2do Informe de Microbiología - Concentración de Microorganismos2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
“CONCENTRACIÓN DE MICROORGANISMOS”
SEGUNDO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA SANITARIA II –

SA323
DOMINGUEZ VILLAFANA CHRISTIAN JORGE - 20160314H
DOCENTE: ING. TELLO CEBREROS JORGE
Lima, Perú
2018
MICROBIOLOGÍA SANITARIA II UNI-FIA
LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos
INDICE
I. RESUMEN……………………………………………………………………….2
II. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………….3
III. OBJETIVOS………………………………………………………...……..…….3
IV. MARCO TEÓRICO………………………………………………………….….4
V. RESULTADOS…………………………………………………………..……...8
VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS……………………………………………...9
VII. CONCLUSIONES………………………………………………………..…......9
VIII. RECOMENDACIONES…………………………………………………..…...10
IX. CUESTIONARIO………………………………………………….…………...11
X. FUENTES DE INFORMACIÓN……………………………………….……..19
XI. ANEXOS……………………………………………………..…………………20
 EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y MUESTRAS

 PROCEDIMIENTO
 CÁLCULOS
XII. APENDICE…………………………………………………………………..…30
 DIAGRAMA DE FLUJO
1
I. RESUMEN
En la práctica del laboratorio N°2 con ayuda del microscopio compuesto se logró
determinar la concentración de microorganimos. Para tal fin, se emplearon el
método de la celda Sedgewick-Rafter y el método de la franja de una muestra de
algas obtenida del estanque FAUA de la Universidad Nacional de Ingeniería.
Método de la celda Sedgewick-Rafter
Es el método más preciso y consiste en verter 1ml de la muestra en la celda S-R,

luego se procede a contabilizar el número de microoranismos en cada campo y
a partir de eso determinar la concentración (algas/ml).
Método de la franja
Consiste en verter una gota de la muestra en el portaobjetos, contabilizar el

número de microoranismos en cada campo y a partir de eso determinar la
concentración (algas/ml).
2
II. INTRODUCCIÓN
Han sido muchos los casos de floraciones masivas de algas en el mundo, y es

evidente es que el número de floraciones se eleva año con año. El crecimiento
excesivo de cianobacterias (algas verde-azules) y algas verdes en los
reservorios de agua pueden puede traer consecuencias negativas para la
calidad del agua. El agua se vuelve verde, los filtros de arena se tapan, y
algunas algas pueden producir geosminas y MIB (Metilisoborneol) que dan un
sabor terroso al agua, lo que puede resultar en quejas de clientes. Además, las
cianobacterias pueden llegar a producir toxinas que causan enfermedades
graves en los seres humanos que consuman el agua. Es por eso que las
floraciones de algas se evitan, y se desea el control.
Conocer la concentración de algas presentes en el agua nos da una idea de

cuan contaminada está, es un parámetro de polución.
La metodología empleada para determinar la concentración de estos

microorganimos que utilizan la gran mayoría de los laboratorios; consiste en un
análisis cualitativo y cuantitativo; en este último se emplea el método de celda de
Sedgwick-Rafter y el método de la franja.
III. OBJETIVOS
Determinar la concentración de microorganismos mediante el método de
la Celda Sedgwick-Rafter y el método de la franja.
3
IV. MARCO TEÓRICO
Algas
En general las algas se definen similares a las plantas, organismos fotosintéticos
y acuáticos, pero que a diferencia de las plantas no tiene verdadera raíz, tallo,
hojas o tejido vascular y tiene forma de reproducción simple.
Se encuentran en todo suministro de agua expuesto a la luz del sol, aunque

algunas algas se encuentran en el suelo y en superficies expuestas al aire.
Conocer el número y clase de algas presentes en estanques de aguas negras es
de gran utilidad para ver el avance del proceso de oxidación.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la

