Guia Corregida Q.a.instrumental 1 (19-19) PDF

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
Guía de Prácticas de laboratorio de
ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL I
Segunda Edición
Recopilación:
Dr. Wilson Parra
Dr. Iván Tapia
Marzo 2019
PROCESO PLAN CURRICULAR
FORMATO DE GUÍA DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017
GUÍAS DE PRÁCTICAS DE LABORATORIOS

/ TALLERES / CENTROS DE SIMULACIÓN
CARRERA/AS : Química / Química Farmacéutica /

Química de Alimentos / Bioquímica Clínica
UNIDAD DE ORGANIZACIÓN : Profesional
CURRICULAR
CAMPO DE FORMACIÓN : Praxis Profesional
ÁREAS / SUBÁREA ACADÉMICA : Química Analítica
NOMBRE DE LA ASIGNATURA : Química Analítica Instrumental I
2 de 74
ÍNDICE
Densimetría ....................................................................................................................................... 7
Refractometría I............................................................................................................................... 15
Refractometría II.............................................................................................................................. 22
Polarimetría ..................................................................................................................................... 25
Introducción a la espectrofotometría. Control instrumental fotométrico........................................... 31
Fotocolorimetría .............................................................................................................................. 40
Espectrofotometría visible ............................................................................................................... 45
Análisis espectrofotométrico de una mezcla ................................................................................... 49
Determinación del pH de una solución reguladora .......................................................................... 52
Determinación de la composición de complejos ............................................................................. 55
Titulaciones fotométricas................................................................................................................. 59
Espectrofotometría ultravioleta ........................................................................................................ 63
Fluorometría .................................................................................................................................... 66
Turbidimetría y nefelometría ........................................................................................................... 69
Turbidez en agua ............................................................................................................................ 72
3 de 74
REGLAMENTO DE SEGURIDAD
Normas de laboratorio
Para el desarrollo y aprovechamiento del trabajo en el laboratorio de prácticas es importante tanto

la disciplina general como particular. Cada práctica tiene su instructivo completo en donde se
especifican objetivos, equipos, material de vidrio y algunos reactivos particulares. Este material no
debe mezclarse con el correspondiente a otra práctica. Por otra parte, cada alumno tendrá un
material de uso individual, como gafas protectoras, pera de succión y material de grupo de trabajo
como láminas de aluminio, plástico de embalaje, papel filtro y otros que serán solicitados al inicio
del ciclo semestral.
Existe un material común: bidones con agua destilada, reactivos químicos en la estantería
correspondiente, pipetas, embudos, probetas, vidrios de reloj, varillas para agitar, espátulas,
balanzas, agitadores, algunos de los cuales serán entregados a un representante del grupo de
trabajo al inicio de la práctica. Se evitará dispersar este material por el laboratorio y, en lo referente
al material de vidrio, es preciso limpiarlo antes y después de su utilización. Es de interés general
mantener el orden y la limpieza en los espacios físicos individuales y comunes. Así mismo habrá
recipientes para recoger los distintos tipos de residuos generados. Al finalizar la práctica, debe
dejarse el material en las mismas condiciones como se lo recibió.
Es obligatorio cumplir con el horario de prácticas. Las sesiones de prácticas durarán tres horas y si
el estudiante debe salir por alguna razón deberá solicitar permiso de ausencia al instructor o su
ayudante.
Seguridad en el laboratorio
El trabajo de laboratorio presenta características que lo diferencian de otras áreas. En primer

lugar, la variedad de riesgos. Es frecuente encontrar en un laboratorio riesgos eléctricos, de
incendio, biológicos, de intoxicación, etc. Dentro de este último, la situación es especialmente
compleja por la gran variedad de productos químicos con los que se trabaja habitualmente.
Además, y sobre todo en los cursos iniciales, la destreza de los alumnos en las tareas es escasa,
lo que se traduce en conductas y comportamientos de riesgo.
Conducta en el laboratorio
Existen tres reglas fundamentales para trabajar en el laboratorio: limpieza, seguridad y disciplina.
 Hay que trabajar siempre con mandil o ropa protectora apropiada y llevarla abotonada.
 Es preciso mantener el área de trabajo ordenada y limpia.
 Los desperdicios sólidos y líquidos hay que depositarlos en contenedores apropiados.
 Hay que leer detenidamente la etiqueta de los recipientes antes de usar su contenido.
 No se deben cambiar las etiquetas de los reactivos ni los recipientes con productos distintos a
los que indica dicha etiqueta.
 El almacenamiento de reactivos preparados en el laboratorio se llevará a cabo en recipientes
adecuados a su reactividad y serán debidamente etiquetados.
 Hay que evitar usar y almacenar excesivas cantidades de reactivos químicos.
 Es muy importante no contaminar los reactivos de los botes con otros productos. No se debe
pipetear directamente de los mismos y en caso de sólidos hay que usar espátulas recién
limpias.
 No se deben calentar recipientes de vidrio aforados (pipetas, buretas, matraces aforados,
etc.), botellas pesadas ni recipientes herméticamente cerrados.
 No hay que ir con prisas. Es necesario leer cuidadosamente el instructivo antes de empezar
4 de 74
los experimentos y seguir los consejos del profesor.
 Se deben consultar las dudas existentes al profesor encargado o su ayudante y no al
compañero.
 Al terminar el experimento, hay que limpiar el área de trabajo, banquetas, balanzas, mesas,
campanas extractoras, etc.
Normas de seguridad para el trabajo en el laboratorio
 Hay que usar gafas de seguridad

 Hay que utilizar mascarilla de respiración cuando se trabaje con sustancias volátiles o sólidos
en forma de polvo.
 Hay que usar guantes de goma cuando se manejen sustancias potencialmente peligrosas al
contacto con la piel.
 No se deben llevar comidas ni bebidas al laboratorio.
 Está prohibido fumar. Los cigarrillos son puntos de combustión incontrolados.
 No se deben llevar prendas de vestir sueltas y si se tiene el cabello largo deberá estar
recogido hacia atrás.
 No se deben mantener mecheros encendidos cuando no se usan. Siempre que estén
encendidos deberá permanecer una persona vigilándolos.
 No se debe trabajar con líquidos inflamables cerca de la llama de los mecheros.
 Hay que mantener los recipientes de los productos químicos perfectamente tapados y
ordenados.
 No se debe situar la cara cerca de los recipientes con líquidos volátiles.
 Nunca hay que probar el sabor ni el olor de productos y mezclas químicas.
 Hay que usar aspiradores (peras de goma) para pipetear reactivos o disoluciones.
 Hay que utilizar la campana extractora de seguridad (sorbona para reacciones que involucran
la emisión de humos, vapores corrosivos o venosos).
 No se deben hacer en solitario trabajos experimentales que entrañen el más mínimo riesgo.
 Los experimentos que, debido a su largo duración, han de continuar durante toda la noche
serán debidamente señalizados, indicando claramente en una nota su posible peligrosidad y el
teléfono de contacto de la persona responsable.
 No se deben calentar recipientes de vidrio directamente a la llama, procurando elevar su
temperatura poco a poco. Hay que evitar colocar los recipientes que estén calientes junto a un
foco frío, puesto que el choque térmico podría romperlos.
 No se debe dirigir la boca de recipientes que se estén calentando o agitando hacia los
compañeros, con el fin de evitar proyecciones peligrosas.
Normas de seguridad contra incendios
Precauciones generales
 Está prohibido fumar en el laboratorio.

 No hay que mantener mecheros encendidos sin usarlos.
 No se debe trabajar con líquidos inflamables cerca de la llama de los mecheros.
 Se ha de conocer perfectamente la inflamabilidad de los reactivos con que se trabaja.
 No se deben sobrecargar los puntos de suministro eléctrico.
 En los experimentos que sean potencialmente peligrosos de provocar incendios, se
extremarán las precauciones anteriores.
 Hay que seguir estrictamente las normas de evacuación en los simulacros de incendios.
 Se debe conocer perfectamente la ruta de evacuación a seguir en caso de incendio.
 Hay que conocer la localización exacta de los medios de extinción existente (mangueras,
extintores y mantas).
5 de 74
Lucha contra el fuego
 No se debe correr riesgos personales.

 En caso de producirse un conato de incendio, es necesario procurar no perder la calma
apagando el fuego con el equipo de lucha contra incendios más adecuado que se disponga.
 Hay que cerrar todas las puertas y ventanas, eliminando las corrientes de aire, para evitar el
aporte de oxígeno a la zona de combustión.
 Si el fuego es tan serio como para requerir más de un extintor o, en el caso se estime que está
fuera de control, hay que hacer sonar la alarma de incendios, advertir a las personas más
cercanas de la necesaria evacuación y llamar a los bomberos dando la posición exacta del
fuego.
Evacuación
 Cuando suene la alarma hay que evacuar inmediatamente el laboratorio.

 La evacuación debe ser ordenada y sin prisas.
 Todos los responsables del instrumental abandonarán el edificio tras comprobar que todos los
aparatos están apagados.
 Antes de abandonar el edificio hay que apagar los mecheros bunsen, cortar el suministro
general de gases (cerrar válvulas de los tanques), cerrar los grifos de agua y desconectar los
equipos eléctricos, siempre y cuando lo permitan las condiciones del incendio.
 Los profesores responsables de las prácticas deberán comprobar que no se ha quedado
ningún alumno y que todos los aparatos están desconectados.
 Como prevención todos los pasillos y salidas deben estar libres de obstrucciones. Todas las
puertas de los laboratorios deben estar siempre desbloqueadas.
Algunos percances usuales y su tratamiento
En el laboratorio debe existir un botiquín provisto de un material mínimo, como algodón, gasas,
tijeras, esparadrapo, yodo y alcohol sanitario, agua oxigenada, crema para quemaduras,
bicarbonato sódico, analgésicos, etc.
Ingestión de sustancias:
Es necesario conseguir la mayor información posible sobre el producto ingerido y trasladar

inmediatamente a la persona intoxicada a un centro sanitario. En caso de dudas de la peligrosidad
de la sustancia, se puede pedir información al Centro de Información de Medicamentos y Tóxicos
“CIMET” (2500-535).
Lesiones superficiales:
En general, hay que proceder al lavado con agua abundante, salvo si la lesión se ha producido por
ácido sulfúrico. En este caso se neutraliza con agua jabonosa y se aplica sustancias oleosas. En
particular, para ácidos fuertes hay que lavar abundantemente con agua bicarbonatada y para
bases fuertes como sosa caústica hay que lavar abundantemente con agua acidulada o vinagre.
En caso de cortaduras superficiales, lavar con abundante agua y desinfectar con un antiséptico y
aplicar presión con una gasa estéril para detener el sangrado, realizar un vendaje en la zona
afectada.
En caso de quemaduras, aplicar crema para quemaduras o cubrir con jelonet al área afectada, y
sobre este colocar una gasa y vendar apropiadamente.
6 de 74
N° de la práctica: 1
Unidad Curricular: FUNDAMENTOS DE LA QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL
Título: Densimetría
1.1 Objetivos
 Familiarizarse con diversos métodos densimétricos para el análisis cuantitativo de diversas

sustancias.
 Conocer cómo se debe trabajar con un picnómetro.
 Conocer el uso de la balanza de Westphal
 Conocer el uso de los densímetros, alcoholímetros, aerómetros etc.
 Determinar la densidad de varias soluciones
 Determinar la concentración de una muestra en solución, midiendo la densidad relativa por
varios métodos:
a) Picnométrico.
b) Balanza de Westphal.
c) Densímetros
d) Balanza hidrostática
1.2 Fundamento de la práctica
Se determina la densidad relativa de la muestra mediante los métodos indicados. Por medio de
curvas de calibración experimentales y tablas de densidad en función de la concentración de
soluciones acuosas de analito seleccionado, se calcula su contenido. Para el rango de concentración
estudiado, existe una relación lineal entre densidad y concentración. Aprovechando esta
particularidad se encuentra la concentración de una muestra por interpolación gráfica y matemática.
1.3 Parte experimental
1.3.1. Instrucciones previas

Observar el reglamento establecido en las páginas 4 a 6
1.3.2. Materiales y Reactivos

– Probetas de 2000 ml
– Balanza de Westphal
– Picnómetro
– Baño termostático
– Balanza analítica
– Diversos densímetros y aerómetros
– Balones aforados de 250ml
– Balones aforados de 100ml
– Vasos de precipitación de 50ml
– Agua destilada
– Soluciones de sacarosa: 2, 4, 8 y 12% P/V
– Soluciones de etanol (2, 4, 8, 12 %V/V)
– Termómetros
– Buretas de 25ml
– Gradilla con tubos de Nessler
1.3.3. Procedimiento
1.3.3.1. Método del picnómetro:
 Determinar el peso del picnómetro vacío con exactitud de 0,1mg. (El picnómetro debe estar
7 de 74
limpio y seco).
 Llenar el picnómetro con agua destilada, asegurándose que el capilar esté lleno de agua y que
no existan burbujas de aire.
 Introducir el picnómetro en el baño térmico por 3 minutos.
 Secar completamente las paredes exteriores y determinar su peso en la balanza analítica.
 Llenar el picnómetro con la muestra, y repetir el procedimiento anterior
1.3.3.2. Método de la Balanza de Westphal
 Armar la balanza según indicaciones.

