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Faculté de Médecine
Département de Pharmacie
TECHNIQUES D’IDENTIFICATION
DES
CHAMPIGNONS FILAMENTEUX
Dr L.Rezkallah
Laboratoire de Parasitologie-Mycologie
Introduction
Mycoses
Septomycètes
Siphomycètes
(Septés,
(Non septés)
cloisonnés)
Phaéohyphomycètes
Hyalohyphomycètes Zygomycètes
(Dématiés)
(Hyalin) Mucorales
(Bruns, Noirs)
Pathogènes vrais:
Dermatophytes Alternaria
Opportunistes:
Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Acremonium
Geotrichum, …
Identification des champignons filamenteux après
isolement sur ½ de culture (SC, SAC)
Sporulation
(conidiogenèse, fructification)
Production de pigment
piriformes
piriformes, arrondies,
allongée
solitaires ou en groupes
Autres techniques
Mais parfois, d’identification:
Dermatophyte non Repiquage sur ½
identifiable: d’identification→
stérile, pléiomorphisé Sporulation
ou présente des critères Caractères physiologiques
et biochimiques
atypiques
Milieux d’identification
½ de Borelli
(milieu au ½ eau ½ Agar tween ½ au Bromocrésol
gélosée à 2% 80 (AT) pourpre (BCP caséine)
Lactrimel) ( EG)
Fructification de la
plupart des Gris au départ, vire au
dermatophytes Fructification Pigmentation de bleu-violacé en présence
Production de du T. rubrum de T. mentagrophytes.
pigments (rouge T. rubrum La coloration n’est en
vineux pour T. rubrum revanche pas modifiée
et jaune-orangé pour avec T. rubrum
M. canis)
Exigences nutritives :
½ gélosé BHI (Brain Heart Infusion): MEE:
T. verrucosum (ochraceum) T° d’incubation↗: 32° C (37°C)
T. violaceum, T. schoenleinii
Milieu enrichi à la thiamine:
T. violaceum (microconidies et macroconidies)
T. verrucosum a besoin de thiamine et d’inositol→Labo spécialisés
Recherche de l’uréase:
≠cier T. rubrum (uréase négative) de T. mentagrophytes
(uréase positive)
½ liquide:
Gélose à l’urée de Christensen
½ à l’urée-indole
Caractères culturaux et
Aspect microscopique
macroscopiques
Croissance rapide
Couleur jaune kaki de ses
colonies
Absence de microconidies
Nombreuses Macroconidies
en « régime de bananes »
Epidermophyton floccosum
Nombreuses macroconidies en massues ou en raquettes,
isolées ou groupées par 2 ou 3 en « régime de banane »
Microconidies = 0
Trichophyton rubrum: anthropophile strict
Caractères Aspect
culturaux et microscopique
macroscopiques
FM hyalins septés
Croissance : lente à modérément Macroconidies à paroi lisse et
rapide mince: rares, voire absente en forme
Colonie: duveteuse, blanche de cigare «en saucisse»
surélevée en son centre (en dôme ou Microconidies: piriformes en
en coupole), poudreuse, rose, jaune acladium, solitaires
Verso: incolore, brun, jaune, rouge Excroissances triangulaires
vineux à noir pigment diffusible (du
rouge violet au noir)
Microconidies piriforme en acladium
Pigment
Uréase : négative
Perforation du cheveu in vitro :
négative
Culture sur gélose pomme de terre
glucose : pigment rouge
Sporulation, pigments : ½ de Borelli
Trichophyton mentagrophytes:
2 variétés indifférenciables en pratique (culture):
Var mentagrophytes (Géophile et Zoophile)
Var interdigitale (Anthropophile)
Caractères culturaux et
Aspect microscopique
macroscopiques
Croissance: rapide
Colonie plâtreuse, duveteuse à FM: hyalins, septés, s’articulent svt à
poudreuse, blanchâtres à crème au angle droit (en croix de Lorraine)
recto Macroconidies à paroi lisse et mince :
Verso : jaune à brun en massue, souvent absentes
Microconidies rondes solitaires, très
nombreuses et disposées en buissons
Vrilles (filaments spiralés) fréquents+++
Plâtreuse
Macroconidie: en massue
Microconidies: Piriforme en grappe (buisson)
Trichophyton mentagrophytes:
Ornementations: Vrilles nombreuses, organes en bois de cerf
Uréase : positive
Perforation du cheveu : positive
Culture sur PDA ou Cornmeal :
absence de pigment rouge
Trichophyton violaceum: anthropophile strict
(1 à 2 mois)
Cérébriforme
Examen
microscopique
½ de Borelli
(milieu au Lactrimel):
Fructification
Production de pigment
jaune-orangé
Organes de
fructifications du
genre Aspergillus
Tête bisériée
Disposition
en colonne
Tête unisériée
Fructification (Sporulation):
Aspergillus
Tête aspergillaire
↓
*Se développe bien sur ½ Identification
classiques de mycologie
*Gélose de Sabouraud avec et Difficulté d’identification →Repiquage
sans cycloheximide
(Actidione®)
*À 25°C, 37°C
½ de Czapek
Sensible à
l’Actidione
Vérification tous les ½ à l’extrait de malt
jours Eau gélosée à 2%
Thermophiles ou thermotolérants et Corn-meal –agar
aptitude de se développer à 37°C
↓
Caractère important en pathologie
Pas de sporulation: T° et vitesse de
Repiquage sur ½ pousse
d’Identification : ½ Czapek Caractères Sensibilité au
culturaux et cycloheximide
macroscopiques
Aspect
Identification macroscopique des
colonies
Tête aspergillaire
Aspect
microscopique (organe fructification
Biologie asexuée)
moléculaire
(coûteuse et
lourde)
Spectrométrie
de masse Dg du genre:
(MALDI-TOF)
Aspergillus.sp
*Conidiophores (taille, forme,
*T° et vitesse de pousse présence ou non de pigmentation
*Aspect des colonies, leur couleur ou d’échinulations)
au recto et verso à maturité *Vésicule (taille et forme)
*Présence ou non de métules.