turbiedad.
¿Por qué son importantes las algas?
Las algas abarcan un grupo muy diverso de organismos, que al igual que las
plantas, habitan en diversos ambientes. El término alga se refiere generalmente
a una célula fotótrofa que contiene clorofila, tiene estructuras reproductivas
simples, y no posee raíz, tallos ni hojas. Las algas liberan oxígeno por medio de
la fotosíntesis. Se estima que cerca del 70-80% que respiramos proviene del
oxígeno liberado por ellas. Además de producir oxígeno, las algas son fuente de
alimento para peces y animales acuáticos, formando el primer eslabón en la
cadena alimenticia. Es por eso que en todos los cuerpos de agua hay un nivel
básico de algas que son parte del balance ecológico. No obstante, el agua
estancada causa problemas en la calidad del agua. Cuando el agua está
estática, hay altas temperaturas y alta concentración de nitrato y fósforo, pueden
surgir floraciones de algas.
4
Problemas causados por las algas
El crecimiento excesivo de cianobacterias (algas verde azules) y algas verdes en

un reservorio de agua traen consecuencias negativas para la calidad del agua. Las
toxinas de las cianobacterias no solo han causado muchas veces mortandad de
peces y animales domésticos, sino también son responsables de causar
enfermedades y dolencias en los seres humanos, inclusive se han relacionado
con casos de cáncer de hígado. Cuando las aguas superficiales son usadas con
fines de consumo humano, la presencia de cianobacterias representa un riesgo
para el abastecimiento de agua potable ya que las toxinas y los metabolitos
olorosos tienen la capacidad de disolverse en el agua y escapar a los métodos
convencionales de tratamiento de agua. Bajo esta situación el agua adquiere un
mal olor y sabor en el agua, y en el peor de los casos, ponen en riesgo la salud
de los consumidores.
¿Por qué es importante controlar el crecimiento de

algas?
Una combinación de temperaturas cálidas, agua estancada y alta concentración

de nutrientes puede resultar en el crecimiento excesivo de algas. El desarrollo de
las conocidas floraciones de algas genera diversos efectos adversos tales como
malos olores, escasez de oxígeno en el agua, bloque de luz solar, toxicidad, etc.,
condiciones que favorecen la mortandad de peces y el desbalance general del
ecosistema.
Conteo de algas
El objetivo de contar algas no es solamente establecer la población (densidad)
de células por mililitro que hay en un recipiente, sino también determinar
numéricamente el grado de división celular en un determinado tiempo. Los
resultados permiten estimar en cierto modo la situación de un cultivo y
relacionarlo con la curva de crecimiento de esa población alga.
5
La metodología empleada es la que utilizan la gran mayoría de los laboratorios;

consiste en análisis cualitativo y cuantitativo; en este último se emplea la cámara
de Sedgwick-Rafter que es usada para fines de investigación.
Método de sedgwick-rafter
La celda Sedgwick-Rafter es el dispositivo más comúnmente usado para el
recuento de plancton en donde los organismos tienen que distribuirse
uniformemente en toda la superficie de la celda.
Se divide la celda en campos ya sea solo usando el microscopio mediante

tangentes o con el micrómetro de Whipple.
La concentración se calculará multiplicando la cantidad de microorganismos

promedio por campo y la cantidad total de campos en la celda, dividida entre el
volumen de muestra analizada que es 1 ml.
El tamaño es de 50 mm x 20 mm x 1 mm con un volumen de 1ml.
Método de la Franja
Similar al anterior método, se analiza una gota de muestra sobre un portaobjetos
y sobre la gota se coloca el cubreobjetos, sin dejar la presencia de burbujas,
tomamos una división (campo) y contabilizamos la cantidad de microorganismos,
posteriormente se toma otra división igual y tangente a la anterior, hasta cubrir
toda la celda.
Si la muestra contiene mucha cantidad de organismos se procede a diluirla.
Podemos ayudarnos con la retícula del ocular de Whipple para hacer el

procedimiento más preciso.
Concentración de algas
Es la cantidad de células de determinada especie de alga en un mililitro de
muestra. Es importante para la determinación para poder saber el tratamiento
adecuado a las aguas que son puestas a tratamiento.
6
Micrómetro de whipple
Lo utilizamos para hacer el procedimiento más preciso, el cual es un disco de
vidrio que contiene un retículo grabado que divide el campo en cien partes o
cuadraditos iguales.
Para calibrar el microscopio se coloca el micrómetro de objetivo sobre la platina
del microscopio y la cuadricula de Whipple en el ocular, se hace la superposición
de ambos y de esta manera se puede medir el lado de uno de los cuadritos.
7
V. RESULTADOS
Tabla 1: Concentración de m.o. por el método de la celda Sedgewick-Rafter
OBJETIVO 10X OBJETIVO 43
N° de campos a lo ancho de la celda 15 32
N° de campos a lo largo de la Celda 37 32
N° de campos en el total de la Celda 562 2560
Suma total de microorganismos 173 70

𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠
Promedio de M.O. por campo (𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜) 11.53 2.187
Concentración de M.O./ml 𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠 𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠

6485.625( 𝑚𝑙
) 5598.72( 𝑚𝑙
)
Tabla 2: Concentración de m.o. por el método de la franja
OBJETIVO 10X OBJETIVO 43
N° de campos a lo ancho de la celda 16 32
N° de campos a lo largo de la Celda 16 32
N° de campos en el total de la Celda 256 1024
Suma total de microorganismos 32 12

𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠
Promedio de M.O. por campo ( ) 2 0.375
𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜
algas algas
Concentración de M.O./ml 6400( ) 4800( )
ml ml
Tabla 3: Porcentaje de error
Método de la celda
Microscopio N°14 Método de la franja
Sedgewick-Rafter
Porcentaje de error 13.6% 25%
8
VI. DISCUCIÓN DE RESULTADOS
MÉTODO DE LA CELDA SEDGEWICK-RAFTER

 Se puede precisar que con el objetivo de 10x (6485.625 m.o/ml) se obtuvo
una mayor concentración de microorganismos que con el objetivo de 43x
(5598.72 m.o/ml).
 Contrastando promedios de concentración, con este método (6042.1725
m.o/ml) se obtiene una mayor concentración en comparación al método de
la franja ( 5600 m.o/ml).
 El porcentaje de error obtenido (13.6%) puede ser debido a que muchas
pequeñas algas no fueron vistas al utilizar bajo aumento.
MÉTODO DE LA FRANJA
 Se puede precisar que con el objetivo de 10x (6400 m.o./ml) se obtuvo una
mayor concentración de microorganismos que con el objetivo de 43x (4800
m.o/ml).
 El porcentaje de error obtenido (25%) puede ser debido a que muchas
pequeñas algas no fueron vistas al utilizar bajo aumento.
VII. CONCLUSIONES
 El método más eficaz para realizar el recuento de microorganismos es el de la
celda S-R, debido a su fácil manipulación y también a que nos proporciona
datos razonables. Esto se refleja en los errores hallados, el error con la celda
S-R es de 13.6 % mucho menor al de la franja que es de 25%.
 El volumen de la gota calculada por los alumnos del laboratorio varía entre
0.06 y 0,12ml aproximadamente.
 El número de campos calculados por los estudiantes a lo ancho varía entre
12-16 con el objetivo de 10x, mientras que con el objetivo de 43x varía entre
32-46.
 Para aplicar el tratamiento conveniente y hacer uso adecuado de cada
abastecimiento de agua, es necesario obtener la mayor cantidad de
información cuantitativa.
9
VIII. RECOMENDACIONES
Se recomienda evitar la formación de burbujas, ya que volumen

disminuirá por el aire.
Realizar los conteos rápidamente con el fin de evitar el calentamiento de
la lámpara, ya que si esto sucede la muestra se puede evaporar.
Agitar la muestra antes de antes de extraerla para tener una
concentración más uniforme y extraerla a una profundidad media del
envase.
10
IV. CUESTIONARIO
1) Señale las concentraciones de algas que crean problemas en los

sistemas de aguas para abastecimiento.
a. Captación
b. Proceso coagulación-floculación
c. Filtración
d. Reservorios
El número límite de algas por mílimetro de agua varía mucho de acuerdo con la
especie de alga considerada. Así ciertos organismos como por ejemplo el
Dinobryon que provoca un mal olor muy pronunciado, se debe combatir cuando
está presente en números relativamente bajos, inferiores a 1000 por ml;
mientras que otros como el tetraedron, etc., a veces pueden estar presentes en
número superiores a 3000 por ml. sin causar ningún problema en el tratamiento
o perjudicar directamente la calidad del agua.
De un modo general, es un criterio razonable procurar controlar cualquier

desarrollo superior a 100-200 organismos por mililitro de agua cuando se trata de
organismos de tamaño relativamente grande (de alrededor de 50 micras de
diámetro o de largo) y de 2000-3000 organismos por mililitro, en el caso de
organismos de dimensiones pequeñas (de más o menos 10 micras de diámetro
o de largo)
11
2) ¿Cuál es la concentración de algas en la muestra dada?