 Ajustar la balanza en cero.
 Calibrar la balanza con agua destilada.
 Determinar la densidad de la muestra.
 Determinar la temperatura.
1.3.3.3. Densímetros e hidrómetros:
 Llenar las probetas con soluciones de sacarosa y con la muestra.

 Sumergir lentamente el densímetro hasta que se mantenga estable y no tope las paredes de la
probeta, observar donde corte el menisco del líquido, la escala de densidad y anotar la lectura
(4 cifras decimales). Realizar 5 determinaciones.
 Determinar los grados Baumé de cada solución utilizando los hidrómetros correspondientes.
1.3.3.4. Balanza hidrostática:
 Adaptar la balanza analítica según las indicaciones dadas para que funcione como balanza
hidrostática.
 Pesar el inmersor de vidrio en el aire (con ±0.1mg)
 Pesar el inmersor sumergido en agua destilada
 Pesar el inmersor en cada solución de sacarosa y en la muestra.
1.4 Resultados
Tabla 1-1 Determinación del peso del picnómetro con agua, al vacío y con las diferentes
soluciones
Wpic. Vacío (g) Wpic.+ agua (g) Wpic.+ sol. 2% (g) Wpic.+ sol. 4% (g) Wpic.+ sol. 8% (g) Wpic.+ sol. 12% (g) Wpic.+muestra (g)
Tabla 1-2 Determinación de la densidad del agua y las soluciones dadas con la Balanza Westphal
Medición agua sol. 2% sol. 4% sol. 8% sol. 12% muestra T (°C)
1
2
3
x
8 de 74
Tabla 1-3 Densidad de las diferentes soluciones con los densímetros

Solución
Lectura
Agua 2,0% 4,0% 8,0% 12,0% Muestra
1
2
3
4
x
1.4.1. Cálculo de la densidad relativa y absoluta por el método del picnómetro:
W3  W1 W3  W1
Dtt21   Dtt21 = densidad relativa
W2  W1 W
 t1 = densidad absoluta a t1
 t  Dtt .  Ht O
1 1
2
1
2
W1 = peso de picnómetro vacío
W2 = peso del picnómetro + agua
W = W2 - W1 W3 = peso del picnómetro + muestra
w = equivalente del agua
Incluir únicamente un ejemplo del cálculo.
1.4.2. Cálculo de la densidad relativa y absoluta por el método de la balanza de Westphal
(Los datos obtenidos en la balanza de Westphal son directamente de densidad relativa a t 1/t2).
Calcular densidad absoluta:
 t =  tt ( exp ) .  tH O
1 2
1
1
2
1.4.3. Cálculo de la concentración de la muestra:
Cálculo de la concentración de la muestra por interpolación gráfica y matemática con una exactitud de
0.1% mediante curva de calibración, esto para los cuatro métodos.
Los datos se ajustan a una recta del tipo y = ax + b
 Recomendaciones:
 Establecer si las tablas vienen expresadas en % P/P ó %P/V y/o % V/V.
 Familiarizarse con el uso de referencias bibliográficas (mirar bibliografía) y tablas de
densidad absoluta y relativa.
 Considerar la temperatura en cada determinación.
1.4.4. Calcular la concentración en % P/V y % V/V, % P/P
9 de 74
Tabla 1-4 Datos calculados de densidades para los estándares y la muestra, obtenidos con el método
del picnómetro.
Solución  2020  20 , g/cm3 % P/P %P/V %V/V

1
2
3
4
Muestra
Tabla 1-5 Datos calculados de densidades para las soluciones de NaCl y, concentración de la
muestra obtenida con la balanza de Westphal
Estándar  2020  20 , g/cm3 % P/P %P/V %V/V
1
2
3
4
Muestra
Tabla 1-6 Método de los densímetros: densidades relativa y absoluta para las soluciones de sacarosa
y muestra; expresar las concentraciones en porcentajes
D 20 ( g / cm 3 )
Estándar  2020 ( g / cm3 )  20 ( g / cm3 ) %P/P %P/V %V/V
(tablas )
1
2
3
4
Muestra
1.4.5. Cálculo estadístico:
1.4.5.1. Método del picnómetro
Calcular: (para la muestra)

 La media de densidad absoluta
 La desviación estándar de la densidad absoluta
 La media de la concentración %P/P
 La desviación estándar de la concentración
Expresar el resultado como:
% P / P   n 1
 20   n 1
1.4.5.2. Método de la balanza de Westphal

Realizar de igual forma que en el método del picnómetro .
10 de 74
1.4.5.3. Calcular la sensibilidad y el límite de detección para los cuatro métodos .

Nota: Incluir en el informe fotocopia de la tabla de constantes físicas de las soluciones empleadas y
de la densidad del agua a varias temperaturas.
1.4.6. Ajuste de los datos experimentales a una recta del tipo:    0  K sC

Tabla 1-7 Cálculos de los valores ajustados de la densidad para todos los métodos (B. Westphal,
picnómetro, densímetros)
% P/P  2020 ( g / cm3 ) (experimental)  2020 ( g / cm3 ) (ajustado)
Pic. B. W Hidrom. B. Hidros. Pic. B. W Hidrom. B. Hidros.
0,0
2,0
4,0
8,0
12,0
1.4.7. Gráficos
a) Densidad relativa vs concentración (hidrómetros) (experimental y tablas)

b) Densidad relativa vs concentración (B. Westphal)
c) Densidad relativa vs concentración (Picnómetros)
De cada grafico se obtendrán las respectivas ecuaciones del tipo    0  ks C ; con las cuales
podrán calcularse las concentraciones de las muestras.
Tabla 1-8 Resultados para las muestras con todos los métodos:
% P/P sacarosa
Determinación
Densímetros Picnómetro B. Westphal
1
2
3
4
x
Calcular:
a) La media del %P/P de sacarosa para la muestra
b) Desviación estándar  n 1
c) Reportar como % P / P   n 1
d) Sensibilidad y límite de detección para sacarosa por densimetría, utilizando los
hidrómetros y la balanza hidrostática.
1.5. Discusión de resultados
 Fuentes de error que pudieron intervenir en la práctica

 Relación de los resultados obtenidos con la bibliografía
 Precisión y exactitud del método
 Discusión de los gráficos obtenidos
11 de 74
1.6. Conclusiones
 Concluir en base a los objetivos de la práctica

 Concluir en base a los postulados teóricos comprobados en la experimentación
1.7. Cuestionario
 Definiciones de densidad absoluta, densidad relativa, unidades.

 Principio de Arquímedes. Principales métodos experimentales para determinar la densidad.
 Relación entre la densidad - concentración y temperatura para mezclas binarias.
 Conversiones %P/P - % V/V - %P/V
 Discusión del diseño y funcionamiento de los instrumentos: Funcionamiento y precauciones.
 Principio en que se basan las determinaciones experimentales de la densidad con los hidrómetros
y con la balanza hidrostática.
 Ecuaciones que definen el empuje de los líquidos sobre los cuerpos sumergidos.
 Clasificación de los hidrómetros o aerómetros
 Relación entre densidad específica y la concentración para mezclas binarias.
 Ecuaciones para calcular la densidad específica según la balanza hidrostática.
1.8. Bibliografía
[1].BLATT, F. (1991). Fundamentos de Física 3ra. Edición. Prentice – Hall. México. p. 216-217, 243-
247
[2].SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta. Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 611.
[3].SKOOG, D., HOLLER, J. y NIEMAN, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental
5ta.EdiciónMcGraw – Hill. Madrid. p. 1116
[4].SKOOG, D. y WEST, D.(2001). Química Analítica 7ma. Edición. Mc Graw – Hill. México. p. 166-
179.
[5].Otra Referencia bibliográfica:International Critical Tables Handbook of Chemistry and Physics
Manual de Lange
12 de 74
1.9. Anexos
13 de 74
14 de 74
Unidad Curricular: MÉTODOS REFRACTOMÉTRICOS
Título: Refractometría I
2.1. Objetivos
 Examinar el refractómetro de Abbe, sus accesorios y forma de operación.

 Determinar el índice de refracción de sustancias líquidas y compararlo con tablas.
 Calcular la dispersión parcial, refracción específica, refracción molar y el número de Abbé.
 Identificar una sustancia mediante su índice de refracción.
2.2. Fundamento de la práctica
El índice de refracción es una propiedad física característica que se utiliza para identificar substancias
químicas.
2.3. Parte experimental

Observar el reglamento establecido en las páginas 4 a 6.
2.3.2. Materiales y reactivos
– Refractómetros de Abbé (Carl Zeiss, Baush & Lomb)

– Baño termostático
– Termómetros
– Piceta
– Frascos goteros
– Agua destilada
– Metanol
– Isobutanol
– Acetona
– Glicerina
– Muestra
 Examinar el refractómetro, sus partes y las conexiones al baño termostático a 25C. Hacer un
esquema del instrumento.
 Colocar 2 gotas de agua destilada en el prisma inferior o de iluminación. Cierre suavemente el
prisma superior.
 Mover los prismas de Amici hasta obtener los 2 campos perfectamente definidos.
 Llevar hasta la línea el límite del ángulo crítico de refracción con 4 cifras decimales. Anotar
también la posición de los prismas de Amici en el tambor (compensador).
 Hacer 3 lecturas más a fin de obtener el promedio.
 Limpiar cuidadosamente los prismas con un papel absorbente suave y luego con acetona.
 Determinar los índices de refracción de las demás substancias.
15 de 74
2.4. Resultados
Tabla 2-1 Lecturas del Índice de Refracción y del compensador
25
nD
Determinación Compensador
1 2 3 x
Agua destilada
Propanol
Isobutanol
Alcohol bencílico
Heptano
Muestra
Calibración del refractómetro
Agua destilada
n D (tablas) - n D (experimental) = n
25 25
“El n se debe sumar o restar (según el signo) a las demás lecturas”

Tabla 2-2 Valores de n25 25
D corregidos y n D de tablas
25 25 25
Sustancia n D (exp.) n D (corregidos) n D (tablas)
Agua destilada
Propanol
Isobutanol
Alcohol bencílico
Heptano
2.4.1. Cálculo de la dispersión parcial y la dispersión específica
D p = nF - nc F  línea azul del H2 (  = 486.1nm)

C  línea roja del H2 (  = 656.3nm)
D p = nF - nc = A + (B * C)
A, B, C  Valores que se deben consultar en tablas, hacer interpolaciones.
D A B Compensador C
Dp
Dc = (Poner un solo ejemplo de cálculo)
t
2.4.2. Cálculo de la refracción molar y # de Abbé
16 de 74
2
nD - 1 ) M
RM = ( 2
nD + 2 
-1
 = nD
n f - nc
Se puede calcular n f ; nc ; v según nomogramas

Valores de D ; Dc ; v ; RM
Tabla 2-3 Valores de dispersión parcial, refracción específica, refracción molar y número de Abbé
para varias sustancias
Sustancia D r (nomog) RM v (calculado )

Agua destilada
Propanol
Isobutanol
Alcohol bencílico
Heptano
2.4.3. Cálculo estadístico

Tabla 2-4 Cálculo estadístico de los valores de índice de refracción del agua
25
Grupo n D Agua corregidos
1
2
3
4
x
 n-1
Nota: Incluir fotocopias de tablas de nomogramas.
 Analizar las fuentes de error que podría alterar los resultados

 Relación de los índices de refracción de las sustancias con su valor teórico
 Precisión y exactitud del método
2.6. Conclusiones

 Tipos de refractómetros que existen y su precisión.
 Concluir en base a los postulados teóricos comprobados en la experimentación
2.7. Cuestionario
 Refracción, Índice de refracción, variables que afectan al índice de refracción, métodos

experimentales para determinar el índice de refracción, número de Abbé, refracción molar,
variación de la refracción molar y número de Abbé en series homólogas.
 Discusión del diseño y funcionamiento del refractómetro de Abbé
17 de 74
2.8. Bibliografía
[1]. BLATT, F. (1991). Fundamentos de Física 3ra. Edición. Prentice – Hall. México. p. 647659
[2]. MELOAN, C. y KISER, R. (1973). Problemas y experimentos en Análisis Instrumental.Reverte.
México. p. 187196
[3]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 147148, 153161
[4]. SKOOG, D. y WEST, D. (1975). Análisis Instrumental 1ra. Edición. Interamericana. México.
p.306317.
[5]. SKOOG, D. y WEST, D. (1987). Análisis Instrumental 2da. Edición. Interamericana. México. p.
370–375.
18 de 74
2.9. Anexos
Tablas y nomogramas
19 de 74
20 de 74
Nomograma
21 de 74
Unidad Curricular: MÉTODOS REFRACTOMÉTRICOS
Título: Refractometría II
3.1. Objetivos
 Examinar el refractómetro de Inmersión, su forma de operación y sus accesorios.

 Realizar determinaciones cuantitativas de soluciones de NaCl y etanol mediante refractometría.
 Estudiar la relación entre índice de refracción y la concentración de soluciones acuosas (n vs. %
P/V)
 Obtener los siguientes gráficos:
 Lectura vs % P/V
 n vs. % P/V
Para el rango de concentración estudiado existe una relación lineal entre n y la concentración de
NaCl, sacarosa, etanol, etc. Aprovechando esta particularidad se determina la concentración de una
muestra por interpolación gráfica y analítica.


