1) Ce este echivalența genomică, la ce specii a fost demonstrată experimental și cu ce tipuri de

nuclei?

Datorita faptului ca toate celulele unui organism provin din ovulul fecundat sau zigot, ele au
aceeași informație genetica cu a zigotului, adică sunt echivalente dpdv genetic. Celulele prezinta
fenotipuri diferite unele de altele nu pentru ca au gene diferite, ci pentru ca exprima gene diferite.

1975 Gurdon prin clonarea somatica numita si transfer nuclear somatic, realizat pe Xenopus
laevis de la care a recoltat ovocite aflate in metafaza meiozei II. Cu un fascicul de UV a distrus
nucleul ovocitar pentru a realiza ovocite enucleate. Intai a introdus in acestea nuclei somatici
endodermali din intestin apoi un nucleu de celula diferentiata adulta, de keratinocita.

1996 Ian Wilmut a recoltat ovocite de la o rasa de oaie cu fata neagra, aceste ovocite au fost
enucleate cu o micro pipeta. In paralel s-au recoltat celule ale glandelor mamare de la o rasa de oaia
alba. El a folosit nucleii acestor celule in stadii G0 si G1. Numele speciei este Ovis aries.

2) Enumerați anomalii asociate clonării.

In ciuda entuziasmului succesului clonării a oii Dolly, Ian Welmut si echipa acestuia au
temperat acest entuziasm, deoarece in urma aspectului de oaie tânără, Dolly avea la naștere 7 ani,
deoarece nucleul somatic provenea de la o oaie de 6 ani. Astfel, experimentele de clonare au scos in
evidenta o serie de anomalii si aspecte particulare:

1. eficienta de clonare este foarte scazuta, in jur de 10% si 0% cu nuclei de celule

terminal diferentiate de tipul neuroni sau limfocite. O eficienta mai mare a clonarii a
fost observata la speciile de ferma, unde este cunoscuta mai bine embriologia si
fiziologia.
2. De altfel, o aplicatie benefica a clonarii se gaseste in ferma, unde sunt perpetuate
rasele cu propietati superioare de lapte, de carne etc;
3. O anomalie o reprezinta ca majoritatea embrionilor clonati mor la un scurt timp
dupa implantarea in uter. Cei care se dezvolta pana la termen prezinta anomalii
comune, indiferent de nucleu somatic donor. Astfel de anomalii sunt: placenta
marita, obezitate, tumori cerebrale, pulmonare, hepatice si renale.Toate aceste
anomalii nu se transmit descendentiilor, ceea ce sugereaza ca aceste modificari sunt
epigenetice(metilarea ADN-ului, acetilarea histonelor). Oaie Dolly a avut 6 miei
sanatosi;
4. Embrionii clonati nu activeaza genele embrionare cheie in stadiul de blastocist;
5. Embrionii clonati activeaza precoce genele specifice nucleului somatic donor;
6. Embrionii clonati prezinta un model aberant al metilarii ADN-ului;

3) Dați un examplu de excepție de la regula echivalenței genomice.

Diminuarile cromozomiale reprezinta exceptii de la regula echivalentei genomice, iar

aceaste au fost identificate la nevertebrate. De exemplu, la Ascaris se elimina in cursul diviziunii
embrionare 25% din ADN. Acest ADN eliminat este bogat in secvente repetitive si in
heterocromatina. S-au identificat 2 gene eliminate din nucleii celulelor somatice. Prima gena, fert 1,
este activata dupa fertilizare si formeaza o familie de transcripti primari care raman in celulele
respective si dupa eliminarea genei. A doua gena este gena S19, care codifica pentru o proteina
ribozomala, in acest caz, din celulele somaice, se elimina o singura alela. La o specie inrudita,
Parascaris, se elimina 85% din ADN. Aceasta eliminare nu are loc inainte de a treia diviziune de
segmentare și, în general, se elimina heterocromatina. In toate cazurile de diminuari cromozomiale,
cromatina se elimina din celulele somatice, genomul complet al zigotului rămânând într-o populatie
mica de celule, care va da nastere celulelor germinale primordiale.

4) Ce intelegeți prin reprogramare nucleară?

Reprogramarea nucleara reprezinta totalitatea modificarilor in activitatea genelor,

modificari induse experimental prin transferul unui nucleu intr-un mediu citoplasmatic nou. In cursul
reprogramarii nucleare, genele inactivate in cursul diferentierii celulare sunt reactivate. Aceasta a
fost demonstrata prin transplantarea unui nucleu somatic intr-un ovocit enucleat, nucleul somatic
modificandu-si modelul exprimarii genetice initale, comportandu-se ca un nucleu ovocitar,
demonstrandu-se ca nucleul este controlat de mediul citoplasmatic in care este plasat.