a. Método de la celda Sedgewick-Rafter
b. Método de la franja
Concentración de microorganismos
Método de la celda
Método de la franja
Microscopio Sedgewick-Rafter
10x 43x 10x 43x
2 9126 - 11921 -
3 9636 - - -
4 5400 - 11266 -
5 24128 145530 79200 628452
6 6650 - 9000 -
7 26950 - 30000 -
8 3960 - 8961 -
9 17920 - 19688 -
11 8025 1440 18189.372 44832.117
12 10430.14 - 20009.6 -
13 35442 59096 50960 92730
14 6485.625 5598.72 6400 4800
18 5790 - 5544 -
22 3500 - 21600 -
26 9867 - 16133 -
30 9990 30720 35123 34560
6964 - 13014 -
33
9568 - 1872 -
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3) Explique los problemas que ocasionan los m.o en los sistemas de

agua.
a. Redes de distribución
b. Reservorios
c. Corrosión
d. Instalación de pozos
Redes de distribución
Causan fenómenos de turbidez, gusto y olor o adheridos a las paredes internas

de los tubos y canales conductores de agua, formando costras ya sean
gelatinosas, fibrosas o de mayor consistencia que tienden a reducir el diámetro o
espacio útil de la tubería, contribuyendo así a aumentar las pérdidas de carga y
otros inconvenientes. Las bacterias filamentosas, principalmente del genere
crenothrix, constituyen el grupo más importante responsable de la obstrucción de
las tuberías. Esas bacterias crecen en ambientes sin luz, como es el caso de las
tuberías en general y particularmente en los sistemas de refrigeración de
motores térmicos, en los que pueden causar serios perjuicios. Solamente en
forma excepcional se las puede encontrar en agua que provienen de fuentes
superficiales. Esos organismos cuando oxidan el fierro que se encuentra en
solución en el agua, provoca la precipitación de hidróxido férrico que es
insoluble, iniciando asila formación de costras solidas o incrustaciones que a la
larga causan la obstrucción de la tubería. Esas incrustaciones y los propios
filamentos bacterianos son muy difíciles de remover. las bacterias de los genere
beggiatoa, sphaerotilus y otros grupos de microorganismos como los hongos
leotomitus pueden formar costras gelatinosas en tubos cerrados, sobre todo, en
presencia de aguas ricas en materia orgánica.
Reservorios
En los reservorios de cemento, sobre las paredes húmedas de los ladrillos, en

los canales, etc, a veces forman un revestimiento verde que puede ser
gelatinoso y escurridizp –el limo- o en forma de tufo con filamentos largos como
“cabellos verdes”
Esas formaciones no tienen gran significado cuando están en estado incipiente,

pero cuando alcanzan un desarrollo abundante pueden crear problemas. Los
tufos filamentosos que crecen en las paredes de los sedimentadores a veces se
13
desprenden y van a caer sobre la superficie de los lechos filtrantes

obstruyéndolos. Además, esas algas pueden elevar el contenido de materia
orgánica en el agua, contribuir a la producción de gusto y olor y favorecer el
desarrollo de otros tipos de organismos. Las algas cuyas células están envueltas
por sustancias gelatinosas, como las algas verdeazuladas, dan origen a la costra
de limo, que además de obstruir las canalizaciones y presentar otros
inconvenientes, protegen a las bacterias del agua contra la acción desinfectante
del cloro.
Corrosión
Hay varios géneros de algas que favorecen la corrosión de piezas y tubos de

concreto armado y ya se ha demostrado el papel de las algas del género
OSCILATORIA, en la corrosión de secciones de tubos de acero que fueron
expuestas a la luz. La corrosión causada por las algas puede ser tanto por la
acción directa de ellas como por la modificación química del medio. El ácido
carbónico, el silicio y el oxálico que producen las algas pueden intervenir en el
proceso de corrosión, así como también la producción de oxigeno que puede
oxidar el revestimiento del tubo de acero. Asimismo, se ha observado que las
columnas de concreto armado, en su parte sumergida, se vuelven friables debido
al desarrollo de costras de algas. El proceso de corros se interrumpe si se
eliminan esas costras.
Instalación de pozos
Los microorganismos, incluidas bacterias, virus, hongos y parásitos, pueden