– Refractómetro de inmersión
– Refractómetro de Abbe
– Baños termostáticos
– Baños de agua
– Termómetros
– Agua destilada
– Soluciones de NaCl: 2%, 4%, 8%, 12% P/V
– Soluciones de etanol: 2%, 4%, 8%, 12% V/V
– Muestras de etanol, NaCl, sacarosa
 Preparar soluciones de NaCl y etanol, de las concentraciones señaladas anteriormente.
 Montar los accesorios del refractómetro de inmersión.
 Determinar la lectura obtenida de cada solución y del agua destilada en la escala del
refractómetro de inmersión, realizar 3 lecturas.
 Consultar las tablas para transformar el valor leído en índice de refracción (con 5 cifras
decimales)
 Determinar el índice de refracción de la muestra.
 Determinar en el refractómetro de Abbe la lectura de la concentración de sacarosa en grados
BRIX. Repetir con otras sustancias a indicarse.

Para el etanol trabajar en % V/V (precaución en los gráficos)
22 de 74
3.4. Resultados
Tabla 3-1 Datos de índice de refracción para soluciones de NaCl o etanol*
% P/V (NaCl) Lecturas

o n20(exp.) n20(tablas)
% V/V (Etanol) 1 2 3 x
0.0
2.0
4.0
8.0
12.0
Muestra
* Para cada serie de soluciones
3.4.1. Conversión de los valores refractométricos en índice de refracción, utilizando tablas. Interpolar
datos de ser necesario. Incluir sólo un ejemplo de cálculo.
3.4.2. Ajuste de los datos obtenidos experimentalmente a una recta del tipo
   0  ksC
Tabla 3-2 Cálculo de los valores ajustados de η utilizando la ecuación obtenida.
% P/V ó V/V η (exp.) η (corregido)
0.0
2.0
4.0
8.0
12.0
3.4.3. Cálculo de la concentración de NaCl y etanol en las muestras por interpolación gráfica y en la
ecuación matemática.
Tabla 3-3 Cálculo estadístico de la concentración de NaCl o etanol en la muestra
Lectura %P/V (NaCl) %V/V (Etanol)

1
2
3
x
 n-1
% de error
3.4.5. Cálculo de la sensibilidad y límite de detección para NaCl y/o etanol,
 Fuentes de error del método

23 de 74
 Analizar los valores obtenidos: limite de detección, sensibilidad, precisión, límite de cuantificación,
linealidad.
 Cuál es el método de mayor precisión a comparación con la práctica anterior.
3.6. Conclusiones
 Reportar la concentración de la muestra entregada con su respectiva incertidumbre

 Diferencia entre refractómetro de Abbe y de inmersión
3.7. Cuestionario
 Relación del índice de refracción con el porcentaje de sustancia seca y con los sólidos
disueltos. De existir poner ejemplos. (mínimo 5)
 Discusión del diseño y funcionamiento del refractómetro de inmersión:
3.8. Bibliografía
[1]. BLATT, F. (1991). Fundamentos de Física 3ra. Edición. Prentice – Hall. México. p. 216217,
243247.
[2]. MELOAN, C. y KISER, R. (1973). Problemas y experimentos en Análisis Instrumental.
Reverte. México. p. 187196.
[3]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 147148, 153161
[4]. SKOOG, D. y WEST, D. (1975). Análisis Instrumental 1ra. Edición. Interamericana. México.
p. 306317.
[5]. SKOOG, D., HOLLER, J. y NIEMAN, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental 5ta.
Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 1116.
24 de 74
Unidad Curricular: MÉTODOS POLARIMÉTRICOS
Título: Polarimetría
4.1. Objetivos
 Examinar el diseño y operación de los polarímetros.

 Determinar si una sustancia es dextrógira o levógira o si es ópticamente inactiva.
 Medir el ángulo de rotación y evaluar la rotación específica de los azúcares.
 Estudiar la relación entre la longitud del tubo del polarímetro y la concentración con el ángulo de
rotación y la rotación específica.
 Familiarizarse con los métodos cuantitativos polarimétricos.
 Determinar el contenido de lactosa en una muestra de leche en polvo.
Las substancias que tienen la propiedad de hacer girar la luz polarizada en un plano son
denominadas óptimamente activas, pueden ser determinadas cualitativa o cuantitativamente por
medio de mediciones polarimétricas.
Inactivo Dextro Levo

Al precipitar las proteínas de la leche por la adición de sales de metales pesados en medio ácido, se
separa la lactosa que permanece en solución. Midiendo el ángulo de rotación de esta solución es
posible determinar el contenido de lactosa en la muestra.


 Polarímetro
 Agua destilada
 Solución de sacarosa al 0,5; 1,0; 1,5;
3,0% (100mL)
 Tubos polarimétricos de 1 y 2dm.
 Termómetros
 Balanza analítica
 Embudos
 Vasos de precipitación
 Balones o Tubos de Nessler
 Pipetas Volumétricas
 Discos de Papel filtro cuantitativo
 Solución de ácido sulfúrico al 20%
 Solución de Tungstato de Sodio
(Wolframato de Sodio) al 10%
 Lactosa de alta pureza
 Muestra de leche en polvo.
25 de 74
 Examinar el polarímetro, sus partes y controles según la explicación previa.
 Llenar el tubo polarimétrico de 2dm con agua destilada y colocar en el porta muestras. Graduar la
escala del ángulo de rotación en 0.0, observar y anotar la disposición de los campos.
 Mover lentamente el analizador hasta que se invierta el campo y luego regresarlo
cuidadosamente hasta obtener dos o tres campos visuales que tengan igual coloración.
 Según el caso leer el ángulo de rotación con ± 0.05 o ± 0.1 de exactitud.
 Hacer dos lecturas más, cambiando la disposición de los campos y encontrando nuevamente el
punto de equilibrio.
 Siguiendo el mismo procedimiento, determinar los ángulos de rotación de las soluciones de 0,5;
1,0; 1,5 y 3,0 % P/V con el tubo de 1dm y luego con el de 2dm. Determinar la temperatura de la
solución.
 Determinar los ángulos de las dos soluciones problema, utilizando los dos tubos polarimétricos de
1 y 2dm.
4.3.3.1. Preparación de la muestra

 Preparar soluciones de lactosa en agua destilada de 0.5; 1.0; 1.5 y 3.0 % P/V.
 Pesar 5 gramos (±0.001) de leche en polvo, disolver con 20ml de agua caliente.
 Agregar 20ml de ácido sulfúrico al 20% y 5ml de solución de Tungstato de Sodio al 10%, colocar
5-6 gotas de NH3. Filtrar y aforar con agua destilada a 100ml, determinar el ángulo de rotación
con un tubo polarimétrico de 2dm.
4.3.3.2. Medición del ángulo de rotación
 Utilizando un tubo polarimétrico de 1 y 2dm, medir los ángulos de rotación de las soluciones de
lactosa al 0.5%; 1.0%; 1.5% y 3.0 % P/V, así también de la solución obtenida del tratamiento de la
leche.
 Realizar 5 lecturas y obtener el promedio.
 Medir la temperatura de la solución.
 Medir la densidad de las soluciones de sacarosa
4.4. Resultados
Tabla 4-1 Valores de rotación óptica observada con el tubo de 1dm
_
%P/V T (°C) 1 2 3 4 5 x  sol
---
0,5%
1,0%
1,5%
3,0%
Muestra
Tabla 4-2 Valores de rotación observada con el tubo de 2dm

_
%P/V T (°C) 1 2 3 4 5 x  sol
---
0,5%
1,0%
1,5%
3,0%
Muestra
26 de 74
4.4.1. Cálculo de la rotación específica experimental de la sacarosa y levulosa de acuerdo al tubo

utilizado en la medición
α  100 * 
l *C
( l en dm ; C en % P / V )
Tabla 4-3 Valores de rotación específica observada con el tubo de 1dm para la lactosa
St (%P/V)  
0,0
0,5
1,0
1,5
3,0
Tabla 4-4 Valores de rotación específica observada con el tubo de 2dm para la lactosa
St (%P/V)  
0,0
0,5
1,0
1,5
3,0
4.4.2. Cálculo de la rotación específica según las polinómicas dadas en las tablas. (para la sacarosa)
Sacarosa:
[  ] = + 66.412 + 0.01267 d - 0.000376 d2
d= concentración (%P/P)
Tabla 4-5 Valores de rotación específica de la sacarosa según ecuación polinómica
Concentración (% P/V) [  ] exp [  ] tablas

0,5
1,0
1,5
3,0
  exp =
4.4.3. Corrección por el efecto de la temperatura
a) sacarosa:
[  ] = [  ] + n [t2 - t1]
Tabla 4-6 Valores de rotación específica corregida por efecto de temperatura a varias
27 de 74
concentraciones de sacarosa
Concentración (% P/V) [  ] exp [  ] tablas

0,5
1,0
1,5
3,0
  exp =
4.4.4. Cálculo de la concentración de la muestra por interpolación gráfica.

 Graficar:  vs. C (ángulo de de rotación, no rotación específica)
 Calcular el valor de  ajustado mediante la recta de regresión (LR).
 = 0 + b [%P/V]
Tabla 4-7 Comparación de los valores de  experimentales y ajustados
Concentración (%P/V)  (exp erimental ) ̂ ( ajustado )

Blanco
0,5
1,0
1,5
3,0
4.4.5. Cálculo de la concentración de la muestra por interpolación matemática mediante una recta de
regresión (y = a + bx)
   0  ks C
 M  0
CM 
ks
0 = ángulo de rotación del solvente (a)
 M = ángulo de rotación de la muestra (y)

ks = pendiente, sensibilidad de calibración (b)
CM = concentración de la muestra en % P/V (x)
4.4.6. Determinación del contenido de lactosa en la leche (expresado como % P/P)

Según el valor de [  ]  que indican tablas.
t
[  ] tDlactosa = +52.4 + 0.072 (20 - t) Temperatura para C = 5% P/V
Nota: [ 
t
] D : No cambia con la concentración.
100 . a
CM = [  ] tD : corregido a T de laboratorio
[  ] tD . l
28 de 74
 Calcular el porcentaje en peso de lactosa en la muestra considerando el peso y volumen de aforo

de leche utilizada:
Plactosa
%( P / P) lact. = x100
Pmuestra
4.4.7. Cálculo del porcentaje de error:
[  ] tablas - [  ] exp .
%ERROR = . 100 =
[  ] tablas
4.4.8. Cálculo Estadístico:
Tabla 4-8 Cálculo estadístico
Grupo No. %P/P lactosa

1
2
3
4
x
S  S(b )  ks C
Sm  S(b )  3 (b )
(y i  yˆ i ) 2
 y/x  i 1
n2
S m  Sbl
Cm 
Ks
4.4.9. Cálculo Estadístico:
  
Media de la rotación específica  para todas las soluciones
 Media de la concentración de la muestra
 Desviación estándar  n 1 para   de las soluciones y para la muestra
 Reportar el valor de la muestra X +  n 1
29 de 74
Tabla 4-9 Resultados
[  ] exp
% Error
Marca de la leche analizada
Contenido de lactosa en % p/p
% p/p  n-1
Sensibilidad de calibración
Límite de detección

 Mencione las fuentes de error instrumental en la presente práctica
 Analizar valores obtenidos: limite de detección, limite de cuantificación, linealidad, precisión,
sensibilidad
 Relacionar la rotación especifica con datos tabulados.
4.6. Conclusiones
 Reportar la concentración de la muestra
4.7. Cuestionario
 Sustancias ópticamente activas
 Rotación específica
 Variables que afectan a la rotación específica
 Discusión sobre el diseño y funcionamiento del polarímetro y precauciones de su uso
 Determinaciones cuantitativas polarimétricas, ventajas y limitaciones
 Relación de α con C en soluciones que contiene sólo un soluto ópticamente activo.
 Valores normales de la lactosa en la leche. (Composición química de la leche).
4.8. Bibliografía
[1]. MELOAN, C. y KISER, R. (1973). Problemas y experimentos en Análisis Instrumental. Reverte.
México. p. 201211.
[2]. SKOOG, D. y WEST, D. (1975). Análisis Instrumental 1ra. Edición. Interamericana. México. p.
318339.
375–388.
[4]. SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta. Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 6-
11.
[5]. WILLARD, H., MERRITT, L. y DEAN, J. (1981). Métodos Instrumentales de Análisis. Continental.
México. p. 471 490.
[6]. WINGROVE, A. y CARET, R. (1981). Química Orgánica. Harla. México. p. 205–211, 218–223.
[7]. WEAST Robert; CRC Handbook of Physics 49th (1968)
30 de 74
Unidad Curricular: ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR
Título: Introducción a la espectrofotometría. Control instrumental fotométrico
5.1. Objetivos
 Examinar y operar un espectrofotómetro UV - VIS

