Introducción

En las últimas décadas la utilización de la Inmunohistoquímica ha sido progresivamente creciente y se ha consolidado

como tecnología esencial en el diagnóstico patológico de rutina. En general y muy especialmente en patología oncológica,
son cada vez más las patologías cuyo diagnóstico y clasificación requiere la Inmunohistoquímica. La incorporación de
nuevos protocolos de recuperación antigénica y la afluencia constante de nuevos anticuerpos están ampliando
notablemente el ámbito de aplicación con nuevas utilidades en diagnóstico y pronóstico.

Importancia de la Inmunohistoquímica

• Como técnica de laboratorio la Inmunohistoquímica es de vital importancia para el marcaje selectivo de proteínas
y otros elementos que pueden estar presentes, tanto en las membranas celulares, citoplasma, y demás
compartimientos citoplásmicos, así como también en la matriz extracelular.

• Es de gran utilidad en la identificación de las estirpes celulares de los tejidos básicos, de receptores de membranas,
proteínas citosólicas, y de cualquier otra estructura para la cual se halla desarrollado un anticuerpo específico. Su
aplicación es de indiscutible valor en anatomía patológica en el diagnóstico de lesiones tumorales y su pronóstico
y en la investigavión en general, sobre todo en la definición del inmunofenotipo de las células de los tejidos.

FUNDAMENTO:

• La técnica de Inmunohistoquímica se fundamenta en la reacción Antígeno - Anticuerpo.

• La técnica se basa en aplicar al tejido o muestra en estudio, el antícuerpo contra el antígeno que se desea detectar,
Posteriormente este anticuerpo especifico es a su vez usado como antígeno y marcado con un segundo anticuerpo
inespecífico, que se halla unido a un sistema molecular que puede ser detectado mediante una técnica de
coloración, En este momento, el examen microscópico del corte histológico o del extendido citológico nos permite
determinar la presencia o ausencia del antígeno que buscábamos, y en caso positivo podemos ver en qué lugar
exacto del tejido o de las células se encuentra alojado.

Representación gráfica sencilla de una molécula de anticuerpo

Anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales

• Los anticuerpos monoclonales son producidos por un clon individual de plasmocitos, mientras que los anticuerpos
policlonales son producidos por diferentes plasmocitos y en consecuencia pueden reaccionar con varios
fragmentos del antígeno para el que fueron creados. El animal más utilizado para la producción de anticuerpos
policlonales es el conejo, seguido por la cabra, oveja, caballo, entre otros. Para los anticuerpos monoclonales, el
animal de elección es el ratón, tal vez por motivos económicos.

MÉTODOS:

• MÉTODO DIRECTO: un marcador visual, ya sea fluorescente o enzimático, se adhiere químicamente al anticuerpo
primario. El anticuerpo primario es el anticuerpo dirigido contra el antigenoque se quiere demostrar.

• MÉTODO INDIRECTO: el marcador visual está unido al anticuerpo secundario. El tejido es expuesto previamente
al anticuerpo primario que no es marcado y luego al anticuerpo secundario, el cual es dirigido contra el anticuerpo
primario y se unirá con él

MÉTODO DE LA PEROXIDASA-ANTIPEROXIDASA

• Este método usa un anticuerpo primario, un anticuerpo secundario y un anticuerpo producido en contra,
conjugado con la enzima peroxidasa (complejo PAP). El anticuerpo secundario es producido en una especie animal
diferente del anticuerpo primario y del complejo peroxidasa-antiperoxidasa y el anticuerpo primario y el complejo
peroxidasa-antiperoxidasa provienen de la misma especie animal. Consecuentemente, el anticuerpo secundario
actua como puente o anticuerpo eslabon.
MÉTODO EL COMPLEJO AVIDINA-BIOTINA

• Esta técnica usa tres reactivos; un anticuerpo primario, un anticuerpo secundario que esta químicamente ligado
a la vitamina biotina, y un complejo de la glicoproteína avidina que esta ligado a la biotina y peroxidasa. La avidina
tiene la habilidad de ligarse con cutro moléculas de biotina, en forma no inmunológica. Esta fuerte afinidad le da
al método exelente sensibilidad.

La fluorescencia

• Es una forma de luminiscencia entendiéndose ésta última como la emisión de la luz que se produce a partir de
una fuente de energía no térmica y bajo el efecto de una excitación.

• La fluorescencia primaria o autofluorescencia es aquella que presenta determinadas sustancias de forma

espontánea sin necesidad de ser modificadas; por ejemplo la lámina elástica de las arterias muestra
autofluorescencia en determinadas condiciones).

• En los tejidos que no poseen esta propiedad se puede inducir la fluorescencia, llamándola fluorescencia
secundaria, esto se puede hacer mediante tinción histoquímica con sustancias fluorescentes llamadas
fluorocromos o uniendo fluorocromos a antígenos dirigidos a anticuerpos tisulares.

Fluorocromos.