contaminar el agua subterránea que abastece los pozos. El principal origen de
estos microorganismos es la materia fecal procedente de animales y seres
humanos. La forma más habitual de detectar contaminación fecal es el análisis
del agua de pozo en este punto de uso en busca de bacilos coliformes totales.
Cuando está disponible, puede efectuarse un examen para estos
microorganismos y/o Escherichia coli como análisis combinado con coliformes
totales y usado para el examen bacteriano anual. La ausencia de coliformes es
una buena evidencia pero no absoluta de la ausencia de contaminación fecal
sustancial. Es preciso reexaminar las muestras que contienen bacilos coli-formes
para determinar si son fecales; los especímenes que son positivos deben ser
examinados para la presencia de E. coli u otros patógenos.
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4) Señale los controles preventivos y correctivos que se deben realizar

para el control de los microorganimos.
a. Bacterias
b. Protozoarios
c. Algas
d. Virus
CONTROLES PREVENTIVOS
Organismos patógenos
Los procesos de naturaleza física y química que se llevan a cabo en curso de

agua y que son responsables del fenómeno de la autopurificación actúan
también sobre los organismos patógenos destruyéndolos en en gran proporción.
Esos procesos son principalmente:
Sedimentación
Antagonismo entre diferentes microorganismos
Luz
Temperatura
Oxidación
Variaciones de presión osmótica, etc.
Organismos heterótrofos
El control se realiza impidiendo que estos microorganismos se nutran de

materia orgánica(desechos orgánicos, en especial los desagües); por
ello, se debe fiscalizar contra el lanzamiento ”in natura” de los desagües
domésticos.
Reducción de la cantidad de O2 disuelto en el agua.
Cubrir o tapar los reservorios de distribución o domiciliares.
Para algas y otros organismos autótrofos
El control se realiza limitando la concentración de:

Anhidrido carbónico
Luz, construyendo reservorios de gran profundidad, con la finalidad de
disponer del agua del fondo, la cual se caracteriza por impedir el ingreso
de la energía radiante empleada en la fotosíntesis, haciendo uso de
compuertas.
15
CONTROLES CORRECTIVOS
Bacterias y virus
Uso de los siguientes bactericidas:
Cloro
Sulfato de cobre
Yodo
Ozono
Algas
El uso de alguicidas como el sulfato de cobre, el cloro o una combinación

de ambos. En este proceso se deben tomar en cuenta muchos aspectos.
Uno de ellos es la cantidad de alguicida que se debe emplear. Se debe
utilizar una dosis que no afecte al hombre ni a los peces. La dosis debe
calcularse según la especie predominante y su concentración. El sulfato
de cobre es uno de los alguicidas más usados. Debe emplearse en dosis
inferiores a una parte por millón.
Compuesto cuaternarios de amoniaco.
Rosinaminas, quinonas, compuestos de urea y zinc, permanganato de
potasio, etc.
Protozoarios
Sedimentación
Sulfato de cobre
Yodo
Rayos ultravioleta y el ozono.
16
5) Explique el problema que ocasionan las algas cianobacterias en

zonas de recreación.
La presencia masiva de cianobacterias en nuestras aguas conllevan otra serie

de problemas relacionados con el uso del recurso hídrico, como son los
problemas estéticos de la presencia masiva de cianobacterias que las hace
perjudiciales para las actividades recreativas y/o turísticas. Además, pueden
suponer problemas cuando se utiliza como agua de riego ya que obstruye las
válvulas y los aspersores. Para el mismo proceso de potabilización también
pueden suponer problemas graves ya que obstruyen y colmatan los filtros y
complican enormemente el proceso de potabilización. En muchas ocasiones
además confieren olores y sabores desagradables al agua mediante la
producción de sustancias como la geosmina que aunque no sea tóxica inhabilita
el agua para su utilización.
Desde que en algunos países se estudia el problema se han atribuido multitud

de muertes de ganado y de animales domésticos, perros fundamentalmente, a la
presencia de cianobacterias tóxicas.
17
6) Explique el problema que ocasionan el crecimiento de plantas

acuáticas y algas en lagos ¿Cómo se evoluciona?.
Estos tipos de vegetación tiene el inconveniente principal de producir grandes