 Conocer los procedimientos para evaluar el desempeño del espectrofotómetro
 Determinar las posibles causas de error en una medición espectrofotométrica
Dentro de los requerimientos para el buen desempeño de un Laboratorio de Química Analítica, ocupa
un lugar preferencial el tipo de instrumento utilizado en la detección y cuantificación de los parámetros
que se analizan y el control de su óptimo funcionamiento. El espectrofotómetro UV - Vis. constituye el
instrumento más utilizado en el Laboratorio, ya que la mayoría de las determinaciones se llevan a
cabo colorimétrica o espectrofotométricamente. Aunque los aparatos de medición que existen en el
mercado son sometidos a controles de calidad por sus fabricantes, el intenso uso y el envejecimiento
deterioran su rendimiento, dando lugar a errores analíticos de origen instrumental que, aunque sea
parcialmente, se pueden detectar y corregir.
En el laboratorio se debe llevar un registro de todo el instrumental, donde deben constar todos los
controles que se realizan, los desperfectos que se producen, las reparaciones que se efectúan, los
responsables del servicio técnico, etc. de manera de constituirse en una documentación válida que
respalde el accionar profesional.
5.2.1. Nomenclatura espectrofotométrica
Rango Espectral: Intervalo de longitudes de onda en el cual el instrumento puede realizar medidas de
absorbancia o transmitancia. Abarca habitualmente el UV y el visible.
Exactitud de Longitud de Onda: diferencia entre la longitud de onda que indica el seleccionador y la
longitud de onda real. Es el corrimiento de longitud de onda y se mide en nm.
Precisión de longitud de onda: Es la capacidad del instrumento de reproducir la longitud de onda
elegida. Se mide también en nm.
Estabilidad de lectura, deriva y ruido: Es la variación del cero electrónico del instrumento en función
del tiempo. La deriva es una inclinación hacia una lectura más alta o más baja durante un período de
tiempo y el ruido es la falta de estabilidad.
Abs Abs
Tiempo Tiempo
Bajo ruido y baja deriva Baja deriva y alto ruido
31 de 74
Abs Abs
Tiempo Tiempo
Alta deriva y bajo ruido Alta deriva y alto ruido
Exactitud fotométrica: Exactitud de las medidas de absorbancia, es decir, diferencia entre la

absorbancia real y la absorbancia medida de una solución.
Precisión fotométrica: Repetitividad de las medidas de absorbancia.
Sensibilidad o linealidad fotométrica: es la capacidad de respuesta lineal de un espectrofotómetro a
concentraciones crecientes o decrecientes de una sustancia que cumpla la ley de Beer a distintas
longitudes de onda.
Ancho espectral de rendija (AER): es el intervalo de longitudes de onda que emerge del
monocromador cuando seleccionamos un valor de longitud de onda que va a recibir la máxima
cantidad de luz. Se expresa en nm.
Ancho espectral de banda o ancho de banda (AEB): es el intervalo de longitud de onda que recibe el
50 % del máximo de intensidad de radiación. Generalmente es la mitad del AER y se mide en nm.
(Figura 2)
Intensidad A
B C
D E
Longitud de onda  
Figura 2: A: longitud de onda seleccionada
DE: ancho de rendija
BC: ancho de banda
Luz parásita: es toda radiación electromagnética de longitud de onda distinta a la seleccionada por el
monocromador que alcanza el detector y por lo tanto queda registrada por el instrumento.

32 de 74

– Espectrofotómetro UV - VIS
– Balones aforados
– Pipetas
– Cubetas limpias
– Agua destilada
– Dicromato de potasio
– Azul de bromotimol
– Nitrato de cobalto
– Cianohemoglobina
– Ácido Sulfúrico 0.37N
– Ácido perclórico 0.001 N
– P- Nitrofenol
– Nitrito de sodio
5.3.3.1. Control de la exactitud de la longitud de onda.

El método más exacto consiste en reemplazar la lámpara del instrumento por una fuente de energía
radiante que emita fuertes líneas a determinadas longitudes de onda. Son útiles para este fin: a)
Lámpara de vapor de mercurio (313, 365, 405, 436 y 546 nm) y b) Lámpara de hidrógeno y de
deuterio (486 y 656 nm.) Un segundo método consiste en la utilización de filtros de tierras raras como el
óxido de Holmio (361, 418, 453, 536 y 636 nm.) y el Didimio ( 573, 586, 685, 741 y 803 nm.).
En caso de no contar con estos filtros o sus soluciones se recomienda usar el método del punto
Isosbéstico. Esta es una característica que presentan ciertas sustancias con isómeros estables cuyos
espectros en solución equimolecular ácida y alcalina se cortan en una longitud de onda característica.
La importancia del método resulta en que el punto isosbéstico es independiente de la concentración
absoluta de la sustancia y de la temperatura entre 4 y 45 ºC. La experiencia consiste en determinar
los espectros de absorción-emisión de alguna de las sustancias que luego se mencionan, en sus
formas ácidas y alcalinas. El punto isosbéstico se define gráficamente tal como muestra la figura
siguiente.
Espectro del rojo Congo

Realizar el espectro de barrido de las soluciones ácidas y alcalinas de las siguientes soluciones:
a) Dicromato de Potasio (29.5 mg/l) Pto. Isosbéstico: 339, 445 nm.
b) Azul de bromotimol ( 25 mg/l) Pto. Isosbéstico: 325 y 498 nm.
c) Rojo Congo (14 mg/l) Pto. Isosbéstico 541 nm.
Puede también utilizarse una solución absorbente con un pico de máxima absorción como el
permanganato de potasio ( = 526 nm)
33 de 74
5.3.3.2. Control de la exactitud fotométrica.

Se pueden utilizar filtros comerciales de absorbancia conocida y certificada a longitudes de onda
dadas o específicas por ejemplo los filtro de Didimio u Oxido de Holmio o neutros. En su ausencia se
puede recurrir a soluciones con absorbancia conocida a determinadas longitudes de onda. Estas
deben cumplir con la condición de presentar un amplio pico máximo de absorbancia, alto coeficiente
de extinción molar, buena solubilidad, ser estables e independencia de la absorbancia con la
temperatura.
a) Dicromato de Potasio en Ácido Perclórico 0,001 N a 340 nm

b) Nitrato de Cobalto en Ácido Sulfúrico 0.37 N a 510 nm
c) Cianmetahemoglobina a 540 nm
En caso de hallarse errores en la exactitud que superen los límites de aceptabilidad se deben realizar
correcciones pues generalmente en esta zona del espectro se llevan a cabo lecturas absolutas para
determinación de enzimas por métodos cinéticos.
Factor de corrección:
Abs. referencia
F  100
Abs. hallada
Este factor se puede utilizar siempre que el error en la medida de absorbancia no supere el 10 % ya
que en este caso es imprescindible recurrir al servicio técnico.
5.3.3.3. Control de la precisión fotométrica:

Tomar una alícuota, por ejemplo la solución de Dicromato de Potasio empleada en el punto anterior,
en 10 porciones y medir los valores de absorbancia de cada una cuidando de colocar la cubeta en la
misma orientación. Hallar la media, la desviación estándar y el coeficiente de variación. El valor de CV
deberá ser inferior a 1 % para cubetas paralelas y 2 % para tubos de fotocolorimetría. Puede
realizarse la misma experiencia con soluciones de Nitrato de Cobalto para la zona de los 510 nm o
con soluciones de Sulfato de Cobre a 650 nm.
5.3.3.4. Control de la linealidad fotométrica.
El método más práctico consiste en preparar diluciones de determinadas sustancias y ver la
respuesta del instrumento. Se recomienda medir la linealidad a más de una longitud de onda, sobre
todo de aquellas sustancias utilizadas en los métodos de detección Química.
a) Dicromato de Potasio Acido a 340 nm.
b) p - Nitrofenol a 405 nm.
c) Nitrato de Cobalto a 510 nm.
d) Cianmetahemoglobina a 540 nm.
e) Permanganato de potasio 526 nm
Se pueden obtener situaciones como las de los siguientes gráficos.
34 de 74
Gráfico A Gráfico B
Gráfico C Gráfico D
Gráfico A: Recta ideal

Gráfico B: Buena linealidad. Diferencia de exactitud de la absorbancia.
Gráfico C: Linealidad aceptable hasta aproximadamente 1.000 UA; luego disminuye
Gráfico D: Mala linealidad en todo el rango de absorbancia (mala sensibilidad: no registra cambios
significativos de absorbancia al cambiar la concentración)
5.3.3.5. Control de la estabilidad de las lecturas.

La deriva y el ruido deben comprobarse y registrarse al menos una vez al mes por medio de la
medición de las variaciones de ABS cada 30 segundos, durante 15 minutos, tanto para un blanco de
agua de 0,000 UA como para una solución de Dicromato de ABS aproximadamente a 0,400 UA a 340
nm. Un instrumento que tenga alto ruido o deriva no debe usarse para ensayos cinéticos y cuando se
usa para métodos colorimétricos punto final con Estándares debe tenerse cuidado con el intervalo de
tiempo entre la primera y la última lectura de absorbancia.
5.3.3.6. Control de cubetas.

a) En caso de trabajar con más de una cubeta se debe verificar la homogeneidad de las
mismas. Por ejemplo, llenadas con Dicromato y llevadas en forma arbitraria a ABS =
0,400 no deben diferir entre si en una cantidad mayor de 0,004 unidades de absorbancia.
Realizar la prueba a 340nm.
b) Si el instrumento que se usa tiene un porta cubetas con más de una posición variando la
35 de 74
ubicación de la misma cubeta en el carro, no debe diferir la absorbancia en  0,002
unidades en 0.400 UA (0.400 + 0.002 UA).
5.3.3.7. Control de luz parásita.

Se puede medir introduciendo en el aparato una muestra que tenga una transmitancia del 0 %; por lo
tanto, cualquier radiación detectada e indicada en el lector corresponderá a luz espuria.
Ajustar cuidadosamente el 100 % T con agua destilada a 340 nm. Luego medir la transmitancia
aparente de una solución de NO2 Na (50g/l). El valor máximo admisible de T es de 1.0 %.
5.4. Resultados
Tabla 5-1 Espectros de absorción de las formas ácida y básica del indicador
Absorbancia
*Longitud de onda ()
Forma ácida Forma básica
320
325
330
335
340
345
350
...
550
*Variar la longitud de onda en intervalos de 5 nanómetros y de 1 nanómetro o menos cerca al punto isosbéstico
Tabla 5-2 Control de la estabilidad de lectura fotométrica

Determinación Absorbancia Determinación Absorbancia
x1 x7
x2 x8
x3 x9
x4 x10
x5 x
x6
n-1
CV
Tabla 5-3 Control de ruido y deriva

Agua destilada Solución de Dicromato
Tiempo (seg.) Absorbancia Tiempo (seg.) Absorbancia
0 0
15 15
30 30
45 45
... ...
900 900
36 de 74
Tabla 5-4 Control de cubetas
Nº de cubeta Absorbancia.
1
2
3
4
Rango
Tabla 5-5 Control de linealidad fotométrica
Estándar Absorbancia
0
1
2
3
4
5
y = ax + b
Coeficiente de correlación (r2 y r) R2 = R=
5.4.1. Cálculos de control

 Control de la longitud de onda (Incluir gráfico de espectro de barrido)
 Control de la exactitud fotométrica.- Determine el factor de corrección de las mediciones de
absorbancia
Abs.referencia
F  100
Abs.hallada
 Control de la precisión fotométrica.- Determine los valores de la desviación estándar y coeficiente
(ver cálculo estadístico)
 Control de la linealidad fotométrica.- Incluir gráfico de correlación lineal y ecuación de la recta
 Control de la estabilidad de las lecturas.- Incluir gráfico de la deriva y ruido
 Control de cubetas
 Control de luz parásita
37 de 74
Tabla 5-6 Control de calidad de un espectrofotómetro UV - VIS

Marca:
Modelo:
Fecha de Verificación:
Control de la longitud de onda
Sustancia utilizada
Punto isosbéstico
Control de la exactitud fotométrica
Sustancia utilizada:
Factor de corrección
Control de la precisión fotométrica
Desviación estándar (n-1)
Coeficiente de variación (CV)
Control de la linealidad fotométrica
Ecuación de la recta (A = Ao + KsC)
Coeficiente de correlación ( r )
Control de la estabilidad de las lecturas1
Ruido:
 Alto  Bajo
Deriva:
 Alto  Bajo
Control de cubetas
Precisión2 
Control de la luz parásita
Transmitancia de agua destilada
Transmitancia aparente de la solución de NO2Na
 Cálculo de la Desviación Estándar (n-1) de 10 medidas sucesivas en el control de la precisión

fotométrica.
 (x i  x) 2
S   n 1  i 1
N 1
 Cálculo del Coeficiente de variación (CV) para las 10 medidas.
S
CV   100%
x
 Cálculo de la sensibilidad de calibración (Ks) y del coeficiente de correlación ® de la ecuación de la
recta.
 Cálculo de la precisión en el control de cubetas.
1 Realizar el gráfico respectivo con una solución de dicromato de potasio con 0.400 UA y según resultados marcar un “X” donde
corresponda
2 Precisión determinada en diferentes posiciones del carro porta cubetas
38 de 74
 Mencionar las fuentes de error más comunes en espectrofotometría
 Analizar los datos obtenidos: precisión, exactitud, linealidad.
 Analizar los controles del espectrofotómetro
 Relación de los resultados obtenidos con la bibliografía.
5.6. Conclusiones
 Reportar el punto isosbéstico y los controles correspondientes
5.7. Cuestionario
 Señales y ruido: relación entra señal y ruido, fuentes de ruido en los análisis instrumentales.
 Linealidad, repetibilidad o repetitividad.
 Presición y exactitud
5.8. Bibliografía
[1]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 153161, 318–333.
[2]. SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta. Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p.
5259, 142155, 160164.
[3]. SKOOG, D., HOLLER, J. y NIEMAN, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental 5ta. Edición.
Mc Graw – Hill. Madrid. p. 211, 103–115, 146–149, 151–155, 163–167, 177–181.
39 de 74
Título: Fotocolorimetría
6.1. Objetivos
 Realizar determinaciones colorimétricas mediante el empleo de tubos de Nessler y el colorímetro
de Duboscq.
 Determinar el funcionamiento del espectrofotómetro
 Establecer la longitud de onda de máxima absorbancia del KMnO 4 en solución.
 Obtener los siguientes gráficos:
A vs c
A vs λ (para el estándar tres)
%T vs c
 Determinar el contenido de manganeso en una muestra de suelo