5) Care este diferența dintre o celulă specificată și una determinată?

Diferenta dintre o celula specificata si una determinata o reprezinta faptul ca o celula

specificata poate avea destinul modificat de celulele vecine, in schimb celulele diferentiate se pot
diferentia autonom si cand sunt plasate in alt embrion sau in alta regiune embrionara.

6) Cum se menține starea determinată pe parcursul diviziunilor celulare?

Memoria celulara pe parcursul diviziunilor mitotice se mentine prin doua mecanisme:

memoria citoplasmatica si memoria nucleara.

1. Memoria citoplasmatica. In acest caz, se considera ca in prima celula determinata

este activata o gena care codifica pentru o proteina A. Aceasta proteina are
capacitatea de a fi transportata in nucleu, undese poate lega de regiunea promotor
a propriei gene, realizand o auto-reglare la nivel transcriptional, se poate lega si de
alte gene, pe care fie le blocheaza (gena b), fie le activeaza (gena c). Acest model de
autoactivari, activari si represii este caracteristic unui tip celular. Dupa diviziunea
celulei, in citoplasma celor doua celule fiice exista suficienta proteina A, care prin
translocarea in nucleu sa reia modelul exprimarii genice din celula parentala. Acest
mecanism mai poarta si numele de feed-back pozitiv.
2. Memoria nucleara. Se bazeaza pe un anumit model de gene active si inactive, ea
fiind dependenta de modificari intrinseci ale cromatinei, de tipul inactivarii unui
cromozom X sau metilarii ADN-ului. Memoria nucleara face posibil ca doua gene
identice de tipul alelelor sa fie exprimate diferit chiar daca sunt expuse aceluiasi
mediu citoplasmatic. (gene activate = acetilarea histonelor si metilarea ADN-ului)
7) Considerăm următorul experiment: s-a prelevat dintr-un embrionde Danio rerioun grup de
celule,care a fost transplantat in regiunea posterioara a altui embrion. La sfârșitul
embriogenezei s-a constatat cădin celulele transplantate s-a format un ochi la nivelul
cozii.Cum erau celulele transplantate în momentul prelevării?

Celulele transplantate erau deja determinate. Calea lor de dezvoltare era deja fixata prin
selectarea genelor ce urmau sa fie exprimate. Celulele vecine celor transplantate nu au afectat
dezvoltarea acestora deoarece celulele determinate si populațiile celulare derivate din acestea se
diferențiază autonom.

8) 8. Ce este transdiferențierea? Exemple. Prin ce se deosebește de dediferențiere?

Transdiferentierea a fost observata in tesuturile regenerate, unde un tip celular poate fi

convertit in alt tip celular inrudit. De exemplu: regenerarea cristalinului la triton se realizeaza prin
recrutarea celulelor din regiunea dorsala a epiteliului pigmentat al irisului. Transdiferentierea poate
fi demonstrata in cultura: celulele cromafine (gasite in medula-suprarenala) prezinta in cultura un
fenotip caracteristic, ele fiind prismatice si contin in citoplasma granule cu adrenalina. Daca in
mediul de cultura se adauga factori de crestere nervos, celulele se transdiferentiaza in neuroni
simpatici, care prezinta fenotip diferit si, in plus, contin noradrenalina. Transdiferentierea are loc
intre celule inrudite embriologic, astfel ca la triton, celulele cristaliniene si retiniene provin din
ectoderm, in timp ce celulele cromafine si neuronii simpatici provin din celulele crestelor neurale.
Spre deosebire de transdiferentiere, dediferentiarea este procesul prin care un tip celular se
transforma in alt tip celular de alta origine embrionara. Noile celule isi pierd propietatile structurale
si functionale ale celulelor diferentiate de la care s-a pornit.

9) Ce tip de structură poate avea un motiv zinc-finger și la ce tip de proteine se întâlnește?

In cazul clasei Cys2His2, Zincul este asociat cu 2 cisteine (dintr-un α-helix) si 2 histidine
(dintr-o β-pliata). Acest tip de structura se intalneste la TF III A (care are 9 motive zinc-finger),
Kruppel (care contine 5 motive zinc-finger) si Hunchback (care contine un domeniu cu 4 motive zinc-
finger si un domeniu cu 2 motive zinc-finger).
In cazul clasei Cys4, Zincul este asociat cu 4 cisteine. Acest tip de structura se intalneste la
receptorii nucleari pentru hormoni steroizi si tiroidieni.