cantidades de materia orgánica, que por ultimo sedimenta en el fondo del lago
formando el lodo; material en descomposición que además de disminuir la
capacidad del lago, origina demanda de oxígeno y da como resultado
subproductos que causan olor, gusto y coloren las aguas de abastecimiento. En
esos sedimentos es frecuente la descomposición anaeróbica con
desprendimiento de burbujas de gases e intenso mal olor. La vegetación
sumergida, al realizar la fotosíntesis, produce oxígeno, el que se disuelve en el
agua, ayudando así a la auto purificación, aunque no siempre los inconvenientes
acarreados por la formación de la materia orgánica. La vegetación emergente,
aunque pueda hacer sombra sobre el agua, de tal manera que impida la
formación de algas y de otros tipos de vegetación sumergida, des prende el
oxigene que resulta de la reacción de la síntesis orgánica que realiza, fuera del
agua. Esto es particularmente perjudicial en lo que se refiere a la calidad del
agua, porque produce materia orgánica y no ayuda al re oxigenación del agua.
Además, hay otros inconvenientes como son: disminución de la circulación
normal de las aguas provocadas por la masa de vegetación que cauda un
estancamiento permanente del lago; los deterioros que pueden causar a las
combas y turbinas eléctricas y las frecuentes obstrucciones de las rejillas y otro
sistema de retención instalados por la protección de las mismas.
18
X. FUENTES DE INFORMACIÓN
Para la creación de este informe se tuvo como base la teoría encontrada en

los siguientes libros y sitios web:
Samuel Murgel Branco, 1969, “Hidrobiología aplicada a la Ingeniería

Sanitaria”,82 : 105, Sao Paulo, Brasil. Abril, 22, 2018
Lg Sonic, “Control de algas en lagos y reservorios”,
https://www.lgsonic.com/es/blogs-es/control-de-algas/, Abril. 23, 2018.
Juan CR, “Concentración de microorganismos”,
https://es.scribd.com/document/267647744/Laboratorio-N02-MICRO-2-
docx, Abril. 23, 2018.
A. Quesada, “Cianobacterias en aguas de consumo y de recreo: un
problema de todos”, http://ceh-
flumen64.cedex.es/Ecosistemas/Jornadas%20Cianos/A.Quesada.pdf,
Abril. 23, 2018.
19
XI. ANEXOS
EQUIPOS
Figura 1: Microscopio compuesto N° 14 y lámpara
MUESTRAS
Figura 2: Algas del estanque de FAUA
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INSTRUMENTOS
Figura 3: Celda Sedgewick Rafter
Figura 4: Portaobjetos Figura 5: Cubreortaobjetos
Figura 6: Probeta
Figura 7: Pipeta
Figura 8: Gotero Figura 9: Contador
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PROCEDIMIENTO
1. Determinación del número de campos a lo ancho de la celda Sedgewick-

Rafter. Objetivo 10x Objetivo 43x
Nº de campo Nº de microorganismos
1 ….
2 …
… ….
∑Total de campos ∑ total de microorganismos
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑁°𝑑𝑒 𝑚.𝑜

Promedio del N° de m.o/campo = 𝑥̅ = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠
2. Determinar el Nº de campos en toda la celda S-Rafter.
Nº de campo a lo ancho de la celda S-R-----------ancho: 20mm

Nº de campo a lo largo de la celda S-R------------largo:50mm
50
Nº de campo a lo largo de la celda S-R = Nº de campo a lo ancho de la celda S-R*
20
3. Determinación de la concentración de microorganismos
𝑁° 𝑑𝑒 𝑚.0 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑑𝑎 𝑙𝑎 𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 𝑆𝑅 𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠

Concentración de m.o ( 𝑚𝑙
) = 𝑥̅ ( 1𝑚𝑙
) ( 𝑚𝑙 )
22
1. Determinación del número de campos en cada lado del cubreobjetos.
Nº de campo Nº de microorganismos
1 ….
2 …
… ….
∑Total de campos ∑ total de microorganismos
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑁°𝑑𝑒 𝑚.𝑜

Promedio del N° de m.o/campo = 𝑥̅ = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠
2. Determinar el Nº de campos en todo el cubre objeto.
Nº de campos en todo el cubre objeto = (Nº de campos en cada lado del cubre objeto)2
3. Determinación del volumen de una gota