El manganeso presente en el suelo se extrae mediante una fusión con KHSO4, luego por oxidación
con peryodato de potasio, el color resultante del permanganato de potasio obtenido se compara con
estándares y se determina su absorbancia a una longitud de onda de 526 nm donde se produce su
máximo de absorción


 Tubos de Nessler
 Balones aforados
 Baño de agua
 KMnO4 0.1 N
 KIO4
 KHSO4
 H2SO4 0.25N
 H3PO4 0.25N
 Mezcla ácida (H2SO4 + H3PO4)
 Agua estabilizante (mezcla
ácida+0.1gKIO4
40 de 74
6.3.3.1. Estándares
Preparar una serie de estándares como se indica en la tabla 6-1
6.3.3.2. Realización de lecturas:
 Comparar visualmente el juego de estándares en los tubos Nessler, comparar la muestra

obtenida con estos estándares.
 En el espectrofotómetro, calibrar a 526nm de longitud de onda y medir la absorbancia y/o el
porcentaje de transmitancia de los estándares y muestra.
6.3.3.3. Muestra
Preparar la muestra de suelo según las siguientes instrucciones

 Pesar (exactamente) en balanza analítica alrededor de 0,1g de suelo, pasar a un tubo de ensayo
pyrex seco y agregar 0,5g de KHSO4, mezclar y fundir en un mechero.
 Calentar con 5ml de H2SO4 0,25 N en baño María, filtrar y luego lavar con 5ml de mezcla ácida.
Agregar 0,25g de KIO4, llevar a ebullición por 30 segundos en un mechero sin derramar la
muestra.
 Calentar en baño maría por 15 minutos y diluir a 50,0ml con agua estabilizante. El color resultante
comparar con los estándares. De ser necesario hay que realizar diluciones.
 Hacer lecturas con el estándar más cercano en el colorímetro de Duboscq, luego determinar la
absorbancia o la transmitancia de la muestra a las longitudes de onda de 530 y 620nm en el
fotocolorímetro y, en el espectrofotómetro realizar las lecturas a 526 nm
6.4. Resultados
Tabla 6-1 Preparación de los estándares de trabajo
Estándares ml. KMnO4 0,001N ml. H2O estabilizante
0 0 50
1 6 44
2 12 38
3 18 32
4 24 26
Tabla 6-2 Valores de absorbancia y transmitancia para los estándares y muestra a diferentes
longitudes de onda
A530 T530 A620 T620

St.
Espectrofotómetro Espectrofotómetro
0
1
2
3
4
M
41 de 74
Tabla 6-3 Valores de absorbancia y transmitancia para el estándar tres a diferentes longitudes de
onda
Estándar 3
nm %T A
420
470
530
620
670
6.4.1. Absortividad molar

Tabla 6-4 Cálculo del coeficiente de absortividad molar y absortividad especifica a cada longitud de
onda
Estándar 3
(nm)
Absortividad molar Absortividad específica
(mol.L-1.cm-1) (mg.L-1.cm-1)
420
470
530
620
660
Tabla 6-5 Cálculo de absortividad a una longitud de onda de 535nm (o la más cercana)
St. Σ(535nm)
Absortividad Molar
0
1
2
3
4
6.4.2. Concentración de los estándares:
42 de 74
Tabla 6-6 Cálculo de la concentración de los estándares
Estándar g Mn/ml g KMnO4/ml ppm Mn ppm KMnO4 ppm MnO2
0
1
2
3
4
5
6.4.3. Concentración de Mn en el suelo, expresado:
a. Como % de Mn y ppm de Mn, ppm de KMnO4, ppm MnO2

b. En meq de Mn /100g de suelo.
c. Suponiendo una capa arable de 15cm de espesor y la densidad del suelo = 2,65 g/cm3;
expresar en Kg. de Mn por hectárea de suelo.
Tabla 6-7 Cálculo de la concentración de Mn en la muestra

Concentración Colorímetro de Duboscq Espectrofotómetro
Mn (%)
Mn (ppm)
KMnO4 (ppm)
MnO2 (ppm)
Mn (meq/100g suelo)
Mn (Kg/Ha suelo)
6.4.4. Cálculo Estadístico
 Promedio x
 Desviación estándar  n 1
 % Mn  3 n-1
Tabla 6-8 Tratamiento estadístico
Grupo Espectrofotómetro
% Mn
1 x1
2 x2
3 x3
4 x4
Promedio x
Desviación estándar  n 1
Resultado x  2 n 1
43 de 74
 Mencionar las fuentes de error instrumental de la práctica

 Analizar los datos de coeficientes de absortividad molar, relacionándolos con valores tabulados
6.6. Conclusiones
 Reportar la concentración de manganeso presente en la muestra de suelo con su
correspondiente variación.
 Concluir en base a los objetivos de la práctica.
 Reportar la longitud de onda máxima del permanganato de potasio obtenido.
6.7. Cuestionario
 Fundamento de la absorción molecular de la radiación electromagnética ¿por qué las sustancias
presentan coloración?
 Definición de Absorbancia y Transmitancia
 Diseño y funcionamiento del colorímetro de Duboscq, fotómetro de filtro.
 Métodos de medición de la absorción de la radiación:
a) Método de las series patrón
b) Método de compensación
6.8. Bibliografía
[1]. AYRES, G.(1970). Análisis Químico Cuantitativo 2da Edición. Harla. México. p. 463–471
México. p. 13.
6678, 84, 142147.
México. p. 103115.
44 de 74
Título: Espectrofotometría visible
7.1. Objetivos
 Examinar y operar el espectrofotómetro
 Determinar hierro en una muestra por el método de la ortofenantrolina
 Familiarizarse con los diferentes métodos que existen para el cálculo de la concentración por
espectrofotometría. Ley de Beer.

Tres moléculas de ortofenantrolina (1-10 fenantrolina) reaccionan con los iones ferrosos formando un
complejo de color anaranjado que obedece a la Ley de Beer y cuya máxima absorción se produce a
510nm. Se utiliza también ácido ascórbico para reducir el Fe 3+ a Fe2+, o en su defecto se puede
utilizar gotas de clorhidrato de hidroxilamina. Pueden interferir los iones Cobre, cinc y níquel.

Observar el reglamento establecido en las páginas de la 4 a 6

- Espectrofotómetro
- Balones aforados
- Pipetas
- Cubetas limpias
- Agua destilada
- Fe (NH4)2(SO4)2. 6H2O (Sal de Mohr)
- Buffer de pH 4-5 (pesar 16,5g de NaOAc, añadir 11,4ml de HOAc y aforar 100ml)
- Solución de ácido ascórbico 10% ó sulfito de sodio 5% (no pesar en papel aluminio el sulfito)
- Solución de ortofenantrolina 0.25%
7.3.3.1. Preparación de los estándares
 A partir de la sal de Mohr preparar una solución que contenga 1000ug Fe/ml y a partir de esta una
solución patrón de 10ug Fe/ml.
 De esta última (solución patrón), preparar la siguiente serie de estándares indicada en la tabla
Tabla 7-1 Preparación de los estándares de hierro
St. Soln. Patrón Ac. Ascórbico Buffer Ortofenantrolina H2O Vol. Final
ml ml ml ml ml
0 0,0 0,5 1,0 1,0 12,5 15,0

1 0,6 0,5 1,0 1,0 11,9 15,0
2 1,3 0,5 1,0 1,0 11,2 15,0
3 2,5 0,5 1,0 1,0 10,0 15,0
4 5,0 0,5 1,0 1,0 7,5 15,0
5 10,0 0,5 1,0 1,0 2,5 15,0
 Determinar los valores de % de transmitancia y Absorbancia a 510nm de cada estándar y la

muestra en el espectrofotómetro y en el colorímetro.
45 de 74
7.3.3.2. Preparación de la muestra problema

Las muestras disponibles contienen alrededor de 3-6 ppm de Fe (*), hacer los cálculos necesarios
para tomar un volumen adecuado de muestra y que las mismas presenten una absorbancia que se
encuentre en la mitad de la curva de calibración. Las muestras deben recibir el mismo tratamiento que
los estándares, una vez hecho esto determinar la A y %T en los 2 equipos, tanto de los estándares
como en las muestras.
(*) Para los cálculos considérese un contenido promedio de 4,5 ppm en las muestras.
7.4. Resultados
Tabla 7-2 Valores de comparativos de absorbancia y transmitancia
Espectrofotómetro
St. µgFe/ml
Absorbancia Transmitancia
0
1
2
3
4
5
M
7.4.1. Solución patrón

Cálculo de la cantidad de sal de Mohr necesaria para preparar la solución patrón de 1000µg/ ml de
hierro.
7.4.2. Concentración de hierro
Cálculo de la concentración de hierro en los estándares (un solo cálculo modelo)
7.4.3. Curva de calibración

Ajuste de los datos a una recta del tipo: y= a + b x
Tabla 7-3 Corrección de los valores de absorbancia
Absorbancia
(Shimadzu)
Estándar
Experimental Corregido
0
1
2
3
4
5
7.4.4. Coeficiente de absortividad molar y absortividad especifica

 Cálculo del coeficiente 
media.
7.4.5. Cálculo de la cantidad de hierro en la muestra por los siguientes métodos:

 Interpolación gráfica
 Interpolación analítica (Recta ajustada A = A0 + KsC)
 Cálculo de las concentraciones utilizando  y α comparando con el estándar más cercano

46 de 74
Tabla 7-4 Cálculo de los valores de absortividad específica

St g Fe/ml Molaridad Espectrofotómetro
Fe α (l / mg cm)  (l / mol cm)
1
2
3
4
x
Cálculo de la sensibilidad y límite de detección para el método.

Reportar:
 % de Fe en el agua potable
 Coeficiente α
 Coeficiente ε
Reportar todos los resultados como
% de Fe en agua ± 2  N 1
Tabla 7-5 Cálculo estadístico
Método % Fe (agua potable)   Ks LD
Espectrofotómetro
 Mencionar las fuentes principales de error, y como afectaría directamente en los resultados
experimentales.
 Aplicaciones de la ley de Beer
 Indicar la diferencia metodológica entre espectrofotometría visible y ultravioleta.
7.6. Conclusiones
 Reportar la concentración de hierro existente en la muestra con su correspondiente variación

estadística
 Analizar los resultados obtenidos: Límite de detección, cuantificación, linealidad del método,
precisión, sensibilidad analítica.
7.7. Cuestionario
 Diseño y funcionamiento de un espectrofotómetro de un solo haz y de doble haz
47 de 74
7.8. Bibliografía
164170.
Mc Graw – Hill. Madrid. p. 165–186, 337–347.
48 de 74
Título: Análisis espectrofotométrico de una mezcla
8.1. Objetivos
 Estudiar las aplicaciones de la ley de Beer.

 Conocer los métodos de análisis de mezclas absorbentes de dos o más componentes.
 Realizar la determinación simultánea de una mezcla de soluciones de Dicromato y permanganato
de potasio.
La absorbancia total de una solución a cualquier longitud de onda es igual a la suma de las
absorbancias de los componentes individuales de la solución. Esta relación en principio permite
determinar las concentraciones de los componentes individuales de una muestra incluso si existe
solapamiento total de sus espectros, gracias a esto es posible analizar simultáneamente una mezcla
de dicromato y permanganato de potasio.
A total = A K2Cr2O7 + A KMnO4

8.3.2. Materiales y reactivos:
- Balones aforados de 50 ml
- Bureta de 25 ml
- Balanza
- Acido sulfúrico 0,5M
- Agua estabilizante
- KMnO4 4,0 x 10-3M en ácido sulfúrico 0,5M (estabilizada con KIO4)
- K2Cr2O7 1,00 x 10-2M en ácido sulfúrico 0,5M
8.3.3.1. Preparación de las soluciones:

Preparar las soluciones siguientes por disolución a volumen exacto a partir de las soluciones
originales:
 Solución A: En un balón de 50,0ml preparar una solución 4,0 x 10 -4M de KMnO4 en ácido sulfúrico
0,5M.
 Solución B: Diluir una porción de la solución A con un volumen igual de ácido sulfúrico 0,5M.
 Solución C: Diluir una porción de la solución B con un volumen igual de ácido sulfúrico 0,5M.
 Solución D: En un balón de 50,0 ml preparar una solución de 1,00 x 10 -3 M K2Cr2O7 en ácido
sulfúrico 0,5M.
 Solución E: Diluir una porción de la solución D con un volumen igual de ácido sulfúrico 0,5M.
 Solución F: Diluir una porción de la solución E con un volumen igual de ácido sulfúrico 0,5M.
 Solución G: En un balón de 50,0 ml preparar una solución que sea 2,0 x 10 -4 M de KMnO4, 5,0 x
10 –4 M de K2Cr2O7 y afórese con solución 0,5M en ácido sulfúrico.
 Solución problema: diluir la solución problema a 50,0 ml.
 Medir la absorbancia de cada una de las soluciones anteriores, de A hasta G, y la de la disolución
problema, contra ácido sulfúrico 0,5M como referencia, a 526nm y a 440nm.
49 de 74
8.4. Resultados
8.4.1. A partir de las absorbancias medidas de las soluciones A, B y C, calcular la absortividad molar
del KMnO4 y la media de los tres valores a 526 y a 440nm.
Tabla 8-1 Cálculo de la absortividad molar del KMnO 4 a dos longitudes de onda
Solución Vol. Inicial Vol. Final Concent A , 526nm A  440nm
(ml) (ml) (mol /l) 526nm (l /mol cm) 440nm (l /mol cm)
A
B
C
 