10) Precizați mecanismul de activare a genelor de către receptorii nucleari.

Modelul de activare al receptorilor nucleari (vom exemplifica cu heterodimerul RAR-RXR):

- In absenta ligandului, heterodimerul RARE-RXR nu poate recunoaste secventele RARE din
ADN, deoarece monomerul RAR e asociat cu un corepresor
- In cazul in care ligandul se leaga de monomerul RXR, heterodimerul din nou nu recunoaste
secventele RARE. In cazul in care ligandul ajuns in nucleu se leaga de monomerul RAR are loc
o modificare de conformatie care determina, pe deoparte eliberarea corepresorului, iar pe
de alta parte legarea unui coactivator care regleza complexul transcriptional bazal inintiind
transcrierea genei respective.
 - Daca in nucleu exista o cantitate mare de ligand, acesta se leaga dupa legarea de
monomerul RAR si de monomerul RXR, determinand recrutatea mai multor coactivatori,
care pot intensifica transcrierea genei respective.

11) Precizați structura motivelor leucin zipper și HLH

Motivul Leucin-zipper are in forma lui monomerica doura regiuni: o regiune carboxi
terminala de dimerizare si o regiune amino terminala de legare de ADN.
Regiunea carboxi-terminala. Secventa primara a acestei regiuni este formata dintr-o
succesiune de hectade, adica 7 aminoacizi (a, b, c, d, e, f, g). Aminoacizii din pozitile a si d sunt
hidrofobi.
Motivul HLH este format din doua alfa helixuri amfipatice unite printr-o bucla flexibila si
variabila ca lungime.

12) Care este diferența dintre homeodomeniu si motivul HTH?

Motivul HTH de aproximativ 20 de aminoacizi a fost descoperit initial intr-o serie de prot
reglatorii de la PK. Cele doua alfa helixuri sunt unite printr-un element structural rigid, mic,
asemanator unei bucle, dar care se numeste turn.
Proteinele cu homeodomeniu contin in extremitatea carboxi-terminala a moleculei un motiv
similar HTH. Homeodomeniul, insa, are 3 alfa helixuri. Primul si al doilea alfa helix sunt antiparalele si
perpendiculare pe al treilea. Cel de-al treilea helix este de recunoastere. Primul alfa helix este
precedat de un brat flexibil amino-terminal, care se infasoara in jurul ADN-ului si contacteaza
secventele bogate in A-T din adancitura (fosa) minora de pe fata opusa a acidului nucleic.

13) Dati câte un exemplu de factori transcripționali ce conțin motive: zinc-finger, leucin-zipper,
HLH si homeodomeniu.

Zinc-finger: TFIIIA
Leuzin-zipper: AP1 - Activator Protein 1 si C/EBPBeta - CCAAT/Enhancer Binding Protein
HLH: MyoD, Myf5 si Miogenina
Homeodomeniu: Homeobox A1 (HOX A1).

14) Indicați factorii transcripționali care se legă sub forma dimerică și monomericăde ADN?

F.t. care se leaga sub forma monomerica sunt: cei din clasa C2H2 (TFIIIA, Kruppel si
Hunchback); receptorii Orphan ai clasei C4 si proteinele cu homeodomeniu (Bicoid, Antennapodia,
Hoxa4, Deformed)
F.t. care se leaga sub forma dimerica sunt: cei din C4 (heterodimerul RAR-RXR), clasa leucin-
zipper (LAP, AP1 si C/EBPβ), clasa HLH ((E12, E47), MyoD, Myf5 si miogenina) si proteinele HTH de la
PK.

15) Dacă în celule existăurmatoarele proteine: Id, MyoD, Myf5, Rb, AP1, ce fac ele,
proliferează sau se diferențiaza? Explicați de ce
 MyoD si Myf5 sunt fanctori transcriptionali miogeni.
In cursul formarii celulelor musculare se succed 2 eveniment: determinarea si diferentierea.
Proteina id inhiba diferentierea celulara, deci, in prezenta proteinelor date, va avea loc
proliferarea.
In prezenta factorilor de crestere => AP1 +RB active. AP1 si Rb mentin mioblastele in
diviziune.
 Transcrierea intensa a genei id. Proteina id impiedica
diferentierea prin heteromerizare cu MyoD si Myf5