Nº de gotas-----------5ml
1 gota------------Volumen
4. Determinación de la concentración de microorganismos
𝑁° 𝑑𝑒 𝑚.0 𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑡𝑜𝑑𝑜 𝑒𝑙 𝑐𝑢𝑏𝑟𝑒 𝑜𝑏𝑗𝑒𝑡𝑜𝑠 𝑁° 𝑑𝑒 𝑔𝑜𝑡𝑎𝑠

Concentración de m.o ( 𝑚𝑙
) = 𝑥̅ ( 𝑔𝑜𝑡𝑎
) ( 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 )
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CÁLCULOS

OBJETIVO DE 10 X
N° de microorganismos
N° de campos
Objetivo10x
1 11
2 11
3 10
4 21
5 12
6 13
7 15
8 17
9 10
10 11
11 12
12 1
13 6
14 7
15 9
Total de N° de campos Total N° de microorganismos
15 173
a) Determinación del N° de campos y el N° microorganismos por campo.
Número de campos a lo ancho: 15

Número de microorganismos: 173
𝑁° 𝑀. 𝑂. 173
𝑥̅ = = = 11.53
𝑁° 𝐶𝑎𝑚𝑝𝑜𝑠 15
b) Determinación del N° de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.
- Número de campos en el ancho (20 mm) de la celda: 15

50
- Número de campos en el largo (50 mm) de la celda: 15 𝑥 = 37.5
20
- Número de campos totales: (N° campos ancho) x (N° campos largo) = 562.5
c) Determinación de la concentración de microorganismos.
- Número total de microorganismos:

N° m. o. = x̅ × N°Campos = 11.53 × 562.5 = 6485,625
- Concentración de m.o.:
N° m.o. 6485,625
Conc. = = = 6485,625m.o/ml
Volcelda 1
24
OBJETIVO DE 43 X
N° de campos
Objetivo 43x
1 1
2 2
3 1
4 2
5 2
6 3
7 1
8 3
9 2
10 2
11 5
12 2
13 2
14 4
15 2
16 1
17 2
18 1
19 3
20 4
21 3
22 1
23 2
24 2
25 1
26 4
27 3
28 2
29 2
30 3
31 1
32 1
32 70

𝑁° 𝑀. 𝑂. 70
𝑥̅ = = = 2.187
b) Determinación del N° de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.
- Número de campos en el ancho (20 mm) de la celda: 32

50
- Número de campos en el largo (50 mm) de la celda: 32 𝑥 = 80
20
- Número de campos totales: (N° campos ancho) x (N° campos largo) = 2560
25

N° m. o. = x̅ × N°Campos = 2.187 × 2560 = 5598.72
N° m.o. 5598.72
Conc. = = = 5598.72
Volcelda 1
26
DETERMINACION DEL VOLUMEN DE UNA GOTA
62 GOTAS < > 5mL

1 GOTA < > XmL  X = 0.08 mL
OBJETIVO DE 10 X
N° de campos
Objetivo10x
1 1
2 2
3 3
4 2
5 3
6 1
7 1
8 3
9 4
10 1
11 4
12 1
13 3
14 2
15 1
16 0
16 32

𝑁° 𝑀. 𝑂. 32
𝑥̅ = = =2
b) Determinación del N° de campos en todo el cubreobjetos.
- Número de campos en el ancho (22 mm) del cubreobjeto: 16

- Número de campos totales: (N° campos ancho)2 = 256

N° m. o. = x̅ × N°Campos = 2 × 256 = 512
N° m. o. 512
Conc. = = = 𝟔𝟒𝟎𝟎 𝐚𝐥𝐠𝐚𝐬/𝐦𝐥
Volgota 0.08
27
OBJETIVO DE 43 X
N° de campos
Objetivo 43x
1 0
2 0
3 0
4 0
5 1
6 1
7 0
8 0
9 0
10 0
11 0
12 1
13 2
14 0
15 0
16 1
17 0
18 1
19 1
20 0
21 0
22 0
23 0
24 2
25 1
26 0
27 1
28 0
29 0
30 0
31 0
32 0
32 12

𝑁° 𝑀. 𝑂. 12
𝑥̅ = = = 0.375
b) Determinación del N° de campos en todo el cubreobjetos.
- Número de campos a lo ancho (22 mm) del cubreobjeto: 32