8.4.2. A partir de las absorbancias de las soluciones D, E y F, calcular la absortividad molar de
K2Cr2O7 y la media de los tres valores a ambas longitudes de onda.
Tabla 8-2 Cálculo de la absortividad molar del K2Cr2O7 longitudes de onda

Solución Vol. Inicial Vol. Final Concent A , 526nm A  440nm
(ml) (ml) (mol /l) 526nm (l /mol cm) 440nm (l /mol cm)
D
E
F
 
8.4.3. Para la solución G, compárese la absorbancia medida a cada una de las longitudes de onda,
con la suma de las absorbancias de los componentes aislados a las mismas concentraciones:
¿son aditivas las absorbancias con el margen de error experimental?
Tabla 8-3 Comparación de de las absorbancias de la solución G, con la suma de las absorbancias de
los componentes.
A A
526nm 440nm
Solución G
(Solución B + Solución E)
8.4.4. Calcular la concentración de cada uno de los componentes en la muestra problema (después
de diluir a 50,0 ml para la medida); informar los resultados en concentraciones molares de
KMnO4 y de K2Cr2O7 y también en ppm de manganeso y de cromo.
Tabla 8-4 Cálculo de la concentración de la solución problema

Concentración Solución Problema
KMnO4 (mol / l)
K2Cr2O7 (mol / l)
Mn (ppm)
Cr (ppm)
50 de 74

 Indique las fuentes de error asociadas a los instrumentos de análisis de espectrometría molecular,
discuta la influencia de la calidad de los componentes y circuitos eléctricos, señales, ruido, manejo de
las muestras y fuentes de incertidumbre.
 Analizar la Comparación de de las absorbancias de la solución G, con la suma de las
absorbancias de los componentes.
 Aplicaciones de la ley de Beer
8.6. Conclusiones
 Reportar las concentraciones molares de permanganato y dicromato de potasio en la solución
problema y analizar su valor.
 Indicar la Variación que existe entre la suma de las absorbancias de los componentes con la
solución G.
8.7. Cuestionario
 Análisis de mezclas de sustancias absorbentes: determinación simultánea de dos o más

componentes.
8.8. Bibliografía
[1]. AYRES, G. (1970). Análisis Químico Cuantitativo 2da Edición. Harla. México. p. 491–493, 671–
674.
México. p. 10–11.
189–190.
Mc Graw – Hill. Madrid. p. 325–328.
México. p. 112–115.
51 de 74
Título: Determinación del pH de una solución reguladora
9.1. Objetivos
 Determinar espectrofotométricamente el pH de una mezcla reguladora.
Las absortividades de las formas ácida y básica conjugada de un indicador se miden a dos longitudes
de onda diferentes. En una solución reguladora problema se determina la concentración de cada
forma a las dos longitudes de onda; la concentración del ión hidronio se puede calcular a partir de
esos datos.
La relación entre las dos formas de verde de bromocresol en solución acuosa se puede describir por
el equilibrio:
HIn + H2O In- + H3O+
Amarillo azul
Para la que: K a  1.6 x10 5


H O In 
3
 
HIn
La medida espectrofotométrica de In- y HIn- permite el cálculo de H3O+.


- Balanza
- Buretas de 50,0ml
- Balones de 100,0ml
- HCl 0,4F
- NaOH 0,4F
- Verde de bromocresol
9.3.3.1. Preparación de las soluciones

 Verde de bromocresol. Disolver 100mg de indicador en 1,45ml de NaOH 0,01N y luego diluir
hasta 100ml con agua destilada.
 HCl 0,4F. Diluir unos 7ml de HCl concentrado hasta alrededor de 200ml
 NaOH 0,4 F. Disolver unos 3g de NaOH en 200ml de destilada o desionizada.
9.3.3.2. Determinación de los espectros de absorción individuales

 Transferir alícuotas de 1,0ml de la solución madre del indicador verde de bromocresol a dos
matraces aforados de 25,0ml
 Añadir a uno 5,0ml de HCl 0,4 F, y al otro añadir 5,0 de NaOH 0,4 F.
 Diluir cada uno hasta el enrase, mezclar bien.
52 de 74
 Obtener los espectros de absorción, entre 400 y 650nm para las formas ácida y básica
conjugadas del indicador, utilizando agua como blanco.
 Registrar los valores de las absorbancias a intervalos de 10nm, y si es necesario a intervalos
menores para definir los máximos y los mínimos.
 Calcular la absortividad para cada especie a las longitudes de onda que corresponden a sus
máximos de absorción.
9.3.3.3. Determinación del pH de una solución reguladora problema

 Transferir una alícuota de 1,0ml de la solución madre del indicador verde de bromocresol a un
matraz aforado de 100,0ml
 Añadir 20,0ml de la solución reguladora problema.
 Diluir hasta el enrase y medir la absorbancia de la solución diluida a las longitudes de ondas para
las que se calcularon los datos de absortividad.
9.4. Resultados
Tabla 9-1 Espectros de absorción de la forma ácida del indicador
Longitud de onda () % Transmitancia Absorbancia
400
410
420
……
650
Tabla 9-2 Espectros de absorción de la forma básica del indicador
Longitud de onda () % Transmitancia Absorbancia
400
410
420
……
650
9.4.1. Calcular el pH de la solución reguladora.

 En base a los cálculos y resultados analice la información y relaciónela con los postulados teóricos
que corresponden a la técnica analítica.
 Indique cuales pueden ser las causas de error más probable en caso de que los resultados se
alejen de los valores teóricos.
 Analizar el porqué de la utilización del indicador verde de bromo cresol con su correspondiente
rango de pH
9.6. Conclusiones
 Reportar el pH de la solución amortiguadora
 Que es el punto isosbéstico
9.7. Cuestionario
 Intervalo de pH de cambio de color del indicador
 Constantes físicas y químicas del verde de bromocresol
53 de 74
9.8. Bibliografía
[1]. AYRES, G.(1970). Análisis Químico Cuantitativo 2da Edición. Harla. México. p.
[2]. LIDE, D. (2006). Handbook of Chemistry and Physics 86ta. Edición. CRS Press. p.3-60 – 3-61, 8-
16.
[4]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 312–317.
189–190.
Mc Graw – Hill. Madrid. p. 325–328.
[7]. SKOOG, D. y WEST, D.(2001). Química Analítica 7ma. Edición. Mc Graw – Hill. México. p. 788–
789.
México. p. 112–115.
54 de 74
Título: Determinación de la composición de complejos
10.1. Objetivos
 Estudiar los campos de aplicación del análisis por absorción.

 Conocer los métodos espectrofotométricos para la determinación de complejos.
La técnica de la razón molar es un método en el cual se puede determinar el número de ligandos en

un complejo con el ión central. Se prepara una solución de concentración conocida del ión central y
se le agrega en pociones el formador de complejo; después de cada adición se determinan las
absorbancias hasta que no aparezca aumento alguno en ellas, lo que, por lo general, dará una curva
del tipo indicada por la línea continua de en la figura 1. Sin embargo, si el complejo se disocia
considerablemente, la curva obtenida, indicada por la línea de trazos varía apenas en su pendiente,
haciendo casi imposible la interpretación de los resultados.
Con el método de las variaciones continuas, el número de moles presentes se mantiene constante.
Esto es, si se mezclan 2ml de una solución (0.01M) y 8ml de otra de igual concentración, todas las
otras determinaciones deberán tener siempre un volumen total de 10ml, por ejemplo 3 y 7, 6 y 4, etc.
En este caso se traza una gráfica de la absorbancia en función de la fracción molar del ión central. En
la figura 2 se muestra el tipo de curva correspondiente. La absorbancia aumenta a medida que se
forma más complejo alcanzando un máximo cuando se llega a la relación estequiometria,
descendiendo luego en virtud de la insuficiente cantidad del ión formador de complejo.
Fig. 2
Fig. 1
M + nL 
 MLn


- Balanza analítica
- Balones de 50,0ml
- Bureta
- Ácido sulfúrico 6M
- Hidroquinona
- Ácido clorhídrico
55 de 74
- Sal de Mohr
10.3.3.1. Preparación de los reactivos
Disolución de reserva A: Ion ferroso 0,01 M. Disolver 3,92g de FeSO4(NH4)2SO4.6H2O para análisis
en agua, añadir 1 ó 2ml de ácido sulfúrico 6M y diluir a un litro.
Disolución de reserva B: 1,10 fenantrolina 0,01 M. Disolver 1,98g del monohidrato en la menor
cantidad posible de etanol y diluir con agua a un litro.
Hidroquinona en disolución acuosa al 1%.
Ácido clorhídrico 0,1M.
Método de las variaciones continuas (tabla 10-1)
Preparación de las soluciones:
 Utilizando matraces volumétricos preparar una disolución exacta 1:10 de la solución A y de la B;
etiquetar estas soluciones con C y D, respectivamente.
 Utilizando buretas o pipetas graduadas, preparar en balones de 50,0ml las mezclas siguientes:
8,0ml de C + 2,0ml de D
 Añadir a cada solución 1,0ml de hidroquinona al 1% y 0,5ml de ácido clorhídrico 0,1M y diluir con
agua a 50,0ml. Homogeneizar las soluciones y dejarlas en reposo durante una hora a la
temperatura ambiente.
Medida:
Poner el espectrofotómetro a 508nm y determinar la absorbancia de las soluciones anteriores en la
forma habitual, utilizando agua como blanco.
Representación gráfica y cálculos:

 Con los datos obtenidos para las soluciones 1 a 8, representar la absorbancia en eje de
ordenadas contra la fracción molar de D en abscisas (figura 2). Trazar una curva continua que
recoja los puntos experimentales. Extrapolar los segmentos de la curva a un punto de
intersección y anotar el valor de la absorbancia en este punto; ¿cómo se compara con la
absorbancia medida para la solución 9?
 Deducir la composición del complejo expresándolo en número de moles de 1,10 fenantrolina que
reacciona con un mol de Fe++.
 Utilizar la absorbancia de la solución 9 y la absorbancia de la solución que en la serie anterior
corresponde a la composición del complejo para calcular la constante de formación del complejo
fenantrolina-ferrosa. Comparar el valor calculado con el valor tomado de la literatura. Explíquese
la posible discrepancia.
Método de la razón molar (tabla 10-2)

Preparación de las soluciones:
 En todos los balones de 50,0ml que forman la serie de nueve, poner 2,0ml de la solución C y
56 de 74
añadir después a cada uno respectivamente, 2.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 10.0, 12.0 y 15.0ml de la
solución D.
 Añadir a todos y a cada uno de los matraces 1,0ml de hidroquinona al 1% y 0,5ml de ácido
clorhídrico 0,1M y diluir después hasta el enrase con agua destilada, mezclando bien las
soluciones. Dejar en reposo las soluciones durante una hora.
Medida:
 Medir las absorbancias de las disoluciones a 508nm, contra agua.
Representación gráfica y cálculos:

 Representar la absorbancia en función del número de moles de 1,10 fenantrolina por mol de Fe ++
(Figura 1: Con este fin puede tomarse el volumen de la solución que se ha añadido por cada
volumen de solución C, en lugar de utilizar las concentraciones molares; ¿por qué?).
 En la gráfica, deducir el número de moles de 1,10-fenantrolina que reaccionan con un mol de Fe ++
para formar el complejo.
 Utilizar la absorbancia de la última solución (15ml de D / 2ml de C) y la absorbancia de la solución
que corresponde a la relación molar en la reacción para calcular la constante de formación del
complejo. Comparar este valor con el determinado en la parte a y con el que se encuentra en
literatura.
Notas:
 Si se van a realizar las partes A y B de este experimento, preparar 100ml de la solución C y 200 o
250ml de la solución D. Si solo va a realizarse la parte a, preparar 50ml de la solución C y 100ml
de la solución D.
 La absorbancia de la solución 9, que contiene un gran exceso de 1,10-fenantrolina, representa la
conversión completa de Fe++ en complejo. Localizar su posición en la gráfica de la parte a.
 La fracción molar de D=D / (C + D); los volúmenes tomados para la preparación de las
soluciones pueden utilizarse como si realmente fueran concentraciones.
10.4. Resultados
Tabla 10-1 Método de las variaciones continuas:

Solución C Solución D Hidroq. 1% HCl 0.1M Vf. Fracción Absorbancia
ml ml ml ml ml de D
8.0 2.0 1.0 0.5

6.0 4.0 1.0 0.5
4.0 6.0 1.0 0.5
3.0 7.0 1.0 0.5
2.5 7.5 1.0 0.5
2.0 8.0 1.0 0.5
1.5 8.5 1.0 0.5
1.0 9.0 1.0 0.5
2.5 20.0 1.0 0.5
57 de 74
Tabla 10-2 Método de la razón molar:

Solución C Solución D Hidroq. 1% HCl 0.1M Vf. D/C Absorbancia
ml ml ml ml ml
2.0 2.0 1.0 0.5

2.0 4.0 1.0 0.5
2.0 5.0 1.0 0.5
2.0 6.0 1.0 0.5
2.0 7.0 1.0 0.5
2.0 8.0 1.0 0.5
2.0 10.5 1.0 0.5
2.0 12.0 1.0 0.5
2.0 15.0 1.0 0.5
10.4.1. Cálculo de la constante de formación de complejos:

Deducir la ecuación considerando que:
M + nL = MLn
10.4.2. Con los datos obtenidos determinar la composición del complejo hierro-ortofenantrolina por los
dos métodos

 Comparar la composición del complejo Fe-Ortofenantrolina por los dos métodos: Variaciones
continuas y razón molar ¿Existe variación significativamente considerable? Discutir el resultado.
 Diferencia entre los dos métodos aplicables para determinar el complejo
 Mencione las causas de error que pudieron afectar los resultados experimentales
10.6. Conclusiones
 Reportar la composición del complejo y el número de ligandos correspondiente.
 Concluir en base a los objetivos de la práctica y a los postulados teóricos que corresponden a la
técnica analítica
10.7. Cuestionario
 Métodos de cálculo: Razón Molar, Variaciones Contínuas
10.8. Bibliografía
[1]. AYRES, G.(1970). Análisis Químico Cuantitativo 2da Edición. Harla. México. p. 491–501, 674–
676.
México. p. 1315.
58 de 74
Título: Titulaciones fotométricas
11.1. Objetivos
 Examinar y operar adecuadamente el espectrofotómetro y el proceso de titulación fotométrica.
 Titular fotométricamente vinagre con NaOH utilizando como indicador el p-nitrofenol.