Dg
d’espèce
*Conidies (taille, surface et
Aspect de tête aspergillaire pigmentation)
(lié à l’implantation des phialides *Existence ou non d’1
sur la vésicule): reproduction sexuée (présence ou
tête en colonne; tête ronde radiée non de cléistothèces, et de cellules
en noisette ou « Hülle cells »)
Aspergillus fumigatus: 80 à 90%
Caractères culturaux et macroscopiques
T° de devpt 37 à 50°C.
Croissance Très rapide à 37°C (24 à 48 h)
Aspect Poudreux
Couleur (Recto ) Blanche puis bleu-vert virant au vert foncé à gris noirâtre.
Revers (Verso) Incolore, jaune, vert ou brun- rouge.
Aspect microscopique
Conidiophore 1mm de long, hyalin, à paroi verruqueuse (st près de l’apex)
Vésicule Sphérique, 25 à 45µm
Phialides directement insérées sur vésicule ou portées par des
métules
Tête unisériée ou bisériée, 300 à 400µm de long, radiée
(Phialides insérées sur tout le pourtour de la vésicule),
puis se scindant en plusieurs colonnes
Conidies globuleuses à subglobuleuses, vert pâle, échinulées,
3,5 à 4,5µm de Ø
Pas de reproduction
sexuée connue
Pas de « Hülle cells »
A.niger
Caractères culturaux et macroscopiques
T° de dev 25- 30°C (peut pousser jusqu’à 42°C)
Croissance rapide (2 à 3 jours)
Aspect Granuleux
Couleur (Recto) d’abord blanches, puis jaunes, et enfin noires
Revers (Verso) incolore à jaune pâle
Aspect microscopique
Conidiophore lisse, hyalin ou brunâtre dans sa moitié supérieure, très
long (1,5 à 3mm)
Vésicule globuleuse, 30 à 100µm
Phialides insérées sur la vésicule par l’intermédiaire de métules
disposées sur tout le pourtour de la vésicule
Tête Large ,radiée, bisériée noire à maturité
Conidies globuleuses (3,5 à 5µm de Ø), brunes, échinulées
à très verruqueuse, souvent en chaines
Pas de reproduction
sexuée connue
Pas de « Hülle cells »
A.terreus
Caractères culturaux et macroscopiques
T° de dev 25-30°C (pousse aussi à 37°C)
Croissance rapide (3 à 5 jours)
Aspect Duveteux à poudreux
Couleur (Recto) teinte beige à brun noisette ou cannelle
Revers (Verso) jaune à brun orange
Aspect microscopique
Conidiophore lisse, incolore, de 100 à 250µm de long
Vésicule globuleuse
Phialides portées par des métules insérées surtout sur la
partie supérieure de la vésicule
Tête en colonne, bisériée
(en colonne évasée « aspect d’éventail »)
Conidies de petite taille (1,5 à 2,5µm), lisses, globuleuses à
légèrement elliptiques
Pas de reproduction
sexuée connue
Pas de « Hülle cells »
A.nidulans
Caractères culturaux et macroscopiques
T° de dev 25 à 30°C (pousse aussi à 37°C)
Croissance rapide (3 à 5 jours)
Aspect Duveteux à poudreux
Couleur (Recto) vert foncé ou vert cresson, jaunâtre pour
les souches productrices de cléistothèces
Revers (Verso) rougeâtre, pourpre
Aspect microscopique
Conidiophore brun, lisse, sinueux, très petit (courts )
Vésicule sphérique
Phialides portées par des métules insérées sur la partie
supérieure de la vésicule
Tête bisériée en colonne, courte et compacte
Conidies rondes, vertes, échinulées, 3 à 3,5µm de Ø, souvent
disposées en chaines
Reproduction sexuée:
Emericella nidulans
Présence de
« Hülle cells »:
Arrondies
(10 à 20µm de Ø)
Fructification sexuée:
100 à 300µm de Ø
cléistothèce
Identification de
Penicillium.sp
Penicillium.sp
Contaminants de Labo Industrie agro-alimentaire et
Saprophytes très répandus pharmaceutique.
Penicillium.sp
Rarement incriminé en pathologie humaine
Macroscopie: P.marneffei
Pas de
blastospores
Dg d’espèce:
Caractères Identification du genre Geotrichum
auxanographiques (filaments mycéliens et des arthrospores)