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Identificación de Aminoácidos

Luis Hubert Acosta Vega1 Dumer Stiven Sacanamboy Papapmija1


1Universidad de la Amazonia, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química,
lh.acosta@udla.edu.co y d.sacanmboy@udla.edu.co
Resumen
Se identificaron cualitativamente distintos aminoácidos mediante distintos ensayos
y reacciones: Ensayo con Ninhidrina, Ensayo de Millon, Ensayo Xantoproteíco,
Reacción de Ehlrich, Reacción de Hopkins Cole y Reacción con Acetato de Plomo a
muestras de Ricostilla, proteína de huevo y proteína de trigo.
Palabras clave: Aminoácidos, Proteína de huevo, Proteína de trigo, Ricostilla.

Abstract
Different amino acids were identified qualitatively by different assays and reactions:
Ninhydrin Assay, Millon Assay, Xanthoproteic Assay, Ehlrich Reaction, Hopkins Cole
Reaction, and Lead Acetate Reaction to Ricostilla, egg protein and wheat protein
samples.
Keywords: Amino acids, Egg protein, Ricostilla, Wheat protein.

Introducción
Los aminoácidos constituyen el bloque de construcción de proteínas vitales para los
seres vivos [1]. Se consideran veinte aminoácidos según el código genético, cada
uno cumpliendo una determinada función. La identificación de aminoácidos
constituye una de las bases de la química de los alimentos, referente al contenido
presente y su intervención frente a posibles afecciones [2][11], así como sus
propiedades amortiguadoras en el control de cultivos de bacterias y reacciones
químicas [2] así como el funcionamiento de los mismos en las proteínas, que ejercen
múltiples funciones los seres vivos, entre las que se destaca su función estructural
y catalizadora de reacciones (enzimática) [3].
La identificación de los de los diferentes aminoácidos permite el control frente a
posibles afectaciones que se puedan presentar ya sea por exceso o falta de un
aminoácido en la conversión de proteínas presentes en cada ser vivos [12]. Por
tanto, el uso de diferentes técnicas y/o reacciones químicas permite la identificación
de aminoácidos presentes en los seres vivos y en los alimentos de los cuales
provienen, así como su función e importancia en la dieta [2][3] que se puede
relacionar con problemas como lo es el incompleto desarrollo de tejidos (músculos,
cabellos, uñas entre otros) e incapacidad de metabolizar y llevar a cabo reacciones
importantes [4].
Por lo cual, en este informe se presenta la identificación cualitativa de diferentes
aminoácidos, mediante diversas reacciones químicas específicas de las cadenas
laterales o grupos ‘R’ que presentan los distintos aminoácidos.

Resultados y discusión
Ensayo con Ninhidrina
Tabla 1. Reacción de Ninhidrina.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Coloración
Alanina X
purpura
Coloración
Ricostilla X
purpura clara
Precipitado
Huevo X
blanco
Trigo X Sin cambio

Figura 1 De izq. a der. Blanco, Alanina, Ricostilla, Huevo y Trigo.

La Ninhidrina posee la capacidad de descarboxila y desaminar a los aminoácidos


gracias a su poder oxidante, se formará Amoniaco (NH3) y Dióxido de Carbono (CO2)
para el aminoácido así como formando un grupo aldehído mientras que la Ninhidrina
reducida (Hidridantina) reaccionará con una molécula de Ninhidrina no reducida
junto al amoniaco producido en la oxidación para formar un complejo que presenta
una coloración violeta, con otros aminoácidos presentará otras coloraciones tales
como la Prolina que presenta una coloración amarilla [3].

Figura 2 Reacción de la Ninhidrina.

Entre los resultados obtenidos, el aminoácido Alanina brindó una respuesta positiva
al ensayo con Ninhidrina al igual que las proteínas presentes en el Ricostilla, sin
embargo, la muestra del Huevo brindó la formación de un precipitado blanco lo que
puede dar lugar a otra reacción que puede estar ocurriendo entre los grupos amino
como amoniaco y las moléculas de Ninhidrina (reducida y original), ya que el Huevo,
su proteína, presenta una variedad de aminoácidos distintos (entre los cuales están
presentes todos los esenciales) [5]. Por otra parte, el Trigo, la proteína de Trigo se
mantuvo inmutable ya que no hubo variación en el aspecto físico de la mezcla, lo
que indica que no hubo reacción aparente que mostrara cambio a nivel visual, esto
puede encontrar causa en el hecho que todas las proteínas presentes en el trigo son
de tipo estructural (Albuminas, Globulinas, Gliadinas y Gluteninas) [6] y por lo tanto
presenten otras condiciones que hayan impedido observar una variación al
reaccionar con Ninhidrina.
Tabla 2. Ensayo de Millon.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Coloración rojo
Tirosina X
ladrillo
Fenilalanina X Sin cambio
Amarillo opaco con
Ricostilla X solido en suspensión
rojo
Huevo X Rojo ladrillo
Trigo X Precipitado rojo-rosa

Figura 3 Reacción de Millon, de izq. a der. Blanco, Tirosina, Fenilalanina, Ricostilla, Huevo y Trigo.