En el sistema estudiado, el indicador p-nitrofenol en medio básico (>7,6), absorbe fuertemente la
radiación de 410nm permitiendo la titulación de un ácido débil con una base fuerte.


- 2 buretas
- Balones
- 4 Matraces de erlenmeyer de 250 y 125 ml
- Pipetas volumétricas de 1 y 10ml
- Vinagre comercial * (2-5% de ácido acético)
- NaOH 0,1M
- P-nitrofenol (sol.)
- Agua destilada
- Agitador magnético
- Magneto
(*) Preparar la muestra diluyendo 10ml de vinagre en un balón de 100ml y de aquí tomar las muestras
para titular.
11.3.3.1. Método clásico
 Titular 10 ml de vinagre con NaOH 0.1 M utilizando fenolftaleína como indicador. Determinar los
ml. de titulante en el punto de equivalencia y calcular la concentración de ácido. Por el método
clásico podemos conocer cuál es el volumen crítico, es decir el volumen de NaOH al que se
produce la neutralización.
11.3.3.2. Método fotométrico

 Medir 5 ml de vinagre diluido y agregarlos a la cubeta, añadir 25 ml de agua y 1 ml de indicador,
agregar todos estos reactivos a un matraz erlenmeyer de 125 ml, conjuntamente con suficiente
agua para que el agitador magnético pueda agitar la solución. Seleccionar la longitud de onda a
410 nm, y llevar al 100% de la transmitancia. Agregar desde la bureta NaOH 0.1 M, con
incrementos según indicaciones, esperar a que la aguja se estabilice y medir el % de
transmitancia. Al llegar al volumen crítico debe agregarse titulante con intervalos de 0.2 ml o
menos.
Terminar la titulación cuando la absorbancia comienza una tendencia a estabilizarse. El volumen

mínimo de solución necesario para medir es 15.0 ml. De lo contrario se debe añadir agua. En el
caso de utilizar el agitador magnético, cada vez que se agregue titulante agitar bien y trasvasar
pequeñas cantidades de muestra a las celdas del espectrofotómetro, medir la transmitancia (o
absorbancia o ambos) y luego devolver las muestras al agitador con cuidado de no perder muestra
y continuar la titulación.
59 de 74
11.4. Resultados
Tabla 11-1 Método Clásico
Determinación Alícuota de muestra V NaOH 0,1M
(ml) Gastado (ml)
1
2
3
4
Tabla 11-2 Método Fotométrico

NaOH 0,1M %T A A*
(ml) (leída) (corregida)
0,0
1,0
2,0
---
---
---
5,0ml vinagre + 1,0ml Sol. Indicador + 10ml de H2O
V  v 
Aˆ corregida  Aleida   
 V 
V  volumen inicial
v  volumen de titulante añadido
11.4.1. Cálculo de la molaridad y porcentaje de ácido acético del vinagre por el método clásico.
Tabla 11-3 Cálculo de la concentración de ácido acético del vinagre
Determinación Vol. HO – Ac Vol. NaOH 0,1M M % P/V
(ml) (ml) HO – Ac HO – Ac
1
2
3
4
x
ts
LC  x 
n
11.4.2. Cálculo de la molaridad y porcentaje de ácido acético del vinagre por el método fotométrico,
mediante los puntos de equivalencia en los gráficos.
Página 60 de 74
Gráficos:
T A
Vtit (ml) Vtit (ml)
A  A
V V
Vtit (ml) Vtit (ml)
Tabla 11-4 Resultados de la titulación
A ' ' A
VNaOH (ml) ΔV %T A ΔA
V V
Página 61 de 74

 Comparar los dos métodos de titulación: clásico y fotométrico.
 Indique que método es mejor para determinar la concentración de ácido acético en vinagre
 Mencione las fuentes de error que pueden generar resultados variables.
 Porcentaje de error presente en los dos métodos, en base a la concentración encontrada en el
envase de vinagre.
11.6. Conclusiones
 Reportar las concentraciones de ácido acético en la muestra de vinagre con su respectivo
porcentaje de error.
 Determinar el punto de equivalencia.
11.7. Cuestionario
 Curvas de valoración fotométrica típicas
11.8. Bibliografía
[1]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 147148,
153161.
[2]. SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta. Edición. Mc Graw – Hill. Madrid.
p. 192194.
[3]. SKOOG, D., HOLLER, J. y NIEMAN, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental 5ta.
Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 372–374.
Página 62 de 74
Título: Espectrofotometría ultravioleta
12.1. Objetivo
 Determinar la concentración de cloranfenicol en una forma farmacéutica.
El cloranfenicol es una sustancia que absorbe fuertemente la radiación UV produciendo un máximo

a 278nm, esto nos permite realizar una valoración de cualquier forma farmacéutica que declare
contener este principio activo (PA).
HO Cl
NH
Cl
O O
Cloranfenicol
Soluc. 5% en etanol de 95º
Solubilidad en agua (25°C) = 2.5mg/ ml
Mol = 323.13 (C11H12Cl2N2O5)

λ = 278nm

– Espectrofotómetro UV/VISIBLE
– Balones aforados
– Pipetas
– Vasos de precipitación
– Agua destilada
– Cápsulas cloranfenicol
– Cloranfenicol Q. P.
 Pesar unas 10 tabletas o cápsulas (el polvo) de cloranfenicol de cualquier casa farmacéutica.
Obtener el peso promedio de 10 tabletas o cápsulas.
Página 63 de 74
 Según la cantidad de P. A. declarada en la etiqueta por el fabricante, preparar una solución de

aproximadamente 200ppm de cloranfenicol en agua, filtrar y a partir de esta preparar una
muestra de aproximadamente 20 ppm.
 Leer el %T y la A de esta solución a una longitud de onda de 278nm utilizando agua destilada
o metanol como blanco.
12.3.3.1. Preparación del estándar

 Preparar una solución (100 ml) de cloranfenicol Q. P. de concentración 200ppm. A partir de
ésta preparar un estándar de 20 ppm. Leer el % de T y la A de esta solución.
 Preparar también una serie de estándares: 0, 5, 10, 20, 30, 40 ppm
12.4. Resultados
Tabla 12-1 Mediante comparación con un solo estándar
Fabricante
Presentación
Nombre comercial
Cantidad declarada
Pesos promedio de las cápsulas
Cantidad pesada para el análisis
Volumen de aforo
Alícuota para la dilución
Volumen final
%T =
A=
Cantidad determinada
Tabla 12-2 Mediante una curva de calibración:
Estándar Cloranfenicol (ppm) Absorbancia

1
2
3
4
M
12.4.1. Valoración del cloranfenicol y reportar como mg de cloranfenicol por tableta o cápsula.
12.4.2. Cálculo de % de cloranfenicol encontrado con respecto al contenido declarado.
12.4.3. Deducción de una(s) fórmula(s) que permitan obtener el % de cloranfenicol utilizando el
peso promedio de las cápsulas o tabletas.
12.4.4. Deducción de una fórmula que permita obtener mg de P. A. por tableta o cápsula.

 Mencione las fuentes de error instrumental en la práctica y como afecta en los resultados
obtenidos.
 Razón por la que se utiliza celdas de cuarzo a diferencia de las de plástico o vidrio.
 En base a los cálculos y resultados analice la información y relaciónela con los postulados
teóricos que corresponden a la técnica analítica.
12.6. Conclusiones
 Concluya en base a los objetivos de la práctica+
 Reportar la concentración de cloranfenicol en la muestra.
 Concluya en base a los postulados teóricos comprobados en la experimentación
12.7. Cuestionario
 Espectrofotometría UV
 Principales especies químicas que absorben esta radiación
Página 64 de 74
 Aplicaciones de la espectrofotometría UV
12.8. Bibliografía
173186.
Mc Graw – Hill. Madrid. p. 334367.
Página 65 de 74
Unidad Curricular: ESPECTROSCOPÍA DE FOTOLUMINISCENCIA Y DISPERSIÓN
Título: Fluorometría
13.1. Objetivos
 Examinar y operar el Fluorómetro “COLEMAN modelo 12 C”

 Determinar tiamina en un preparado farmacéutico por el método fluorométrico.
El método fluorométrico para determinación de vitamina B1 se basa en la oxidación en medio alcalino

de la tiamina a tiocromo, el cual presenta una intensa fluorescencia azul. Este método se utiliza
principalmente para la determinación de vitamina B1 en piensos, productos de nutrición animal,
órganos, líquidos biológicos, alimentos y otros productos naturales, se aplica también en el análisis
farmacéutico, particularmente en preparaciones multivitamínicas.
Los resultados tan sólo son reproducibles en un 5-10% de acuerdo con la naturaleza de la muestra.
 Fluorómetro “Coleman 12 C”
 Vasos de precipitación
 Balones aforados
 Pipetas
 Balanza analítica
 Embudos de separación
 Tiamina P. A.
 Isobutanol (libre de impurezas fluorescentes)
 KCl (Solución ácida):25 g de KCl y 0.85 ml de HCl (37%) (Aforar a 100 ml)
 K3 [Fe (CN)6] 1%
 NaOH 15%
 HCl 0.1 N
 Sulfato de sodio anhidro
13.3.3.1. Curva de calibración
 Pesar 0,100g de Tiamina P. A. y disolver en un balón aforado de 100ml, de esta solución tomar 1ml
y aforar a 250ml, la solución resultante contiene 4μg/ml, de esta coger 1ml y aforar a 200ml, lo
importante es que al final debemos tener una solución que contenga 0.02g/ml (los aforos deberán
realizarse con HCl 0.1 N)
 La solución oxidante debe ser preparada en el momento de usar, mezclando 1ml de solución de
K3[Fe(CN)6] con 24ml de NaOH 15%
 Para la preparación de la curva de calibración se transfiere a un embudo de separación de 500mL
un volumen de 20mL de la solución patrón mas 8mL de KCl mas 3mL de solución de ferricianuro
de potasio, mezclar por un lapso de 2 minutos, dejar reposar por 2 minutos, posteriormente se
añade 20mL de isobutanol, mezclar de forma homogénea por otros 2 minutos evitando que se
emulsione, luego dejamos reposar hasta que se separe la fase orgánica y la fase acuosa, de las
cuales la fase acuosa la desechamos a través de la llave del embudo, en este paso se debe filtrar a
través de un embudo que tenga papel filtro con una pequeña cantidad de sulfato de sodio anhidro
para absorber los remanentes de la fase acuosa, y finalmente recolectar esta fracción en un vaso
de precipitación seco.
Página 66 de 74
 De la solución recolectada en el vaso de precipitación (fase orgánica) se toman 3, 6 y 9 mL para la

preparación de la curva de calibración y se afora en un balón de 10mL usando isobutanol como
disolvente.
 Preparar con la ampolla inyectable o el comprimido multivitamínico una solución de

aproximadamente 0.02μg/ml, tomando en cuenta los valores de Tiamina declarados por el
fabricante, (AFORAR CON HCl 0.1 N), de esta solución colocar 5 ml en un embudo de separación
y seguir los mismos pasos que para los estándares.
 Medir la emisión de fluorescencia y construir la curva de calibración, para finalmente interpolar el
valor de emisión de la muestra. Calibrar el equipo con isobutanol llevándolo al cero de emisión.
 Asegurarse que los filtros tanto primario como secundario sean los adecuados para la
determinación de Tiamina.
 No exponer las soluciones más de 15 segundos al paso de radiación ultravioleta.
13.4. Resultados
Tabla 13-1 Valores de fluorescencia de estándares de diferentes concentración
Estándar Concentración Fluorescencia
0
1
2
3
4
Muestra
13.4.1. Calcular el contenido de tiamina en la solución por interpolación gráfica, y por comparación con el
estándar más cercano.
Fluorescencia
Fm.
Cm ug.
13.4.2. Calcular el porcentaje de Tiamina en la forma farmacéutica analizada, comparar con el valor
declarado.
 Analizar los resultados obtenidos: sensibilidad de calibración, límite de detección, cuantificación y

linealidad del método.
Página 67 de 74
 Mencionar las fuentes de error instrumental en la práctica y como afectan en los resultados
experimentales.
que corresponden a la técnica analítica
13.6. Conclusiones
 Reportar el porcentaje de tiamina de la muestra, y comparar con su valor teórico presente en la

etiqueta.
 Concluir en base a los objetivos de la práctica.
13.7. Cuestionario
 Resolver el problema #8 del capítulo de “ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

