trabajo correspondiente.

5.16 CALCULOS
5.16.1 N/A.

5.17 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Y LIMITES DE REFERENCIA

5.17.1 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.17.1.1 Un color rojo se considera positivo (así también un

color naranja), un color amarillo se interpreta como
negativo.

5.17.1.2 Interpreta en la sección de identificación del

microorganismo; pozos 4, 5 y 6 (L, SXT y E), la
presencia de U. urealyticum por los colores rojo,
rojo y amarillo y la presencia de M. hominis por los
colores amarillo, rojo y rojo.

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5.17.1.3 Interpreta en la sección de conteo de colonias (pozos

1, 2, 3 y 7), interpreta el resultado como sigue; que
el color rojo observado en el pozo 1 corresponde a
U.u 103, en los pozos 1 y 2 corresponde a U.u 104, en
los pozos 1,2 y 3 corresponde a U.u 105 y en el pozo
7 corresponde a M.h. 104.

5.17.1.4 Interpreta en la sección de antibiograma, que el

color amarillo en los dos pocillos indica
susceptibilidad y el rojo en los dos pocillos;
resistencia, en caso de un pocillo rojo y el otro
amarillo, interpreta como intermedio (un caso
particular es la pristinamicina que solo se prueba
una concentración).

5.17.1.5 Interpreta contaminación bacteriana en caso de

observar turbio el contenido del pozo.

5.17.1.6 En caso de que todos los pozos de la galería se

encuentren rojos diluye la muestra inoculando un
nuevo medio UMMt con 300 µL del medio UMMlyo original
conservado en refrigeración y procede a realizar la
nuevamente la prueba como está descrito con
anterioridad.

5.17.1.7 Una muestra con una carga baja de micoplasmas puede

provocar un cambio de color aleatorio en los
diferentes pozos de la galería.

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5.18 LIMITES Y RESPONSABILIDAD DE LIBERACION DE RESULTADOS

5.18.1 ANALISTA A, B o C DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.18.1.1 Libera todos los resultados.

5.19 INFORME DE RESULTADOS

5.19.1 ANALISTA A o B DE DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

5.19.1.1 Captura, verifica y libera el resultado en el Sistema

Proa2mil según el Manual de Usuario de Proa2mil
código MAN-INF-001.

5.20 BIBLIOGRAFIA

5.20.1 MYCOFAST EVOLUTION 3. Inserto del reactivo.

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