En la reacción de Millon, los aminoácidos que presenten grupos fenólicos, como la


tirosina por ejemplo, dan una prueba positiva cuando se hace reaccionar con el
reactivo de Millon (Nitrato de Mercurio) con Ácido Nítrico (HNO3) produciendo una
coloración rojiza [3], de acuerdo a la reacción:

Figura 4 Reacción con el Reactivo de Millon.


Esta reacción es muy selectiva para la Tirosina e incluso es capaz de diferenciarla
de la Fenilalanina debido a que un requerimiento importante es el grupo fenol para
la formación del complejo [1].
Tabla 3. Ensayo Xantoproteíco.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Tirosina X Coloración Amarilla
Fenilalanina X Sin cambio
Coloración amarillo
Ricostilla X
pálido
Coloración Amarillo
Huevo X
pálido
Coloración Amarillo
Trigo X
pálido

Figura 5 Ensayo Xantoproteíco, de izq. a der. Blanco, Tirosina, Fenilalanina, Ricostilla, Huevo y Trigo.

En esta reacción ocurre una nitración en un anillo aromático produciendo una


coloración amarilla en solución, propia de estos compuestos, esta prueba brinda un
resultado positivo para aminoácidos derivados de anillos aromáticos, tales como la
Tirosina, Fenilalanina y Triptófano, que luego para cerciorarse del resultado, es
sometido a un medio básico aumentando la intensidad del color amarillo [7]. Sin
embargo, la prueba da positiva para aminoácidos como la Tirosina y el Triptofano
ya que su anillo se encuentra activado y por ende la nitración ocurrirá con mayor
facilidad mientras que para la Fenilalanina no posee su anillo activado y por lo tanto
no se someterá fácilmente a la nitración, como se muestra la siguiente reacción:
Figura 6 Reacción del Ensayo Xantoproteíco.

Tabla 4. Reacción de Ehlrich.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Coloración rosa
Tirosina X
suave
Coloración rosa muy
Ricostilla x
debil
Huevo X Sin cambio
Trigo X Sin cambio

Figura 7 Reacción de Ehlrich. De izq. a der. Blanco, Tirosina, Ricostilla, Huevo y Trigo.

En la Reacción de Ehlrich, aminoácidos que presenten en su cadena sustituyentes


fenólicos (Tirosina) o aminas aromáticas (Histidina) reaccionan con el ácido
diazobencenosulfónico para producir sales de diazonio, produciendo coloraciones
purpuras/rosas al alcalinizar el medio [8], tal como se muestra en la siguiente
reacción:

Figura 8 Reacción de Ehlrich.

Tabla 5. Reacción de Hopkins Cole.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Coloración ligeramente
Triptófano X
rosa
Coloración naranja-
Ricostilla X
amarillo
Huevo X Solución lechosa
Coloración rosa-
Trigo X
amarillo con anillo

Figura 9 Reacción de Hopkins Cole. De izq. a der. Blanco, Triptófano, Ricostilla, Huevo, Trigo.
La reacción de Hopkins Cole es específica para la determinación cualitativa de
Triptófano, ya que es el único aminoácido que posee un grupo indol. En esta reacción
el anillo indol del Triptófano reacciona con ácido glicoxílico en presencia de un ácido
fuerte, siendo usualmente ácido sulfúrico (H2SO4) [4] [9], como se muestra en la
siguiente reacción:

Figura 10 Reacción de Hopkins Cole

Tabla 6. Reacción del Acetato de plomo.