- Número de campos totales: (N° campos a lo ancho)2 = 1024
28

N° m. o. = x̅ × N°Campos = 0.375 × 1024 = 384
N° m. o. 384
Conc. = = = 𝟒𝟖𝟎𝟎 𝐚𝐥𝐠𝐚𝐬/𝐦𝐥
Volgota 0.08
PORCENTAJE DE ERROR
Tomando como valor exacto al objetivo 10x:
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛(10𝑥)−𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛(43𝑥)
Porcentaje de error = 𝑥 100%
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛(10𝑥)

6485.625−5598.72
% de error = 6485.625
𝑥 100% = 13.6%
6400−4800
% de error = 6400
𝑥 100% = 25%
29
XII. APÉNDICE
DIAGRAMA DE FLUJO
 MÉTODO DE LA CELDA SEDGEWICK RAFTER
Extraer con la pipeta 1ml Verterlo en la celda

de la muestra de algas. Sedgewick Rafter y cubrirlo
con el portaobjetos.
Contar la cantidad de m.o. Determinar los campos a

por cada campo y anotar. lo ancho de la celda.
30
 MÉTODO DE LA FRANJA
Contar las gotas que hay en Verter una gota en el

5 ml de muestra y hallar el portaobjetos y poner sobre
volumen de una gota. ella el cubreobjetos.
Contar la cantidad de m.o. Determinar los campos a

por cada campo y anotar. lo ancho de la celda.
31

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

SEGUNDO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA SANITARIA II –

DOMINGUEZ VILLAFANA CHRISTIAN JORGE - 20160314H

DOCENTE: ING. TELLO CEBREROS JORGE

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

IV. MARCO TEÓRICO………………………………………………………….….4

VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS……………………………………………...9

 EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y MUESTRAS

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

Método de la celda Sedgewick-Rafter

Es el método más preciso y consiste en verter 1ml de la muestra en la celda S-R,

Consiste en verter una gota de la muestra en el portaobjetos, contabilizar el

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

Han sido muchos los casos de floraciones masivas de algas en el mundo, y es

Conocer la concentración de algas presentes en el agua nos da una idea de

La metodología empleada para determinar la concentración de estos

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

IV. MARCO TEÓRICO

Se encuentran en todo suministro de agua expuesto a la luz del sol, aunque

Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la

¿Por qué son importantes las algas?

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

Problemas causados por las algas

El crecimiento excesivo de cianobacterias (algas verde azules) y algas verdes en

¿Por qué es importante controlar el crecimiento de

Una combinación de temperaturas cálidas, agua estancada y alta concentración

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

La metodología empleada es la que utilizan la gran mayoría de los laboratorios;

Se divide la celda en campos ya sea solo usando el microscopio mediante

La concentración se calculará multiplicando la cantidad de microorganismos

El tamaño es de 50 mm x 20 mm x 1 mm con un volumen de 1ml.

Si la muestra contiene mucha cantidad de organismos se procede a diluirla.

Podemos ayudarnos con la retícula del ocular de Whipple para hacer el

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

Tabla 1: Concentración de m.o. por el método de la celda Sedgewick-Rafter

OBJETIVO 10X OBJETIVO 43

N° de campos a lo ancho de la celda 15 32

N° de campos a lo largo de la Celda 37 32

N° de campos en el total de la Celda 562 2560

Suma total de microorganismos 173 70

Concentración de M.O./ml 𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠 𝑎𝑙𝑔𝑎𝑠

Tabla 2: Concentración de m.o. por el método de la franja

OBJETIVO 10X OBJETIVO 43

N° de campos a lo ancho de la celda 16 32

N° de campos a lo largo de la Celda 16 32

N° de campos en el total de la Celda 256 1024

Suma total de microorganismos 32 12

Tabla 3: Porcentaje de error

Porcentaje de error 13.6% 25%

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

VI. DISCUCIÓN DE RESULTADOS

MÉTODO DE LA CELDA SEDGEWICK-RAFTER

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

Se recomienda evitar la formación de burbujas, ya que volumen

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

1) Señale las concentraciones de algas que crean problemas en los

De un modo general, es un criterio razonable procurar controlar cualquier

LABORATORIO 2: Concentración de microorganismos

2) ¿Cuál es la concentración de algas en la muestra dada?

10x 43x 10x 43x