MOLECULAR”, Skoog-West, Segunda Edición.
 Teoría de la fluorescencia
 Moléculas que presentan el fenómeno de fluorescencia.
 Relación entre la fluorescencia y la concentración.
 Aplicaciones y limitaciones.
 Sustancias fluorescentes, sustancias fosforescentes. (mínimo 5 ejemplos)
 Diseño y funcionamiento de los instrumentos.
13.8. Bibliografía
[2]. RUBINSON, K. (2001). Análisis Instrumental. Prentice – Hall. Madrid. p. 308–312.
[3]. SKOOG, D. y LEARY, J. (1994). Análisis Instrumental 4ta. Edición. Mc Graw – Hill. Madrid. p. 201–
223.
[4]. SKOOG, D., HOLLER, J. y NIEMAN, T. (2001). Principios de Análisis Instrumental 5ta. Edición. Mc
Graw – Hill. Madrid. p. 381399.
Página 68 de 74
Título: Turbidimetría y nefelometría
14.1. Objetivos
 Examinar y operar el complemento TK del espectrofotómetro Spekol 10 para mediciones
turbidimétricas.
 Determinar sulfatos en diferentes muestras por diferentes métodos.
 Familiarizarse con los métodos turbidimétricos y nefelométricos.

Los iones sulfato reaccionan con bario formando un precipitado fino de sulfato de bario, el cual es
mantenido en suspensión por medio de una solución acondicionadora. En estas condiciones se cumple
una relación lineal entre la turbidez y la concentración.


 Espectrofotómetro
 Pipetas
 Cristales de BaCl2.2H2O
 Solución patrón de 100ppm de (SO4)2- (NaSO4)
 Reactivo Acondicionante: 75,0g NaCl + 30,0ml HCl © (agitar) + 100ml de etanol + 50,0ml de
glicerina, y aforar a 500ml.
14.3.3.1. Preparación de la curva de calibración
 A partir de la solución de 100 ppm de sulfatos preparar la siguiente serie de estándares según la
tabla 14-1
Tabla 14-1 Curva de calibración (turbidimetría)

Sol. Patrón Agua destilada Sol. Acondicionante
Estándar
(ml) (ml) (ml)
0 0,0 10,0 0,5
1 1,0 9,0 0,5
2 2,0 8,0 0,5
3 4,0 6,0 0,5
4 6,0 4,0 0,5
5 7,0 3,0 0,5
 Seleccionar a 400nm la longitud de onda en el espectrofotómetro.

 Al estándar “0” (blanco) agregar 0.5ml. de solución de cloruro de bario al 10%, agitar con una varilla
por 30 segundos e inmediatamente pasarla a una cubeta del espectrofotómetro. Calibrar a 100% T
y 0 de absorbancia. Controlar el tiempo que se ha requerido para realizar la lectura fotométrica.
 Al estándar 1 agregar 0.5ml. de solución de cloruro de bario al 10%, agitar a igual velocidad y por el
mismo tiempo que para el blanco, y luego determinar el % de T y la T en el espectrofotómetro,
controlando que el tiempo necesario para hacer la lectura no sea mayor que el requerido para el
estándar 0.
 Proceder de idéntica manera con los demás estándares, asegurando que la velocidad de agitación,
Página 69 de 74
 el tiempo de agitación, el tiempo para la lectura fotométrica, sea reproducible para todos los
estándares.
 AGUA POTABLE
 Medir 10,0ml. de agua potable filtrada, añadir 0.5ml. de la solución acondicionadora y agregar
0.5ml. de solución de cloruro de bario al 10%. Proceder de idéntica manera que los estándares y
finalmente determinar el % de T.
Tabla 14-2 Preparación de la curva de calibración (nefelometría)
Estándar Sol. Patrón (ml) Agua destilada (ml) Sol. Acondicionante (ml)
0 0,0 10,0 0,5

1 1,0 9,0 0,5
2 2,0 8,0 0,5
3 4,0 6,0 0,5
4 6,0 4,0 0,5
5 8,0 2,0 0,5
 Proceder de idéntica forma que para la turbidimetría, excepto que las lecturas se harán con el
espectrofotómetro
 Para la MUESTRA tomar la décima parte (1.0 ml)
14.4. Resultados
Tabla 14-3 Turbidimetría
Estándar Sol. Patrón (ml) V. Final ppm SO4 %T Turbidez

0 0,0 10,5
1 0,5 10,5
2 1,0 10,5
3 2,5 10,5
4 5,0 10,5
5 7,5 10,5
Muestra
Tabla 14-4 Nefelometría

Estándar Sol. Patrón (ml) V. Final ppm SO4 Unidades de
Turbidez
0 0,0 10,5
1 0,5 10,5
2 1,0 10,5
3 2,5 10,5
4 5,0 10,5
5 7,5 10,5
Muestra
Turbidez:  = log ( T o )
T
 Graficar  vs. C en ambos casos. Interpolar.
Calcular:
Página 70 de 74
 Concentración de sulfatos (ppm) en los estándares.

 Determinación de la concentración de sulfatos en las muestras por interpolación gráfica con los dos
métodos; ppm de sulfatos en el agua potable.
 Cálculo estadístico.

 Mencione las fuentes de error en la práctica, y como afectan en los resultados experimentales.
14.6. Conclusiones
 Concluya en base a los objetivos de la practica
14.7. Cuestionario
 Indique qué factores deben controlarse en las mediciones turbidimétricas.
 Compare las ventajas y desventajas que presente este método turbidimétrico para determinar
sulfatos, con el clásico de gravimetría.
 Compare la sensibilidad del método turbidimétrico con el clásico para gravimetría.
 Explique el origen de la aparición de la turbidez cuando se mezclan las soluciones de sulfato de
hidrazina y de hexametilentetramina (incluir la reacción).
 Fundamento de la turbidimetría y nefelometría, aplicaciones y limitaciones.
 Efecto Tyndall.
 Diseño y funcionamiento de los instrumentos:
14.8. Bibliografía
[2]. SKOOG, D. y WEST, D. (1975). Análisis Instrumental 1ra. Edición. Interamericana. México. p. 250–
252.
309–313.
Página 71 de 74
Título: Turbidez en agua
15.1. Objetivos
 Conocer los métodos analíticos basados en la medición de la dispersión de la luz.

 Determinar la turbidez en agua.
Este método se basa en la comparación de la intensidad de la luz dispersada por una muestra bajo
condiciones definidas con la intensidad de la luz dispersada por una suspensión estándar de referencia
bajo las mismas condiciones. Mientras más alta es intensidad de la luz dispersada mayor será la
turbidez. La hidracina se utiliza como suspensión patrón para el estándar de referencia. La turbidez de
una concentración específica de hidracina se define como 4000 NTU.


 Nefelómetro
 Pipetas
 Sulfato de hidracina
 Hexametilentetramina
15.3.3.1. Suspensión Stock de Turbidez:
Solución I: 1,0 g. (NH2)2.H2SO4 (sulfato de hidracina). Aforar a 100 ml. con agua destilada filtrada.
Solución II: 10,0g. (CH2)6N4 (hexametilentetramina). Aforar a 100 ml. con agua destilada filtrada.
15.3.3.2. Procedimiento de medición

 Mezclar 5 ml. solución I y 5 ml. de solución II. Dejar en reposo por 24 H a 25±3C. Diluir a 100 ml.
con agua y obtener una solución de 400 NTU.
 De la suspensión de 400 NTU tomar 10 ml. y diluir a 100 ml. con agua para obtener una solución
de 40 NTU.
 A partir de la suspensión de 40 NTU, por dilución preparar las siguientes:
Página 72 de 74
15.4. Resultados
Tabla 15-1 Curva de calibración (turbidez en agua)
Estándar Susp. 40 NTU (ml) V. Final NTU %T Turbidez
0 0,0 20,0 0
1 2,5 20,0 5
2 5,0 20,0 10
3 10,0 20,0 20
4 15,0 20,0 30
5 20,0 20,0 40
Muestra
 Calcular la concentración de sulfatos en los estándares.

 Calcular la turbidez propia del agua de turbidez, utilizando la siguiente ecuación.
Muestras de agua:
NTU  NTU leido 

A  B
A
A = Cantidad de muestra tomada

B = Agua añadida
 Graficar NTU vs. C

 Interpolar el valor de turbidez del agua

 Indique cuales pueden ser las causas de error más probable en caso de que los resultados se alejen
de los valores teóricos
15.6. Conclusiones
 Concluya en base a los objetivos de la practica
15.7. Bibliografía
[2]. SKOOG, D. y WEST, D. (1975). Análisis Instrumental 1ra. Edición. Interamericana. México. p. 250–
252.
309–313.
[4]. APHA (1993). Standard Methods. 20th. Edition
Página 73 de 74
Elaborado Revisado Aprobado

Cargo: Docente Cargo: Cargo:
Firma Firma Firma

Nombre y Apellido
Wilson Parra Nombre y Apellido Nombre y Apellido
Fecha: 26/03/2018 Fecha: Fecha:
Página 74 de 74

Guia Corregida Q.a.instrumental 1 (19-19) PDF

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Guia Corregida Q.a.instrumental 1 (19-19) PDF

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

Guía de Prácticas de laboratorio de

ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL I

GUÍAS DE PRÁCTICAS DE LABORATORIOS

CARRERA/AS : Química / Química Farmacéutica /

Para el desarrollo y aprovechamiento del trabajo en el laboratorio de prácticas es importante tanto

El trabajo de laboratorio presenta características que lo diferencian de otras áreas. En primer

Normas de seguridad para el trabajo en el laboratorio

 Hay que usar gafas de seguridad

Normas de seguridad contra incendios

 Está prohibido fumar en el laboratorio.

 No se debe correr riesgos personales.

 Cuando suene la alarma hay que evacuar inmediatamente el laboratorio.

Algunos percances usuales y su tratamiento

Es necesario conseguir la mayor información posible sobre el producto ingerido y trasladar

 Familiarizarse con diversos métodos densimétricos para el análisis cuantitativo de diversas

1.2 Fundamento de la práctica

1.3 Parte experimental

1.3.1. Instrucciones previas

1.3.2. Materiales y Reactivos

1.3.3.2. Método de la Balanza de Westphal

 Armar la balanza según indicaciones.

1.3.3.3. Densímetros e hidrómetros:

 Llenar las probetas con soluciones de sacarosa y con la muestra.

1.3.3.4. Balanza hidrostática:

Tabla 1-3 Densidad de las diferentes soluciones con los densímetros

1.4.1. Cálculo de la densidad relativa y absoluta por el método del picnómetro:

Incluir únicamente un ejemplo del cálculo.

1.4.2. Cálculo de la densidad relativa y absoluta por el método de la balanza de Westphal

1.4.3. Cálculo de la concentración de la muestra:

1.4.4. Calcular la concentración en % P/V y % V/V, % P/P

Solución  2020  20 , g/cm3 % P/P %P/V %V/V

Estándar  2020  20 , g/cm3 % P/P %P/V %V/V

1.4.5. Cálculo estadístico:

1.4.5.1. Método del picnómetro

Calcular: (para la muestra)

Expresar el resultado como:

1.4.5.2. Método de la balanza de Westphal

1.4.5.3. Calcular la sensibilidad y el límite de detección para los cuatro métodos .

1.4.6. Ajuste de los datos experimentales a una recta del tipo:    0  K sC

a) Densidad relativa vs concentración (hidrómetros) (experimental y tablas)

1.5. Discusión de resultados

 Fuentes de error que pudieron intervenir en la práctica

 Discusión de los gráficos obtenidos

 Concluir en base a los objetivos de la práctica

 Definiciones de densidad absoluta, densidad relativa, unidades.

 Examinar el refractómetro de Abbe, sus accesorios y forma de operación.

2.2. Fundamento de la práctica

2.3.1. Instrucciones previas

2.3.2. Materiales y reactivos

– Refractómetros de Abbé (Carl Zeiss, Baush & Lomb)

Calibración del refractómetro

“El n se debe sumar o restar (según el signo) a las demás lecturas”

2.4.1. Cálculo de la dispersión parcial y la dispersión específica

D p = nF - nc F  línea azul del H2 (  = 486.1nm)

A, B, C  Valores que se deben consultar en tablas, hacer interpolaciones.

Se puede calcular n f ; nc ; v según nomogramas

Sustancia D r (nomog) RM v (calculado )

2.4.3. Cálculo estadístico

Nota: Incluir fotocopias de tablas de nomogramas.

2.5. Discusión de resultados

 Analizar las fuentes de error que podría alterar los resultados