• Son sustancias químicas que tienen la propiedad de absorber fotones de alta energía procedente de la radiación
ultravioleta o del espectro visible. Ello provoca una redistribución de los electrones de las moléculas
fluorescentes, puesta de manifiesto por la emisión de una radiación luminosa de longitud de onda distinta
aunque dentro del espectro visible.

• Los fluorocromos más utilizados en las técnicas de inmunofluorescencia son:

• · Fluoresceína: absorbe luz azul y emite fluorescencia verde manzana.

• · Rodamina: absorbe luz verde y emite fluorescencia roja anaranjada.

 • Los fluorocromos pueden unirse de forma covalente a los anticuerpos sin alterar la capacidad de estos últimos
para unirse a sus correspondientes antígenos, por ello las fluorocromos ligados a anticuerpos específicos
constituyen un medio útil de visualizar los lugares donde reproduce la reacción Antígeno − Anticuerpo.

ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE LAS DIFERENTES PATOLOGÍAS, DE DIVERSAS ÁREAS

• 1. LINFOMAS

• Diagnóstico de tipo de linfoma, linaje B o T, factores pronósticos, determinación de CD20 para terapias TARGET.

• CD3 CYCLIN D1
CD5 BCL2
CD8 BCL6
CD10 KI67
CD15 CD56
CD20 TdT
CD22 CD30
CD23 DBA44
CD43

2. TUMORES DE ORIGEN DESCONOCIDO

• Diagnóstico certero o aproximado de origen de metástasis de tumor oculto, en hígado, pulmón, piel, hueso,
ganglio, etc.

• CK7 S100
CK20 WT1
CD45 PSA
VIM AE1/AE3
CEA BERP4
TTF1 EMA
CA19.9 GFAP
GCDFP15 CEA
CK 34BE12 NSE
CHR A TIROGLOBULINA
MELAN A CALRETININA
SYN
3. CANCER DE MAMA

• Es muy importante la determinación del estatus hormonal del tumor para su tratamiento con identificación de
receptores de Estrógeno, Progesterona. Así también el HER2 como factor pronóstico y tratamiento que actúan
especialmente sobre las células positivas con este marcador. El Ki67 es determinado recientemente para
estratificar los tumores de acuerdo al factor de proliferación.

• ER
PR
HER2
KI 67
P53

4. NEOPLASIAS MALIGNAS INDIFERENCIADAS

• Diagnóstico de origen linfoide, sarcomatoso, melanocítico o epitelial.

• CD45
CK34BE12
MELAN A
VIM

5. MESOTELIOMA

• Permite diferenciar origen mesotelial de adenocarcinoma metastático en mesotelio, pleura, pericardio,

peritoneo.

• CALRETININA
CK7
WT1
BEREP4
CEA

6. TIPIFICACIÓN DE TUMORES GERMINALES

• Diagnóstico de distintas líneas de diferenciación en tumores germinales de ovario y testículo

• PLAP
AFP
HCG
CD30
VIM

7. SARCOMAS (TUMORES DE PARTES BLANDAS)

• Permite diagnóstico de origen, Ej. músculo liso, estriado, neural, GIST, vasculares, etc.

• VIM
ASMA
MYOD1
S100
CD117
CD34
CD31
CD68
DESMINA
8. DIFERENCIACION NEUROENDÓCRINA

• Diagnóstico de tumores neuroendócrinos y su estratificación de acuerdo a su malignidad

• NSE
CROMOGRANINA A
SYNAPTOFISINA

9. MEDULA ÓSEA

• Diagnóstico de infiltraciones por linfomas, metástasis, leucemias

• CD138
AE1/AE3
MIELOPEROXIDASA
CD34

10. CÉLULAS PLASMÁTICA

• Determinación de Mielomas/Plasmocitomas. Monoclonalidad

• CD138
KAPPA
LAMBDA

11. CÉLULAS REDONDAS Y AZULES EN NIÑOS

• Son tumores que morfológicamente pueden ser idénticos pero que perteneces a distintas líneas celulares de
origen, por lo que el tratamiento es muy distinto entre ellos, por lo que la IHQ permite su diagnóstico.

• CD45
NSE
S100
CK AE1/AE3
CD99
WT1
MYOD1

12. TUMORES DE PIEL

• Permite subclasificar especialmente los tumores de células fusadas dérmicas, como el Dermatofibroma
Protuberans clásicamente positivo para CD34, o diferenciar un melanoma fusocelular de otro tumor fusado

• MELAN A
CD34
S100
ASMA
CD68
CK7
CK34BE12
BERP4

13. CLASIFICACIÓN DE TUMORES RENALES

• Existen tumores renales con características oncocíticas de diferentes pronósticos según su tipo histológico en los
cuales la IHQ resulta de mucha utilidad. Así como tumores con diferenciación sarcomatoide, de distinto origen
tubular, urotelial, etc.

• VIM
AE1/AE3
CD10
CK7
CK34BE12