Resultado
Muestra Observación
Positivo Negativo
Blanco X Sin cambio
Precipitado oscuro con
Metionina X
solución lechosa
Cisteína X Coloración amarillo claro
Ricostilla X Coloración amarillo claro
Huevo X Sin cambio
Precipitado (poco negro)
Trigo X
con solución lechosa

Figura 11 Reacción del Acetato de Plomo. De izq. a der. Blanco, Metionina, Cisteína, Ricostilla, Huevo y Trigo.
En esta prueba, los aminoácidos azufrados procederán a hidrolizarse en medio
básico, produciendo el grupo sulfuro de Sodio (caso de la Cisteína) y posteriormente
el Plomo (Pb) proveniente del Acetato de Plomo (CH3COOPb) desplazará el catión
sodio produciendo finalmente Sulfuro de Plomo (PbS) que precipita de color gris
oscuro [8] [3]. Por lo tanto los aminoácidos como la Metionina y la Cisteína debieron
haber presentado un resultado positivo en la prueba, sin embargo mostró un
resultado negativo y puede ser debido a efectos experimentales, tales como no
hidrolizar completamente la el grupo tiol o tioeter de la Cisteína y de la Metionina
respectivamente para poder observar la formación del precipitado de color oscuro,
también pueda ser que se agregó poca cantidad de la muestra a analizar y los otros
reactivos se encuentren en exceso, a pesar de ello mostró una variación en la
coloración de la solución dentro del tubo de ensayo y puede indicar que la reacción
no culminó ya que se agotó uno de los reactivos, en este caso la fuente de Azufre
(S). De igual forma la reacción de ambos aminoácidos [10] se muestra a
continuación:

Figura 12 Reacción con Acetato de Plomo

Conclusión
Los aminoácidos, moléculas vitales para la producción de proteínas que son
macromoléculas de imprescindible importancia en los seres vivos, presentan diversas
reacciones químicas con distintas sustancias de manera específica debido a su
aspecto diferencial, su cadena lateral que además le brinda otras propiedades
fisicoquímicas así como características distintas cuando hacen parte de una
estructura mayor y a su vez, permitió la identificación cualitativa de varios
aminoácidos de acuerdo a las propiedades químicas de cada uno de ellos. Revisar.

Referencias

[1] K.-H. R. Jan Koolman, Bioquímica: texto y atlas, vol. 3°Edición, Madrid-
España: Editorial, PANAMERICANA, 2004.

[2] L. J. Peter William Atkins, Principios de Química: los caminos del


descubrimiento, Madrid-España: Editorial, PANAMERICANA, 2006, pp. 408-
410.

[3] J. M. Teijón, Fundamentos de bioquímica estructural, Madrid: Editorial Tebar


, 2006.

[4] T. M. Devlin, Bioquímica: libro de texto con aplicaciones clínicas, Madrid:


Reverté , 2004.

[5] A. Hernandes Gil, Tratado de nutricion / Nutrition Treatise: Composicion Y


Calidad Nutritiva De Los Alimentos / Composition and Nutritional Quality of
Foods, Colombia: Editorial Médica Panamericana, 2010.

[6] E. Osbore, «Proteínas de la harina de trigo: clasificación y propiedades


funcionales.,» Temas de ciencia y Tecnología, vol. 13, nº 38, pp. 27-32,
2009.

[7] P. Kumar, «Qualitative and Quantitative Tests for Amino Acids and Proteins,»
28 Octubre 2017. [En línea]. Available:
http://www.biologydiscussion.com/proteins/qualitative-and-quantitative-
tests-for-amino-acids-and-proteins/13065. [Último acceso: 26 Abril 2019].

[8] S. Quesada Mora, Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica,


Costa Rica: EUNED, 2008.

[9] P. M. Swamy, Laboratory Manual on Biotechnology, India: Rastogi


Publications, 2008.

[10] Farmacognosia - Carrera de Farmacia, «PROTEÍNAS, PÉPTIDOS Y


AMINOÁCIDOS.,» 2016. [En línea]. Available:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/farmacognosia/. [Último acceso: 26 Abril
2019].

[11] “ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA Identificación y


Cuantificación de aminoácidos esenciales en Vigna unguiculata ( frejol
castilla ) y Phaseolus vulgaris ( frejol guinda ) por Cromatografía Líquida de
Alta Performance ( HPLC ) Tesis para optar el Título Profesional de Químico
Farmacéutico Presentado por : Br . Flores Hilario Elsa Br . Montoya Navarro ,
Kelly Janys Asesor : Dr . Félix Veliz Luis Miguel Lima – Perú,” 2018.
[12] M. Hurtado, J. A. Cocho, S. Herrera, and M. Arévalo-herrera, “Colombia
Médica Original article Reference values of amino acids , acylcarnitines and
succinylacetone by tandem mass spectrometry for use in newborn screening
in southwest Colombia,” vol. 48, no. 5, pp. 112–118, 2017.